表皮生长因子对人眼Müller细胞增生迁移的影响及其作用机制

背景研究证实表皮生长因子（EGF）可促进鼠视网膜Müller细胞的增生和迁移,但EGF能否促进人眼Müller细胞的增生迁移尚未见报道。目的探讨人眼Müller细胞能否自身表达和分泌EGF及EGF对Müller细胞增生迁移的影响及其作用机制。方法同一代人永生株Müller细胞系MIO—M1细胞用高糖DMEM进行培养,利用MTT比色法观察不同质量浓度EGF作用24、48、72h,不同浓度CoCl2作用12h和24h,加入导致Müller细胞半数致死量的CoCl,浓度前2h加入不同质量浓度EGF的Müller细胞增生情况;Transwell小室观察正常及CoCl2缺氧条件下用不同质量浓度EGF作用24、48、72h后Müller细胞的迁移情况;采用ELISA法观察Müller细胞表达和分泌EGF的情况;通过Westernblot法检测体外不同条件培养下EGF对ERK1/2及Akt信号转导通路的作用。结果正常培养条件下,不同质量浓度的EGF作用后Mfiller细胞的吸光度（A570）值的总体比较差异有统计学意义（F=123．765,P=0．000）,100mg／LEGF促Müller细胞增生作用最强,为对照组的1．6倍,10mg／LEGF促Müller细胞迁移的作用最强,为对照组的4．5倍。各EGF组Müller细胞的A570,值均明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈O．01）。缺氧条件下培养,Müller细胞半数致死量的CoCl2浓度为600nmol／L,提前2h加入10～100阻g／LEGF后,EGF对抗缺氧所致Muller细胞的损伤作用最明显。700nmol／LCoCl2致Müller细胞损伤80％时其自身低分泌7．8ng／LEGF。10～100mg／LEGF作用Müller细胞促增生迁移作用信号最明显,600nmol／ LCoCl2作用Müller细胞24h后ERKl／2及Akt信号强度减弱,提前2h加入外源性EGF后,ERK1／2及Akt两条信号通路最明显。结论EGF能以剂量依赖的方式促进体外培养的Müller细胞增生及迁移。正常培养条件下的Müller细胞自身不表达,缺氧条件下Müller细胞自身可少量分泌EGF。EGF可能通过ERK1／2及Akt信号转导通路介导Müller细胞的增生和迁移,并对CoCl2损伤的Müller细胞发挥保护作用。     

表皮生长因子对氧化损伤的人眼Müller细胞增生及迁移的保护作用

背景 目前认为氧化损伤机制在年龄相关性黄斑变性(AMD)的发病中起着重要作用,主要与血-视网膜屏障的破坏有关,而Müller细胞是稳定血-视网膜内屏障功能的主要细胞成分.研究表明,表皮生长因子(EGF)可促进实验动物视网膜Müller细胞的增生和迁移,但其对人Müller细胞的作用研究较少. 目的 探讨EGF对体外氧化损伤的人眼Müller细胞增生和迁移的影响及其作用机制. 方法 将人眼Müller细胞系MIO-M1细胞进行培养并用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、第Ⅷ因子、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、人角蛋白及S -1 00免疫组织化学法进行鉴定.在无血清DMEM中加入不同质量浓度(0、1、10、30、100 mg/L) EGF,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷( BrdU)标记法测定MIO-MI细胞的阳性率.根据干物方式的不同将培养细胞分为EGF组、H2O2损伤组、EGF+H2O2组、葡萄糖氧化酶(GO)组、GO+EGF组、EGF+ LY294002+H2 O2组,采用MTT比色法测定各组培养细胞的增生情况(A590).对培养的人眼Müller细胞采用划痕实验观察H2O2损伤条件下0、1、10、30、100 mg/L EGF作用24、48、72 h后对Müller细胞增生、迁移的影响;采用Western blot技术检测EGF对体外不同培养条件下M üller细胞Akt信号传导通路的作用. 结果 正常培养条件下10、30、100 mg/L EGF作用后Müller细胞的增生率分别为28.0％、32.9％、39.0％,明显高于0 mg/L、1 mg/L EGF组(24.5％、26.2％).在H2O2和GO分别培养细胞的条件下,高质量浓度的EGF组Müller细胞的吸光度(A570)值明显大于低质量浓度组,各组总体差异有统计学意义(F=23.582,P=0.000).与EGF+H2O2组比较,EGF+ LY294002+H2O2组Müller细胞的吸光度(A570)值明显下降.10 mg/L EGF促进Müller细胞迁移的作用最强.0.08 mmol/LH2O2作用Müller细胞后Akt信号通路激活,提前2h加入外源性EGF后,100 mg/L EGF对抗氧化所致Müller细胞的损伤作用最明显,同时提前2h加入外源性EGF和Akt信号通路阻断剂LY294002后,Akt信号传导通路的保护作用减弱. 结论 EGF对体外培养的Müller细胞具有促进增生及迁移的作用,10 mg/L EGF促进Müller细胞迁移作用最强.100 mg/L外源性EGF抗Müller细胞氧化损伤作用最强,其作用机制是激活Akt信号传导通路.     

PI3K抑制剂对体外培养的眼底血管内皮细胞的作用

目的 观察PI3K激酶抑制剂LY294002对体外培养的视网膜脉络膜血管内皮细胞增生和迁移抑制以及诱导凋亡的作用。方法 四唑盐（MTT）比色法检查对照组和LY294002干预组干预72h后RF／6A细胞增生的抑制，Transwell分析法检查不同浓度的LY294002对VEGF诱导的RF／6A细胞迁移的抑制效果，流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果 LY294002以浓度依赖性方式抑制VEGF诱导的RF／6A细胞增生和迁移，各个LY294002干预组与对照组相比，增生和迁移能力降低，差异有统计学意义（P〈0．05），流式细胞仪分析结果显示LY294002可以诱导细胞的凋亡。结论 LY294002可抑制体外培养的RF／6A细胞的生长和迁移，并诱导细胞的凋亡，有望为临床上新生血管性疾病提供新的治疗方法。     

LY294002对人晶状体上皮细胞蛋白激酶B活化的影响

背景蛋白激酶B（Akt）与许多细胞信号转导通路密切相关，从而参与多种细胞功能活动的调控，包括细胞的增生、迁移和代谢等，其中磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）可催化Akt活性并启动各种相关的细胞信号通路。P13K抑制剂能够抑制Akt活性，但是否影响后发性白内障发生过程中残留的晶状体上皮细胞（LECs）的生物学行为尚不清楚。目的观察P13K抑制剂LY294002对人LECs中Akt活化的影响。方法对人LECs系HLEC-B3细胞进行常规培养和传代，然后接种于96孔板中，培养24h后在培养板中加入LY294002，终浓度分别为0、10、20、30、40、50、60、70、80μmol／L，继续培养24h后采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组细胞的增生抑制率。在同一批接种于6孔板内无菌盖玻片上的传代细胞中加入10μg／L转化生长因子-β2（TGF—β2）为诱导组，用20μmol／LLY294002预培养1h后再加入10Ixg／LTGF—β2进行共培养为TGF—B，与LY294005共培养组，以未加入TGF，p：和LY294002的细胞作为对照组，应用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞中磷酸化Akt（p-Akt）的荧光表达情况，并用Westernblot法检测各组细胞中p-Akt表达量的差异。结果CCK-8法检测结果显示，随着LY294002浓度的增加，HLEC—B3的吸光度（A）值逐渐减小，即LY294002对HLEC—B3细胞增生的抑制作用随浓度的增加而逐渐增强，不同浓度LY294002组间HLEC—B3的A值比较差异有统计学意义（F分组=9．72，P=0．00）；随着检测时间点的延长，HLEC—B3的4值逐渐增大，不同检测时间点A值比较差异有统计学意义（F时间=1737．54，P=0．00）。激光扫描共焦显微镜观察显示，对照组细胞仅有微量的p-Akt红色荧光，诱导组p-Akt表达明显增多，并向细胞膜聚集，细胞轮廓清晰，而TGF—β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt表达的红色荧光明显减弱，细胞形态不清。Westernblot法检测结果显示，对照组、诱导组和TGF—β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt的表达量分别为0．91±0．08、1．48±0．13和0．95±0．19，3个组间差异有统计学意义（F=15．04，P=0．00）。结论LY294002能够拈抗TGF—β2诱导的Akt磷酸化激活过程，有望成为新的有效防治后发性白内障的药物。     

LY294002对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增生的影响

目的探讨LY294002对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的兔晶状体上皮细胞（LECs）增生的影响。方法兔眼LECs经培养后,将10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／LLY294002分别加入LECs培养基中培养48h为LY294002组。另将10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／LLY294002＋bFGF（10mg／L）加入培养基中培养LECs48h。bFGF（10mg／L）诱导LECs增生48h为阳性对照组,空白对照组仅用无血清DMEM。MTT比色法测定吸光度（A）值,分析各组药物对LECs增生的抑制率,流式细胞仪检测各细胞周期的LECs百分率。结果bFGF组与空白对照组相比A值升高,LY294002组随着药物浓度的增加,4值明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。bFGF＋LY294002组与LY294002组相比,A值下降更明显,差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪分析LY294002对LECs的抑制作用与MTT呈现相同趋势,随着LY294002浓度的增加,处于G0／G1期的LECs逐渐增加（P〈0．01）,而S期和G2／M期逐渐减少。结论LY294002可明显抑制体外培养的bFGF诱导的兔LECs的增生,并呈剂量依赖关系,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

抑制Akt通路提高视网膜母细胞瘤对卡铂敏感性的实验研究

目的 探讨抑制Akt信号通路活性能否提高视网膜母细胞瘤（RB）SO-Rb50细胞对卡铂的敏感性。设计 实验研究。研究对象 SO-Rb50细胞株。方法 CCK-8法检测卡铂作用于细胞的IC50值;蛋白印迹法检测Akt、p-Akt、caspase 3、bax、p21蛋白在药物作用前后表达量的改变;流式细胞仪法检测药物作用前后细胞周期的改变。主要指标 IC50值,蛋白表达量,细胞周期中各期细胞百分比。 结果 卡铂作用于SO-Rb50细胞48小时的IC50值为（30.1±5.9）mg/L;分别用5 μM和10 μM的LY294002抑制细胞Akt信号通路的活性后,卡铂作用于SO-Rb50细胞的IC50值分别为（16.3±0.83）mg/L和（8.64±0.11）mg/L。用卡铂（30 mg/L）、LY294002（5 μM和10 μM）单独或联合作用于SO-Rb50细胞48 h后,细胞Akt活性随LY294002浓度的增加而降低,caspase-3蛋白生成增加,bax蛋白生成增加,p21蛋白在卡铂作用下生成显著增加;LY294002对细胞周期的进程无明显影响,卡铂使G0/G1期细胞百分比从（57.89±2.16）%下降至（12.11±2.87）%,G2/M期细胞从（0.34±0.34）%增加至（43.62±11.01）%,S期细胞无明显变化;两种药物联合作用并未改变卡铂对细胞周期的影响。结论 抑制Akt信号通路可提高SO-Rb50细胞对卡铂的敏感性,抑制Akt信号通路可能是提高RB化疗疗效的一个靶点。     

EGF通过PI3K/AKT通路诱导人晶状体上皮细胞移行

目的研究表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）诱导人晶状体上皮细胞移行及其信号通路机制。方法培养人晶状体上皮细胞,用不同浓度EGF处理24h后,Phagokinetic Track Motility分析细胞的移动性;EGF（100μg·L^-1）孵育细胞不同时间后,Westernblot法检测磷酸化EGFR和AKT,并分别用PD153035（EGFR激酶抑制剂）和LY294002（PI3K/AKT抑制剂）预孵育细胞,观察上述指标;EGF（100μg·L-1）孵育细胞不同时间（12h、24h、48h）后,用酶谱法分析基质金属蛋白酶-2（matrix metallopreteinase-2,MMP-2）,并用PD153035、LY294002预孵育细胞,检测MMP-2活性及细胞的移行。设立对照组,结果进行单因素方差分析,P〈0.05表明差异有统计学意义。结果EGF可诱导培养人晶状体上皮细胞移行,并随浓度增加细胞的移动性有显著性提高;EGF可诱导EG-FR和AKT磷酸化,EGF处理后5min,EGFR和AKT的磷酸化达到峰值,作用可持续1h,EGFR抑制剂可阻断EGF诱导的AKT磷酸化;EGF可显著提高细胞中MMP-2的活性,并随时间延长活性增强,24～48h达到较高水平（1.4倍）,PD153035、LY294002可抑制MMP-2的活性以及细胞的移行。结论在人工培养的人晶状体上皮细胞中,EGFR/PI3K/AKT通路介导了EGF刺激MMP-2的激活和体外培养人晶状体上皮细胞的移行,这一通路可被EGFR激酶抑制剂、PI3K/AKT抑制剂阻断,这些涉及的信号通路可能形成潜在的治疗后囊膜混浊的靶点。     

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞中S期激酶相关蛋白2表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对体外培养的人晶状体上皮细胞（LECs）增生和细胞周期S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达的影响。方法 MTT比色法检测25μmol/L的LY294002处理人LECs细胞株SRA01/04后12h和24h细胞的增生情况;流式细胞仪检测LY294002作用24h后细胞周期的分布情况;Westernblot和real-timePCR法分别测定LY294002处理24h后细胞中Skp2及其mRNA的表达情况。结果 25μmol/L的LY294002作用于SRA01/04细胞0～24h,SRA01/04细胞的增生受抑制,且作用24h时对SRA01/04细胞的抑制作用最明显。LY294002组中处于G1期和S期的细胞占总细胞数的百分率分别为（66.15±2.63）%和（27.34±6.58）%,对照组为（56.73±1.35）%和（37.32±5.54）%,LY294002组细胞Skp2及其mRNA的表达量明显减少。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增生,使部分细胞停滞于细胞周期的G1期,LY294002抑制人LECs的增生可能与Skp2的表达下调有关。     

整合连接激酶在血管内皮生长因子诱导视网膜新生血管形成的信号传导通路中的作用

目的 观察整合连接激酶（ILK）在血管内皮生长因子（VEGF）诱导的视网膜新生血管形成过程中的作用。方法 在体外培养的视网膜脉络膜血管内皮细胞（RF/6A细胞系）中，用LY294002抑制ILK活性或siRNA转染敲减ILK表达后，检测ILK对VEGF诱导的细胞黏附、增生、迁移及内皮细胞管状结构形成的作用；并在动物模型水平观察LY294002抑制ILK活性后对视网膜新生血管形成的影响。结果 正常对照组、VEGF处理组、LY294002抑制组、siRNA转染组细胞黏附实验结果分别为（0.0726±0.01961）、（0.1137±0.02631）、（0.0837±0.01503）、（0.0853±0.02454），VEGF处理组与正常对照组比较，差异有统计学意义（t =4.211，P<0.01）；LY294002抑制组以及siRNA转染组与VEGF处理组相比，差异有统计学意义(t =3.074 和2.91，P<0.01）。正常对照组、VEGF处理组、LY294002抑制组细胞增生实验结果分别为（0.4162±0.1392）、（0.6412±0.2420）、（0.4476±0.1834），VEGF处理组较正常对照组比较，差异有统计学意义（t=2.608，P<0.05）；LY294002抑制组与VEGF处理组相比，差异也有统计学意义（t=2.244，P<0.05）。正常对照组、VEGF处理组、LY294002抑制组细胞迁移实验结果分别为（83.66±30.283）、（248±74.748）、（138.5±38.167），VEGF处理组与正常对照组比较，差异有统计学意义（t=5.436，P<0.01）；LY294002抑制组与VEGF处理组相比，差异也具有统计学意义（t=3.682，P<0.01）。血管内皮细胞管状结构形成实验显示，ILK活性或表达受到抑制后无明显管状结构形成。动物实验显示腹膜下注射LY294002使视网膜后极部无灌注区面积从（62798±16995.62）μm2增加至（84722.65±10435.01） μm2，二者比较，差异有统计学意义（t=3.476，P<0.01）。 结论 应用LY294002抑制ILK活性或siRNA转染敲减ILK表达使细胞黏附率、细胞增生率及细胞迁移率均显著下降。ILK通过参与调控VEGF诱导的视网膜血管内皮细胞黏附、增生、迁移及内皮细胞管状结构形成过程而对VEGF诱导的视网膜新生血管形成过程发挥着重要作用。     

丹参抗晶状体上皮细胞DNA氧化损伤的研究

目的研究丹参对晶状体上皮细胞（LECs）DNA氧化损伤的保护作用。方法应用单细胞凝胶电泳法分别测定0．1、0．2、0．4、0．8mg／mL丹参液对体外培养的LECs氧化损伤的保护作用，并与牛磺酸的保护作用相比较。结果各质量浓度组丹参液培养后的LECs对H2O2的损伤均有抵抗作用，尤其0．8mg／mL质量浓度组的保护作用优于40mmol／L牛磺酸组，除0．1mg／mL丹参组外各处理组细胞的尾长、彗星细胞百分率与H2O2损伤组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论丹参中的有效成分对体外培养的LECs氧化损伤有明显的保护作用，且呈现质量浓度依赖的量效关系。     

慢性眼内压增高对大鼠视网膜Muller细胞钙通道电流的影响

目的利用电生理方法,鉴定大鼠视网膜Muller细胞钙通道,进而研究慢性眼内压增高对Muller细胞钙通道电流的影响。方法在急性分离的大鼠Muller细胞上,利用全细胞膜片钳的电压钳技术记录钙通道电流。采用结扎巩膜上静脉的方法制备大鼠高眼压模型。结果当细胞外液中不含二价阳离子时,可以记录到电流幅度较大的钙通道介导的Na＋流。该电流可被L-型钙通道阻断剂nimodipine和T-钙通道阻断剂mibefradil可逆地压抑到加药前的（39．8±5．4）％（P〈0．001）和（46．7±8．7）％（P〈0．001）。与假手术组相比,高眼压术后1周、2周和4周的大鼠视网膜Mtiller细胞钙通道的电流幅度没有明显的变化。然而,电流成分分析发现,与对照组相比,高眼压大鼠Muller细胞的nimodipine敏感电流呈降低的趋势[1周：（70,9±13．3）％;2周：（70．5±21．9）％;4周：（69．2±23．9）％],而mibefradil敏感的电流在高眼压术后1周和2周呈增高趋势[（157．5±21．2）％和（158．6±35．5）％],4周时趋于正常（109．2±37．9）％。结论大鼠视网膜Mailer细胞功能性表达L-型和T-型钙通道。慢性眼内压增高导致L-型钙通道电流减小,T-型钙通道电流增大,从而增加胞内钙,共同参与Mtiller细胞的去极化和激活。     

TGF—β2干预的缺氧状态下补肾活血剂对Muller细胞及谷氨酰胺合成酶活性的影响

目的观察在缺氧和（或）转化生长因子-β2（TGF—β2）干预条件对体外培养的Muller细胞活力以及谷氨酰胺合成酶（GS）的影响。方法用出生7d的SD大鼠体外培养视网膜Muller细胞，将第2代细胞在含20％胎牛血清的DMEM中培养24h后，换用无血清的DMEM孵育24h。分组为：空白血清对照组（20％正常SD大鼠血清的DMEM）；TGF—β2组（20％正常SD大鼠血清的DMEM及终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）；模拟缺氧组（20％正常SD大鼠血清的DMEM及终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠）；TGF—β2＋缺氧组（20％正常SD大鼠血清的DMEM液、终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）；中药血清组（20％中药SD大鼠血清的DMEM）；中药血清＋TGF—β2＋缺氧组（20％中药SD大鼠血清的DMEM、终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）。以透射电镜观察视网膜Muller细胞超微结构、以490型酶标仪测定细胞外液乳酸脱氢酶（LDH）释放量及GS活性。结果在缺氧条件下Muller细胞的超微结构发生明显的改变，如：细胞核变形，固缩；细胞器破坏；微绒毛内糖原明显增多。与正常对照组比较，TGF-β2干预组、缺氧组、TGF-β2＋缺氧组的LDH释放量均明显增加（P〈0．05），缺氧组、TGF—β2＋缺氧组的GS活性均明显下降（P〈0．01）；与缺氧组比较，TGF-β2＋缺氧组的LDH释放量明显增加、GS活性明显下降（P〈0．05、P〈0．01）。补肾活血中药血清能降低24h及48h时正常以及TGF—β2与缺氧同时存在条件下LDH的释放量（P〈0．05），增强12h时正常条件下以及12h和24h时TGF-β2与缺氧同时存在条件下GS的活性（P〈0．05、P〈0．01）。结论TGF—β2可加重缺氧条件下Muller细胞活力与GS活性的降低；补肾活血中药含药血清能增强视网膜Muller细胞活力及GS活性。     

PI3K-mediated glioprotective effect of epidermal growth factor under oxidative stress conditions

AIM:To determine the effects of epidermal growth factor (EGF) on the proliferation and migration of Müller cell line Moorfields/Institute of Ophthalmology-Müller 1 (MIO-M1), and its related molecular mechanisms under normal and oxidative stress conditions.METHODS: Müller cells were cultured with different concentrations of EGF in the presence or absence of varied amounts of H2O2 and glucose oxidase (GO) which induced oxidative stress. The proliferation and migration of Müller cells were examined by 5-Bromo-2-deoxyUridine (BrdU), MTT assay, Transwell assay and scratch wound healing assays. The cell viability was determined with the MTT assay. The secretion of EGF by Müller cells was evaluated by ELISA. Western blot was performed to detect the activation of extracellular regulated protein kinases (ERK)1/2 and Akt signal pathways.RESULTS:EGF stimulated the proliferation and migration of Müller cells in a concentration-dependent manner in vitro. Underoxidative damage condition,2h of pretreatment with 10-100 ng/mL EGF can mostly inhibit 50% lethal dose of 0.08 mmol/L H2O2-induced cell damage. The Western blot results showed that after Müller cells were exposed to varying EGF for 24h, Akt and ERK1/2 were phosphorylated in a dose-dependent manner. In the presence of the LY294002, the potent PI3K inhibitor, the p-Akt was significantly attenuated.CONCLUSION:EGF may induce the proliferation and migration of human Müller cells through the Akt and the ERK1/2 signal pathways, and induce PI3K-mediated glioprotective effect under oxidative stress.     

缺氧条件下共培养时观察Mtiller细胞对RPE细胞生长的影响

背景视网膜色素上皮（RPE）细胞和Mtiller细胞在维持视网膜的正常代谢中起重要作用,多种生理、病理过程与二者的相互作用有关。目的利用Transwell小室体外共培养兔Mtiller细胞与RPE细胞,观察缺氧条件下Moller细胞对RPE细胞增生和迁移的影响。方法应用组织块培养法和酶消化法分别培养原代兔Mtiller细胞和RPE细胞,免疫组织化学法鉴定2种细胞。取第3代培养良好的细胞进行试验。应用CoCl2培养细胞以建立细胞化学缺氧模型,分为常氧组和缺氧组,每组又分为对照组（RPE细胞单独培养）、共培养组（MOiler细胞与RPE细胞共同培养）。利用Transwell小室建立Mtiller细胞和RPE细胞的共培养模型,各组分别培养3、6、24、48h,利用MTT法和结晶紫染色法对培养存活的RPE细胞进行计数,检测常氧及缺氧条件下Miiller细胞对RPE细胞增生和迁移的影响。结果原代培养的RPE细胞符合RPE细胞的特征,90％以上呈现CK．18阳性反应。培养的Miiller细胞对胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和S-100染色呈阳性反应。与常氧培养条件比较,缺氧条件下单独培养的RPE细胞增生数量增加,细胞迁移数量增加,差异有统计学意义（P〈0．01）;缺氧条件下与MUller细胞共培养的RPE细胞增生数量和迁移数量明显增加,与常氧组和单细胞培养情况下比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。缺氧条件下,与RPE细胞单细胞培养组比较,共培养组RPE细胞的增生和迁移增加,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论缺氧可以促进RPE细胞的增生和迁移,Mtiller细胞可以加重缺氧引起的RPE细胞的增生和迁移。     

脂质体介导增强型绿色荧光蛋白基因在鼠视网膜Müller细胞中的表达

目的研究脂质体介导增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因对体外培养的鼠视网膜Müller细胞转染的有效性及安全性。方法采用视网膜组织块法培养鼠视网膜Müller细胞,振荡法分离纯化细胞,并对其进行免疫细胞化学鉴定。用阳离子脂质体Lipofectamine 2000负载pEGFP-N1质粒转染Müller细胞,荧光显微镜检测转染后12、24、48、72h的转染效率。台盼蓝排斥实验检测转染和未转染细胞的活力,明确脂质体Lipofectamine 2000对Müller细胞的毒性作用。结果成功培养视网膜Müller细胞,传代后90%以上的细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色阳性。Lipofectamine 2000介导质粒pEGFP-N1转染Müller细胞后12、24、48、72h的转染效率分别为（9.7±1.9）%、（18.1±16）%、（17.2±2.5）%、（16.9±1.7）%。台盼蓝排斥实验显示Lipofectamine 2000转染前后活细胞率分别为（98.2±5.6）%、（96.1±6.2）%。结论脂质体Lipofectamine 2000可安全有效地介导Müller细胞的转染,为进一步明确Müller细胞的病理、生理功能及靶向Müller细胞的基因治疗提供了新的手段。