表皮生长因子对氧化损伤的人眼Müller细胞增生及迁移的保护作用

背景 目前认为氧化损伤机制在年龄相关性黄斑变性(AMD)的发病中起着重要作用,主要与血-视网膜屏障的破坏有关,而Müller细胞是稳定血-视网膜内屏障功能的主要细胞成分.研究表明,表皮生长因子(EGF)可促进实验动物视网膜Müller细胞的增生和迁移,但其对人Müller细胞的作用研究较少. 目的 探讨EGF对体外氧化损伤的人眼Müller细胞增生和迁移的影响及其作用机制. 方法 将人眼Müller细胞系MIO-M1细胞进行培养并用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、第Ⅷ因子、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、人角蛋白及S -1 00免疫组织化学法进行鉴定.在无血清DMEM中加入不同质量浓度(0、1、10、30、100 mg/L) EGF,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷( BrdU)标记法测定MIO-MI细胞的阳性率.根据干物方式的不同将培养细胞分为EGF组、H2O2损伤组、EGF+H2O2组、葡萄糖氧化酶(GO)组、GO+EGF组、EGF+ LY294002+H2 O2组,采用MTT比色法测定各组培养细胞的增生情况(A590).对培养的人眼Müller细胞采用划痕实验观察H2O2损伤条件下0、1、10、30、100 mg/L EGF作用24、48、72 h后对Müller细胞增生、迁移的影响;采用Western blot技术检测EGF对体外不同培养条件下M üller细胞Akt信号传导通路的作用. 结果 正常培养条件下10、30、100 mg/L EGF作用后Müller细胞的增生率分别为28.0％、32.9％、39.0％,明显高于0 mg/L、1 mg/L EGF组(24.5％、26.2％).在H2O2和GO分别培养细胞的条件下,高质量浓度的EGF组Müller细胞的吸光度(A570)值明显大于低质量浓度组,各组总体差异有统计学意义(F=23.582,P=0.000).与EGF+H2O2组比较,EGF+ LY294002+H2O2组Müller细胞的吸光度(A570)值明显下降.10 mg/L EGF促进Müller细胞迁移的作用最强.0.08 mmol/LH2O2作用Müller细胞后Akt信号通路激活,提前2h加入外源性EGF后,100 mg/L EGF对抗氧化所致Müller细胞的损伤作用最明显,同时提前2h加入外源性EGF和Akt信号通路阻断剂LY294002后,Akt信号传导通路的保护作用减弱. 结论 EGF对体外培养的Müller细胞具有促进增生及迁移的作用,10 mg/L EGF促进Müller细胞迁移作用最强.100 mg/L外源性EGF抗Müller细胞氧化损伤作用最强,其作用机制是激活Akt信号传导通路.     

表皮生长因子对人眼Müller细胞增生迁移的影响及其作用机制

背景研究证实表皮生长因子（EGF）可促进鼠视网膜Müller细胞的增生和迁移,但EGF能否促进人眼Müller细胞的增生迁移尚未见报道。目的探讨人眼Müller细胞能否自身表达和分泌EGF及EGF对Müller细胞增生迁移的影响及其作用机制。方法同一代人永生株Müller细胞系MIO—M1细胞用高糖DMEM进行培养,利用MTT比色法观察不同质量浓度EGF作用24、48、72h,不同浓度CoCl2作用12h和24h,加入导致Müller细胞半数致死量的CoCl,浓度前2h加入不同质量浓度EGF的Müller细胞增生情况;Transwell小室观察正常及CoCl2缺氧条件下用不同质量浓度EGF作用24、48、72h后Müller细胞的迁移情况;采用ELISA法观察Müller细胞表达和分泌EGF的情况;通过Westernblot法检测体外不同条件培养下EGF对ERK1/2及Akt信号转导通路的作用。结果正常培养条件下,不同质量浓度的EGF作用后Mfiller细胞的吸光度（A570）值的总体比较差异有统计学意义（F=123．765,P=0．000）,100mg／LEGF促Müller细胞增生作用最强,为对照组的1．6倍,10mg／LEGF促Müller细胞迁移的作用最强,为对照组的4．5倍。各EGF组Müller细胞的A570,值均明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈O．01）。缺氧条件下培养,Müller细胞半数致死量的CoCl2浓度为600nmol／L,提前2h加入10～100阻g／LEGF后,EGF对抗缺氧所致Muller细胞的损伤作用最明显。700nmol／LCoCl2致Müller细胞损伤80％时其自身低分泌7．8ng／LEGF。10～100mg／LEGF作用Müller细胞促增生迁移作用信号最明显,600nmol／ LCoCl2作用Müller细胞24h后ERKl／2及Akt信号强度减弱,提前2h加入外源性EGF后,ERK1／2及Akt两条信号通路最明显。结论EGF能以剂量依赖的方式促进体外培养的Müller细胞增生及迁移。正常培养条件下的Müller细胞自身不表达,缺氧条件下Müller细胞自身可少量分泌EGF。EGF可能通过ERK1／2及Akt信号转导通路介导Müller细胞的增生和迁移,并对CoCl2损伤的Müller细胞发挥保护作用。     

表皮生长因子对家兔角膜内皮损伤修复作用的实验研究

目的 研究表皮生长因子对家兔角膜内皮损伤的修复作用。方法 将溶于透明持酸钠的ＥＧＦ注入角膜内皮已损伤的兔眼前房,对照眼只注入ＮａＨＡ。结果 １０μｇ和５μｇ的ＥＧＦ均可使角膜内皮缺损面积显著缩小,并可使再生的角膜中央内皮细胞密度,六边形细胞出现率显著上升及细胞面积变异系数明显减小。     

干性ARMD中视网膜色素上皮细胞的作用及损伤机制

年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,ARMD)是导致老年人中心视力不可逆丧失的主要原因。ARMD的典型特征是视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)和脉络膜毛细血管发生退行性改变及黄斑区出现玻璃膜疣。临床上ARMD分为两种亚型：非渗出型(干性或萎缩型)和渗出型(湿性或新生血管型)。该病的发生是年龄、环境、遗传、吸烟、氧化应激和心血管功能障碍等多种因素相互作用的结果。鉴于RPE细胞在ARMD发病中的重要作用,现以RPE细胞为重点,总结了蓝光、吸烟、氧化应激、脂褐素积累、慢性炎症和蛋白质稳态对干性ARMD发病的作用和可能机制,为认识和预防干性ARMD的发生提供新的帮助。     

三氧化二砷对表皮生长因子诱导的视网膜色素上皮细胞增生和迁移的影响

背景 细胞因子失衡所导致的视网膜色素上皮(RPE)细胞的异常增生和迁移是增生性玻璃体视网膜病变( PVR)的主要病理变化之一.三氧化二砷(As2O3)是中国传统中药中的有效成分,可有效抑制肿瘤细胞的增生和迁移.但As2O3对细胞生长因子引起的RPE细胞增生和迁移的影响尚未明确. 目的 探讨As2O3对表皮生长因子(EGF)诱导的ARPE-19细胞增生和迁移的影响.方法 用无血清培养基对RPE细胞系ARPE-19细胞进行培养,将终浓度为0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0 μmol/L的As2O3分别加入到无血清培养基和含10 mg/L EGF的ARPE-19细胞培养液中作用24 h和48 h,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测各培养组ARPE-19细胞活性的吸光度(A)值,以探讨As2O3对细胞的药物毒性作用,并筛选安全、有效的As2O3作用浓度.用10 mg/L EGF加入培养基诱导ARPE-19细胞迁移,分别在培养板中加入0、0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3 作用24 h和48 h,并通过划痕试验和Transwell试验检测As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞迁移的影响.结果 MTT法检测发现不同浓度As2O3组作用24 h和48 h后,无血清培养组细胞A值随As2O3浓度的升高而逐渐下降,总体差异有统计学意义(F浓度=38.269,P=0.000;F时间=0.874,P=0.358).与空白对照组(0μmol/LAs2O3组)比较,0.5～ 5.0 μmol/L As2O3组ARPE-19细胞A值的差异均无统计学意义(P＞0.05).对含10 mg/LEGF组的ARPE-19细胞,药物对细胞A值的影响呈现浓度和时间依赖性(F浓度=152.155,P=0.000;F时间=51.649,P=0.000).与对照组比较,0.5～2.0μmol/L As2O3加入24 h和48 h后,A值的变化差异均无统计学意义(P＞0.05),而0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3加入10 mg/L EGF诱导的ARPE-19细胞中作用24h和48 h后,A值的变化差异均无统计学意义(F浓度=2.215,P=0.126;F时间 =2.230,P=0.155).5.0 ～20.0 μmol/L As2O3作用于EGF诱导的ARPE-19细胞中作用后,细胞A值明显下降,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),5.0～20.0 μmol/L As2O3作用24 h后,对EGF诱导的ARPE-19细胞增生抑制率分别为12％、32％、37％;作用48 h后细胞抑制率分别为39％、44％和53％.划痕试验结果显示,0.5～2.0 μmol/L As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞的横向迁移具有抑制作用.Transwell试验结果表明,0.5～2.0 μmol/L As2O3对10 mg/L EGF诱导的ARPE-19细胞纵向迁移有明显的抑制作用,0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3作用12h对ARPE-19细胞的抑制率分别为22％、33％和46％. 结论 As2O3在一定浓度范围内对ARPE-19细胞无毒性作用,2.0 μmol/L以下浓度的As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞增生无明显影响,但可影响细胞的迁移能力,5.0 μmol/L以上浓度的As2O3可明显抑制ARPE-19细胞的增生.     

熟地黄、枸杞子及其混合提取物对小鼠视网膜光损伤的保护作用

目的　探讨熟地黄、枸杞子及其混合提取物对小鼠光诱导视网膜损伤的作用。方法　雄性C57BL/6小鼠34只,随机分为5组:对照组、模型组、熟地黄组、枸杞子组、熟地黄+枸杞子组,药物干预组分别予相应药物提取物灌胃,并暴露于一定光照强度下。通过视网膜电图测量视觉功能,光学相干断层扫描观察活体视网膜形态,荧光素眼底血管造影术观察视网膜血管形态和面积,病理切片HE染色观察视网膜结构变化, TUNEL染色观察视网膜细胞凋亡情况,通过检测血液中抗氧化酶活性及丙二醛浓度评价药物抗氧化作用。结果　枸杞子组、熟地黄+枸杞子组小鼠光损伤后视网膜电图中0.01 cds?m^-2、3.00 cds?m^-2、10.00 cds?m^-2暗反应下b波波幅较模型组均提高,其中熟地黄+枸杞子组较模型组0.01 cds?m^-2暗反应震荡电位(OPS)波显著提高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。模型组小鼠的眼底照相中观察到视网膜渗出样改变和玻璃膜疣样病变,但在对照组、枸杞子组和熟地黄+枸杞子组中未观察到此病变。在HE染色中,模型组外核层结构有明显的紊乱、细胞密度降低趋势,对照组、熟地黄组、枸杞子组和熟地黄+枸杞子组外核层细胞排列紧密且规则。与模型组比较,枸杞子组、熟地黄组、熟地黄+枸杞子组可显著降低视网膜细胞凋亡率（均为P<0.05）。熟地黄组、枸杞子组和熟地黄+枸杞子组中超氧化物歧化酶活性较模型组分别升高了8.93%、16.30%、20.57%,熟地黄组、枸杞子组、熟地黄+枸杞子组中谷胱甘肽过氧化物酶活性较模型组分别升高了14.44%、20.05%、36.04%,熟地黄+枸杞子组中丙二醛含量较模型组降低了7.60%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论　熟地黄、枸杞子对AMD模型小鼠的视网膜功能与结构有保护作用,两种药物同时干预效果更加明显。     

光损伤对白内障术后年龄相关性黄斑变性的影响

随着年龄的增加,人类正常的晶状体逐渐变黄。变黄的晶状体能减弱蓝光、紫外线等一些有害光线到达视网膜,进而减少这些有害光线对视网膜的损伤。然而,变黄的晶状体因超声乳化晶状体吸出术被透明的人工晶状体取代时就相应地增加了这些有害光线对视网膜的损伤。过多暴露于这些光线对视网膜的破坏主要表现在视网膜色素上皮细胞、光感受器细胞等受损。这些组织的病变与年龄相关性黄斑变性的发展或进展有一定的关联。本文就超声乳化晶状体吸出术后年龄相关性黄斑变性的发展及一些诱发因素加以阐述。     

氧化损伤和老年性黄斑变性

本文复习和总结了氧化损伤与老年性黄斑变性的发病、疾病进展的关系,并对几种抗氧化剂在临床的应用及对老年性黄斑变性的预防作用进行了综述.     

表皮生长因子促角膜损伤修复的研究进展

EGF是促生长因子家族成员之一，呈单链多肽结构，通过与靶细胞上的受体结合而发挥促细胞生长发育及组织损伤修复等作用。随着基因工程技术的进展，EGF重组蛋白已广泛用于组织损伤修复的研究。本就EGF促进组织损伤愈合机制的研究进展作一综述。     

重组人表皮生长因子对牛品状体上皮细胞增殖的影响

目的观察重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)对牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)增殖的影响。方法体外培养牛LEC,在培养液中分别加入0μg.L-1、1μg.L-1、10μg.L-1、20μg.L-1、50μg.L-1、100μg.L-1、1000μg.L-1rhEGF,加药后72h采用MTT法,在酶标仪490nm波长处测定吸光度值并观测细胞增殖变化。结果0μg.L-1、1μg.L-1、10μg.L-1、20μg.L-1、50μg.L-1、100μg.L-1、1000μg.L-1的rhEGF作用于LEC72h后MTT法测得的OD值分别为0.166±0.029、0.195±0.017、0.232±0.034、0.263±0.019、0.315±0.009、0.261±0.005、0.206±0.043。结论rhEGF对牛LEC增殖有明显的促进作用,且呈浓度相关。     

表皮生长因子对人视网膜色素上皮细胞增生及移行的影响

目的　观察表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)及血清对体外培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞增生及移行的影响。 方法　对培养的人 3～ 6代RPE细胞采用MTT比色法观察不同浓度的EGF(0 .1、1、10、5 0、10 0 μg·L-1)及血清对人RPE细胞增生的影响 ;应用RPE细胞损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察EGF及血清对RPE细胞移行的影响。结果　在细胞增生的实验中 :无血清组 ,10～ 10 0 μg·L-1EGF达到最佳刺激浓度 ,其增生率为 81.8% ;5 0mL·L-1血清组 ,1～10 μg·L-1EGF的刺激作用最强达到 12 2 .7% ;无血清组与 5 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,且 5 0mL·L-1血清可明显促进人RPE细胞的增生 (P <0 .0 0 1)。在细胞的移行实验中 :无血清组 ,1～ 10 0 μg·L-1EGF可促进RPE细胞移行 ,但作用较弱 ;10 0mL·L-1血清组中 1～ 10 μg·L-1EGF促移行作用最强达 4 38.9% ;1～ 10 0 μg·L-1EGF的促进基础RPE细胞移行能力 (最强为 36 % )低于 10 0mL·L-1血清诱导的RPE细胞的移行能力 (强度为 14 7% ) ;无血清组与 10 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论　EGF对体外培养的人RPE细胞具有浓度依赖性促增生和移行的作用 ;血清自身也具有此作用     

HTRA1基因过表达对视网膜色素上皮细胞增殖及迁移影响

目的 研究HTRA1基因过表达对人视网膜色素上皮细胞(RPE)的增殖和迁移能力的影响,探讨HTRA1基因在老年黄斑变性(AMD)发病中的作用.方法 用携带人HTRA1基因的慢病毒感染体外培养的人RPE细胞,荧光显微镜下观察细胞的感染效率,RT-PCR和Westem Blot检测HTRAlmRNA和蛋白的表达,MTT比色法检测感染细胞毒性及细胞增殖能力,TransweH小室检测细胞迁移能力变化.结果 与空载体慢病毒感染RPE细胞相比,HTRA1基因慢病毒感染的RPE细胞HTRA1mRNA和蛋白的表达量明显增加,细胞增殖能力及迁移能力均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 过表达HTRA1基因能抑制人视网膜色素上皮细胞的增殖及迁移,THRA1基因可能通过影响RPE细胞功能参与AMD的进程.     

Intravitreal triamcinolone does not alter basal vascular endothelial growth factor mRNA expression in rat retina

Intravitreal triamcinolone inhibits choroidal neovascularization. To investigate if vascular endothelial growth factor (VEGF) is affected, we examined VEGF expression after intravitreal triamcinolone administration in rat retina. Using in situ hybridization, we have found dense clustered VEGF mRNA signals in the retinal pigment epithelium, moderate patchy signals in the inner nuclear layer, and positive labeling in a sub-population of ganglion cells. Densitometry and northern blot analysis revealed no significant alteration of VEGF mRNA expression pattern and level 3-21 days after triamcinolone injection. Our data indicate that intravitreal triamcinolone does not affect basal VEGF mRNA expression in normal adult rat retina.     

重组人表皮生长因子促进角膜上皮损伤修复的研究

目的：客观评估重组人表皮生长因子（ｒｈＥＧＦ）促进角膜上皮损伤修复的临床疗效及安全性。方法：应用前瞻性评估研究方法,对于角膜缘干细胞异常的角膜盲１５３例１５３只眼施行穿透性角膜移植术。移植片直径流一为７．５ｍｍ,术中去除供体角膜上皮;将所有研究病例按随机双盲原则分试验组（９１眼）、赋型剂组（３１眼）及素高捷疗组（３１眼）。术后分别观察移植片角膜上皮的愈合速率。结果：各ｒｈＥＧＦ组术后移植片角膜上皮     

眼科新一代抗血管内皮生长因子药物的基础研究及临床试验进展

视网膜新生血管形成是眼部多种疾病共有的病理改变,其造成的眼部功能损害是致盲的重要原因之一。血管内皮生长因子（VEGF）是治疗新生血管性眼病的重要靶点。进入抗VEGF治疗眼病的纪元以来,单靶点抗VEGF—A药物在新生血管性眼病的治疗中取得了良好的效果。近两年来,以阿柏西普（aflibercept,VEGF Trap—Eye,Eylea）和康柏西普（conbercept,KH902）为代表的多靶点[包括VEGF—A、VEGF—B和胎盘生长因子（P1GF）]抗VEGF药物逐步进入临床。新一代多靶点抗VEGF药物可改善一些对单靶点抗VEGF药物治疗无反应患者的临床症状。同时,因为延长了两次用药之间的间隔又可达到同样的疗效,可减少多次眼内注射带来的相关风险。但是此类药物的新增靶点在维持血管和神经元正常功能方面可能起着作用。因此,虽然目前还没有关于这类新药引起严重不良反应的报道,但仍需进一步评价这类新药潜在的不良反应。就眼科新一代抗VEGF药物,aflibercept和conbercept的基础研究、药代动力学、疗效、安全性及目前存在的问题进行综述。     

内质网应激在年龄相关性黄斑变性中的作用

内质网是哺乳动物细胞内蛋白质加工的重要细胞器,各种因素导致的内质网应激(ERS)过强均可能损伤细胞功能,甚至引起细胞死亡.年龄相关性黄斑变性(AMD)是多因素导致的常见致盲性疾病,研究证实氧化应激、炎症反应及脂代谢异常等因素引起的ERS在AMD的发生发展过程中起重要作用,其中促使视网膜色素上皮(RPE)中血管内皮生长因子(VEGF)表达上调,进而促进脉络膜新生血管(CNV)长入Bruch膜而形成CNV膜是干性AMD转变为湿性AMD的主要病理机制.就ERS的发生过程、发生机制及氧化应激、炎症反应等因素与ERS在AMD病变过程中的相互作用进行综述.