人过敏毒素C5a反义肽与其正义肽的相互作用研究

目的　证实过敏毒素C5a与其反义肽分子间是否确实存在选择性相互识别作用 ,进一步以反义肽分子设计的思路 ,寻找过敏毒素C5a拮抗反义多肽的依据。方法　选择人过敏毒素C5a与其受体 (C5aR)相互作用的两个功能区域 ,按照反义肽分子设计的模型 ,分别设计合成其对应的反义肽 ,并利用生物分子相互作用分析 (BIA)技术 ,对C5a正、反义间相互作用进行分析。结果　在设计合成的 4条反义肽中 ,有一条反义多肽与全长C5a以及其对应的正义肽分子间均存在选择性相互作用 ,其解离平衡常数值分别为 6 .6 2× 10 - 6 M、4 .5 0 8× 10 - 6 M。结论　过敏毒素C5a及其反义肽分子间确实存在选择性相互作用 ,从反义肽的思路寻找C5a生物学效应的拮抗多肽 ,进行新药的设计和开发是可能的。     

生物传感器在医学中新的应用

生物传感器作为一项新兴的科学技术已应用于医学检验分析领域中，是近来国际上医学检测技术的热点之一。本文对国内外近几年光学、电化学和压电3种生物传感器及其应用的研究进行了综合评述。     

利用光学生物传感技术筛选C5a拮抗多肽

目的 :筛选人过敏毒素C5a的拮抗反义多肽 ,并进一步研究其分子间相互作用的动力学特性。方法 :借助于生物分子相互作用分析技术 (BIA) ,筛选可与C5a特异性结合的反义肽 ,并对其分子间的相互作用进行动力学分析。结果 :在设计合成的 4条反义肽中 ,筛选出一条反义多肽 (R4 ) ,其与C5a分子间相互作用的解离平衡常数值 (KD)o 6 6 2× 10 -6mol/L ;与其对应的功能活性区片段L2间的KD 值为 7 0 2× 10 -7。结论 :光学生物传感器是一种研究生物大分子间相互作用的理想工具 ,可用于弱亲和力分子间结合与解离的动力学分析及拮抗效应多肽的筛选。     

生物传感器在医学中新的应用

生物传感器作为一项新兴的科学技术已应用于医学检验分析领域中,是近来国际上医学检测技术的热点之一.本文对国内外近几年光学、电化学和压电3种生物传感器及其应用的研究进行了综合评述.     

反义方法及其在疼痛研究中的应用

分子生物学领域的最新进展极大地促进了基因克隆和测序的发展。有人预测到 2 0 0 5年人类基因组计划将提供 3,0 0 0～ 10 ,0 0 0种新的基因用于药物研究 [1 ] ,其中约 1/ 3的基因将用于研究疼痛。因此 ,对这些新基因的功能研究提出了更高的要求。目前研究基因功能的方法很多 ,包括增强基因表达和减弱或阻断基因表达等。减弱或阻断基因表达主要有基因敲除 ( knock- out)和基因下调 ( knock- down)两种方法。基因敲除是设计与目的基因互补的目的载体 ,通过同源重组结合或替代目的基因 ,阻断目的基因表达 ,进而研究基因的功能 [2 ] 。基因下调…     

生物传感器在内毒素检测中的应用

内毒素是造成脓毒症、多脏器功能衰减等病症的关键因子，对其快速、可靠、灵敏地进行检测具有重要的意义。传统检测方法存在费时、干扰因素多、自动化程度低等缺点，而生物传感器可以克服上述缺点。本重点回顾了压电和光纤生物传感器在内毒素检测中的应用和发展，最后对生物传感器的应用和发展趋势进行了简要的展望。     

反义核酸技术应用研究的最新进展

本文综述了１９９４年度反义核酸在抗肿瘤、抗病毒、调节免疫功能、基因功能、细胞凋亡、发育和遗传、神经系统、受体研究和Ｉ－Ⅱ期临床试验研究中的重要进展。     

生物传感器在内毒素检测中的应用

内毒素是造成脓毒症、多脏器功能衰减等病症的关键因子,对其快速、可靠、灵敏地进行检测具有重要的意义。传统检测方法存在费时、干扰因素多、自动化程度低等缺点,而生物传感器可以克服上述缺点。本文重点回顾了压电和光纤生物传感器在内毒素检测中的应用和发展,最后对生物传感器的应用和发展趋势进行了简要的展望。     

B7反义肽抑制同种异基因移植排斥反应的研究

目的 :探讨B7反义肽竞争抑制CD2 8 B7共刺激通路、抑制移植排斥反应的作用 ,为该反义肽在器官移植方面的应用提供实验依据。方法 :固相合成法合成含有MYPPPYmotif的B7反义肽N’ EFMYPPPYLD C’ ,纯度 95 % ,分子量 (MW)为12 71 6 ;用灭活的C5 7(H 2 d)脾细胞和体外培养新生C5 7心肌细胞作为刺激细胞 ,以适当浓度的B7反义肽处理刺激细胞后 ,再与BALB C(H 2 d)脾细胞作为应答细胞进行混合培养 ,观察此反义肽在体外抑制淋巴细胞增殖的效果 ;用此反义肽预封闭新生C5 7小鼠心肌后 ,移植到BALB C小鼠耳后 ,观察此反义肽在体内抑制移植排斥反应、延长心肌移植存活的情况。结果 :B7反义肽能抑制前述两种淋巴细胞增殖反应 ,抑制率分别为 38 4 %和 36 6 % ;并呈现出明显的剂量依赖关系 ,此反义肽预处理过的新生C5 7小鼠心肌 ,移植到BALB C小鼠 ,可较对照组平均延长 5 4天 (n =6 ,P <0 0 0 1)。结论 :人工合成的B7反义肽在体外可以通过抑制CD2 8 B7共刺激通路 ,抑制淋巴细胞的增殖 ,并可用于延长心肌移植物存活 ,为进一步研究其在移植免疫方面的应用提供了有益的启示。     

反义寡核苷酸在动脉粥样硬化研究中的应用

反义寡核苷酸在动脉粥样硬化研究中的应用成凤羚（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｂｒｅｉｆｒｅｖｉｅｗｏｆａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｏｔｉｄｅｓｕｓｅｄａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｇｅｎｔｏｎｃ...     

研究C5a反义肽的理论价值和实际意义

存在于蛋白质中某些相邻片段的微小表面之间的疏水作用力可以稳定天然蛋白质的构象 ,它也是小肽与蛋白质特异性结合过程中的主要驱动力。在正义DNA链上编码亲水性氨基酸残基的密码子 ,其同一阅读框内所对应的反义DNA链上大多会编码疏水性氨基酸 ,反之亦然。Mekler Biro Blalock模型 (MBB)认为正义 反义肽的相互作用是根据Kyte&Doolittle的疏水 亲水复合指数的疏水性反互补机制 (hydrophobicanticomplementarity)而实现的。在离体和在体实验中 ,都存在有正义 反义多肽发生相互作用的现象 ,如 :一氧化氮合成酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)的钙调蛋白结构域的反义肽 ,0 .0 1～ 1 .0mmol L的浓度就能够抑制结构型和诱导型NOS ,其IC(50 )值分别为 98mmol L和 56mmol L ;内皮素受体 (endothelinreceptor ,ETR A)一个片段的反义肽ETR P1 f可抑制内皮素诱导的颈动脉和股动脉血管收缩 ,1 .0 μmol LETR P f反义肽将明显抑制ET 1的功能活性。 0 .2 5μmol L的人C5a反义肽可以保护小鼠免受rh C5a的攻击 ,单独使用rh C5a会使小鼠发生中毒反应 ,血细胞减少     

C5a反义肽对肺血管内皮细胞与中性粒细胞粘附的影响

目的：探讨补体C5a反义肽在C5a过敏毒素介导的肺血管内皮细胞与中性粒细胞粘附中的阻断作用。方法：采用流式细胞术，检测C5a与其反义肽相互作用后再刺激人肺血管内皮细胞(PVEC)，对细胞表面粘附分子P选择素(P-Selectin)表达的影响；同时通过测定粘附于血管内皮细胞表面的PMN中髓过氧化物酶(MPO)活性，间接反映血管内皮细胞表面粘附的PMN数量的变化。结果：发现反义肽R4可以剂量依赖关系抑制C5a介导的PVEC上粘附分子P-Selectin的表达，当R4浓度为5000ng/ml时，可使P-Selectin的表达量下降20％左右，进一步增加R4的浓度，P-Se1ectin表达量无显著性改变；另外，反义肽R4对PVEC与PMN的粘附也有明显抑制作用，表现为PVEC上粘附的PMN中MPO活性的降低，当R4的浓度增加到5000ng/ml，MPO的活性可降低近40％左右。结论：C5a反义肽对C5a过敏毒素的生物学活性具有一定的拮抗作用。     

人C5a过敏毒素拮抗剂的分子设计及其活性检测

目的：从蛋白质结构与功能的关系出发,探讨C5aR与其配体的C5a的结合位。方法：按分子设计理论,采用亲水性方案寻找C5aR胞外区高亲水性区域,Fmoc方案人工合成C5aR第9－30位氨基酸基序（P22肽）,经高效液相色谱纯化,毛细管电泳鉴定。结果：合成多肽（P22）的纯度为95.19％,每次缩合的平均效率为99.78％;能与anti-C5aR McAb（S5／1,Serotic公司）有效地结合,酶联OD490极显著高于同浓度对照多肽C20;还可被配体rh-C5a(10ng/ml)明显抑制而降低其酶联OD值（P＜0.05）,此外10ng/mlP22还可抑制rhC5a所致U937细胞胞浆Ca^2 升高（P＜0.01）。结论：从C5a分子中寻找C5a结合位基序,可拮抗C5a的过敏毒素作用,为治疗C5a及其相关疾病进行新型的药物设计。     

Generation of chimeric C5a/formyl peptide receptors: towards the identification of the human C5a receptor binding site

We employed the polymerase chain reaction to produce a series of chimeric C5a/formyl peptide receptors. Chinese hamster ovary cells transfected with these constructs were tested for their ability to bind C5a. Substitution of three of the extracellular domains of the C5a receptor with the corresponding domains of the formyl peptide receptor abolished C5a binding, whilst replacement of the first extracellular loop of the C5a receptor with that of the formyl peptide receptor had little effect on the affinity of the receptor for C5a. We therefore conclude that this first outer loop of the C5a receptor does not participate in ligand binding, whilst involvement of the other extracellular domains of the receptor cannot be ruled out.     

Complement proteins and C3 anaphylatoxin in the tears of patients with conjunctivitis

Previous studies in our laboratory have demonstrated pollen-specific IgG antibodies in the tears of patients with vernal conjunctivitis (VC) and elevated tear IgG levels in patients with contact lens-induced giant papillary conjunctivitis (GPC). Tear secretions were examined for complement (C) proteins to determine the role of this effector system in the pathogenesis of these ocular disorders. The tears of VC (15) and GPC (10) patients with active disease had elevated tear levels of both C3 and factor B. By use of transferrin as a marker for the leakage of plasma proteins into the tears, most C3 was locally produced by the conjunctival tissues. Although immune complexes could not be detected in the tear secretions, increased levels of C3 des Arg were present in the tears that suggested complement activation with the generation of anaphylatoxins. These studies suggest that complement may be important in the inflammatory ocular process of VC and GPC and that the generation of anaphylatoxins (C3a), even by nonimmune mechanisms, may contribute to basophil and mast cell activation with the release of inflammatory mediators into the tear secretions.     

中和C5a过敏毒素的分子设计研究

目的 从蛋白质结构与功能的关系出发,探讨Ｃ５ａＲ与其配体Ｃ５ａ的结合位。方法 按分子设计理论,采用亲水性方案寻打Ｃ５ａ胞外区高亲水性区域,Ｆｍｏｃ方案人工合成Ｃ５ａ第９～３０位氨基酸基序（Ｐ２２肽）,经高压液相色谱纯化,毛细管电泳鉴定。结果合成多肽（Ｐ２２）的纯度为９５．１９％,每次缩合的平均效率为９９．７８％;能与ａｎｔｉ－Ｃ５ａＲ ＭｃＡｂ（Ｓ５／Ⅰ,Ｓｅｒｏｔｉｃ公司）有效地结合,酶联ＯＤ４     

C5a anaphylatoxin as a product of complement activation up-regulates the complement inhibitory factor H in rat Kupffer cells

The 155-kDa complement regulator factor H (FH) is the predominant soluble regulatory protein of the complement system. It acts as a cofactor for the factor I-mediated conversion of the component C3b to iC3b, competes with factor B for a binding site on C3b and C3(H2O) and promotes the dissociation of the C3bBb complex. The primary site of synthesis is the liver, i.e. FH-specific mRNA and protein were identified in both hepatocytes (HC) and Kupffer cells (KC). Previous studies in rat primary HC and KC had shown that the proinflammatory cytokine IFN-gamma influences the balance between activation and inhibition of the complement system through up-regulation of the inhibitory FH. In this study we show that C5a, as a product of complement activation, stimulates the expression of FH-specific mRNA and protein in KC and thus induces a negative feedback. Quantitative-competitive RT-PCR showed an approximate threefold C5a-induced up-regulation of FH. ELISA analyses revealed a corresponding increase in FH protein in the supernatants of KC. The up-regulation of FH was completely inhibited by the C5a-blocking monoclonal antibody 6-9F. Furthermore, an involvement of LPS and IFN-gamma was excluded, which strongly indicates a direct effect of C5a on the expression of FH in KC.