SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测前列腺癌抗原3mRNA表达水平

目的采用SYBR Green I实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,建立检测前列腺癌抗原3(DD3)mRNA的标准,定量检测人体不同组织中该基因的表达水平。方法从LNCaP细胞中采用RT- PCR法扩增特异性DD3基因片段,将其与pMD18-T载体连接,转化宿主菌JM109,对质粒标准进行聚合酶链反应(PCR)检测及测序。纯化后检测质粒拷贝浓度,制备梯度浓度标准品。应用LightCycler荧光定量PCR仪对标准品进行检测。取正常人乳腺组织、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢、正常前列腺组织、前列腺增生及前列腺癌组织,定量检测DD3 mRNA表达。结果建立稳定的检测DD3 mRNA的标准,正常人乳腺、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢中无DD3 mRNA表达,在正常前列腺及前列腺增生组织中低表达,两者间差异无显著性 (P>0．05);在前列腺癌中高表达(P<0．05)。结论应用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR技术检测 DD3 mRNA表达水平简便、可行、经济。DD3基因的表达具有良好的前列腺癌特异性。     

肝素酶在胃癌组织中表达的临床意义探讨

目的:探讨肝素酶表达在胃癌发生、发展中的作用。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定42例胃癌和26例非癌组织中肝素酶的表达情况。采用χ2检验比较肝素酶的表达与胃癌临床病理特征之间的关系。结果:胃癌中肝素酶呈阳性表达26例(61.9%);非癌组织中呈弱阳性表达1例(3.8%)。RT-PCR和FQ-PCR的检测结果均相同。胃癌TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期肝素酶mRNA表达阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05);肝素酶表达与浆膜浸润、淋巴结转移或远端转移呈相关性(P<0.05)。结论:肝素酶可能促进胃癌浸润和转移,在胃癌的转移途径中,参与淋巴道转移而非血道转移。肝素酶可作为预测胃癌复发、转移的分子标志物之一。     

Survivin基因与NET-1 蛋白在膀胱癌中的表达及相互关系

目的:探讨survivin基因和NET-1蛋白在膀胱癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应和免疫组化方法分别检测27例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织survivin基因和NET-1蛋白的表达,并将结果进行相关分析。结果:27例膀胱癌组织中survivin基因阳性17例(62.96%),NET-1蛋白阳性21例(77.78%);10例正常膀胱组织未见survivin基因表达,NET-1蛋白表达10.00%(1/10),二者差异有统计学意义(P<0.01);survivin基因与NET-1蛋白表达有相关性(χ2=7.09,P<0.01),survivin基因和NET-1蛋白表达与膀胱癌WHO分级和TNM分期有关,与患者年龄和性别无关。结论:survivin基因和NET-1蛋白在膀胱癌中过度表达表明膀胱癌发生、发展与细胞凋亡和细胞增殖有关,survivin基因对膀胱癌早期诊断和靶向治疗有重要意义。     

microRNA-150在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 检测microRNA-150 (miR-150) 在结肠癌细胞株、结直肠癌(CRC)组织中的表达,分析其与临床特征间的关系。方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测8种结肠癌细胞株及45例CRC患者癌组织及对应正常组织中miR-150的表达情况,分析其表达与CRC临床病理资料之间的关系。结果 miR-150在8种结肠癌细胞株中表达明显降低,CRC组织中miR-150的表达较同一患者正常黏膜组织中的miR-150表达明显下调(P<0.05);miR-150在CRC组织中的表达与肿瘤的分化程度(P<0.05)及病理类型(P<0.01)密切相关。结论 miR-150在CRC中表达下调,其低表达与CRC的分化及病理类型相关,可作为结直肠癌诊断及治疗的指标之一。     

miR-155在胃癌组织中的表达及临床意义

目的分析胃癌组织和癌旁组织miR-155的表达差异及其临床意义。方法收集手术切除的胃癌标本52例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）检测胃癌组织及癌旁组织标本miR-155的表达水平,并分析其表达水平与临床病理因素的关系。结果miR-155在胃癌组织中的表达量显著高于其在配对癌旁组织中的表达量（P〈0．05）;淋巴结转移组的表达量高于淋巴结未转移组（P〈0．05）。结论miR-155可能在胃癌发生、发展和转移过程中起到重要作用。     

TSC2基因的表达产物tuberin在结直肠癌中的表达及其意义

目的研究TSC2基因的表达产物tuberin在结直肠癌中mRNA和蛋白水平的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在结直肠癌发生中的作用。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测40例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织中tuberin mRNA的表达,应用免疫组织化学方法检测60例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织tuberin蛋白的表达,分析tuberin mRNA和蛋白表达与临床病理特征的关系。结果40例结直肠癌中tuberin mRNA表达量与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、远处转移无相关性（P〉0.05）,但显著低于癌旁正常组织,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）。tuberin蛋白在60例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织中的阳性表达率分别为41.6%、75%,差异有统计学意义（P﹤0.05）。tuberin蛋白阳性表达率与性别、组织学分级相关。结论tuberin在结直肠癌中表达下调,可能参与结直肠癌的发生。     

miR-218在大肠癌中的表达及其临床意义

目的研究miR-218在大肠癌与正常组织中表达的差异。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测60例大肠癌及相应正常组织中miR-218的表达水平,计算其相对表达量。结果60例大肠癌组织中miR-218的相对表达量为0.33±0.12,显著低于对照组,miR-218的表达差异有统计学意义(P<0.05);miR-218在不同性别、年龄、肿瘤大体形态、组织学类型、临床分期、浸润深度、肿瘤分化程度上表达差异无统计学意义(P>0.05),有淋巴结转移较无淋巴结转移者表达量低(P<0.05)。结论 miR-218在大肠癌中呈低表达,其表达水平越低可能提示淋巴结转移越早,miR-218可能作为抑癌基因参与肿瘤的发生、发展。     

WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义

目的 :探讨 WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)方法测定 5 3例急性白血病、15例慢性粒细胞白血病、2 1名正常人的 WT1基因表达。结果 :5 3例急性白血病患者中 4 1例 WT1基因表达阳性 ,阳性率为 77.35 % ,其中急性髓系白血病 (AML )和急性淋巴细胞白血病 (AL L )阳性率分别为 80 .6 %和 72 .0 % ,两组相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;15例的慢性粒细胞白血病 (CML ) WT1基因表达阳性率为 4 6 .7% ,其中 7例急变期和加速期阳性率为 10 0 % ,8例慢性期阳性率为 0 %。 2 7例急性白血病完全缓解 (CR)患者中 2 2例 (81.5 % ) WT1基因表达转阴 ,4例复发患者 WT1基因表达再次升高。 2 1例正常人的 WT1基因表达阴性 ;RT- PCR检测 WT1基因灵敏度为 10 - 4水平。结论 :1WT1基因在各种类型白血病患者中均有表达 ,在正常人中不表达。 WT1的表达与白血病病程相关 ;2 WT1基因可作为检测MRD的标记性基因。 WT1基因的表达与白血病患者的化疗效果及预后密切相关。     

P53结合蛋白1在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义

目的：探讨P53结合蛋白1（53BPI）在宫颈鳞癌组织中的表达情况及其与临床分期、分化程度、淋巴结转移以及病灶大小的关系。方法：选取2010年5月至2011年8月期间在温州医科大学附属第一医院妇科收治的临床资料完整的52例宫颈鳞癌、30例宫颈上皮内瘤变（CIN）和20例正常宫颈组织,采用实时荧光定量PCR技术检测53BP1 mRNA的表达水平,并对其表达水平与临床病理特征的关系进行统计学分析。结果：宫颈鳞癌组织中53BP1 mRNA相对表达水平明显低于正常组织,差异具有统计学意义（P〈0．05）。宫颈鳞癌中高分化组中53BP1 mRNA相对表达水平明显高于宫颈鳞癌低分化组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。宫颈鳞癌无淋巴结转移组中53BP1 mRNA相对表达水平明显高于宫颈鳞癌淋巴结转移组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。宫颈鳞癌FIGO I期组和FIGO Ⅱ期组以及宫颈鳞癌大病灶组和小病灶组间53BP1 mRNA相对表达水平比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：53BP1在宫颈鳞癌组织中表达减低,与分化程度、淋巴结转移有关,与病灶大小、临床分期无明显相关。     

原发性肝癌组织中LASP-1 mRNA和HPA-1 mRNA表达水平及其临床意义

目的定量检测LIM和SH3蛋白1（LASP-1）mRNA和乙酰肝素酶-1（HPA-1）mRNA在原发性肝癌组织中的表达水平,探讨二者与肝癌发生、侵袭和转移的关系。方法利用实时荧光定量PCR检测法分别检测62例原发性肝癌癌组织、配对癌旁组织（距癌2cm）和正常肝脏组织（距癌大于5cm）中LASP-1mRNA和HPA．1mRNA的表达水平,并分析二者与肝癌临床病理特征的关系。结果肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中HPA-1mRNA表达水平分别为47．25±16．65、23．15±14．89、7．56±5．15,LASP-1mRNA的表达水平分别为51．66±20．12、35．73±15．07、10．17±8．29。HPA-1mRNA及LASP-1mRNA在癌组织中的表达高于癌旁组织和正常组织（P均〈0．05）。HPA-1及LASP-1的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关（P〈0．05,P〈0．01）,与患者年龄、性别及肿瘤大小无关（P均〉0．05）。Spearman等级相关分析显示LASP-1mRNA和HPA-1mRNA的表达呈正相关（OR=0．421,P〈0．05）。结论肝癌组织中LASP-1mRNA与HPA-1mRNA的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移及TNM分期等密切相关。二者联合表达水平的增加可能促进肝癌的侵袭转移。     

Caveolin-1在复发膀胱尿路上皮癌组织中的表达及临床意义

目的 研究Caveolin-1在膀胱尿路上皮癌初发与复发之间表达的差异,探讨Caveolin-1与膀胱尿路上皮癌复发的分子机理及具有的临床病理意义。 方法 应用免疫组化方法检测23例初发膀胱尿路上皮癌和37例复发膀胱尿路上皮癌组织中Caveolin-1的表达,分析其与膀胱尿路上皮癌临床病理特征、肿瘤复发之间的关系。     

Cyclin D1在食管癌中的表达及其临床意义

【目的】检测食管癌中CyclinD1的表达并探索其临床意义。【方法】运用RT-PCR与组织芯片免疫组化法检测CyclinD1在食管癌组织、配对的邻近食管上皮中的表达状态。分析探讨CyclinD1的表达状态与食管癌临床和病理参数之间的关系。【结果】61%和35%的病例分别在食管鳞癌及其邻近上皮组织中显示CyclinD1表达增加。食管癌组织与其邻近的上皮组织之间CyclinD1的表达具有显著差异(!2=8.776,P<0.01)。不同T分期的肿瘤组织中CyclinD1的表达差异具有统计学意义,在T3+T4期的表达率为70%,T1+T2期的表达率为40%(T3+T4vsT1+T2,!2=5.363,P<0.05);在T3期的表达率为70%,T1期的表达率为30%(T3vsT1,!2=4.646,P<0.05)。【结论】CyclinD1可能是参与食管癌化的分子标志物,并且可能是区分不同食管癌T分期的有价值的分子标志物。     

Caveolin-1在胃癌中的表达及其临床意义

目的：探讨基因蛋白Caveolin-1与胃癌侵袭及转移的关系。方法整群选取采用在该院2011年1月—2015年1月间手术切除胃组织存档蜡块57例,组织学类型、分级和分期等均参考世界卫生组织分级系统(2011),临床分期,I期9例,II期15例,III期28例,IV期5例。伴淋巴结转移的39例,无腋窝淋巴转移的18例。应用FCM(流式细胞免疫法)检测Caveolin-1在57例胃癌组织中的相关表达,以荧光指数(Fluorescence Idex, FI)表示结果,取因其它良性胃部病变而手术切除的正常胃组织12例作为对照。结果Caveolin-1基因蛋白在III,IV期胃癌中的FI值0.53±0.27,明显低于I,II期的胃癌FI=0.91±0.31,差异有统计学意义(t=2.3782,P=0.0297<0.05);Caveolin-1基因蛋白在有淋巴转移的胃癌组织中平均FI值为0.51±0.21明显低于无淋巴转移的胃癌FI=0.94±0.27,差异有统计学意义(t=2.4563,P=0.0294<0.05)。结论胃癌组织中Caveolin-1的低表达可能促进了胃癌的侵袭和转移,提示Caveolin-1可作为胃癌诊断的一个有效指标并有助于胃癌的预后判断。     

胃癌患者细胞间黏附分子-1表达意义的研究

目的 :研究胃癌瘤体细胞间黏附分子 - 1(intercellularadhesionmolecule- 1,ICAM - 1)的表达与胃癌临床病理特征及其侵袭转移的关系。方法 :采用免疫组化技术 (S -P法 )对 6 0例胃癌及 15例远癌胃组织标本中ICAM - 1进行检测 ,分析ICAM - 1的表达与胃癌临床病理之间的关系。结果 :胃癌和远癌胃组织中ICAM - 1的阳性表达率分别为70 % (42 / 6 0 )和 2 0 % (3/ 15 ) ,两者之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,组织ICAM - 1表达水平与胃癌淋巴结转移、TNM分期密切相关。结论 :检测胃癌组织ICAM - 1的表达水平对评估淋巴结转移程度、TNM分期及胃癌侵袭深度有较大意义 ,ICAM - 1可能是反映胃癌侵袭转移潜能的一个有效生物学指标     

肌肉浸润性膀胱癌中腺苷酸激酶4的表达及临床意义

目的探讨腺苷酸激酶4(AK4)在肌肉浸润性膀胱癌组织中的表达及其临床意义。方法回顾性分析2006年3月至2012年11月天津市第一中心医院接受膀胱癌根治手术治疗的85例肌肉浸润性膀胱癌患者的临床资料。采用免疫组织化学法检测85例膀胱癌组织和对应的癌旁组织中AK4的表达,分析其与临床病理学特征的关系。结果 AK4的阳性表达主要在细胞质内,呈棕黄色颗粒。AK4在膀胱癌组织中均有一定的阳性表达,而在癌旁组织中无表达。AK4的阳性高表达率为70.6%(60/85)。膀胱癌远处转移的AK4高表达率高于无远处转移者,有脉管内瘤栓的AK4高表达率高于无脉管内瘤栓者(P<0.05),不同性别、年龄、肿瘤分期和分级、淋巴结转移和复发的AK4高表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。生存分析提示,在膀胱癌中AK4高表达的患者生存时间明显短于低表达患者(P<0.05)。结论肌肉浸润性膀胱癌组织中存在AK4表达水平上调,并与膀胱癌远处转移和脉管内瘤栓有关,且AK4异常表达可能提示膀胱癌患者预后不良。     

Syndecan-1(CD138)在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的 :有研究表明Syndecan - 1与部分人肿瘤的浸润和转移有一定的关系。本研究旨在探讨大肠腺癌组织中Syndecan - 1的表达及其在本病发展过程中的作用。材料与方法 :用免疫组化染色方法检测了 5 1例大肠腺癌及 2 0例癌旁异性增生组织和 2 0例正常肠组织中Syndecan - 1的表达。结果 :大肠腺癌组织中Syndecan - 1表达阳性率明显低于正常肠组织和癌旁异性增生组织 ,分别为 39.2 %、80 %和 75 %。大肠癌组织中Syndecan - 1的表达与淋巴结转移、远处转移、组织类型及Ducks分期差别有显著性 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,与年龄和肿瘤直径差别无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :大肠癌组织中Syndecan - 1的表达与肿瘤进展有一定的关系 ,可视为一种反映大肠癌生物侵袭性的有价值的标志物。     

Cyclin D1蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

为探讨周期素D1(Cyclin D1)蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义,作者采用免疫组化LSAB法对110例乳腺癌标本进行了Cyclin D1蛋白的检测.结果显示:本组病例的Cyclin D1蛋白表达阳性率为74.55%(82/110);生存时间≤5年及≥10年者,其Cyclin D1蛋白表达阳性率分别为96.22%(51/53)和40.54%(15/37);Cyclin D1蛋白过度表达与乳腺癌的临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移有关.由此揭示Cyclin D1蛋白的过度表达是判断乳腺癌患者预后的一项重要指标.     

YB-1在中晚期宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的研究YB-1在中晚期宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨YB-1在宫颈癌侵袭、转移和进展中的作用．方法采用免疫组化法检测中、晚期宫颈癌组织微阵列芯片78例组织标本中YB-1的表达情况,分析其表达与宫颈癌淋巴转移、FIGO分期、分化程度的关系．结果（1）78例宫颈癌组织中YB-1的阳性表达率为24/78（30．8％）;（2）YB-1在宫颈癌组织中表达与FIGO分期和分化程度密切相关,随着FIGO分期的变晚、分化程度的降低其表达逐渐增高（P〈O．05）;YB-1在宫颈癌组织中表达与淋巴转移无关,有淋巴转移组和无淋巴转移组YB-1表达差异无统计学意义（P〉O．05）．结论YB-1在宫颈癌组织中表达可能与宫颈癌的局部侵袭、转移和进展密切相关．     

Bmi-1在直肠癌中的表达及其临床意义

目的 研究Bmi-1 mRNA在直肠癌组织中的表达,探讨其在直肠癌的表达与直肠癌分化、转移及临床预后的关系.方法 收集42例直肠癌患者的癌组织、癌旁正常组织,采用RT-PCR方法检测直肠癌组织与对应癌旁组织Bmi-1 mRNA表达情况,并分析其与临床病理指标的关系.结果 经RT-PCR检测,42例配对标本中25例直肠癌患者Bmi-1mRNA表达明显高于癌旁正常组织,阳性表达率为59.5%.直肠癌直径≥5 cm表达明显高于直径＜5 cm(P＜0.05);有淋巴结转移者表达明显高于无淋巴结转移者(P＜0.05);Ⅲ/Ⅳ期患者表达明显高于Ⅰ/Ⅱ期者(P＜0.05).Bmi-1的表达与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度等均无明显关系(均P＞0.05).结论 Bmi-1 mRNA在直肠癌组织中高表达,提示Bmi-1可能参与了直肠癌的发生、发展,并对肿瘤的浸润转移有促进作用,与直肠癌的疾病进展密切相关,可以作为反映直肠癌生物学行为的有效指标.     

RASSF1A和TIP30在大肠癌中的表达及临床意义

目的 探讨RASSF1A和TIP30在大肠癌的发生、恶性转化、侵袭和转移的作用和临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测大肠正常组织、大肠癌组织和大肠癌旁组织中RASSF1A和TIP30蛋白表达.综合分析它们与患者的年龄、性别、分化程度、淋巴结转移等临床病理因素相关性.采用Spearman等级相关分析RASSF1A和TIP30的相关性.结果 在大肠正常组织、癌旁组织和癌组织中RASSF1A阳性率分别为90％、72％、16％,TIP30阳性率分别是95％、70％、13％,在大肠癌中RASSF1A和TIP30的表达与淋巴结转移、浸润深度、分化程度有关(P＜ 0.05). Spearman等级相关分析RASSF1A和TIP30的表达呈正相关(rs=0.292,P＜0.05).结论 RASSF1A和TIP30与大肠癌的发生、恶性转化、侵袭和转移的作用有关,可能作为大肠癌的早期诊断和预后判断的一种新的潜在的分子标志物,对大肠癌患者早期诊断,评价恶性程度,指导临床治疗,判断预后具有一定临床意义.