丙型肝炎病毒核心蛋白与转位蛋白相互作用的研究

目的 本文为了探讨丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白（core)在肝肿瘤中起作用的分子机制,研究核心蛋白是否与肿瘤相关蛋白的相互作用。方法 应用酵母双杂交系统3构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出30个克隆,对既能在四缺营养缺陷培养基上生长（SD／-Trp-Leu-His-Ade),又能在涂有x-α-gal的四缺培养平皿上长出蓝色菌落,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后测序,进行生物信息学分析。发现一个可以引起染色体转位的基因即与肿瘤发生有关的基因转位蛋白基因（Translin)同源。为了进一步证实转位蛋白基因所表达蛋白能与HCV核心蛋白相互作用,网织红细胞裂解物进行体外翻译、蛋白之间的免疫共沉淀。结果 结果显示,转位蛋白不但在酵母双杂交中能与HCV核心蛋白相互作用,而且在体外翻译后也能相互作用。结论 HCV核心蛋白可以和转位蛋白相互作用,推测此蛋白可能在HCV致癌中起一定作用,部分解释了HCV引起肿瘤的发病机制。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对HePG2细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察核心蛋白对细胞增殖和细胞周期调控的影响。方法 观察表达HCV核心蛋白的细胞株HePG2-C和作为对照的细胞株HePG2-CMV的细胞形态;绘制细胞生长曲线;检测细胞周期;用流式细胞仪、免疫组化染色检测PCNA,P16,P27,P53;半定量RT－PCR检测P16,P27,P53mRNA。结果 转染重组质粒PBK－HVCC的HePG2-C细胞与转染空载体PBK－CMV的HePG2-CMV细胞相比细胞形态未见明显变化。生长曲线显示HePG2 细胞在转染PBK-HCVC和空载体PBK－CMV后,生长速度无明显变化。检测转染空载体的细胞HePG2-CMV 81.3%进入G0／G1期,7．7％进入S期;而转染PBK－HCV C的细胞HePG2-C73%进入G0／G1期,13．7％进入S期。在进一步分子机制的探讨中发现HePG2-C细胞PCNA、P53表达显著增加,P16、P27表达显著降低。 同样的变化也发生在转录水平。结论 HCV核心蛋白可能通过调节某些基因的转录与表达,增加细胞DNA合成,扰乱细胞周期,进而参与致癌过程。     

亚洲地区丙型肝炎病毒基因重组研究

目的 检测亚洲地区丙型肝炎病毒(HCV)基因重组事件,探讨其重组规律及重组病毒株的分布情况.方法 收集GenBank中HCV病毒基因全序列1 192条,标记病毒分离地点并选出亚洲地区HCV序列296条,利用MEGA4.1软件对齐整理,参照参考序列去除空位.利用最大似然法构建进化树,划分HCV基因型,统计出亚洲地区HCV不同基因型的分布特征.运用RDP4.0软件检测HCV中的重组事件,统计基因型内与基因型间重组事件的发生规律.结果 1型为亚洲地区流行的主要基因型,共检测到重组序列22条.结论 不同基因型HCV在亚洲各地区分布有差异.基因重组断点在HCV基因组中散在分布,可能影响HCV病毒学特性与临床特征.     

丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6的反式调节基因研究

目的：筛选、克隆新基因HCBP6转染肝癌细胞后的反式调节基因，探索HCBP6基因表达对肝细胞基因表达谱的影响。方法：应用酵母双杂交技术和生物信息学(bioinfonnatics)技术，筛选得到的人HCV核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)的基因。构建HCBP6基因的真核表达载体pcDNA3．1(-)-HCBP6，应用抑制性消减杂交技术对重组表达质粒pcDNA3．1(-)-HCBP6转染的HepG2细胞和空载体转染的相同细胞差异表达的mRNA进行研究，将富集的二次PCR产物与T／A载体连接，并转化大肠杆菌进行文库扩增，随机挑取克隆聚合酶链反应(PCR)扩增后进行测序及同源性分析。结果：消减文库扩增后得到30个阳性克隆，菌落PCR分析显示，其中24个克隆含有200—1000bp插入片段。对插入片段测序，并通过生物信息学分析，结果共获得11种蛋白编码基因。结论：应用SSH技术成功筛选了HCBP6对肝癌细胞的反式调节基因，本实验结果对初步探索新基因的功能提供重要的信息，为进一步阐明HCV核心蛋白与HCBP6相互作用后的肝细胞生物大分子变化提供了理论依据。     

丙型肝炎病毒核心蛋白基因的克隆及其高效表达

目的在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因片段。方法利用PCR技术，扩增出357bp的HCV核心蛋白基因片段，双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32a，构建重组表达质粒pET-32a／HCVc。转化到大肠杆菌BL21中，IPTG诱导表达。SDS-PAGE鉴定表达情况，Western blot鉴定表达产物的抗原性。结果 经IPTG诱导后获得了目的蛋白的融合表达；SDS—PAGE电泳显示其在32000处有一条融和表达条带；Western blot结果显示其具有HCV抗原特异性。结论 HCV核心蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，而且表达产物有良好的抗原性。     

丙型肝炎病毒核心蛋白生物学功能研究进展

目的：概述丙型肝炎病毒核心蛋白的主要生物学功能。方法：查阅并参考国外近年20多篇相关献资料。结果：综述了丙型肝炎病毒核心蛋白T、B细胞表位及对细胞周期的影响。结论：核心蛋白是丙型肝炎病毒疫苗研究的靶区域,与病毒持续性感染、肝细胞肝癌的发生密切相关,对其深入研究有助于探讨丙型肝炎病毒的致病机制及其防治。     

丙型肝炎病毒分子生物学若干问题的研究现状

丙型肝炎病毒分子生物学若干问题的研究现状微生物教研室（０４６０００）李水仙康润田生物教研室车德才１ＨＣＶ的基因结构及其表达蛋白自从Ｃｈｏｏ等分离到第一个丙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＣＶｉｒｕｓ，ＨＣＶ）ＤＮＡ克隆［１］后，世界各地包括中国大陆和台...     

丙型肝炎病毒的研究进展

1989年初，非胃肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒(NANBV)被命名为丙型肝炎病毒(HCV)。是目前世界输血后肝炎的主要病原体，由于HCV感染易慢性比并与肝硬化及肝癌的发病密切相关，所以倍受医学界重视。近年来学们在丙型肝炎的研究方面作了大量工作，并有了很大进展，本对有关HCV的研究进展作一综述。     

丙型肝炎病毒（HCV）基因分型研究中现存的问题

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因分型研究中现存的问题广西区卫生防疫站李平川综述葛宪民审校目前，在ＨＣＶ基因分型研究中所依据的基因区、分型方法、基因型的命名及数目等方面均无统一标准，各家报道很不一致，现将导致上述现象的原因综述如下。１分型所依据的基因区不同目...     

丙型肝炎病毒基因分型的研究进展

丙型肝炎病毒是一个高度异质性的RNA病毒,目前可分为6个基因型与不同的亚型.本文就 HCV基因型构成、HCV基因分型的检测方法与命名、HCV基因型的流行病学的意义、HCV基因型与疾病严重性、急性HCV感染的转归、IFN-α疗效、HCV基因分型与疫苗的研制等有关的研究作一综述.     

丙型肝炎病毒基因型的检测研究进展

1　丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)的基因结构ＨＣＶ - 1型病毒是单股正链ＲＮＡ病毒 ,含有大约 940 0个核苷酸 ,在 3’末端有一个“多肽Ａ尾巴” ,核酸序列包含有由 341个硷基组成的 5’非翻译区 ,一个含 30 1 1个氨基酸的多肽蛋白的巨大的开放读码框架 (Ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ,ＯＲＦ)和由约 2 7个硷基组成的 3’非翻译区。据推测 ,三种Ｎ -末端ＨＣＶ蛋白 (Ｃ Ｅ1和Ｅ2 /ＮＳ2 )是结构蛋白 ,而四种Ｃ—末端蛋白 (ＮＳ2 ,ＮＳ3,ＮＳ4和ＮＳ5 )在病毒复制中起作用。每种ＨＣＶ基因型的开放读码框架(ＯＲＦ)的长度存在着特异性的差别 ,Ｈ…     

丙型肝炎病毒核心蛋白与JNK／SAPK信号转导通路

丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白是一种多功能的病毒核衣壳蛋白,对细胞信号转导途径具有明显作用,从而影响相关的靶基因。JNK／SAPK信号转导通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应以及多种人类疾病的发生与发展中起着至关重要的作用,是正常与疾病状态时细胞的一个重要调节靶点。     

丙型肝炎病毒 人工复制成功

德国美因兹大学的分子生物学者Rblf Bartenschlager及其同事在1999年7月1日出版的《科学》(Science)杂志上报告,他们找到了一种复制部分丙型肝炎病毒(HCV)的方法,这将有助于研究人员了解并有可能寻求治疗该病的新途径。现时全球有约170万人受肝炎病毒的感染,且越来越多地因此而引起肝病。由于HVC不能在实验室里培植,减慢了对其药物、疫苗以及对该病毒生命周期的基础知识的研究。     

原发性肝癌患者血清乙型肝炎病毒标志和丙型肝炎病毒抗体检测分析

对56例原发性肝癌(HCC)患者进行了血清乙型肝炎病毒标志(HBV—M)和丙型肝炎病毒抗体检测。结果,HCC患者HBV—M阳性率为83.93%,抗—HCV阴性率为17.86%;抗—HCV在HBV—M阴性患者检出率高于HBV—M阳性患者,HCV和HBV双重感染率为10.71%。说明HCC病毒病因以HBV为主,HCV在HBV—M阴性患者可能具有重要作用。     

丙型肝炎病毒血清学检测在临床中的应用

目的评价丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）和核心抗原（HCV-cAg）的酶联免疫检测结果在临床中的应用,选择适合基层医院开展的丙型肝炎病毒感染的血清学诊断方法。方法对来自我院的89例拟诊为丙型肝炎的患者同时进行抗-HCV、HCV-cAg双相检测。结果 89例拟诊为丙型肝炎患者中检出87例阳性,检出率为97.7%,84例抗-HCV阳性,53例两项检测同时阳性,5例抗-HCV阴性患者中,3例HCV-cAg阳性,2例HCV-cAg阴性。结论酶联免疫法联合检测抗HCV和HCV-cAg,简便易行,适合基层医院对丙型肝炎病毒感染的筛查,能减少漏诊,为临床提供可靠依据。     

丙型肝炎病毒核心蛋白抑制肝癌细胞P16、P27的表达

目的：探讨HCV核心蛋白对肝瘤细胞P16、P27表达的影响。方法：将HCV核心基因cDNA插入真核表达载体PBK－CMV的Hind　Ⅲ和BamH I位点间，构建重组质粒PBK－HCVc。再将重组质粒PBK－HCVc和空载体分别导入肝癌细胞株HepG2中，G418筛选，RT－PCR、蛋白印迹鉴定HCV核心蛋白表达。免疫组化，蛋白印迹检测P16、P27蛋白表达；RT－PCR检测P16、P27mRNA。结果：重组质粒PBK－HCVc在HepG2细胞中有稳定表达；表达HCV核心蛋白的细胞HepG2-C的P16、P27在蛋白水平和mRNA水平较转染空载体的细胞HepG2-CMV明显下降。结论：HCV核心蛋白能抑制P16、P27表达，可能与肝细胞的癌变有关。     

丙型肝炎病毒基因基础及干扰素治疗进展

目的：综述丙型肝炎病毒基因（ＨＣＶ）及干扰素（ＩＦＮ）治疗疗效的最新发展。方法：以手工检索并参阅国内外２０多篇文献资料。结果：综述了ＨＣＶ基因分型、基因变异、结构及功能、ＩＦＮ治疗及影响因素。结论：ＨＣＶ基因变异和准种感染是影响ＩＦＮ疗效的重要因素，为临床应用ＩＦＮ，减少治疗的盲目性提供理论依据。