临床常用的β内酰胺酶抑制剂能否治疗产Ⅰ型头孢菌素酶细菌的感染?

产 β内酰胺酶是革兰阴性杆菌对 β内酰胺类抗生素最 常见和最为重要的耐药机制 ,目前常见的革兰阴性杆菌临床分离菌株 85 %以上产酶阳性。在众多 β内酰胺酶中 ,可水解广谱 β内酰胺类抗生素的Ⅰ型头孢菌素 (ＡｍｐＣ)酶近年来日益受到重视 ,目前产ＡｍｐＣ酶细菌已成为院内感染最常见病原体。欧洲 1997～ 2 0 0 0年的一项耐药监测资料[1] 显示产ＡｍｐＣ酶细菌 (不包括铜绿假单胞菌 )占临床分离菌的 12 % ,其中 2 7.6%对头孢他啶耐药 ,美国一项全国监测报告[2 ] 耐药率更高达 3 7%。据我国 2 0 0 1年全国院内感染监测资料 ,这类菌株已占我…     

361株呼吸道铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素耐药机制分析

目的分析和推测呼吸道铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素耐药机制,指导临床合理使用抗菌药物。方法收集近两年呼吸道标本铜绿假单胞菌药敏资料,并根据监测药物耐药表型,推测铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的耐药机制。结果本院361株铜绿假单胞菌中,外排系统过度表达导致耐药最常见,占25．8％;其次,为产AmpC酶,占23．3％。产ESBLs、产金属β内酰胺酶耐药分别占13．0％和11．1％。膜孔蛋白缺失和产青霉素酶等2种耐药机制最低。结论外排系统过度表达和产ArnpC酶是本院铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制。     

产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的基因检测及耐药性研究

目的　研究本地区铜绿假单胞菌临床分离株中产金属 β -内酰胺酶流行株的主要基因型和耐药性。 方法　用纸片扩散法进行抗生素协同敏感试验 ,检测产金属 β -内酰胺酶的铜绿假单胞菌 ,用琼脂稀释法检测其最低抑菌浓度 (MIC) ,分别用金属酶IMP - 1,IMP - 2 ,VIM - 1和VIM - 2引物进行聚合酶链反应 (PCR)并对扩增产物进行序列分析。结果　在 82株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中 ,抗生素协同敏感试验阳性 7株 ,PCR检测金属 β -内酰胺酶阳性株也为这 7株 ,且基因型均为VIM - 2型。产酶株对亚胺培南、头孢噻肟、头孢他啶、哌拉西林 /他唑巴坦等常用抗铜绿假单胞菌 β -内酰胺类抗生素不敏感 ,对氨曲南较为敏感。结论　本地区铜绿假单胞菌所产金属 β-内酰胺酶为VIM - 2型 ,且产酶株耐药性强 ,应注意对其进行临床检测和监控。     

铜绿假单胞菌中Ambler A和D类酶流行状况与药物敏感性研究

目的了解AmblerA和D类β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌（PA）的流行状况及其与药物敏感性的关系。方法用琼脂稀释法检测101株铜绿假单胞菌对8种常用抗菌药物的最低抑菌浓度，并PCR测序法鉴定101株铜绿假单胞菌中AmblerA和D类β-内酰胺酶流行状况。结果101株铜绿假单胞菌对8种常用药物的MIC50的范围为2～32μg／ml。最有效的药物是美罗培南，但也仅能抑制80．2％的菌株。1种或1种以上β-内酰胺酶基因阳性的有27株，其中tem-1型是最常见的亚型，共有14株菌阳性；有10株菌oxa-10基因阳性；菌株PA36的oxa-I群酶基因在基因库中无完全同源序列，将其暂命名为oxa-56 like，并已提交基因库，序列号为EF437948。结论铜绿假单胞菌对β-内酰胺类耐药现象非常普遍，产酶株有对广谱抗菌药物广泛耐药的趋势。因此，早期及时地检出产酶菌株对临床治疗中抗菌药物的选择和控制感染的播散都是非常重要的。     

TEM-104编码基因的克隆与原核表达

随着超广谱 β 内酰胺类抗生素 (如头孢噻肟、氨曲南和头孢他啶 )在临床上的应用 ,首先在肠杆菌科细菌中发现了超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs) ,其由肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌、粘质沙雷菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌和铜绿假单胞菌等产生[1] ,且能使第 3代头孢菌素和单环类抗生素失活。截止 2 0 0 1年 12月 12日 ,在全球范围内至少已发现 15 0多种ESBLs。根据其编码基因同源性的不同分为TEM、SHV、CTX M、OXA和其他等五类 ,其中以TEM和SHV型最多见 ,他们分别由广谱酶TEM 1、TEM 2和SHV 1编码基因中数个位点发生点突…     

中国部分地区铜绿假单胞菌耐药性及主要β内酰胺酶基因型分布

目的 了解中国各地区铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况及其主要β内酰胺酶基因型的分布.方法 收集中国16个城市28家医院2006年7月至2007年7月临床分离的铜绿假单胞菌645株.采用Etest法或Kirby-Bauer纸片扩散法测定其对11种常用抗菌药物的敏感性,应用PCR扩增及序列分析确定所有菌株TEM、SHV、CTX-M、OXA等β内酰胺酶的基因型.统计学处理采用SPSS 11.0软件.结果 645株铜绿假单胞菌对11种抗菌药物的耐药率高,仅对阿米卡星及美罗培南的耐药率＜30%.其中对亚胺培南和(或)美罗培南不敏感的菌株为275株,占42.64%,多重耐药铜绿假单胞菌368株,占57.05%,对所检测抗菌药物全部耐药的铜绿假单胞菌菌株为20株,占3.10%.从基因型分布情况来看,阳性率最高的为OXA-10群共51株,其次CARB型37株,TEM型36株,PER型35株,CTX-M型11株,VEB型9株,SHV型5株,金属酶基因型阳性的24株,GES基因型1株,未检测到质粒介导的AmpC酶及其他碳青霉烯酶基因型.并在铜绿假单胞菌中发现了CTX-M-13、CTX-M-14、CTX-M-15、CTX-M-3基因型的超广谱β内酰胺酶基因.结论 中国28家医院临床分离的铜绿假单胞菌耐药情况比较严重.β内酰胺酶基因型以OXA-10及PSE-1为主.在对碳青霉烯类抗菌药物不敏感的或敏感的铜绿假单胞菌中,β内酰胺酶基因型分布也有所不同.     

铜绿假单胞菌耐药性与产β内酰胺酶的关系

目的分析临床分离的93株铜绿假单胞菌的耐药性与β内酰胺酶类型的关系。方法采用K-B法测定亚胺培南等16种抗菌药物对93株铜绿假单胞菌的体外抗菌活性；采用等电聚焦电泳(isoelectric focusing，IEF)、三维试验、2-巯基丙酸抑制试验、聚合酶链反应(PCR)分析β内酰胺酶类型。结果阿米卡星敏感性最高为82．8％，其次依次为头孢吡肟(81．7％)、头孢哌酮／舒巴坦(81．7％)、头孢他啶(80．6％)、美罗培南(77．4％)、亚胺培南(71．0％)。三维试验结果表明，14株(15．1％)产碳青霉烯酶，其中2株产金属酶；15株(16．1％)产AmpC酶，其中2株同时产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)。等电聚焦电泳显示产AmpC的细菌均具有9．0的条带；19号和54号菌株有一个6．3的条带。2．巯基丙酸抑制试验筛选金属酶2株阳性，与三维试验结果相符。设计金属酶VIM-2特异性引物，PCR反应结果阳性，经克隆测序证实为VIM-2型金属酶。结论铜绿假单胞菌感染中产B内酰胺酶较常见，其中产碳青霉烯酶和AmpC酶占一定比率，是造成临床上铜绿假单胞菌对碳青霉烯类和头孢菌素第3、4代耐药的主要原因。     

碳青霉烯酶:未来困扰我们的难题

在所有β内酰胺类抗生素中 ,碳青霉烯类具有最广泛的抗菌活性 ,它对革兰阴性菌产生的超广谱 β内酰胺酶(ESBL)、AmpC酶都很稳定 ;但随着碳青霉烯类的广泛使用 ,细菌也逐渐获得对此类药物的耐药性。铜绿假单胞菌由于外膜蛋白的D2孔的缺失而对亚胺培南耐药。非特异的多药外排泵的表达增强可以引起铜绿假单胞菌对美罗培南、头孢菌素、喹诺酮类、四环素等耐药。肠杆菌科细菌高产AmpC酶 ,同时外膜通透性降低 ,会造成碳青霉烯类耐药。麻烦的是 ,近来产生获得性碳青霉烯酶的铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肠杆菌科细菌的报道有所增加[1,2 ] 。由…     

多重耐药铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因型及传播机制

铜绿假单胞菌可导致医院获得性感染,是呼吸机相关肺炎的首位病原菌.由此菌引起的菌血症病死率达70%.碳青霉烯类抗生素对大多数β-内酰胺酶,包括超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和产头孢菌素C β-内酰胺酶(AmpC酶)稳定,具有抗菌谱广、杀菌活性强的特点,对铜绿假单胞菌也有很好的抗菌活性.     

产ESBLs鸡肠杆菌科细菌对21种抗菌药的敏感性检测

超广谱β-内酰胺酶（Extended-spectrump β-lactamases,ESBLs）是指能水解青霉素类和广谱头孢菌素类（包括第三、第四代头孢菌素）以及单环β-内酰胺类抗生素,由质粒介导的主要由肠杆菌科细菌产生的β-内酰胺酶（Beta-lactamase,BLA）。自1983年德国Knothe等从肺炎克雷伯菌中首次发现以来,世界各地不断有新的ESBLs从医院致病菌中发现。产ESBLs菌株已分布到全球各个角落,它们的流行呈增长趋势。ESBLs产生菌可通过接合、转化和转导等形式使耐药基因在细菌间扩散,从而造成严重的爆发性感染流行及耐药菌的传播扩散,因此对产ESBLs菌株的检测极为重要。     

鸡志贺菌产ESBLs的基因型鉴定

目的检测鸡志贺菌所产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型和基因亚型,分析其产酶耐药的分子机制。方法采用双纸片协同增效法对临床分离的鸡志贺菌进行了ESBLs检测,用试管二倍稀释法测定了其对常用抗菌药物的敏感性,并通过PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定该菌所产ESBLs的基因亚型。结果鸡志贺菌为ESBLs产生菌,对三代头孢类药物严重耐药,具有多重耐药特性。该菌所产ESBLs的基因序列与U48775对比,同源性为99.2%,属于TEM型ESBLs;与同源性最高的AY903309(TEM-116)相比,同源性为99.8%,两处碱基发生变化,409位碱基T突变为C,没有引起氨基酸变化,为沉默突变,157位碱基A突变为G,引起53位丝氨酸变为甘氨酸且该突变是新的突变位点。结论该菌产ESBLs基因型为新的基因亚型,暂命名为TEM-1V,上传至GenBank获序列号DQ211973。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药基因序列分析

目的　了解四川大学华西医院产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的TEM及SHV型ESBLs亚型 ,并分析其耐药性。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)扩增分离四川大学华西医院住院患者的产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌株的TEM型及SHV型ESBLs基因并测序 ,用琼脂稀释法测定头孢他啶和头孢噻肟等 8种抗菌药物的最小抑菌浓度 (MIC)值。结果　所有产ESBLs株均耐头孢噻肟 ,11株耐氨曲南 ,2株分别耐头孢他啶和头孢吡肟 ,对环丙沙星、阿米卡星及头孢西丁耐药的分别为 11株、5株和 3株。 12株ESBLs菌中 10株产SHV 2 ,2株产TEM 19。结论　本研究中的产ESBLs株以耐头孢噻肟和氨曲南为主 ,其中绝大多数为多重耐药株 ,产SHV 2和TEM 19是其对头孢噻肟及氨曲南等氧亚胺基 β 内酰胺酶类抗生素耐药的原因之一     

鲍曼不动杆菌17种β内酰胺酶基因研究

目的了解鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii.Ab)β内酰胺酶耐药基因存在状况。方法根据美国CLSI2004年版要求进行抗生素敏感性判断,应用PCR技术对Ab菌进行17种β内酰胺酶基因测定。结果Ab对13种抗菌药物耐药严重。27株Ab菌中blaTEM阳性22株(81.5%)、blaOXA-23群阳性12株(44.4%),blaADC阳性23株(85.2%)。其中12株为blaTEM、blaOXA-23群、blaADC3种β内酰胺酶基因均阳性,10株为blaTEM、blaADC2种β内酰胺酶基因阳性。结论我院分离的Ab不仅具有多重耐药性,而且blaTEM、blaOXA-23群、blaADC等β内酰胺酶基因携带率高。     

产气肠杆菌连续分离株的耐药性及β-内酰胺类抗生素耐药机制的研究

目的 探讨临床连续分离的产气肠杆菌耐药性及耐碳青霉烯类药物菌株对β-内酰胺类药物耐药的主要机制。方法 用Vitek2-Compact仪对临床连续分离的240株产气肠杆菌进行鉴定和常规药敏试验,并筛选出耐碳青霉烯类药物的菌株;用琼脂稀释法测定其对碳青霉烯类药物的MIC值;用改良的三维试验方法分别检测耐药菌株的ESBLs与AmpC酶;改良Hodge试验法检测碳青霉烯酶;用PCR扩增法检测3种β-内酰胺酶的耐药基因;结果 240株产气肠杆菌对23种常用抗生素的耐药率在3.8%～100%之间,最高为头孢西丁(100%)、最低为亚胺培南(3.8%);筛选出10株耐碳青霉烯类产气肠杆菌;三维试验10株菌ESBLs 及AmpC酶均为阳性,Hodge试验阳性7株。PCR结果示,携带blaKPC基因7株;携带blaCTX-M基因7株,携带blaSHV基因2株;携带blaDHA基因6株,携带blaACT/MIR型ampC基因4株; 16SrRNA基因定量确定ampC基因的表达增加的3株。结论 产气肠杆菌对临床常用抗菌药物具有较高的耐药性,其主要耐药机制为产碳青霉烯酶、ESBLs与AmpC酶。     

Avibactam is a covalent, reversible, non-β-lactam β-lactamase inhibitor

Avibactam is a β-lactamase inhibitor that is in clinical development, combined with β-lactam partners, for the treatment of bacterial infections comprising gram-negative organisms. Avibactam is a structural class of inhibitor that does not contain a β-lactam core but maintains the capacity to covalently acylate its β-lactamase targets. Using the TEM-1 enzyme, we characterized avibactam inhibition by measuring the on-rate for acylation and the off-rate for deacylation. The deacylation off-rate was 0.045 min(-1), which allowed investigation of the deacylation route from TEM-1. Using NMR and MS, we showed that deacylation proceeds through regeneration of intact avibactam and not hydrolysis. Other than TEM-1, four additional clinically relevant β-lactamases were shown to release intact avibactam after being acylated. We showed that avibactam is a covalent, slowly reversible inhibitor, which is a unique mechanism of inhibition among β-lactamase inhibitors.     

龟头包皮炎患者淋病奈瑟菌分离与鉴定及其耐药机制研究

目的分离鉴定龟头化脓性包皮炎病原菌,检测分离菌株耐药性并了解其耐药机制。方法采取尿道分泌物及龟头脓包液标本,革兰染色镜检并采用Mycoplasma IST 2试剂盒检测支原体。上述标本接种哥伦比亚血平板、淋病奈瑟菌选择平板、酵母菌鉴定平板进行细菌分离培养,获得的菌落用VITEK 2-compact全自动细菌检测分析系统进行鉴定,另采用PCR检测上述标本及菌落的淋病奈瑟菌16SrRNA基因。采用K-B法检测分离菌株对5种常用抗生素的敏感性,采用β-内酰胺酶和超广谱β-内酰胺酶确证试验了解该菌株产酶情况,PCR检测该菌株耐药相关tetM、TEM、mefA和ermF基因。结果各标本支原体检测结果均为阴性。尿道分泌物标本分离培养结果均为阴性,龟头脓包液血平板和选择平板培养结果为阳性。VITEK 2-compact系统和16SrRNA-PCR检测结果显示分离菌株为淋病奈瑟菌。该菌株产β内酰胺酶且对青霉素G、环丙沙星、四环素耐药,其基因组携带tetM、TEM、mefA和ermF基因。结论淋病奈瑟菌可引起龟头化脓性包皮炎,该淋病奈瑟菌菌株多重耐药并与其携带的耐药基因密切相关。     

Molecular characterization of extended-spectrum beta-lactamases produced by clinical isolates of Enterobacter cloacae from a Teaching Hospital in China

Of 59 clinical isolates of Enterobacter cloacae from a teaching hospital in Sichuan, China, 18 isolates were shown to be resistant to oxyimino cephalosporins and aztreonam. Enterobacterial repetitive consensus PCR revealed that these isolates comprised 7 distinct genotypes. The presence of plasmids in the 18 clinical isolates was revealed by conjugational transfer of plasmids from E. cloacae to Escherichia coli with the further isolation of the plasmids in the transconjugants. Subsequent nucleotide sequencing and beta-lactamase isoelectric focusing indicated that the plasmids encoded blaSHV, blaCTX-M and/or blaTEM genes, including genes for CTX-M-22 (13 strains), TEM-1 (12 strains), TEM-29 (1 strain), TEM-141 (1 strain), TEM-157 (1 strain), SHV-5 (1 strain), SHV-12 (1 strain), and SHV-70 (1 strain). The widespread presence of extended-spectrum beta-lactamases in E. cloacae isolated from the southwest of China was likely due to the dissemination of resistance plasmids with the predominant genotype of blaCTX-M-22.     

CTX-M extended-spectrum beta-lactamases among clinical isolates of Enterobacteriaceae in a Thai university hospital

This study presents updates on molecular epidemiology of extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) in clinical isolates of Enterobacteriaceae from Srinagarind Hospital, Khon Kaen University, Thailand. All isolates were screened for the presence of ESBL genes, bla(TEM), bla(SHV), bla(VEB) and bla(CTX-M), using PCR followed by nucleotide sequence determination. The results revealed that beta-lactamase genes among 48 isolates collected between 1998 and 1999 were bla(SHV) (79%), bla(CTX-M-9) (52%), bla(TEM-1) (48%) and bla(VEB) (33%), whereas those found in 52 isolates collected in 2003 were bla(TEM-1) (79%), bla(CTX-M-15) (44%), bla(SHV) (36%), bla(VEB) (36%), bla(CTX -M-14) (11%) and bla(CTX-M-9) (10%). In addition, 45 isolates carried at least two different ESBL genes. Using PCR, part of insertion sequence ISEcpl was found in the upstream regions of bla(CTX-M-14) and bla(CTX-M-15). ERIC-PCR analysis revealed that most ESBL-producing isolates were of different strains. This is the first report of CTX-M-9, CTX-M-14 and CTX-M-15 beta-lactamase genes in Enterobacteriaceae in Thailand.     

手术切口感染铜绿假单胞菌的MBLs基因检测和耐药性分析

目的研究住院患者手术切口感染铜绿假单胞菌的耐药性,并对碳青霉烯类耐药株进行分型和金属-内酰胺酶基因检测。方法分离自患者手术切口感染的铜绿假单胞菌186株,以铜绿假单胞菌ATCC27853,大肠埃希菌ATCC25922作为质控菌株,采用常见的8种抗生素进行药敏试验;利用ERIC-PCR对碳青霉烯类耐药株铜绿假单胞菌进行分型;利用IMP-PCR和VIM-PCR检测金属β-内酰胺酶基因。结果 186株铜绿假单胞菌对8种抗生素的耐药率分别为：庆大霉素和哌拉西林36.02%,阿米卡星和左氧氟沙星34.95%,美罗培南32.80%,环丙沙星32.26%,头孢吡肟27.42%,头孢他啶25.27%,其中62株耐碳青霉烯类铜绿假单细胞菌对美罗培南耐药率98.4%,且全部为多重耐药（MDR）,占总数的33.3%。11株为泛耐药株（PDR）,占总数的6%。4株VIM2型铜绿假单胞菌和1株IMP-25亚型金属β-内酰胺酶基因检测阳性。讨论随着近年来抗生素的频繁使用铜绿假单胞菌不断产生新的耐药株,并检出1株IMP-25亚型,这对研究铜绿假单胞菌的耐药性和流行病学特点具有重要意义。