光老化人真皮微血管内皮细胞模型的建立及桃红四物汤的保护作用

目的:建立人真皮微血管内皮细胞光老化模型,并观察桃红四物汤对其影响。方法:体外培养人真皮微血管内皮细胞,将其接种于96孔板中,分为UVA模型组、空白血清组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组、高剂量含药血清组5组,各组细胞接种后,培养24 h,以5 J/cm2的照射剂量对细胞进行照射,于照射后24 h在倒置光学显微镜下观察细胞损伤的形态学变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,评价桃红四物汤含药血清抗HDMEC细胞光老化作用。结果:与空白对照组比较,空白血清组及不同浓度桃红四物汤含药血清组细胞活性显著降低,有统计学差异(P0.01);与空白血清组比较,不同浓度的桃红四物汤含药血清组细胞增值活性均显著升高(P0.01);与低剂量含药血清组比较,中高剂量含药血清组细胞活性显著升高。结论:桃红四物汤对光老化人真皮微血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

基于Hippo-YAP信号通路探讨桃红四物汤对BMSCs增殖与成骨分化的影响

目的 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,运用桃红四物汤含药血清和Hippo信号通路抑制剂Verteporfin干预,进而观察BMSCs增殖和成骨分化的能力。方法 采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,选用10倍等效剂量的桃红四物汤灌服大鼠制备桃红四物汤含药血清,采取0.9%氯化钠注射液灌胃大鼠制取空白组对照血清,将BMSCs分为3组：空白血清组、桃红四物汤含药血清组（THSWT组）以及桃红四物汤含药血清+Verteporfin组（THSWT+V组）,使用CCK-8分析法分析4个时相点0、1、3、7 d细胞增殖活力;干预7 d后,进行ALP测定,观察骨向分化程度;处理21 d后,进行茜素红染色,观察钙积累,Western blotting法检测各组细胞成骨关键因子及Hippo通路关键蛋白表达。结果 THSWT组BMSCs细胞增殖能力明显高于THSWT+V组及空白血清组（P <0.01）;THSWT组BMSCs成骨分化能力及钙盐沉积程度高于THSWT+V组及空白血清组;THSWT组中YAP蛋白表达低于空白血清组、TAZ蛋白表达高于空白血清组（P <0.05）;THSWT...     

四君子汤、四物汤对体外培养人皮肤成纤维细胞EGF、EGF mRNA、VEGFA、VEGF mRNA表达的影响

目的观察补益气血中药四君子汤、四物汤对体外培养人皮肤成纤维细胞EGF、EGF mRNA、VEGFA、VEGF mRNA表达的影响。方法实验分为空白对照组、四君子汤组和四物汤组,空白对照组予含完全DMEM培养液进行细胞培养,四君子汤组、四物汤组分别予含10μg/L、100μg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L、1 g/L相应中药冻干粉的完全DMEM培养液进行细胞培养。采用CCK-8法测定四君子汤、四物汤对人皮肤成纤维细胞增殖的影响,确定药物浓度和用药时间,Western blot法检测EGF、VEGFA的表达,RT-PCR检测EGF mRNA、VEGF mRNA的表达。结果四君子汤、四物汤能促进人皮肤成纤维细胞增殖,各组在浓度为100 mg/L时,促进细胞增殖效果较明显,且药物干预24 h促细胞增殖效果明显。与对照组比较,四君子汤组、四物汤组EGF、EGF mRNA、VEGFA、VEGF mRNA表达增加(P0.05,P0.01)。与四君子汤组比较,四物汤组EGF、EGF mRNA表达降低(P0.05,P0.01),VEGFA表达差异无统计学意义(P0.05),VEGF mRNA表达量明显增加(P0.01)。结论补益气血中药四君子汤、四物汤可通过促进体外培养人皮肤成纤维细胞增殖,上调EGF mRNA、VEGF mRNA的表达,促进EGF、VEGFA的合成分泌,进而促进血管再生、肉芽组织生长,加速创面愈合;补气中药四君子汤与补血中药四物汤作用存在差异,这可能与中医气与血的不同作用、气血关系以及脏腑理论有关。     

桃红四物汤对糖尿病视网膜病变引起的细胞损伤及HIF-1α表达的影响

目的 探究桃红四物汤对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)的保护作用及潜在的分子机制。方法 (1)取hRMECs,设置5组：空白对照组加5 mmol/L葡萄糖培养,高糖模型组加30 mmol/L葡萄糖培养,桃红四物汤低、中、高剂量组分别加30 mmol/L葡萄糖和相应浓度桃红四物汤含药血清培养,通过Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力,血管生成实验检测细胞的成管能力,ELISA试剂盒检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)水平,Western blot法检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达情况。(2)另外设置4组：空白对照组加5 mmol/L葡萄糖培养,高糖模型组加30 mmol/L葡萄糖培养,桃红四物汤组加30 mmol/L葡萄糖和高剂量桃红四物汤含药血清培养,桃红四物汤+HIF-1α过表达组采用HIF-1α过表达的hRMECs细胞加30 mmol/L葡萄糖和高剂量桃红四物汤含药血清培养,考察HIF-1α过表达对桃红四物汤的功能回复作用。结果 (1)与空白对照组比较,高糖模型组细胞侵袭和迁移能力均明显增强(P均<0.05),成管数量明显...     

桃红四物汤对兔皮片移植模型血管新生及MMP-2的影响

目的:观察桃红四物汤对兔自体皮片移植术后移植皮片的血管密度、血清中MMP-2含量的影响,探讨桃红四物汤对皮片移植术后血管新生的影响机制。方法:将健康新西兰兔75只,按随机数字表法分为5组:桃红四物汤低、中、高剂量组、模型组、假手术组,每组15只。假手术组不进行皮片移植,切开后直接缝合,术后予蒸馏水灌胃,桃红四物汤低、中、高剂量组造模后予以相应剂量的桃红四物汤灌胃,模型组造模后以蒸馏水灌胃,各组灌胃时间最长均为8 d。分别于造模后2 d、5 d、8 d从每组随机抽取5只,检测移植皮片血管密度及血清中MMP-2含量。结果:造模后2 d、5 d、8 d,桃红四物汤低、中、高剂量组血管密度、血清MMP-2浓度均高于模型组(P0.05);造模后2 d桃红四物汤低、中、高剂量组与模型组血管密度均低于假手术组(P0.05);造模后2 d、5 d桃红四物汤中、高剂量组血管密度均高于桃红四物汤低剂量组(P0.05)。造模后2 d、5 d、8 d桃红四物汤低、中、高剂量组血清MMP-2浓度均高于假手术组(P0.05);造模后2 d、5 d、8 d桃红四物汤中、高剂量组血清中MMP-2浓度均高于桃红四物汤低剂量组(P0.05);桃红四物汤高、中剂量组血管密度、血清MMP-2浓度比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:桃红四物汤能上调自体皮片移植模型兔血清中MMP-2含量,并能使血管密度值增加,具有促血管新生作用。     

虎杖苷对体外培养乳鼠心肌细胞肥大及成纤维细胞增殖的影响

目的研究虎杖苷对新生乳鼠离体培养心肌细胞和成纤维细胞增殖的影响及其抗氧化作用。方法剪取新生SD大鼠左心室,采用差速贴壁法分离并培养心肌细胞和成纤维细胞,将培养成功的成纤维细胞和心肌细胞均分为5组,即正常对照组、虎杖苷对照组(10-4mol/L)、模型组[10-6mol/L异丙肾上腺素(ISO)]、虎杖苷低浓度组(10-5mol/L+ISO 10-6mol/L)和虎杖苷高浓度组(10-4mol/L+ISO 10-6mol/L),进行相应干预。孵育2天后,采用考马斯亮兰法测定心肌细胞蛋白质含量,并测定其超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;测定成纤维细胞增殖及其培养液中SOD和GSH-Px及NO浓度。结果与正常对照组比较,模型组可诱导心肌细胞蛋白含量增多,明显降低SOD及GSH-Px活力(P0.05);与模型组比较,虎杖苷高低浓度组心肌细胞蛋白含量明显降低,且SOD及GSH-Px活力明显升高(P0.05);虎杖苷高浓度对GSH-Px活性的升高明显较低浓度强,差异有统计学意义(P0.05)。与正常对照组比较,模型组可诱导成纤维细胞增殖,明显降低SOD及GSH-Px活力和NO含量(P0.05);与模型组比较,虎杖苷高浓度组能抑制成纤维细胞的增殖,显著升高NO含量和SOD及GSH-Px活力(P0.05)。结论虎杖苷对ISO诱导的乳鼠心肌细胞肥大和成纤维细胞增殖有一定对抗作用,其作用机制与其抗氧化作用以及影响NO生成有关。     

桃红四物汤含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞TNF-α、MCP-1和IL-1β表达的影响

目的:研究桃红四物汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·m L-1),每天2次,按10 m L·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清。MTT法检测桃红四物汤含药血清(终浓度为5%、10%和15%)预处理对LPS诱导细胞生存率减少的作用;real-time RT-PCR检测TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达情况;Western Blot方法检测MCP-1和NFκB蛋白表达;检测活性氧(ROS)含量,研究桃红四物汤含药血清对HUVEC抗氧化能力的影响。结果:与空白血清对照组比较,经LPS(1μg·m L-1)刺激后细胞ROS含量明显增高而生存率显著降低,同时细胞炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达增高;含药血清组可显著提高HUVECs活力、降低ROS含量和TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达。结论:桃红四物汤含药血清对LPS诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用。     

清肝方对非酒精性脂肪肝大鼠血清GGT影响随机平行对照研究

[目的]观测清肝方对非酒精性脂肪肝大鼠血清GGT影响。[方法]使用随机平行对照方法,30只大鼠喂养3d,称重后使用随机数字表法分为3组,空白组、模型组、药物组,10只/组。空白组普通标准饲料喂养,模型组、药物组高脂饲料喂养,自由饮水,7周后即可得NAFLD动物模型。药物组:3m L/d,清肝方水煎剂;空白组与模型组:3m L/d,生理盐水。各组喂养12周(药物干预5周),水合氯醛麻醉,腹主动脉取血3m L。观测体重、肝指数、血液谷氨酰转移酶(GGT)、肝脏组织。[结果]实验过程中空白组死亡2只,模型组与药物组各死亡1只。体重药物组、模型组均高于空白组(P<0.05,P<0.01),药物组低于模型组(P<0.01);肝指数模型组高于空白组、药物组(P<0.05),药物组与空白组间无明显差异(P>0.05);血清GGT药物组、模型组均高于空白组(P<0.05,P<0.01),药物组低于模型组(P<0.01)。[结论]清肝方可通过抑制肝脏炎症反应和减少肝细胞损伤,减少血清GGT含量,为临床治疗非酒精性脂肪肝提供理论依据。     

小续命汤与桃红四物汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的干预研究

目的:观察小续命汤与桃红四物汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的干预作用及疗效对比。方法:将120只健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=20):正常组、假手术组、模型组、小续命汤组、桃红四物汤组以及小续命汤和桃红四物汤合用组,除正常组和假手术组不插栓线外,其余组采用线栓法制备大脑中动脉阻塞1.5 h再灌注模型,24 h后采用Garcia JH法进行大鼠神经功能评分,造模成功后分别以1 m L·100 g~(-1)小续命汤、桃红四物汤、小续命汤和桃红四物汤合用混合液进行灌胃治疗,正常组和假手术组予等容量生理盐水灌胃;术后治疗第7天时将各组大鼠神经功能评分后处死,取脑组织使用TTC染色法和Nissl染色法观察各组大鼠脑梗死体积和大鼠神经细胞形态和数量。结果:造模成功后,与模型组比较,小续命汤组、桃红四物汤组及两方合用组均能增加神经功能评分(P 0.05),降低大鼠脑梗死体积率(P 0.05),增加大鼠大脑皮质顶叶区尼氏体数量(P 0.05);且两方合用组神经功能评分,大鼠脑梗死体积率,大脑皮质缺血再灌注区正常存活尼氏体数量明显优于桃红四物汤组及小续命汤组(P 0.05),桃红四物汤组又显著于小续命汤组(P0.05)。结论:小续命汤和桃红四物汤对大鼠脑缺血再灌注损伤均具有一定保护作用,其中以桃红四物汤的疗效为优,而两方合用疗效较单用小续命汤和桃红四物汤更为显著。     

桃红四物汤对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌三磷酸肌醇受体表达的影响

目的观察桃红四物汤对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌三磷酸肌醇受体(IP3R)表达的影响,从Wnt/Ca~(2+)信号通路角度探讨其作用机制。方法取2月龄雄性SD大鼠80只,随机分为正常组、模型组、桃红四物汤组和阻滞剂组,每组20只,除正常组外,其余各组均阻断血流制备大鼠右后肢缺血-再灌注损伤模型,桃红四物汤组、阻滞剂组造模前分别给予桃红四物汤灌胃、阻滞剂腹腔注射预处理,HE染色和DAPI荧光染色观察再灌后8 h腓肠肌细胞凋亡,免疫组化检测再灌后8 h腓肠肌IP3R蛋白的表达,RT-PCR检测再灌后0、2、4、8 h腓肠肌IP3R mRNA的表达。结果 HE染色和DAPI荧光染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显升高(P0.05);与模型组比较,桃红四物汤组和阻滞剂组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显降低(P0.05),桃红四物汤组低于阻滞剂组(P0.05)。免疫组化及RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠腓肠肌IP3R蛋白和m RNA表达明显上调(P0.05);与模型组比较,桃红四物汤组、阻滞剂组大鼠腓肠肌IP3R蛋白和m RNA表达明显下调(P0.05)。结论桃红四物汤通过下调Wnt5a/Ca~(2+)信号通路IP3R的表达减轻肢体缺血-再灌注损伤。