联合包载阿霉素和siRNA阳离子脂质体的制备及体外评价

目的制备联合包载阿霉素和siRNA阳离子脂质体并进行体外评价。方法采用薄膜分散法制备载阿霉素阳离子脂质体(doxorubicin cationic liposomes,DCL),与siRNA静电复合得联合载药阳离子脂质体(liposome complexes,lipoplexes);动态激光散射法测定lipoplexes的粒径和zeta电位;透射电镜观察lipoplexes形态;超滤离心法测定lipoplexes中阿霉素和siRNA的包封率;琼脂糖凝胶阻滞实验考察lipoplexes中siRNA的结合能力;荧光显微镜观察MCF-7/ADR细胞对siRNA的摄取情况。结果所制备的lipoplexes外形圆整、分散均匀,当(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵与siRNA质量比为20时,其平均粒径为(125.7±2.7)nm,zeta电位为((45.8±1.5)m V,阿霉素包封率为(52.3±2.6)%,siRNA包封率为(88.1±1.8)%,且lipoplexes中siRNA可以紧密结合。与游离siRNA相比,lipoplexes可显著增加MCF-7/ADR细胞对siRNA的摄取。结论联合包载阿霉素和siRNA阳离子脂质体体外性质良好,能增加MCF-7/ADR细胞对siRNA的摄取,可用于小分子化疗药物和siRNA的共输送。     

阴离子脂质体－阳离子脂质体复合物介导的基因转染

目的评价阴离子脂质体-阳离子脂质体复合物介导质粒转移至HepG2肝癌细胞中及其毒副作用。方法制备携载表达绿色荧光蛋白质粒的阳离子脂质体,与阴离子脂质体形成复合物。测定脂质体复合物的zeta电位,凝胶阻滞实验考察质粒包封情况,流式细胞仪测量各阴离子脂质体-阳离子脂质体复合物的转染效率,MTT法检测细胞毒性。结果复合物能完全包裹质粒,其zeta电位低于阳离子脂质体zeta电位;脂质体复合物介导的转染效率略低于阳离子脂质体,其细胞生存率高于阳离子脂质体。结论阴离子脂质体-阳离子脂质体复合物在降低细胞毒性的同时,可实现对HepG2细胞较高的转染效率。     

pH/氧化还原双敏感聚合物的合成与siRNA复合胶束的制剂学性质

目的合成聚乙二醇-聚乳酸-聚组氨酸-聚乙烯亚胺(methoxy-poly(ethylene glycol)-polylactide-polyhistidine-ss-polyethylenimine,mPEG-PLA-PHis-ss-PEI)阳离子聚合物并制备siRNA胶束复合物,考察其体外制剂学性质。方法以聚乙二醇单甲醚、D,L-丙交酯、聚组氨酸和聚乙烯亚胺为起始原料,合成聚乙二醇-聚乳酸-聚组氨酸-聚乙烯亚胺,并应用核磁共振氢谱和凝胶渗透色谱进行表征;采用薄膜分散法制备mPEG-PLA-PHis-ss-PEI/siRNA胶束复合物(micelleplexes);动态激光散射法测定胶束复合物的粒径和Zeta电位值;透射电镜观察胶束复合物的形态;超速离心法测定胶束复合物中,小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)的包封率;琼脂糖凝胶电泳阻滞法分别考察阳离子聚合物抵御阴离子置换能力、血清稳定性和胶束复合物在弱酸性和还原性条件下siRNA的触发释放行为。结果所制备的胶束复合物呈类球形,大小均一,分布均匀;当氮磷比(nitrogen/phosphoruse molar ratio,N/P)为20时,胶束复合物平均粒径为104.0 nm,Zeta电位值为30.1 mV,siRNA的包封率为(92.9±2.4)%;凝胶电泳阻滞实验结果显示,当N/P大于7时,胶束复合物具有良好的阴离子抵御能力及较强的血清稳定性;胶束复合物在较低N/P条件下具有pH敏感和还原敏感性。结论所制备的胶束复合物稳定性较好,可用于递送siRNA。     

白术挥发油脂质体的制备及质量考察

目的制备白术挥发油脂质体并考察其性质。方法采用薄膜分散法制备白术挥发油脂质体,正交设计优化处方,低温高速离心法分离脂质体和游离药物,HPLC测定脂质体的包封率,并测定其zeta电位和粒径,考察其稳定性。结果白术挥发油脂质体包封率为62．7％,zeta电位为36．65mV,平均粒径为206．9nm。结论薄膜分散法制得的白术挥发油脂质体包封率高。粒径分布均一,稳定性较好。     

载基因阳离子脂质体的制备与包封率测定

目的:制备包封基因质粒的阳离子脂质体并考察其性质、测定包封率。方法:以DC-Chol和DOPE为材料,薄膜分散法制备阳离子脂质体,与可表达增强型绿色荧光蛋白的基因质粒结合并考察其转染性能,激光粒度分析仪测定阳离子脂质体和脂质复合物的粒径及Zeta电位;使用葡聚糖凝胶过滤法测定包封率,并对该法进行详细考察。结果:所制备的阳离子脂质体和脂质复合物的平均粒径分别为161.6和216.3 nm,Zeta电位分别为+22.2和+3.2 mV;基因质粒在0.1925～3.85μg.mL-1浓度范围内线性良好,精密度高,与葡聚糖无吸附作用,柱回收率高,测得脂质复合物的包封率为89.94%。结论:采用该处方和工艺可成功制备质量良好、能有效转染细胞的阳离子脂质体载体,葡聚糖凝胶过滤法可准确测定其包封率,该法快速、简便、有效。     

阿霉素聚酰胺-胺树状大分子脂质体包覆物的制备与评价

目的制备阿霉素聚酰胺-胺树状大分子脂质体包覆物(LLDs-PAMAM-DOX),并对制剂性质进行评价。方法采用逆向蒸发结合pH梯度法制备LLDs-PAMAM-DOX,观察形态,测定粒径分布及zeta电位;采用凝胶柱-UV法测定包封率;采用透析法测定体外释药;采用MTT法,考察其对人乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒作用。结果LLDs-PAMAM-DOX的粒径约为80¹20nm;zeta电位约为22.5120nm;zeta电位约为22.5³2.4mV;包封率大于85%,缓释作用明显。LLDs-PAMAM-DOX呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞的生长,对MCF-7的抑制作用明显优于普通脂质体L-DOX。结论聚酰胺-胺树状大分子脂质体包覆物(LLDs-PAMAM)作为阿霉素(doxorubicin,DOX)的载体,具有较好的缓释作用及良好的抑制肿瘤细胞作用,有望成为一种有潜力的新型药物载体。     

唑来膦酸阳离子脂质体的制备及其体外特性表征

目的制备唑来膦酸阳离子脂质体,并对其体外特性进行表征。方法采用薄膜分散法制备唑来膦酸阳离子脂质体,以包封率、载药量、平均粒径、Zeta电位为评价指标,对处方及工艺进行单因素考察,并对其体外特性进行表征。结果确定处方工艺为DPPC与DC-Chol比例为3∶1,PBS水化体积10 m L,旋转蒸发时间60 min,超声均化5 min,制备得到的阳离子脂质体的平均粒径、聚分散指数、包封率、载药量和Zeta电位分别为(106.76±1.94)nm,0.262±0.027,(38.54±0.99)%,(3.42±0.27)%,+(42.37±2.60)m V,唑来膦酸阳离子脂质体体外释药具有缓释靶向特性,药物释放曲线符合Weibull方程模型。结论采用薄膜分散法制备的唑来膦酸阳离子脂质体具有较高的稳定性,为其药动学和药效学研究奠定了基础。     

他克莫司载药胶束的制备与制剂学性质

目的以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸[methoxy poly(ethylene glycol)-poly(lactide),m PEG-PLA]嵌段共聚物为载体材料,制备他克莫司载药胶束,考察其制剂学性质。方法采用薄膜分散法制备他克莫司载药胶束。超速离心法测定他克莫司载药胶束的载药量和包封率。以载药量、包封率、粒径以及粒径分布为评价指标,采用单因素试验和正交试验优化他克莫司载药胶束制备处方。应用透射电镜、粒度测定仪和zeta电位分析仪对他克莫司载药胶束的形态、粒径和电位进行表征。结果在优化条件下制备的他克莫司载药胶束载药量为7.77%,包封率为84.31%,胶束粒子外观圆整且分散良好,平均粒径为23.20 nm,PDI为0.058,zeta电位为-0.831 m V。结论单因素试验联合正交试验可有效地优化他克莫司m PEG-PLA胶束处方和制备工艺。优化条件下制备的他克莫司载药胶束具有较高的载药量和包封率,粒径较小且分布均匀,24 h内稳定性良好。     

乙醇注入法制备柚皮素脂质体及其质量评价

目的制备柚皮素脂质体,优化其处方和工艺,并对其相关性能进行评价。方法采用乙醇注入法制备柚皮素脂质体,通过正交设计优化处方工艺;利用马尔文动态光散射粒径测定仪测定其zeta电位和粒径,采用微型凝胶柱离心法分离游离药物和脂质体,HPLC法测定脂质体中柚皮素的包封率。结果确定最佳处方为:磷脂的质量浓度为0.006 g·m L~(-1),胆固醇与磷脂的质量比为1∶3,药脂比为1∶20,缓冲液p H值为7.40,类脂溶液的溶解温度设定为55℃,类脂溶液的溶解时间为25 min。制得的柚皮素脂质体包封率为(80.44±0.98)%,平均粒径为(223±11)nm,Zeta电位为(-35.9±5)m V。结论乙醇注入法制备柚皮素脂质体工艺简单可行,所制备的柚皮素脂质体包封率高、粒径较小、稳定性好。     

载基因纳米阳离子脂质体前体制剂的制备及性质研究

目的:制备稳定的载反义寡核苷酸的阳离子脂质体前体制剂。方法:以磷脂-二油酰磷脂酰乙醇胺(dioleoylphophatidylethanolamine,DOPE)-十八胺-胆固醇为类脂成分,采用薄膜超声-挤压制备空白阳离子脂质体,吸附-冷冻干燥法制备载反义寡核苷酸阳离子脂质体前体。激光粒度仪测定冷冻干燥前后脂质体Zeta电位及粒径,透射电镜观察其形态,葡聚糖凝胶柱分离未包封的反义寡核苷酸,紫外法测定冻干前后的载药率。结果:海藻糖与甘露醇及甘氨酸为较好的冻干保护剂,制得的阳离子脂质体前体带正电荷,规则球形,大小较均匀,海藻糖作为保护剂复溶前后平均粒径为175和320 nm左右,复融前后Zeta电位值在+32和+40 mV左右,脂质体的载药率复溶前后分别为87.6%与83.21%。结论:海藻糖作为冻干保护剂,薄膜超声挤压法与冷冻干燥法结合,可成功制备反义寡核苷酸阳离子脂质体前体制剂,稳定性大大改善。