PCOS患者分泌期子宫内膜AngⅡ及AT2的表达变化

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其2型受体（AT2）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者分泌期子宫内膜中的表达变化。方法12例曾接受促排卵治疗、基础体温双相的PCOS患者为A组,其中6例行诊断性刮宫（诊刮）术者为B组;10例月经正常的育龄妇女作为对照（C组）。于经前2～3d测血清生殖激素及子宫动脉和子宫内膜螺旋动脉的收缩期峰值流速（Vs）、舒张期末血流速度（WD）、阻力指数（RI）。同日B、C组行诊刮术,测子宫内膜AngⅡ及AT2。结果B组子宫内膜腺上皮AngⅡ灰度值低于C组,（P〈0．01）,其孕酮（P）显著低于C组（P〈0．01）,腺上皮AngⅡ与P呈正相关（r=0．969,P〈0．05）,其子宫内膜螺旋动脉管周基质细胞AngⅡ与螺旋动脉RⅡ呈正相关（r=0．989,P〈0．05）。A组子宫内膜螺旋动脉显示率低于C组（P〈0．05）。C组螺旋动脉Vs与其管周基质细胞AT2呈正相关（r=0．731,P〈0．05）。结论PCOS患者经促排卵治疗后,分泌期子宫内膜腺上皮细胞AngⅡ的表达高于正常,可能与P较低有关;分泌期子宫内膜血供较少,与螺旋动脉管周基质细胞AngⅡ及AT2的表达有关。     

肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞MCP-1表达的影响

目的观察肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法体外培养大鼠主动脉VSMCs。实验分组：空白对照组（A组）;1×10^-7mol/L ADM组（B组）;1×10^-7mol／LAngⅡ组（C组）;1×10^-8mol／L ADM＋1×10^-7mol／L AngⅡ组（D组）;1×10^-7mol／LADM＋1×10^-7mol／LAng Ⅱ组（E组）。采用逆转录聚合酶链反应技术测定细胞中MCP-1 mRNA的表达量。结果C组MCP-1 mRNA的表达量高于A组（P〈0．05）。D组、E组MCP-1 mRNA的表达量低于C组（P〈0．05）。结论ADM对Ang Ⅱ诱导的大鼠主动脉VSMCs MCP-1的表达起明显的抑制作用,这可能是其发挥抗炎、心血管保护作用机理中的一个重要途径。     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血单个核细胞中叉头状螺旋转录因子（Foxp3）mRNA表达及其与HBV感染后转归的关系。方法应用实时RT-PCR方法检测19例急性乙型肝炎、50例慢性乙型肝炎、21例乙型肝炎后肝硬化、15例慢性乙型重型肝炎和15例正常对照组外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达,应用ELISA法检测其血清中白细胞介素（IL）-10、转化生长因子β（TGF-β）含量,并观察它们与Foxp3 mRNA的相关性。结果急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化、慢性重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平高于正常对照组（P〈0.05）,重型肝炎Foxp3 mRNA水平高于其他各组（P〈0.05）。HBV感染各组IL-10、TGF-β含量较正常组明显升高（P〈0.05）,急性乙型肝炎组IL-10含量较慢性乙型肝炎组明显升高（P〈0.05）;急性乙型肝炎组TGF-β含量与肝硬化组、重型肝炎组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,其他各组两两比较差异有统计学意义（P〈0.05）。IL-10、TGF-β与Foxp3 mRNA表达水平无相关性。结论急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化、慢性重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平高于正常人,重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平高于其他各组HBV感染者,表明Foxp3参与了HBV发病过程,外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平可能与疾病预后密切相关。     

新疆哈萨克族高血压患者外周血单个核细胞炎症激活与NLRP3炎症体通路相关性研究

目的:探讨新疆哈萨克族高血压患者外周血单个核细胞激活与NLRP3炎症体通路的相关性。方法:随机选取2013-09-2014-02新疆医科大学第一附属医院高血压科门诊首次就诊且未经降压药物治疗的新疆哈萨克族高血压患者30例,年龄(54.2±5.7)岁,选取同期同民族健康体检者30例,年龄(53.7±5.4)岁,两组男女比例均为1∶1。采集两组受试者外周血并分别提取血浆和单个核细胞,采用ELISA法检测血浆白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量;使用荧光定量RT-PCR检测单个核细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18mRNA相对表达水平;运用Western blot法检测单个核细胞中NLRP3和Caspase-1蛋白的相对表达量。结果:两组受试者基线资料差异无统计学意义(P0.05);与健康对照组相比,高血压组血浆IL-1β和IL-18水平明显升高(P0.05);外周血单个核细胞层NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18的mRNA相对表达量均高于对照组(P0.05);NLRP3和Caspase-1蛋白的表达量也较对照组增高(P0.05)。结论:新疆哈萨克族高血压患者外周血单个核细胞处于一定程度的炎症激活状态,且该炎症反应可能与NLRP3炎症体及其下游相关细胞因子的表达增多有关。     

阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的心房肌细胞结缔组织生长因子及缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心房肌细胞结缔组织生长因子(CTGF)和缝隙连接蛋白(Cx43)表达的影响。方法将雄性Wistar大鼠40只随机分为A组(15只,给予0.9%氯化钠溶液)、B组(12只,给予盐酸异丙肾上腺素)和C组(13只,给予盐酸异丙基肾上腺素+阿托伐他汀钙片)。分别用放射免疫法测定AngⅡ浓度,凝胶成像系统分析转化生长因子(TGF)-βmRNA、CTGF和Cx43 mRNA的表达。结果三组大鼠血浆和心肌AngⅡ水平均有统计学差异(P0.05),B组大鼠血浆和心肌AngⅡ水平均高于A组(P0.05),C组与A组无统计学差异(P0.05)。三组大鼠TGF-β1 mRNA、CTGF和Cx43 mRNA表达水平均有统计学差异(P0.05),B组大鼠TGF-β1 mRNA、CTGF和Cx43 mRNA表达水平均高于A组(P0.05),C组与A组无统计学差异(P0.05)。结论阿托伐他汀能够降低AngⅡ诱导的心房肌细胞CTGF和Cx43 mRNA表达,减轻与CTGF和Cx43 mRNA表达相关的心肌纤维化和心脏重构进展,在房颤的预防和治疗中具有一定的临床意义。     

4,4′-二异硫氰基芪-2,2′-二磺酸对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的作用

目的探讨氯通道阻滞剂4,4′-二异硫氰基芪-2,2′-二磺酸(DIDS)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2心肌细胞肥大的作用及其可能机制。方法应用AngⅡ1μmol/L刺激心肌H9C2细胞株,构建心肌细胞肥大模型,观察12、24、36、48和72h各项表达,另给予50、100、200μmol/L DIDS预处理H9C2细胞,细胞分组:空白组、AngⅡ组、DIDS组、AngⅡ+DIDS组;免疫荧光染色测量细胞表面积,BCA法检测蛋白含量,实时定量PCR法检测心肌肥厚基因心房钠尿肽(ANP)和肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达,二氯荧光素二乙酸检测活性氧水平。结果48h细胞表面积最大(50 166±2697)μm2和总蛋白含量最大(1.68±0.06)mg/107个,36hANP mRNA为4.08±0.38和β-MHC mRNA为2.80±0.18,表达量均最高。与空白对照组比较,AngⅡ组心肌细胞表面积、总蛋白含量、ANP、β-MHC mRNA表达量和细胞内活性氧水平明显增加(P0.05),DIDS组无显著差异(P0.05);与AngⅡ组比较,DIDS+AngⅡ组的心肌细胞表面积明显减小(P0.05)、总蛋白含量明显减少(P0.05)、ANP mRNA和β-MHC mRNA表达量明显减低(P0.05)、细胞内活性氧水平明显下降(P0.05)。结论 DIDS可以有效抑制AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞肥大,其机制可能与降低活性氧的水平有关。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心脏成纤维细胞纤维化的影响

目的探讨川芎嗪(ligustrazine)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心脏成纤维细胞纤维化的机制及影响。方法体外培养SD大鼠乳鼠CFs,实验分为5组,A组(对照组):培养时不加干预药物;B组(AngⅡ组):加AngⅡ10-6mol/L;C组(川芎嗪低剂量组):AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪5 mg/L;D组(川芎嗪中剂量组)AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪10 mg/L;E组(川芎嗪高剂量组)AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪20 mg/L,干预48 h后,采用RT-PCR法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及钙调神经磷酸酶催化亚基Aβ亚型(Cn Aβ)mRNA的表达情况;Western Blot法检测α-SMA及活化T细胞核因子3(NFAT3)的蛋白表达情况。结果与A组比较,B组α-SMAmRNA、Cn AβmRNA表达均显著增高,差异有统计学意义(P0.05),α-SMA、NFAT3蛋白的表达也显著增加,差异有统计学意义(P0.05);与B组比较,C组α-SMAmRNA、Cn AβmRNA表达差异无统计学意义(P0.05),α-SMA、NFAT3蛋白表达无统计学意义(P0.05),D组和E组α-SMA、Cn Aβ的mRNA表达均显著降低,差异有统计学意义(P0.05),α-SMA、NFAT3蛋白表达显著减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论在一定浓度范围,川芎嗪以剂量依赖方式抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFs心肌纤维化过程,其机制可能与心脏成纤组细胞纤组化川芎嗪抑制CFs的钙调神经磷酸酶(Ca N)信号通路有关。     

Ang(1-7)对AngⅡ诱导的肝星状细胞Mas受体、TGF-β1/Smad3、CTGF的影响

目的体外培养大鼠肝星状细胞(HSC-T6),观察血管紧张素(1-7)(Ang1-7)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肝星状细胞Mas受体、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、结缔组织生长因子(CTGF)表达情况的影响,进而探讨Ang(1-7)在肝纤维化进程中的作用及可能的作用机制,为临床治疗肝纤维化提供理论依据。方法体外培养大鼠肝星状细胞(HSC-T6),分为正常对照组、不同浓度AngⅡ处理组、AngⅡ+Ang(1-7)组、AngⅡ+Ang(1-7)+Mas受体拮抗剂A779组。培养24 h后,流式细胞仪(Annexin V/PI)双染法检测各组细胞凋亡率;同时采用Real-time PCR及Western Blotting检测肝星状细胞中Mas受体、TGF-β1、Smad3及CTGF mRNA及蛋白的表达。结果 (1)与正常对照组相比,AngⅡ处理组肝星状细胞凋亡活性增加,TGF-β1、Smad3、CTGF、Mas受体mRNA及蛋白表达量较正常对照组增加(P0.05)。(2)与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+Ang(1-7)组肝星状细胞的凋亡率增加,而TGF-β1、Smad3、CTGF mRNA表达降低,Mas受体表达增加(P0.05)。(3)与AngⅡ+Ang(1-7)组相比,AngⅡ+Ang(1-7)+Mas受体拮抗剂A779组,肝星状细胞的凋亡率、TGF-β1、Smad3、CTGF mRNA表达降低(P0.05),Mas受体表达增加(P0.05)。结论 (1)AngⅡ可诱导大鼠肝星状细胞活化,促使TGF-β1、Smad3、CTGF表达增加。(2)Ang(1-7)可促使AngⅡ诱导的肝星状细胞凋亡而发挥抗肝纤维化作用。(3)与AngⅡ+Ang(1-7)组相比,AngⅡ+Ang(1-7)+Mas受体拮抗剂A779组,肝星状细胞凋亡率、Mas受体表达下降(P0.05),TGF-β1、Smad3、CTGF mRNA表达增加(P0.05)。     

下肢缺血预适应对急性心肌梗死大鼠细胞因子及HO-1的影响

目的研究下肢缺血预适应后急性心肌梗死（AMI）大鼠细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10及血红素氧合酶-1（HO-1）的动态变化,探讨其在AMI心肌作用中的机制。方法将72只健康雄性成年SD大鼠随机分为AMI组（A组）、下肢缺血预适应组（B组）和对照组。A、B组大鼠分别在AMI后2、4、6、12 h时间点处死取材。ELISA法测定血清IL-6、IL-10、TNF-α的含量;RT-PCR测定心肌组织中HO-1 mRNA表达情况。结果B组梗死区比重较A组低（P〈0.05）;A、B组4、6和12 h血清IL-6水平均较对照组高（P〈0.05）;A、B组2、6、12 h血清IL-10水平较对照组高（P〈0.05）,B组4 h血清IL-10水平较A组和对照组高（P〈0.01）;A、B组各时间点TNF-α均较对照组高（P〈0.01）,但两组间仅4 h时有差异（P〈0.05）。B组各时间点HO-1 mRNA表达较A组升高（P〈0.05或P〈0.01）。结论下肢缺血预适应对心脏的保护作用可能是通过下调IL-6、TNF-α等细胞因子的释放,上调IL-10及HO-1的水平,使心肌组织损伤减轻。     

鼠双微基因2在血管紧张素Ⅱ和神经酰胺致内皮细胞凋亡中作用的实验研究

目的探讨神经酰胺和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致内皮细胞凋亡过程中鼠双微基因2（mdm2）的变化及其作用。方法体外培养脐静脉内皮细胞,分别用AngⅡ1型受体拮抗剂氯沙坦、AngⅡ2型受体拮抗剂PDl23319、神经酰胺合成酶抑制剂烟曲霉素B1（FB1）预处理细胞,再加入AngⅡ与双蒸水对照组比较观察细胞凋亡情况及mdm2 mRNA和蛋白的表达,并用不同浓度的c2-神经酰胺进行处理,RT—PCR和Western blot检测mdm2的mRNA和蛋白表达及细胞凋亡的情况。结果PD123319组和FB1组抑制了AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡,其凋亡指数明显下降（P〈0．05）,而与对照组相比差异无统计学意义,相反氯沙坦组凋亡指数较对照组显著增加（P〈0．05）,FB1组抑制了mdm2的表达。c2．神经酰胺呈剂量依赖性诱导内皮细胞凋亡,mdm2的表达随着C2-神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势。结论AngⅡ诱导内皮细胞凋亡通过AT2受体和神经酰胺起作用,AngⅡ和神经酰胺可能是通过抑制mdm2来诱导凋亡的。     

TGF—β1及AngⅡ对大鼠心肌细胞肥大的信号转导通路作用研究

目的：探讨在TGF-β1及AngⅡ分别诱导的大鼠心肌细胞肥大中Smad信号途径中Smad2蛋白的表达。方法：分别建立TGF-β1及AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大模型,分为正常对照组、TGF-β1组以及AngⅡ组。以碘化丙啶（PI）染色标记法检测心肌细胞中RNA的表达量以间接反映心肌细胞肥大。以实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关肌球蛋白重链β亚型（β—MHC）的表达。以Western blot检测心肌细胞中磷酸化Smad2信号蛋白的表达。结果：TGF-β1及AngⅡ诱导的培养心肌细胞中肥大相关蛋白β1-MHC的表达均明显高于对照组（P〈0．01）。PI染色检测表明,TGF-β1组及AngⅡ组PI的含量明显增高（P〈0．01）。与对照组相比,TGF-β1及AngⅡ均可明显上调磷酸化Smadz（p-Smad2）的表达（P〈0．01）。TGF-β1组与AngⅡ组p-Smad2表达峰值相比无明显差异,但达峰的时间有所不同。结论：TGF-β1及AngⅡ单独均可诱导心肌细胞肥大,在此过程中p-Smad2蛋白的表达明显增加,TGF-β1与AngⅡ促进p-Smad2蛋白表达作用无明显差异。     

不同浓度血管紧张素Ⅱ对人脐静脉血管内皮细胞衰老和P-选择素表达的影响

目的观察不同浓度血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）衰老和P-选择素表达的影响。方法体外培养HUVEC,随机分为对照组和含不同浓度AngⅡ组（10-8～10-5mmol/L）共5组,用含不同浓度AngⅡ的培养基诱导细胞衰老,β-半乳糖苷酶（β-gal）染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;CCK-8法检测细胞存活率情况;ELISA检测各组培养基上清中P-选择素表达含量。结果 AngⅡ培养细胞48h后,β-gal阳性染色率随着AngⅡ浓度的增加逐渐增多（P均〈0.01）;细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,与对照组相比,10-8和10-7mmol/LAngⅡ组无明显差异（P〉0.05）,10-6和10-5mmol/LAngⅡ组有统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）;细胞存活率与对照组相比明显下降;P-选择素表达含量随着AngⅡ浓度的增加明显增多（P均〈0.01）。结论 AngⅡ诱导HUVEC衰老,并呈剂量依赖性的抑制细胞增殖与增加P-选择素的表达。     

肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ促血管外膜成纤维细胞胶原生成作用的影响

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管外膜成纤维细胞胶原生成的影响及机制。方法体外培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞,通过放射免疫法测定培养上清中ADM含量,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）及Western印迹法检测转化生长因子β1（TGFβ1）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA及蛋白的表达。结果AngII呈剂量依赖性地刺激血管外膜成纤维细胞分泌ADM,在AngⅡ（10^-6mol／L）刺激前30min加入氯沙坦或（和）PD123319,氯沙坦（10^-5mol／L）可明显降低AngⅡ刺激的ADM分泌,其抑制率为45％（P〈0．01）,而PD123319（10mmol／L）作用后抑制率仅为3％（P〉0．05）,氯沙坦＋PD123319组与单独氯沙坦组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;AngⅡ显著增加培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,ADM呈剂量依赖地抑制AngⅡ上述作用,其中ADM（10“mol／L）组中I、Ⅲ型胶原合成分别抑制了30％和31％（P〈0．01）,ADM（10^-7mol／L）组则分别抑制了43％和42％（P〈0．01）。ADM受体拈抗剂ADM22-52可增强AngII上述作用,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分别增加了38％和43％（P〈0．01）;ADM呈剂量依赖性抑制AngⅡ刺激的TGFβ1mRNA及蛋白表达,其中ADM（10^-8mol／L）组中TGFβ1mRNA及蛋白表达分别抑制了55％和45％（P〈0．01）,ADM（10^-7mol／L）组则分别抑制了70％和59％（P〈0．01）;AngⅡ明显下调细胞内MMP-2mRNA及蛋白表达,ADM呈剂量依赖性抑制上述作用,其中10^-8mol／LADM组细胞内MMP-2mRNA及蛋白表达分别增加了1．0和0．9倍。结论AngⅡ可刺激血管外膜成纤维细胞释放ADM,而自分泌旁分泌的ADM可能通过下调细胞内TGFN表达和上调MMP-2表达,抑制AngⅡ刺激的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白生成,从而发挥有效的抗血管重构作用。     

血管紧张素（1-7）和血管紧张素Ⅱ对THP-1源性泡沫细胞胆固醇外流的影响

目的 观察血管紧张素（1-7）［Ang（1-7）］及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对THP-1源性泡沫细胞B族Ⅰ型清道夫受体（SR-BⅠ）、ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达及胆固醇外流的影响。方法 将THP-1单核细胞加入100 nmol/L佛波酯（PMA） 48 h诱导分化为THP-1源性巨噬细胞,加入氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）建立泡沫细胞模型。随机分为五组：空白对照组、AngⅡ组、Ang（1-7）组、Ang（1-7）+AngⅡ组及AngⅡ+Ang（1-7）+A-779组［A-779为Ang（1-7）受体特异性阻滞剂］。分别运用RT-PCR及Western blot方法检测SR-BⅠmRNA、ABCA1mRNA及其蛋白的表达,用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出率的变化。结果 与空白对照组相比,加用AngⅡ组SR-BⅠmRNA、ABCA1mRNA及其蛋白的表达均明显减弱且胆固醇外流减少（P<0.05）;与AngⅡ组比较,加用Ang（1-7）促进SR-BⅠmRNA、ABCA1mRNA及其蛋白的表达,胆固醇外流增加（P<0.05）;与AngⅡ+Ang（1-7）组比较,AngⅡ+Ang（1-7）+A-779组SR-BⅠmRNA、ABCA1mRNA及其蛋白的表达减弱、胆固醇外流减少（P<0.05）,但与AngⅡ组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 AngⅡ抑制THP-1源性泡沫细胞SR-BⅠ、ABCA1的表达并减少胆固醇外流,而Ang（1-7） 通过其特异性受体MAS受体可减弱AngⅡ的作用,促进胆固醇外流,从而对动脉粥样硬化的进展起到抑制作用。     

雷公藤甲素对佐剂性关节炎大鼠核因子κB受体激活剂配基表达的影响

目的 探讨雷公藤甲素对佐剂性关节炎（AA）大鼠核因子κB受体激活剂配基（RANKL）和护骨素（OPG）表达的影响及其与抑制关节炎大鼠骨侵蚀的关系。方法 AA大鼠经雷公藤甲素治疗后，测定关节中RANKL、OPG的表达，并测定外周血单个核细胞（PBMC） RANKL mRNA的表达水平和外周血中肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β水平，同时测定胫骨关节端骨密度，并作关节骨侵蚀病理积分。结果 雷公藤甲素组和甲氨蝶呤组骨密度高于模型组（P〈0.01），关节骨侵蚀积分低于模型组（P〈0．01）。雷公藤甲素组大鼠关节滑膜（P〈0.01）及骨组织（P〈0.05）RANKL表达量低于模型组，滑膜OPG表达量低于模型组（P〈0.05）。雷公藤甲素组PBMC中RANKLmRNA表达水平低于模型组（P〈0.01），并且TNF-α和IL-1β水平低于模型组（P〈0．01）。结论 雷公藤甲素可能通过抑制RANKL表达而抑制AA大鼠骨质侵蚀。未见雷公藤甲素对OPG表达有促进作用。     

慢加急性肝衰竭患者Toll样受体3触发后DC分泌细胞因子的变化

目的探讨慢加急性肝衰竭（ACLF）患者外周血单核细胞衍生的树突状细胞（MoDC）上TLR3触发后细胞因子的分泌情况。方法选择ACLF患者60例,慢性乙型肝炎（CHB）患者40例,20例健康者作对照组（NC组）,取其抗凝全血,通过密度梯度法离心及免疫磁珠阳性选择法分离单核细胞,体外诱导培养为MoDC,经poly（I︰C）刺激后,实时荧光定量PCR检测TLR3及核因子κB和干扰素调节因子3的表达,液相蛋白流式检测促炎性因子IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-1β和TNF-α的分泌水平,均数间两两比较采用t检验。结果 poly（I︰C）刺激后,ACLF组患者NF-κBmRNA显著高于CHB组和NC组（P〈0.01）,而其IRF3mRNA低于CHB和NC组（P〈0.01）。3组研究对象MoDC分泌的IL-6及TNF-α差异有统计学意义（P〈0.005）,其分泌水平为ACLF组〉CHB组〉NC组。分泌的IL-10在ACLF组低于CHB组（P=0.021）,但与NC组差异无统计学意义。IL-12p70的分泌水平在ACLF组显著低于CHB组和NC组（P〈0.001）。IL-8分泌水平为ACLF组     

血管紧张素Ⅱ对RIN-m细胞胰岛素分泌功能的影响及机制探讨

目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对RIN-m β细胞胰岛素分泌的影响,探讨Ang Ⅱ损伤β细胞功能的机制.方法 RIN-m细胞以不同浓度AngⅡ(0.1、1、10、100 nmol/L)干预24 h后,用放射免疫法检测各组基础(3.3 mmol/L)和葡萄糖(16.7 mmol/L)刺激下RIN-m细胞胰岛素分泌量;RT-PCR和Western印迹分别检测解耦联蛋白2(UCP2)mRNA及蛋白的表达水平;荧光素酶生物发光法检测细胞内ATP含量;流式细胞仪检测线粒体膜电位和细胞内Ca~(2+)浓度.结果 (1)在低糖刺激下,各Ang Ⅱ处理组RIN-m细胞胰岛素分泌差异无统计学意义(F=0.644,P:0.634);在高糖刺激下,除0.1 nmol/L Ang Ⅱ组外,其余各组胰岛素分泌均显著低于空白对照组(F=118.528,P=0.000).(2)与空白对照组相比较,各AngⅡ处理组的UCP2 mRNA和蛋白表达显著增加(F=1 370,P=0.000;F=675.175,P=0.000).(3)与空白对照组相比较,除0.1 nmol/L Ang Ⅱ组外,其余各组的RIN-m细胞线粒体膜电位、细胞内ATP含量和Ca~(2+)浓度显著减少(F=4.035,P=0.008;F=3.353,P=0.013;F=5.867,P=0.001).结论 AngⅡ损伤胰岛β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)功能,其机制可能是AngⅡ上调β细胞UCP2表达,进而降低线粒体膜电位、减少细胞内ATP含量及Ca~(2+)浓度,最终损伤β细胞胰岛素分泌功能.     

系统性红斑狼疮患儿外周血单个核细胞IL-10、Foxp3和Fas mRNA的表达变化

目的 观察系统性红斑狼疮（SLE）患儿外周血单个核细胞IL-10、叉状头转录因子3（Foxp3）、Fas mRNA的表达.方法 采用实时定量RT-PCR测定30例SLE患儿（SLE组）及20例健康儿童（健康对照组）外周血单个核细胞IL-10、Foxp3、Fas mRNA表达.结果 SLE组、健康对照组IL-10 mRNA表达分别为0.78±0.12、0.12±0.03,P＜0.01;Foxp3 mRNA表达分别为1.38±0.16、0.68 ±0.13,P＜0.01;Fas mRNA表达分别为0.83 ±0.11、0.14±0.05,P＜0.01.结论 SLE患儿IL-10、Foxp3和Fas基因mRNA呈高表达.     

大黄酸对人肾小管上皮细胞血小板反应蛋白1和转化生长因子β1表达的影响

目的:探讨大黄酸对人肾小管上皮细胞(HK-2)血小板反应蛋白1(TSP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:体外培养HK-2细胞,观察AngⅡ(1×10-7mol/L)诱导下低、中和高浓度的大黄酸(10μg/ml、20μg/ml和40μg/ml)对HK-2TSP-1、TGF-β1的mRNA和蛋白表达的影响。采用Real Time PCR检测细胞TSP-1、TGF-β1mRNA表达,采用Westernb lot检测TSP-1、TGF-β1蛋白表达。培养上清液中TGF-β1和活性TGF-β1检测采用ELISA法。结果:与空白对照组比较,AngⅡ(1×10-7mol/L)明显上调了HK-2TSP-1的mRNA表达(3.84±0.48vs1.32±0.19;P<0.05)、伴有TGF-β1的mRNA表达增加(3.68±0.46vs1.18±0.13;P<0.05)。同时AngⅡ(1×10-7mol/L)也上调TSP-1蛋白表达(0.5246±0.0936 vs 0.1015±0.0768;P<0.01),伴有TGF-β1蛋白表达的增加(0.5948±0.0624 vs 0.1264±0.0811;P<0.01)。与AngⅡ阳性对照组比较,中浓度和高浓度大黄酸明显抑制了AngⅡ(1×10-7mol/L)诱导的TSP-1、TGF-β1的mRNA(P<0.05,P<0.01)和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。中浓度大黄酸干预组总的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均减少,(P<0.05);高浓度大黄酸干预组总的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均明显减少(P<0.01)。结论:大黄酸能抑制人肾小管上皮细胞TSP-1、TGF-β1的mRNA和蛋白表达,抑制TGF-β分泌。     

偏硅酸钠对ECV-304细胞株与单个核细胞黏附的影响

目的 观察偏硅酸钠(Na2SiO3)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的ECV-304细胞与人外周血单个核细胞黏附的影响,探讨其抗动脉粥样硬化(AS)作用的机制.方法 ECV-304细胞分为5组:对照组、ox-LDL组、Na2SiO3高剂量组(硅68.5 mg/L)、中剂量组(硅34.2 mg/L)、低剂量组(硅17.1 mg/L).分离正常健康人外周血单个核细胞,计数与各组ECV-304细胞黏附数,检测细胞培养液中IL-8水平;采用流式细胞术测VCAM-1的蛋白表达量;半定量RT-PCR检测VCAM-1、IL-8mRNA的表达.结果 Na2SiO3减少ECV-304单个核细胞黏附数(P＜0.01),降低IL-8浓度(P＜0.01),降低VCAM-1的蛋白表达量(P＜0.05),下调VCAM-1、IL-8 mRNA的表达(P＜0.01).结论 Na2SiO3能够下调ox-LDL诱导的ECV-304 IL-8和VCAM-1的表达.