CSF临床应用的现状

colony stimulating factor(克隆刺激因子,CSF)是造血细胞在体外培养形成粒细胞-巨噬细胞系克隆过程中,起促进作用的体液因子。根据作用于造血干细胞的不同分化程度,CSF可分为多能祖细胞克隆刺激因子(multi-CSF,interleukin-3)、粒-巨噬祖细胞克隆刺激因子(granulocyte-macrophage-CSF,GM-CSF)、粒祖细胞克隆刺激因子(granulocyte-CSF,G-CSF)、巨噬祖细胞克隆刺激因子(macrophage-CSF,M-CSF,CSF-1)及存在于人尿中的CSF hu(hu∶human urine)等几种。现重点介绍临床已经应用及准备应用的几种CSF。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓粒-巨噬细胞系祖细胞的特点

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是后天的细胞膜缺陷性疾病。这种缺陷累及红细胞、粒细胞和血小板,还累及骨髓造血祖细胞。本实验采用造血祖细胞体外培养技术研究PNH病人骨髓粒-巨噬细胞系祖细胞(CFU—GM)的增殖能力;骨髓细胞经新鲜酸化AB型血清处理后培养的CFU—GM的增殖能力;以及CFU—GM对粒-巨噬细胞系集落刺激因子(GM—CSF)的反应能力,以     

集落刺激因子的分子生物学基础及其对血细胞分析的影响

集落刺激因子(Colony Stimulating Factor，CSF)是能刺激骨髓多能造血干细胞向粒单系祖细胞集落分化，并使其发育为成熟粒细胞和巨噬细胞的细胞因子，主要有粒细胞单核巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte—Macrophage Colonv Stimulating Factor，GM—CSF)、粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony Stimulating Factor，G—CSF)和单核巨噬细胞集落刺     

集落刺激因子治疗血液病的研究进展

<正> Bradley 等首次于1966年从造血细胞培养中,发现骨髓细胞要分化增殖为粒一巨噬细胞集落,还需有一种刺激造血的物质参与,并将此物质称为集落刺激因子(ColonyStimulating Factor,CSF)。随着 CSF 的纯化和重组技术的发展,其生物学特性日渐被人们所认识,而且在治疗血液病方面,已从实验室过渡到临床。临床治疗结果更显示了具有广泛的应用前景,日趋受到医学界的高度重视。CSF 是一组糖蛋白物质,由淋巴细胞和单核细胞自然产生,有刺激造血细胞增殖和分化的作用。近年来,对人类 CSF 的研究,取得了很大进展。目前已发现人类 CSF有以下4种,(1)粒—单核细胞集落刺激因子(GM—CSF),即 CSFa,分子量22000,它可刺激粒—单核细胞系祖细胞(GM—     

用人TF-1细胞系检测GM-CSF活性的新方法

人粒单系集落刺激因子(GM—CSF)是正常髓系造血的重要调控因子,具有刺激粒-巨噬系等多种造血细胞增殖与分化的功能。近几年来,临床上已用重组GM—CSF治疗放、化疗后所引起的粒细胞减少症,取得了一定疗效。长期以来,GM-CSF的活性检测多采用半固体粒-巨噬单系集落培养方法,此方法需时长(约14天),操作复杂,影响因素多,结果不稳定,难以满足快速检测多批量基因工程重组GM—CSF产品的迫切需要。TF—1细胞是GM—CSF、IL—3和EPO依赖性细胞系,我们以TF-1细胞为反应细胞,建立了     

28例正常骨髓GM-CFUc测定

造血干细胞培养技术自60年代初建立以来发展甚快,现已成为临床及实验血液学的活跃研究课题。为判别各种血液病的骨髓粒、巨噬系造血祖细胞(GMCFUc)测定的临床意义,首先需了解正常骨髓GMCFUc的变异范围及用正常人外周血作底层所提供的集落刺激因子(CSF)的活力变化。本文为此目的对28例正常骨髓GM-CFUc进行测定,报道如下。     

造血干细胞的抗原特性

本文综述了近年来有关人和小鼠造血祖细胞各种抗原系统的特点及其鉴别方法,以及在生物学和治疗学方面的有关问题。造血祖细胞在有刺激因子存在的半固体培养中,粒-巨噬祖细胞(CFU-G,M)可形成粒细胞或巨噬细胞,或二者混合组成的细胞集落。在红细胞生成素(Ep)刺激下,红系祖细胞(BFU-E和 CFU-E)可生成红系细胞集落。小鼠多能干细胞是通过受致死剂量照射小鼠的脾脏形成     

四种重组造血生长因子对小鼠巨核细胞集落的影响

小鼠体外巨核系祖细胞培养表明,重组鼠白细胞介素-3(IL-3),粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素-6(IL-6)及红细胞生成素(EPO)均有不同程度刺激巨核系祖细胞生长的活性。其最适浓度分别为100U/ml,5ng/ml,20ng/ml与1U/ml。对巨核细胞集落刺激作用最强的是IL-3,IL-6与GM-CSF次之,EPO最弱。在种植2×10~5骨髓单个核细胞中分别获得45±3,25±2,20±3及10±2个巨核细胞集落。     

人巨细胞病毒感染致造血祖细胞增殖抑制与更昔洛韦的影响

背景:临床研究显示,骨髓移植后人巨细胞病毒感染可阻碍血小板植入、出现表型异常的外周血白细胞,导致骨髓移植失败,这可能是由于人巨细胞病毒感染直接影响了造血祖细胞所致.目的:观察更昔洛韦对人巨细胞病毒感染所致脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞体外增殖抑制的影响及更昔洛韦对此的保护作用. 设计:对比观察性实验.单位:泸州医学院附属医院分子生物学实验室.对象:正常足月顺产新生儿脐血标本20例,每份10 mL,由泸州医学院附属医院妇产科提供,产妇对本实验知情同意.实验经医院伦理委员会批准.方法:实验于2004-06/2006-12在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成.采用脐血标本造血祖细胞培养技术,观察、计数100 TCID50人巨细胞病毒-AD169感染粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞后各祖细胞集落数,记录集落维持时间.用PCR和荧光定量PCR技术检测集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.将7.5 mg/L更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的造血祖细胞,再分别计集落数、集落维持时间及集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.设正常培养的造血祖细胞为空白对照组,设与含灭活性人巨细胞病毒的正常造血祖细胞培养系统为灭活对照组.主要观察指标:①祖细胞集落数、祖细胞集落维持时间.②祖细胞集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA. 结果:①集落数和集落维持时间:人巨细胞病毒感染的祖细胞集落数较对照组明显减少(P < 0.01),集落维持时间较对照组明显缩短(P < 0.01).在人巨细胞病毒感染的集落细胞内检测到人巨细胞病毒-DNA的存在;更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后,与人巨细胞病毒感染的祖细胞比较集落数明显提高,差异有非常显著性意义(P < 0.01) ,集落维持时间明显延长,差异有非常显著性意义(P < 0.05).②集落增殖提高率: 粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞、巨核系祖细胞分别为37.4%,74.2%,40.1%,67.4%,38.9%.③集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA:荧光定量PCR显示更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后核酸载量较人巨细胞病毒感染的祖细胞降低,差异有非常显著性意义(P < 0.01).结论:人巨细胞病毒-AD169株在体外能明显抑制粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞集落细胞的增殖;在体外更昔洛韦有抗人巨细胞病毒的活性,能促进人巨细胞病毒感染的造血祖细胞增殖.     

前列腺素对造血的调节

作者通过体外培养证实了粒系造血和巨噬细胞的产生是由正反馈机理包括灶刺激因子(CSF)所调控,而这种正反馈又被负反馈(抑素)作用平衡,甚至提出在粒系造血暂时调节过程中负反馈更为重要。本文主要探讨了在造血的调节机理中,前列腺素(PGE)的作用。实验用年龄2～3月的C57BI/6小鼠,用稍加改进的体外琼脂培养技术(1份3%琼脂,9份含15%小牛血清改进的McCoy′S 5A培养基。加入鼠粒-单核细胞型白血病细胞系(WEHI-3)培养的CSF),观察骨髓定向粒-巨噬祖细胞(CFU-C)、脾B-淋巴     

脐血造血干/祖细胞体外定向诱导扩增的研究

目的　观察不同因子组合在体外对脐血 (CB)中的巨核系等造血祖细胞的诱导扩增作用。方法　用体外液体悬浮培养法 ,将白细胞介素 3(IL 3)、白细胞介素 6 (IL 6 )、血小板生成素 (TPO)、脐血血浆 (CBP)作为刺激因子 ,添加不同的细胞因子组合 ,对CB的单个核细胞 (MNC)短期培养 2 1d。在培养的 0、7、14、2 1d检测新鲜细胞和培养细胞中的有核细胞数 (NC)、巨核系祖细胞 (CFU Mk)、粒巨噬系祖细胞 (CFU GM)、混合系祖细胞 (CFU GEMM)增殖倍数。结果　在 2 1d内 ,3个实验组的NC数 ,CFU GM、CFU Mk、CFU GEMM都有不同程度的增加 ,其中NC、CFU GM在培养的 2 1d达到高峰。CFU Mk、CFU GEMM在培养的 14d达高峰。在含有TPO的实验组中 ,CFU Mk的增殖倍数高于不含TPO的实验组 ,CFU GM、CFU GEMM增殖的倍数也高于不含TPO的实验组。含有CBP的实验组对CFU GM、CFU Mk、CFU GEMM有明显的促增殖作用。结论　CB中的含有丰富的造血干 祖细胞 ,可以在不同细胞因子的刺激下进行定向扩增 ,TPO可以促进干 祖细胞向巨核系分化 ,对粒巨噬系祖细胞也有促进作用。脐血血浆可以作为协同刺激因子促进CB中干 祖细胞增殖。     

人干细胞因子与其它造血生长因子对造血集落形成的协同作用

本文观察了含有人造血干细胞因子(rh-SCF)的重组质粒转染的COS7上清液,在半固体培养中,单独或协同rhGM-CSF、G-CSF、IL-3、EPO刺激人粒单系和红系造血祖细胞形成集落的影响。结果表明:单独rh-SCF对造血祖细胞集落形成无明显作用,SCF主要是协同其它因子,明显增加集落形成数量和集落的大小。     

黄芪注射液影响贫血小鼠粒单系、红系造血及作用机制的探讨

目的：研究黄芪注射液对贫血小鼠粒单系和红系血发生的影响,并探讨其作用机制。方法：制备贫血小鼠模型,随机分为给药组和对照组,采用造血祖细胞体外培养等实验血液学技术。结果：一定浓度的黄芪注射液体内作用可使贫血小鼠血清集落刺激因子（CSF）水平明显升高,刺激贫血小鼠粒单系、红系造血祖细胞增殖和分化以及骨髓基质细胞增殖,使降低的骨髓有核细胞（BMC）数以及外周血象明显回升,黄芪注射液和造血细胞直接一起孵育对粒单系祖细胞（CFU－GM）和红系祖细胞（CFU－E、BFU－E）的产率无明显影响。结论：一定浓度的黄芪注射液体内作用可促进贫血小鼠粒单系和红系造血功能恢复。     

人巨细胞病毒感染致造血祖细胞增殖抑制与更昔洛韦的影响术

背景：临床研究显示，骨髓移植后人巨细胞病毒感染可阻碍血小板植入、出现表型异常的外周血白细胞，导致骨髓移植失败，这可能是由于人巨细胞病毒感染直接影响了造血祖细胞所致。目的：观察更昔洛韦对人巨细胞病毒感染所致脐血粒一巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞体外增殖抑制的影响及更昔洛韦对此的保护作用。设计：对比观察性实验。单位：泸州医学院附属医院分子生物学实验室。对象：正常足月顺产新生儿脐血标本20例，每份10mL。由泸州医学院附属医院妇产科提供，产妇对本实验知情同意。实验经医院伦理委员会批准。方法：实验于2004-06／2006-12在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成。采用脐血标本造血祖细胞培养技术，观察、计数100TCID50人巨细胞病毒-AD169感染粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞后各祖细胞集落数，记录集落维持时间。用PCR和荧光定量PCR技术检测集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA。将7．5mg/L更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的造血祖细胞，再分别计集落数、集落维持时间及集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA。设正常培养的造血祖细胞为空白对照组，设与含灭活性人巨细胞病毒的正常造血祖细胞培养系统为灭活对照组。主要观察指标：①祖细胞集落数、祖细胞集落维持时间。②祖细胞集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA。结果：①集落数和集落维持时间：人巨细胞病毒感染的祖细胞集落数较对照组明显减少（P〈0．01），集落维持时间较对照组明显缩短（P〈0．01）。在人巨细胞病毒感染的集落细胞内检测到人巨细胞病毒-DNA的存在：更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后，与人巨细胞病毒感染的祖细胞比?     

rhTpo／GM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定

本研究的目的是找出一个治疗由于放化疗等原因造成的造血组织损伤导致的贫血、感染和出血的有效方法。通过RT-PCR的方法从人胎肝中克隆了重组人血小板生成素(rhTpo)的基因,利用基因工程的手段将其与重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的基因相融合,并在原核细胞中表达。研究结果表明,大肠杆菌JM101表达的融合蛋白rhTpo/GM-CSF在体外小鼠骨髓造血祖细胞的培养中保留了Tpo对巨核细胞系和红细胞系的刺激作用,并增加了GM-CSF对粒细胞系的刺激活性。结论提示,原核细胞表达的融合蛋白rhTpo/GM-CSF具有刺激骨髓红细胞系、粒细胞系及巨核细胞系造血的活性。     

粒细胞集落刺激因子的作用机理

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)特异地作用于粒细胞系造血祖细胞,诱导其分化成熟,同时刺激成熟中性粒细胞发挥更大效应。因此对骨髓移植以及肿瘤化、放疗后粒细胞减少的恢复,具有明显的促进作用。G-CSF 作用的靶细胞包括:多能造血干细胞、粒系造血祖细胞(CFU-GM)及幼稚和成熟的粒细胞、单核细胞、胎盘滋养层细胞     

正常足月儿脐血中G-CSF、GM-CSF和IL-3含量测定

脐血中不仅含有较丰富的造血干细胞,而且也含有较丰富的多种造血生长刺激因子.因此,研究脐血血浆中造血生长刺激因子,可有助于了解胎儿造血的特点,并且可进一步证实脐血成分中的有关造血的生物活性物质.笔者应用ELISA法对64例正常足月儿脐血血浆中G-CSF(粒系集落刺激因子)、GM-CSF(粒-巨噬系集落刺激因子)和IL-3(白细胞介素-3)进行了测定,现报道如下.     

造血细胞生长因子在治疗血液病方面的应用

自从人们掌握了基因重组技术以来,已能批量生产几种造血细胞生长因子如:红细胞生成素(EPO)粒单细胞-集落刺激因子(GM-CSF)与粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)。现将这些因子在血液病治疗中的应用予以简介。EPO 它能刺激已定向分化的红系祖细胞增生及成熟,Lim等用EPO治疗14例肾病性贫血,但不同时作血液透析,目的是研究于透析前用EPO是否有效,结果证实单用EPO完全有效。方法:EPO     

CD34+造血祖细胞的定向诱导分化研究

目的：探讨不同细胞因子组合定向诱导ＣＤ３４＋细胞向红系、粒系、巨核系及树突状细胞（ＤＣ）分化的能力。方法：利用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐血ＣＤ３４＋细胞，在液体培养体系中经不同细胞因子组合的诱导，检测各系祖细胞及ＤＣ的扩增倍数。结果：干细胞因子、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ６、粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素、血小板生成素的不同组合，可使红系、粒系或巨核系细胞优势生长，其祖细胞可分别被扩增１４．９７±２．８９，１４．４６±３．１９及３４．６７±４．６２倍，ＣＤ４１ａ＋细胞增加了１７．２９±２．３４倍，ＦＬＴ３配基＋ＧＭＣＳＦ＋ＩＬ４＋肿瘤坏死因子α的组合可诱导ＣＤ３４＋细胞形成大量树突状细胞，ＣＤ１ａ＋细胞的比例增至２４．２８％±２．１４％（对照组为０．３６％±０．２８％）。结论：不同细胞因子组合可定向诱导ＣＤ３４＋细胞向红系、粒系、巨核系及树突状细胞分化，这在造血调控研究、造血细胞支持治疗及肿瘤免疫治疗中具有广阔的应用前景     

骨髓基质细胞对粒系祖细胞增殖的影响

本文研究了培养不同时间的骨髓基质细胞对粒系祖细胞体外培养生长的影响,并分析其细胞成分及培养上清液的作用。结果表明:在含上清的基质细胞贴壁层上种植骨髓细胞,除第14天外,均可见对CFU-GM的形成有刺激作用。而单纯无上清贴壁细胞层,或单纯基质贴壁细胞培养上清液,均无此刺激作用。说明基质细胞对粒系造血祖细胞生长的调控必须在一个结构功能完整的体系中才能发挥作用。在无外源性CSF作用的情况下,基质细胞仍能使少量CFU-GM生长,也说明基质细胞有刺激粒细胞生长的作用。14天以前,无琼脂间隔层的粒系祖细胞数较高,而21天后,有琼脂间隔层的粒系祖细胞数较高。说明造血基质细胞对粒系细胞生长的调控受着多方面因素的影响,体外培养时间不同有不同表现。基质细胞一方面通过与粒系造血祖细胞相互作用,近距离调节,另方面通过分泌粒系刺激因子和抑制因子,从正、负两方面调节粒系造血,以维持粒系造血的动态平衡。