下肢缺血预处理对大鼠心肌HIF-1α表达的影响

目的 观察急性心肌梗死(AMI)和经下肢缺血预处理的大鼠缺血心肌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的表达及其在早期心肌缺血状态下的表达规律.方法 SD大鼠随机分为3组:①对照组;②AMI组:结扎左冠状动脉前降支;③下肢缺血预处理(LIP)组:下肢动脉夹闭再开放,随后复制AMI模型.应用伊文思蓝及氯化三苯硝基四氮唑红(TTC)染色,测定心肌梗死范围;应用RT-PCR测定各组心肌缺血区HIF-1α基因动态表达情况.结果 LIP组心肌梗死面积较AMI组明显减小;HIF-1α mRNA在正常心肌有表达,心肌缺血早期相升高;经下肢缺血预处理后缺血心肌的表达降低.结论 下肢缺血预处理对急性缺血心肌有保护作用,HIF-1α基因表达减少可能是其机制之一.     

VEGF在大鼠心肌梗死急性期表达的意义及蜕皮甾酮的促侧支循环作用

目的以急性心肌梗死大鼠为模型,观察血管内皮生长因子(VEGF)在心肌中的表达,探讨急性缺血缺氧刺激与VEGF产生的关系和意义以及蜕皮甾酮(EDS ecdysterone)的促侧支循环作用.方法建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,分为对照组、急性心肌梗死组(1、3、7 d)和蜕皮甾酮干预治疗组(每只0,40mg/d).免疫组化检测VEGF表达;Ⅷ因子相关抗原标记内皮细胞,检测毛细血管密度,比重法测定梗死面积.原代培养大鼠心肌细胞,在常氧与缺氧状态下实验组分别给于蜕皮甾酮治疗(100μg/ml),24h后采用免疫细胞化学法检测心肌细胞中VEGF表达.结果随缺血缺氧时间的延长心肌产生的VEGF增加,与对照组比较各组均有显著差异,缺血时间与VEGF产生量呈正相关;蜕皮甾酮治疗组与对照组相比,血清肌酸激酶同功酶(CK-MB)显著降低(P＜0.01);毛细血管密度增加(P＜0.01);心肌梗死面积减少(P＜0.01).在常氧与缺氧状态下,蜕皮甾酮治疗组心肌细胞VEGF表达显著高于对照组(P＜0.01).结论在心肌梗死急性期缺血心肌通过分泌VEGF对自身产生重要的保护作用;蜕皮甾酮进一步刺激心肌分泌产生VEGF,促进大鼠缺血区血管生成、侧支循环建立、毛细血管密度增加,发挥心肌保护作用.     

灯盏花素对缺血再灌注大鼠心肌Caspase-9蛋白及mRNA表达的影响

目的观察灯盏花素(Bre)对缺血再灌注(IR)大鼠心肌Caspase-9蛋白及mRNA表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BreⅠ组(25 mg.kg-1.d-1腹腔注射,7 d)和BreⅡ组(50 mg.kg-1.d-1腹腔注射,连续7 d)。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌IR模型。应用TTC染色的方法检测各组大鼠心肌梗死面积,western印迹技术检测大鼠心肌组织Caspase-9蛋白表达的变化,RT-PCR技术检测大鼠心肌组织Caspase-9 mRNA表达的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积明显增加(P<0.01),Bre明显改善了IR大鼠心肌梗死面积,BreⅡ组比BreⅠ组心肌梗死面积小(P<0.05);模型组大鼠的Caspase-9蛋白及mRNA表达水平较假手术组明显增加(P<0.01),Bre组大鼠心肌的Caspase-9蛋白及mRNA表达水平较模型组明显减少(P<0.01)且BreⅡ组大鼠心肌的Caspase-9蛋白及mRNA表达水平比BreⅠ组减少(P<0.05)。结论 Bre可以减轻IR大鼠心肌梗死面积,其机制可能与减少大鼠心肌的Caspase-9蛋白及mRNA表达有关。Bre对IR损伤心肌的保护作用呈剂量依赖性。     

SHH信号通路激活对急性心肌梗死大鼠缺血心肌血管再生的作用

目的 探讨SHH(sonic hedgehog)信号通路激活对急性心肌梗死(AMI)大鼠缺血心肌血管再生作用及机制。方法 雄性成年SD大鼠80只,体质量（150~200）g采用结扎大鼠左前降支的方法制备AMI大鼠模型,随机分为单纯心肌梗死(AMI)组,外源性重组人SHH蛋白（rhSHH）处理组,SHH信号通路抑制剂Cyclopamine(CYC)处理组,连续处理7 d后,利用VIII因子免疫组织化学染色测定rhSHH对AMI大鼠缺血心肌微血管密度的影响;TTC染色观察各组心肌梗死面积;ELISA和RT-PCR方法测定AMI大鼠缺血心肌促血管再生相关的指标血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及血管生成素(Ang)-1的血清和mRNA表达;Western blot检测各组SHH信号通路相关蛋白SHH,SMO,Gli-1的蛋白表达。结果 与AMI组相比,rhSHH处理后缺血心肌微血管密度显著增加（P<0.05）,心肌梗死面积减小（P<0.01）,血管生长因子VEGF,bFGF,Ang-1的血清水平和mRNA表达显著增加（P<0.01）,心肌梗死边缘区SHH信号通路下游靶分子(SHH,SMO,Gli-1)的蛋白表达显著增加（P<0.05）;这种影响可以被SHH信号通路抑制剂Cyclopamine所逆转（P<0.01）。结论 激活SHH通路可增加缺血心肌血管生长因子VEGF,bFGF,Ang-1的表达,促进急性心肌梗死大鼠的血管再生。     

肾及下肢缺血预处理对大鼠急性心肌梗死范围及HIF-1α基因表达的影响

目的观察和比较经肾脏和下肢缺血预处理的大鼠急性心肌梗死（AMI）范围和缺血心肌中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA的表达。方法将SD大鼠随机分为4组,对照组不予任何处理;AMI组结扎左冠状动脉前降支制作AMI模型;肾缺血预处理（RIP）组夹闭双侧肾动脉后再开放,随后复制AMI模型;下肢缺血预处理（LIP）组夹闭下肢动脉再开放,随后复制AMI模型。应用伊文思蓝及氯化三苯硝基四氮唑红（TTC）染色,测定心肌梗死范围;应用RT-PCR法测定各组心肌缺血区HIF—1α基因动态表达情况。结果RIP和LIP组心肌梗死面积较AMI组明显减小,但两者相比无统计学差异;RIP和LIP组HIF—1α mRNA表达均降低。结论肾脏和下肢缺血预处理对急性缺血心肌均有保护作用,HIF-1α基因表达减少可能是其机制之一。     

下肢缺血预处理对大鼠心肌基因表达的影响

目的 通过观察经下肢缺血预处理的心肌梗死大鼠心肌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA的表达,探讨其在缺血心肌中的作用.方法 将SD雄性大鼠随机分为心肌梗死组(40只)和下肢缺血预处理组(40只);每组按缺血时间又分为1、2、4、6、12 h组.显微镜下计数外周血白细胞;HE染色观察心肌组织中浸润白细胞的数值.应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定术后各时间点心肌组织中HIF-1α和HO-1mRNA表达.结果 下肢缺血预处理后12 h组外周血白细胞计数以及心肌组织中白细胞浸润数目较心梗组显著减少(P＜0.05);心肌中1、2、4 h HIF-1α mRNA表达与心梗组对应时间点比较有显著差异(P＜0.01).各时间点HO-1mRNA表达与心梗组对应时间点比较有显著差异(P＜0.01). 结论经下肢缺血预处理后,心肌损伤减轻,HIF-1α和HO-1可能与心肌保护作用有关.     

内毒素诱导lrg表达对大鼠急性缺血/再灌注心肌的保护作用机制

目的:通过测定大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤模型中lrg表达水平与血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平及心肌梗死面积的变化,探索内毒素对缺血/再灌注心肌保护的分子机制。方法:将30只SD大鼠随机分为单纯缺血/再灌注模型组、内毒素预处理组和手术对照组,每组10只。采用戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,采用穿线结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌缺血/再灌注模型。采用免疫印迹法结合图像分析软件半定量计算lrg分子表达水平的动态变化,放射免疫法测定血浆CGRP、ET-1和TNF-α浓度,用氯化三苯四唑(TTC)染色法和计算机图像分析系统计算心肌梗死面积。结果:大鼠左冠状动脉前降支缺血/再灌注1.5 h内毒素预处理组血浆ET-1和血清TNF-α浓度较缺血/再灌注组显著降低,心肌梗死面积也显著缩小(P0.01);而血浆CGRP浓度则显著增高(P0.01)。结论:内毒素预处理可诱导lrg分子表达水平上调,并显著降低ET-1而增加CGRP浓度,减小心肌梗死面积,对急性心肌梗死后再灌注心肌产生一定的保护效应。     

黄芪注射液对梗死灶周脑组织HIF-1α和VEGF的影响

目的:观察黄芪注射液对缺血性脑损伤大鼠脑组织低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)影响,探索黄芪注射液对缺血脑组织血管生成的调节作用。方法:30只SD大鼠随机分为假手术组,模型组和黄芪注射液组。采用大脑中动脉局灶性栓塞模型,RT-PCR法检测缺血脑组织中HIF-1α和VEGF改变。结果:与模型组相比,黄芪注射液可显著升高缺血脑组织HIF-1α和VEGF表达(P<0.01)。结论:黄芪注射液可以通过上调缺血脑组织HIF-1α和VEGF的表达起到脑保护作用。     

急性心肌缺血大鼠诱生型一氧化氮合酶的检测

目的 观察诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide sythase,iNOS)蛋白在心肌梗死后早期大鼠心脏的表达变化.方法 将12只大鼠随机分为心肌梗死组和假手术组.采用开胸结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血模型,用免疫组织化学方法检测大鼠心肌梗死后24 h缺血心脏iNOS蛋白颗粒的表达.结果 在大鼠冠状动脉结扎后24h,梗死周围区心肌组织细胞出现大量iNOS蛋白表达,与假手术组相比差异有统计学意义(P＜0.01)假手术组未见iNOS蛋白表达.结论 正常心肌组织无iNOS蛋白表达,心肌梗死后早期缺血心肌组织检测到大量iNOS蛋白表达.     

蒙药顺气补心十一味丸对心肌梗死大鼠心肌血管生成和VEGF表达的影响

目的探讨顺气补心十一味丸对心肌梗死后缺血心肌血管生成的作用以及可能机制。方法健康成年Wistar大鼠72只,随机分为模型对照组、蒙药低剂量组、蒙药高剂量组、卡托普利组,每组18只。所有大鼠背部皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)复制心肌梗死模型,模型建立后,药物干预组分别给予顺气补心十一味丸0.461、1.844 g/kg和卡托普利25 mg/kg,每日两次灌胃。分别取6只大鼠在7、28 d和42 d处死,免疫组化染色观察CD34和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果①MVD结果显示:7、28 d和42 d蒙药低、高剂量组、卡托普利组与模型对照组相比MVD明显增加(P<0.01);②VEGF蛋白在7、28 d和42 d时蒙药低、高剂量组与模型对照组相比表达明显增强(P<0.01);卡托普利组与模型对照组相比无差异。③病理结果显示:相应时间点各治疗组较模型对照组坏死灶面积缩小,42 d时心肌纤维化程度减轻。结论顺气补心十一味丸能够促进心肌梗死大鼠缺血心肌的血管生成,能上调缺血心肌的VEGF蛋白表达,其促血管生成的机制可能与上调缺血心肌的VEGF蛋白表达有关。     

黄芪甲苷Ⅳ对梗死小鼠心肌新生血管成熟及HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响

目的 观察黄芪甲苷（Astragaloside,Astra）-Ⅳ对梗死小鼠心肌新生血管成熟及缺氧诱导因子（Hypoxia induced factor,HIF）-1α和血管内皮生长因子（Vascular endothelial cell factor,VEGF）蛋白表达的影响。 方法 结扎法制备小鼠心肌梗死（Myocardium Infarct,MI）模型,Astra-Ⅳ腹腔注射[2 mg/（kg·d）]21 d,通过小动物超声系统评价小鼠心功能;计算梗死面积（IS）与缺血区面积（AAR）的比值;CD31和α-SMA双荧光染色法观察梗死周边心肌组织新生和成熟血管密度;经鼠尾注射FITC-Lectin观察新生血管的灌注情况;Western blot检测MI区及其边缘组织HIF-1α、VEGF表达的变化。 结果 Astra-Ⅳ可提高小鼠的FS（%）和EF（%）[（61.0±2.7）% vs.（40.2±3.9）%,P<0.05;（44.1±3.2）% vs.（29.1±4.1）%,P<0.05],减少MI范围[28.8±8.4）% vs.（45.1±9.3）%;P<0.05];MI+Astra-Ⅳ组心肌新生血管密度（214.0±21.3/mm2）,成熟血管密度（7.0±2.1/mm2）,有效灌注新生血管密度为（0.39±0.11）×105/pixels,与MI组比较均具有显著差异（P<0.01）;MI+Astra-Ⅳ组显著增加周围组织的HIF-1α、VEGF蛋白水平（P<0.01）。 结论 Astra-Ⅳ缩小MI面积,提高梗死心肌功能,并促进促血管新生和成熟,实现缺血组织有效灌注,其分子机制可能与HIF-1α和VEGF蛋白的表达增加有关。     

后处理减轻心肌缺血/再灌注损伤与HIF-1α-iNOS-cGMP通路激活的关系

目的 探讨后处理减轻缺血/再灌注所致的心肌损伤效应是否与低氧诱导因子-1α （HIF-1α）及其下游通路有关.方法 建立大鼠心肌缺血/再灌注及后处理模型,检测心肌组织中HIF-1α及其下游基因诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的表达情况及cGMP的含量.结果 后处理缩小缺血/再灌注所致的心梗面积[（27.30±4.16）%比 （36.00±5.29）%,P＜0.01],减少心肌细胞凋亡（Caspase 3比活性：（1.85±0.50）比（3.79±0.64）,P＜0.01）,上调心肌组织中HIF-1α表达[（5.76±0.55） 比（2.85±0.13）,P＜0.01）的同时,提高了iNOS的表达及其cGMP的含量.预先给予HIF-1α脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG使后处理心肌组织中HIF-1α表达进一步上调后,iNOS的表达及cGMP含量随之增加,同时后处理减轻心肌损伤的效应[心梗面积：（17.95±2.00）% 比 （27.30±4.16）%,P＜0.01; Caspase3比活性：0.43±0.13比1.85±0.50,P＜0.01]也进一步增强.结论 后处理减轻缺血/再灌注所致心肌损伤的效应可能与其激活心肌组织中HIF-1α-iNOS-cGMP通路有关.     

心肌转染缺氧诱导因子1α对大鼠心肌梗死的保护作用

目的 目的 评价心肌内注射缺氧诱导因子1α进行基因转染对大鼠心肌梗死的保护作用.方法 选择雄性大鼠72只进行实验,将实验分为转染腺病毒缺氧诱导因子1α组,转染空质粒对照组和假手术组.每组以术后的不同时间处死,取材分3、7、14天三个亚组,每个亚组8只.建立心肌梗死模型.当左前降支被结扎后,在室游离壁的三个不同部位分别注射50μg腺病毒缺氧诱导因子1α质粒和50μg的空质粒.假手术组不结扎左前降支.观察缺氧诱导因子1α的基因表达、心肌毛细血管密度和大鼠心肌梗死面积.结果 缺氧诱导因子1α组与对照组相比,心肌组织中缺氧诱导因子1α基因表达明显增强,梗死区毛细血管密度明显增加(P<0.01),心肌梗死面积分别为23.85%±2.25%和38.74%±3.12%,心肌梗死面积明显减少(P<0.01).结论 心肌内注射缺氧诱导因子1α进行基因转染可以增加缺氧诱导因子1α基因表达,增加心肌毛细血管生成,明显减少心肌梗死面积,对大鼠心肌梗死起保护作用.     

缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤过程中内质网应激的影响研究

目的 探讨缺血后处理(IPostC)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中细胞凋亡的影响,以及特异性内质网应激(ERS)损伤相关蛋白Grp78(葡萄糖调节蛋白78)和Caspase 12(半胱氨酸蛋白酶12)的蛋白表达水平的变化和意义。方法 Wistar 大鼠24只随机分为假手术组、I/R组(缺血再灌注组)、IPostC组(缺血后处理组)3组,每组8只。分别测定各组心肌缺血和梗死面积、细胞凋亡指数和Caspase12、 Grp78蛋白表达检测。结果 假手术组未见梗死心肌和缺血心肌,IPostC组心肌缺血区面积(46.46±2.13)%和梗死区面积(41.02±2.93)%均明显小于I/R组(53.31±3.87, 52.19±3.44)%,P值均<0.01。假手术组心肌细胞凋亡指数(6.70±2.25)%明显低于I/R组(26.92±1.91)% 、IPostC组(20.54±3.05)%,P值均<0.001。心肌组织Caspase12蛋白表达水平在假手术组(0.11±0.01)明显低于I/R组(0.41±0.06)和IPostC组(0.35±0.06),并且IPostC组低于I/R组,P值均<0.01;心肌组织Grp78蛋白水平在假手术组(0.13±0.03)亦明显低于I/R组(1.04±0.16)和IPostC组(1.17±0.14),并且IPostC组高于I/R组,P值均<0.01。结论 本研究从动物实验证实IPostC能减轻心肌细胞凋亡,而ERS激活参与了大鼠MIRI过程,推测IPostC在大鼠MIRI过程中可能通过调节ERS途径抑制细胞凋亡,改善MIRI。     

黄瓜香对大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的 观察黄瓜香（VDG）对大鼠急性心肌缺血的保护作用.方法 建立异丙肾上腺素（ISO）致急性心肌缺血模型,测定大鼠Ⅱ导联心电图变化,采用TTC染色法测定心肌梗死区,分光光度计测定血清肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）含量,计算心肌含水量（MWC）及心肌指数（MI）.结果 黄瓜香可降低异丙肾上腺素引起的急性心肌缺血模型大鼠的血清CK、LDH活力,MI及MWC分别降低29.3%和10.8%,减小心肌梗死范围16.0%（P＜0.05）.结论 黄瓜香对大鼠急性心肌缺血具有一定的保护作用.     

缺氧诱导因子α亚型基因在急性心肌梗死大鼠缺血心肌表达的变化

目的 通过观察急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌缺氧诱导因子 (hypoia-inducible factor,HIF) 3个α亚型mRNA表达的动态变化,探讨其在早期缺血心肌中的作用.方法 将大鼠随机分为对照组和AMI组.用HE染色观察心肌形态学变化, RT-PCR检测术后1、2、4、6、12 h缺血心肌HIF 3个α亚型mRNA表达情况.结果 HIF-1α、2α、3α mRNA在正常心肌中均有表达.术后1 h,缺血心肌HIF-1α mRNA表达明显上调(P<0.05),2 h达高峰(P<0.01),4 h开始下降(P＜0.05),6 h降至正常水平,12 h维持在正常水平;HIF-2α、3α mRNA在急性缺血心肌表达无明显变化.结论 早期急性心肌缺血可诱导HIF-1α基因表达改变,与HIF-2α、3α基因表达无关.     

阿托伐他汀对急性心肌梗死髓过氧化物酶的影响

目的探讨阿托伐他汀对急性心肌梗死髓过氧化物酶的影响。方法雄性SD大鼠结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,并随机分为治疗组(19只)、对照组(19只)和假手术组(18只),治疗组术前给予阿托伐他汀10mg.kg-1.d-1,对照组和假手术组给予相应体积的生理盐水。瑞吉染色法检测血液中中性粒细胞(polymorph nuclear neutrophil,PMN)的数量;HE染色光镜检测心肌组织中PMN浸润的数量;TTC染色法测定心肌梗死范围;髓过氧化物酶(MPO)法测定血清和心肌MPO活性。结果治疗组和对照组血液、心肌内的PMN浸润较假手术组明显增加(P<0.01),但治疗组较对照组PMN数量明显减少(P<0.05)。治疗组和对照组血清、心肌内MPO活性均较假手术组明显增加(P<0.01);与对照组比较,治疗组血清、心肌内MPO活性明显降低(P<0.05)。治疗组和对照组心肌梗死范围与假手术组比较有显著差异(P<0.01);治疗组与对照组比较,心肌梗死范围明显缩小(P<0.05)。结论急性心肌梗死后PMN浸润,MPO活性增加,阿托伐他汀干预后可抑制PMN浸润和MPO活性,减少心肌梗死面积。     

有氧运动训练对大鼠心肌缺血/再灌注损伤致心肌细胞凋亡的作用

目的 应用大鼠在体心脏缺血/再灌注损伤（ischemia/reperfusion injury,I/RI）动物模型,观察缺血/再灌注(I/R)后运动训练（exercise training）对心肌细胞凋亡的作用以及与磷脂酸肌醇3激酶蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路可能存在的相互作用,探讨运动训练对心脏保护作用的可能机制。方法 60只SD大鼠建模后随机分成3组:假手术组,I/R组,I/RI+运动训练组。LTTC染色检测心肌梗死范围;采用TUNEL荧光标记法检测心肌凋亡;Caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;免疫印迹法检测p-Akt水平。结果 与I/R组比较,运动训练可以减少心肌梗死范围（n=9,P<0.01）,可以明显抑制心肌细胞凋亡（n＝10,P<0.01）,降低caspase-3活性（n=8,P<0.01）,有效提高I/R后心肌p-Akt水平（n=7,P<0.01）。结论 运动训练对I/RI的心肌具有保护作用,其可能是通过PI3K/Akt信号通路实现的。