几种血液DNA快速抽提法的比较及其临床应用

采用ＮＰ－４０及辛酸法提取血液有核细胞ＤＮＡ，并在ＨＬＡ基因配型等临床检测中应用。通过对２００份血标本及部分淋巴细胞标本ＤＮＡ的提取，与煮沸法及标准酚－氯仿法同步进行对比研究，显示ＮＰ－４０法及辛酸法操作简单，快速，耗分别为６０ｍｉｎ及２０ｍｉｎ，结果稳定，可靠、所获ＤＮＡ的量及纯度与标准酚－氯仿抽提法无差异，用于ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ基因分型均获成功。显示ＮＰ－４０和辛酸法各有其特点，可配合使用，适     

肾移植供受者DNA水平人类白细胞抗原－DR配型的研究

探讨利用聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ），进行人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ基因分型，并应用于肾移植临床的可行性，以准确选择理想配型的供受者，提高移植物长期存活率。方法作者应用分子生物学技术根据ＨＬＡ－ＤＲ核苷酸序列设计合成３０个特异引物，快速盐析法提取模板ＤＮＡ，借助ＰＣＲ技术建立ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对１７１例肾移植供受者和１４份标准ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因水平分型。扩增条件为９４℃、３０秒、６０℃、５０秒，７２℃、４０秒，共３４个循环。分型结果采用标准ＤＮＡ，限制性内切酶分析和特异性探针杂交等予以确证。结果所有１７１份样本和１４份标准ＤＮＡ采用ＰＣＲ－ＳＳＰ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因分型均获成功。特异性扩增产物与引物设计预期大小相同，无假阳性和假阴性，总耗时５小时。分型结果经标准ＤＮＡ、内切酶分析和探针杂交等证实符合，特异性和重复性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型是一种快速而精确的方法，适合于器官移植，尤其是尸肾移植供受者配型选择的临床应用。     

肾移植供受者DNA水平人类白细胞抗原—DR配型的研究

探讨利用聚合酶链反应方法，进行人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ基因分型，并应用于肾移植临床的可行性，以准确选择理想配型的供受者，提高移植物长期存活率。方法作者应用分子生物学术技术根据，ＨＬＡ－ＤＲ核苷酸序列设计合成了３０个特异引物，快速盐析法提取模板ＤＮＡ，用分子生物学技术根据ＨＬＡ－ＤＲ核苷酸序列设计合成３０个特异引物，盐析法提取模板ＤＮＡ，借助ＰＣＲ技术建立ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对１７１例紧移植供     

顺序特异引物聚合酶链反应技术HLA－DR1，DR51组的基因快速分型

采用快速基因分型技术对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ１、ＤＲ５１组准确分型，为临床选择理想配型的供受者提供依据。根据核苷酸序列合成系列特异引物，借助ＰＣＲ技术，建立顺序特异引物聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ）快速基因分型方法，对６９例肾移植供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ１５、ＤＲ１６和ＤＲ１０分型，同时与血清学方法对比研究。分型结果采用限制性内切酶分析和寡核苷酸探针杂交证实。结果：６９例供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组ＰＣＲ－ＳＳＰ分型均获成功，无假阳性和假阴性，总耗时５ｈ，分型结果经酶切分析和探针杂交证实符合。血清学分型耗时２４ｈ，误差率达３２．４％。结论：ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组基因分型，具有快速、精确的特点，适合于临床应用。     

HLA—DRB1基因多态性与河南汉族人群急性淋巴细胞白血病关 …

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）易感性与ＨＬＡ＿ＤＲＢ１基因多态性之间的关联性,找出ＡＬＬ的易感基因。方法：采用序列特异笥引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）ＤＮＡ分型技术对５６例ＡＬＬ患者和１０５例健康对照组进行进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因分型。结果：ＡＬＬ组与ＨＬＡ－ＤＲ７基因关联,基因频率为２４．１％,ＲＲ＝２．５６,χ＾２＝７．３４,Ｐ〈０．０１,病因分数为０．２９．其他等位基因频率ＡＬ     

序列特异性PCR在HLA—DRB1基因分型的应用

参照ＨＬＡⅡ型基因序列设计８条序列特异性引物，应用分别代表ＨＬＡ－ＤＲ１－１８血清学特异性的１１株ＤＮＡ标准品建立序列特异性ＰＣＲ（ＰＣＲ－ＳＳＰ）和套式ＰＣＲ方法，并对６４例ＩＤＤＭ病人和７２例健康对照者进行ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因分型。结果：（１）方法学鉴定示程序了各特异性引物均能从１１株ＤＮＡ标准口扩增出相应的等位基因，并能检出杂合子。除ＨＬＡ－ＤＲ３组特异引物对ＤＲ１发生交叉外，其余序列特异性     

中国南京地区汉族人HLA－DR4DNA的快速分型

应用ＡＲＭＳ（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ）方法对南京地区１００例汉族健康人ＨＬＡ－ＤＲ４进行基因分型，结果表明，本地区汉族人ＨＬＡ－ＤＲ４基因纯合子占６％，杂合子占１５％，非ＤＲ４占７９％。本法较ＰＣＲ／ＳＳＯ法简单、快速，结果可靠，可用于ＨＬＡ配型。检测结果为ＨＬＡ相关联疾病及人类学的研究提供了参考依据     

强直性脊柱炎相关抗原HLA—B2704基因克隆

目的 对ＨＬＡ－Ｂ２７０４的编码基因进行克隆。方法 通过酚提法获取基因组ＤＮＡ,用ＥｃｏＲⅠｇ／Ｌ琼脂糖凝胶分离目的基因片段,采用内闰素末端标记的寡核苷酸探针对重组体噬斑转膜原位杂交,筛选阳性克隆,并进一步克隆化,用Ｗｉｚａｒｄ λＤＮＡ纯化系统试剂盒撮以纯化λＤＮＡ。结果 经酚提法获取基因组ＤＮＡ浓度为０．。８ｇ／Ｌ,Ｄ２６０／Ｄ２８０为１．７５,经高盐洗脱和乙醇纯化法获取的ＤＮＡ浓度为０．１６     

PCR—RFLP用于HLA—DQA1基因分型的方法建立

目的 建立一种简便、快速、价廉的ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型方法，即ＰＣＲ－ＲＦＬＰ（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）。方法 通过对４０例正常献血员及３０例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因的分型，介绍ＰＣＲ－ＲＦＬＰ的原理，具体方法及应注意的问题。结果 正常献血员与ＳＬＥ患者有明显不同的基因型别。结论 ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分型方法更易为一般实验     

乙型肝炎后肝硬化与HLA—DQA 1基因

目的：了解ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因型与乙型肝炎后肝硬化有无关联。方法：对３０例乙型肝炎后肝硬化住院患者的外周血ＤＮＡ，进行聚合酶链反应法扩增ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因第二外显子多态性片，ｒ－＾３２Ｐ末端标记８个序列特异性寡核苷酸，进行斑点杂交以确定ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因型，并与４０例正常人的结果进行比较。结果：ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０１０２和Ａ１＊０３０１的频率在肝硬化组较高，但均未达到统计学意义。结论：ＨＬＡ－     

器官移植HLA—Ⅱ类基因分型研究及应用

目的：提高ＨＬＡ－Ⅱ类基因ＤＲ、ＤＱ位点分型的准确性，选择合适的供受者对，延长移植物的存活时间。方法：对４２９例肾移植供受者ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型进行了研究。ＰＣＲ－ＳＳＰ（聚合酶链式反应－序列特异性引物），全过程耗时３小时。结果：（１）用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法可同时、同条件进行ＩＬＡ－Ⅱ类ＤＲ、ＤＱ基因分型。（２）１７２例次供受者ＨＬＡ－ＤＲ位点０个错配（０ＭＭ），其移植肾１年存活率为１００％；１个错配（１ＭＭ）为９２６％；２个错配（２ＭＭ）为８６５％。（３）在与疾病相关的研究中发现，尿毒症患者ＤＲ１０比例明显高于正常人。供受者ＤＲ、ＤＱ位点基因频率及单倍型连锁不平衡参数与国内外报道大致相同。结论：初步建立起一套完整的ＨＬＡ分型手段，为进一步研究ＨＬＡ打下了基础。     

骨髓移植配型中HLAⅡ类基因PCR-SSP分型技术的应用

ＨＬＡⅡ类基因是位于人类第 6号染色体短臂远端的一组高度多态的基因 ,主要包括ＨＬＡ ＤＲ、ＤＱ、ＤＰ3个亚区[1] 。ＨＬＡⅡ类基因配型对提高异基因骨髓移植存活率 ,减少ＧＶＨＤ ,具有重要意义[2 ] 。既往ＨＬＡⅡ类分型采用血清学微量淋巴细胞毒试验 ,近年国外实验室已转向基因分型 ,并已将其列为常规。我们采用序列特异性引物 (ＳＳＰ)ＰＣＲ技术对ＨＬＡ ＤＲＢ1,ＤＱＢ1进行基因分型 ,快速简便 ,报告如下。1　材料与方法1 1　样本　原山东医科大学附属医院提供 2 2名拟行骨髓移植的恶性血液病患者及相关供者样本。1.2　ＤＮＡ提取…     

中国畲族HLA-DRB1基因多态性研究

本文首次报道了中国畲族ＨＬＡ－ＤＲＢ１的基因分型。以ＰＣＲ／ＳＳＰ方法对中国畲族１０５个血样本进行了ＤＮＡ分型，结果与我国汉族（北方、沈阳、广东）、布依族、突尼斯人和法国高加索族的相关资料进行比较分析，显示中国畲族ＨＬＡ－ＤＲＢ１的等位基因数与以上民族的等位基因数有显著性差异，呈现多态性分布。     

PCR-SSCP作HLA-DRB基因分型的初步研究

从２０例人类白细胞抗原－ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ）血清学特异性不同的血痕样本中抽提基因组ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ基因第二外显子的高度多态区域。ＰＣＲ产物在５０％甲酰胺存在下加性获得单链ＤＮＡ片段后，经８％中性聚丙用酰胺凝胶电泳、银染显色分析。结果显示，ＤＲ血清学特异性不同的个体具有不同的电泳图型。而ＤＲ相同血清不同的个体却具有相同的电泳带型。在稳定条件下，单链电泳图型有着良好的重复性。与聚合酶链反应－制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）或聚合酶链反应－序列特异寡核苷酸（ＰＣＲ－ＳＳＯ）探针法相比，聚合酶链反应。单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析简单、快速、经济，不需探针和限制性内切酶，并可望成为临床上器官和骨髓移植寻找合适的ＨＬＡ配型的一种工具。     

HLA-DRB1基因与2型糖尿病的关联

目的 探讨ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因与２型糖尿病的关系。方法 应用ＰＣＲ反向杂交法对１８名２型糖尿病患者进行２型糖尿病与ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因的关联研究。结果 ２型糖尿病患者ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因中ＨＬＡ－ＤＲ７基因频率明显高于对照组（Ｐ〈０．０５）。结论 ２型糖尿病与ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因存在某些关联。     

乙型肝炎病毒感染者HLA-DRB基因分型及其相关性研究

目的 探索乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者ＨＬＡ－ＤＲＢ基因频率及其与疾病的相关性。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对重庆地区汉族乙肝患者４０例和正常人１２０名进行ＨＬＡ＝ＤＲＢ基因分型,结合临床病型与ＨＢＶ复制状态作用关性分析。结果 重庆地区汉族正常人以ＤＲ２９１５）、ＤＲ５（１２）、ＤＲ９位点常见乙肝患者与之比较ＤＲ３基因频率明显增高（Ｐ〈０．０５）,ＤＲ５（１２）、ＤＲ７基因频率也有增高,均见于慢性乙肝和肝     

HLA方法学进展及其DNA分型应用

人类白细胞抗原（ＨＬＡ）方法学包括传统的ＨＬＡ血清学分型和ＨＬＡ－ＤＮＡ分型,而ＨＬＡ－ＤＮＡ又可分为ＤＮＡ－限 制性片段长度多态性分析、ＰＣＲ－序列特异性寡核苷酸探针、ＰＣＲ－序列特异性引物、ＰＣＲ－单链构象多态性及ＰＣＲ－ＤＮＡ 测序５种,并对血清学和ＤＮＡ分型方法的可靠性进行了比较。ＨＬＡ－ＤＮＡ分型技术主要应用于移植配型、骨髓库和脐 血库的ＨＬＡ分型及人类基因多态性、疾病关联、移植物植活指标的研究。     

HLA-DR快速基因分型PCR-SSP方法的建立

目的：探讨应用于器官移植配型及疾病相关性分析的方法及基本数据,建立一种高分辨率、高特异性、简单、快速、方便的ＨＬＡＤＲ基因分析方法。方法：利用ＤＲ１～ＤＲ１８序列特异性引物及１对内对照引物,采用序列特异性引物聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓ,ＰＣＰＳＳＰ）技术对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２０例未知ＤＲ型别的临床血液标本进行ＨＬＡＤＲ基因分析,扩增条件为：变性９４℃,６０ｓ;退火６５℃,６０ｓ;延伸７２℃,６０ｓ。２５个循环后,７２℃保温７ｍｉｎ。结果：对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示,准确率及重复率均为１００％,无假阳性及假阴性。结论：该方法快速、简便、灵敏、重复性好,结果易于判断,适合临床器官移植组织配型、疾病相关性分析、法医鉴定及人类学研究等。     

微量序列特异性引物聚合酶链反应—HLA分型技术在肾移植中的应用

目的 探讨适用于临床肾移植的组织配型新技术。方法 建立微量序列特异性引物聚含酶链反应（微量ＳＳＰ法）的方法，对肾移植供、受者ＳＳＰ－ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型，并与单克隆抗体一步法分型结果进行对比研究。结果 应用两种方法对１４２份标本进行ＨＬＡ－Ⅱ类抗原／基因分型，结果完全相符，微量ＳＳＰ法不但快速、需血量少，而且分辨率高、结果准确。结论 微量ＳＳＰ法具有快速、准确、省血等优点，适合在临床器官移植配型中推广应用。     

湖南汉族群体HLA—DR2等位基因多态性与系统性红斑狼疮的相？…

以ＨＬＡ－ＤＲＢ基因类扩增为参照,通过ＨＬＡ－ＤＲ２组特异性扩增确定ＨＬＡＤＲ２携带者,ＰＣＲ／ＳＳＰ作亚型分型,并用银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析ＨＬＡ－ＤＲ２等位基因第二外显子单链构象,调查湖南地区汉族群体ＳＬＥ（系统性红斑狼疮）患者５８例和健康对照５９例ＨＬＡ－ＤＲ２等位基因分布。结果示,ＨＬＡ－ＤＲ２与ＳＬＥ相关,ＨＬＤ－ＤＲＢ１＊１５０１为疾病相关等位基因,该群体中检出的另外两种亚型ＤＲＢ１＊