PCR试验中的污染及对策

<正> 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)就是由特异引物启动的对特异基因序列的体外酶促扩增技术,它可在一至数小时内使某一基因序列复制数百万份,从而达到肉眼可见的水平。因而其卓越的优点很快在人类疾病研究和诊断中得到广泛的应用。但也正由于这一方法具有极大的扩增能力、高度的特异性和检测的灵敏性,使得极微量的污染即可导致假阳性结果。因此,PCR污染问题已引起人们极大的     

PCR和分离培养检测细胞培养支原体污染的比较

目的：检测细胞培养中支原体的污染,建立支原体通用的ＰＣＲ方法。方法：根据已出版的序列设计并合成一对支原体（柔膜体纲）１６Ｓ ｒＲＮＡ基因组特异引物。对实验室所存的１２种支原体、大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养细胞进行了ＰＣＲ扩增。以ＰＣＲ与分离培养比较检测了３３份细胞培养标本。结果：１２种支原体均出现了约６２０ｂｐ左右的特异性扩增带,敏感性为１００￣１０００个支原体细胞,且常见的６种细胞     

如何作好PCR技术实验课的准备工作

聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术是医学分子生物学技术中的 1项革命性创举。随着分子生物学的创立和发展 ,ＰＣＲ扩增作为 1门崭新的技术已经在遗传性疾病的诊断 ,临床标本中病原体核酸序列的检测、激活癌基因中突变情况的分析 ,法医学上的遗传学鉴定以及克隆诸方面得到越来越广泛的应用。ＰＣＲ实验技术的教学是我院 1项新开展起来的实验课 ,本实验耗费时间、试剂昂贵 ,实验器材多 ,技术操作对大多数学生来说比较陌生复杂 ,所以实验课准备工作的好坏 ,直接影响到实验课的质量 ,在这样一个繁琐、复杂、精细的工作中 ,即使是微小的疏忽也会造成实…     

PCR污染与对策及假阴性原因

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生.     

罗氏诊断与PCR技术

罗氏诊断拥有PCR(聚合酶链反应)技术的全球专利权。它的发明在1 993年获得了诺贝尔化学奖。目前已经广泛应用于病毒学、妇女健康、微生物学、血液筛查、肿瘤学、基因组学等方面。CobasAmplicor是全球首个完全实现PCR扩增与检测自动化的桌面平台。它主要应用于疾病诊断、病毒载量测定、药物疗效监测及评估、血液筛查等领域罗氏诊断与PCR技术     

PCR及其相关技术进展

ＰＣＲ及其相关技术进展北京医科大学临床肿瘤学院田竟生首都医学院神经科学研究所徐群渊多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，简称ＰＣＲ）是分子生物学领域中的新技术。它的价值可与限制性内切酶、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹相比拟。尽管人们对于...     

PCR技术检测RH株弓形虫组织内感染的实验研究

目的：建立敏感，特异的聚合酶链反应（PCR），以检测组织内弓形虫感染。方法：优化PCR反应关键步骤的条件。以相同的B1引物扩增相近的病原体判断其特异性，扩增倍比稀释的DNA检测其灵敏度，并以PCR法检测实验鼠肝，血中DNA的动态变化。结果与免疫组化法进行比较。评价其检测生物学样本的可行性。结果：实验建立的PCR技术的灵敏度能达到检测出一个虫体的DNA，且特异性强，不扩增鼠DNA，人DNA，隐孢子虫，卡氏肺孢子虫，鼠疟原虫的DNA，检测实验感染小鼠血，肝脏样本，在感染后2天，3只鼠血样本PCR结果阳性，3只小鼠肝标本2只阳性；感染后3天至濒死前后有小鼠检测结果均阳性；血样本阳性检出率100%（11/11），肝脏组织样本阳性检出率81.8%(9/11)。结论：PCR方法是一种敏感，特异快速的诊断方法，可用于诊断血和肝脏组织内的弓形虫。     

PCR测定在医学中的应用

ＰＣＲ测定在医学中的应用江苏镇江医学院生物化学教研室龚志明江苏省镇江市第一人民医院杨兆生聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃ－ｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术是用ＤＮＡ聚合酶在体外条件下，模仿天然ＤＮＡ的复制过程．ＰＣＲ测定的样品量是微量的，只...     

PCR在结核性脑膜炎诊断中的应用

目的 探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）在结核性脑膜炎诊断中的应用。方法 采用ＰＣＲ技术检测结核性脑膜炎（结脑）患者脑脊液（Ｃｓｆ）中结核杆菌（ｔｕｂｅｒｃｌｅ ｂａｃｉｌｌｉ,ＴＢ）３０例。结果 结脑患者Ｃｓｆ中ＴＢ阳性率为７０％。结论：ＰＣＲ技术对结脑的快速、敏感、特异性诊断具有广泛的应用前景。     

庚型肝炎病毒的RT—PCR法检测

根据国外报道的庚型肝炎病毒基因组序列设计两对５’非编码区引物，用ＲＴ－ＰＣＲ法检测了２４例丙型肝炎和１０例透析病人血清静 标本。结果丙型肝炎病人透析病人各１例检出ＨＧＶ ＲＮＡ，占总受检例数的５．８８％。本研究说明了ＨＧＶ在我国的存在，提示开展ＨＧＶ相关研究的必要性。     

PCR检测技术在结核病诊断中的应用

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）自创建以来已逐步应用于临床疾病的诊治［１］，特别是对临床结核标本的辅助诊断更具有重要意义。近期，我们对临床送检的各种可疑结核病标本，应用ＰＣＲ技术对结核病的感染情况进行了检测，结果报告如下。１ 资料与方法１．１ 标本来源 临床送检标本８２例，其中痰３０例，胸水１６例，腹水１４例，尿７例，脑脊液８例，肺泡灌洗液７例。１．２ 方法 标本采集后存放于经高压灭菌和紫外线照射后的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中。模板ＤＮＡ提取的主要过程是：取适量组…     

PCR─SSCP分析实验中的注意事项

ＰＣＲ─ＳＳＣＰ分析实验中的注意事项张学，姜莉，金春莲，孙开来，肖卫国（基础医学院医学遗传学教研室，第一临床学院内科）关键词聚合酶链反应；基因突变ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析，即聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物的单链构象多态（ＳＳＣＰ）分析，是ＰＣＲ扩增产物的单链...     

轮状病毒RT—PCR快速诊断方法研究

采用自制逆转录套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测婴幼儿病毒性肠炎粪便中的轮状病毒，结果阳性率为５６．５％（６１／１０８），显著高于采用ＰＡＧＥ，ＥＬＩＳＡ，ＬＡ检测的阳性率（Ｐ〈０．０１），而检测时间短，敏感性高，采用磷灰石抽提病毒ＲＮＡ的方法也优于其它三法试验盒的效果，国内尚未报道。