硫化氢对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨硫化氢(H₂S)对内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:体外培养雄性SD大鼠主动脉VSMC, 将细胞分成对照组、血清组、内皮素组、NaHS组、血清+NaHS组和内皮素+NaHS组进行研究, 以不同浓度梯度NaHS处理VSMC, 观察对VSMC[³H]-TdR掺入和MAPK活性的影响。结果:加入5×10^-5-5×10^-4mol/LNaHS可明显浓度依赖性地抑制由内皮素诱导的VSMC增殖, 其[³H]-TdR掺入量减低, 抑制率分别为16.8%-37.4%(P＜0.01), 其MAPK活性明显减低, 抑制率为7.4%-33.6%(P＜0.05或P＜0.01)。结论:H₂S对内皮素诱导的VSMC增殖有抑制作用, 同时使MAPK活性下调。推测H₂S对VSMC增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

尾加压素Ⅱ促兔肺动脉平滑肌细胞增殖及机理探讨

目的:探讨尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ,U-Ⅱ)对兔肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的作用及机理。方法:采用植块法培养家兔PASMCs,以MTT测定和[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入法观察U-Ⅱ对PASMCs增殖的影响,加入不同浓度的几种细胞内信号转导阻断剂,观察对U-Ⅱ效应的影响。 结果:U-Ⅱ(10^-9 mol/L-10^-7 mol/L)浓度依赖地促进PASMCs的A值增加及 -TdR掺入,以10^-7 mol/L U-Ⅱ的作用最明显,A值和[³H]-TdR掺入量分别较对照组高42.9%和68.5%(P＜0.05) 。10^-10 mol/L U-Ⅱ对PASMCs增殖无作用。尼卡地平、W₇、H₇、PD₉₈₀₅₉在一定浓度范围内(10^-7 mol/L-10^-5 mol/L)均可以浓度依赖地抑制U-Ⅱ诱导的PASMCs的A值增加及[³H]-TdR掺入增加。在浓度为10^-5 mol/L时,其抑制作用最明显,A值的抑制率分别为42.3%、19.6%、23.2%和10.5%(P＜0.05), -TdR掺入量的抑制率分别为46.6%、9.8%、21.7%和14.7%(P＜0.05 )。 结论: U-Ⅱ具有较强的促PASMCs增殖的作用,其诱导PASMCs增殖是通过Ca²⁺、CaM、PKC、MAPK来介导的。     

养血清脑血清拮抗溶血磷脂酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察养血清脑药物血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的大鼠血管平滑细胞(VSMC)增殖作用的影响。方法:在培养的大鼠平滑肌细胞上,测定[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-thymidine,[³H]-TdR)掺入、丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活性及脂质过氧化终产物丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)含量。结果:1×10^－9、1×10^－8和1×10^－7 mol·L^-1 LPA呈浓度依赖性引起VSMC[³H]-TdR掺入量、MAPK活性及MDA含量增加。5％、10％和15％养血清脑血清预孵育使1×10^－7 mol·L^-1 LPA诱导VSMC[³H]-TdR掺入量分别下降23.0％、42.0％和52.0％(P<0.01);使VSMC MAPK的活性分别下降13.9％(P<0.05)、29.6％(P<0.01)和48.9％(P<0.01);使细胞MDA含量分别下降19.4％、24.7％和43.2％(P<0.01)。结论:LPA呈浓度依赖性引起VSMC增殖及脂质过氧化,VSMC增殖与其细胞内信号转导MAPK途径有关。养血清脑血清可有效地拮抗LPA诱导的VSMC增殖、MAPK激活和脂质过氧化损伤。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:研究金属硫蛋白(MT)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:以[³H]-TdR掺入法测定VSMCs增殖程度,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性,[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法测定MT含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:Hcy(10^-6-10^-4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs[³H]-TdR掺入,0.1mmol/LHcy刺激[³H]-TdR掺入比对照组高4.2倍(P＜0.01)。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出(P均<0.01)。单独MT孵育,对VSMCs的上述指标均无明显影响(P＞0.05)。但MT(10^-6-10^-4mol/L)呈浓度依赖性抑制100μmol/LHcy的促增殖效应(r=0.98,P＜0.01)。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用(均P＜0.01)。以0.5mmol/LZnCl₂预孵育6h后,VSMCsMT含量比非诱导细胞高5.7倍(P＜0.01),这种内源性MT高表达的细胞,显著抵抗Hcy刺激的-TdR掺入和MAPK激活;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应(均P＜0.01)。结论:MT能有效抑制Hcy促大鼠VMSCs增殖作用,其机制可能与MT拮抗Hcy对MAPK的激活和其抗氧化作用有关。     

钙调神经磷酸酶在血管紧张素Ⅱ刺激的大鼠心肌细胞肥大中的作用及其活性调节

目的:观察钙调神经磷酸酶(CaN)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的大鼠心肌细胞肥大中的作用及其活性调节。方法:建立AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大模型,观察CaN抑制剂对AngⅡ刺激的心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入的影响,以及各种因素对心肌细胞CaN酶活性的影响。结果:10、 100、 1000 nmol·L^-1的AngⅡ作用12 h分别使心肌细胞的CaN活性增加了13%、 57%(P＜0.05)、 228%(P＜0.01)。AngⅡ(10 nmol·L^-1)刺激心肌细胞2 h内,CaN活性与对照组无明显差异(P＜0.05);AngⅡ刺激心肌细胞12 h以上,CaN活性才明显增高(P＜0.05)。Losartan(50 μmol·L^-1)、H₇(50 μmol·L^-1)及Fura-2/AM(4 μmol·L^-1)可明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性;而PD98059(50 μmol·L^-1)对AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性无明显影响。AngⅡ(10^-7mol/L)刺激的大鼠心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入明显高于对照组(P＜0.01),而CaN特异性抑制剂-环孢素A(0.5~5 μg/mL)可以明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入。结论:依赖Ca²⁺/CaM活化的CaN可能在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用;CaN的活化可能有赖于胞内Ca²⁺水平的持续升高,另外,CaN的活性还可能受到蛋白激酶C等信号分子的磷酸化调节。     

红景天甙对低氧培养的兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究红景天甙(Salidroside,Sal)对低氧(3%)条件下兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖、DNA合成、细胞内钙离子浓度的影响。方法:应用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入试验、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微术测定细胞内Ca²⁺浓度等方法。结果:低氧24h可直接刺激PASMC,使MTT的A值增加62%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量增加138%(P＜0.01)。在低氧的PASMC培养液中加入Sal(32×10^-5mol/L)可抑制低氧的这种促增殖作用,与低氧组相比MTT的A值下降29%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量下降37%。在低氧的PASMC培养液中加入钙通道阻滞剂verapamil也可抑制低氧的促增殖作用,与低氧组相比较,MTT的A值下降23%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量下降51%(P＜0.01)。PASMC的低氧培养可使细胞内Ca²⁺浓度明显增加(P＜0.05),Sal可抑制低氧所致的细胞内Ca²⁺浓度的上升。结论:红景天甙可抑制低氧促进PASMC增殖、DNA合成的作用,其机制可能与抑制低氧时细胞内Ca²⁺浓度增加有关。     

高胰岛素血症对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的: 观察胰岛素、内皮素-1(ET-1)和胰岛素+ET-1对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和形态结构的影响。方法: 体外培养VSMC中分别加入320 mIU/L胰岛素,10^-9 mol/L ET-1,320mIU/L胰岛素加10^-9 mol/L ET-1, 通过细胞计数和[³H]-TdR掺入量反映VSMC增殖情况, 进行细胞形态学观察。结果: ①胰岛素和ET-1都能促进VSMC的增殖(均为P<0.05); ②胰岛素和ET-1的联合应用使VSMC增殖约是对照组的两倍(P<0.01), 二者的联合作用也明显强于胰岛素(P<0.05)或ET-1(P<0.05)的单独作用; ③3组VSMC均有不同程度出现形态结构的改变, 由收缩表型转为合成表型。结论: 高胰岛素血症和/或ET-1水平增加均有助于糖尿病和胰岛素抵抗致动脉粥样硬化等血管病变的发生和发展。     

3种钙激动剂促培养的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：探讨不同来源的细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）介导的增殖反应的作用。方法：以培养的大鼠VSMCs为靶细胞,用血管紧张素II（Ang Ⅱ）剌激VSMCs跨膜Ca²⁺内流、三磷酸肌醇（IP₃）和雷尼丁（RY）剌激胞内Ca²⁺释放,[γ-³² P]-ATP掺入法和免疫印迹（Western blot）测MAPK活性及蛋白含量,氚-亮氨酸（[³H]-Leu）、氚-胸腺嘧啶（[³H]-TdR）掺入量作为VSMCs增殖的指标。结果：Ang Ⅱ、IP₃和RY均能显著增加VSMCs的[Ca²⁺]i浓度、MAPK活性及蛋白含量,并提高[³H]-Leu、[³H]-TdR掺入量,与对照组VSMCs相比差异显著（P<0.01）。结论：钙激动剂诱导的MAPK活性及含量的增加参与了VSMCs的增殖,VSMCs的肥大增殖与[Ca²⁺]i浓度增加有关,而与[Ca²⁺]i的来源无关。     

血管活性物质对人内皮细胞C-型利钠利尿肽合成和释放的影响

目的:在培养的人内皮细胞上观察内皮素(ET)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和同型半胱氨酸(Hcy)对C-型利钠利尿肽(CNP)生成和释放的影响,以探讨CNP生成和释放的机制。方法:人内皮细胞培养;CNP放免测定。结果:ET、AngⅡ均可刺激内皮细胞CNP的生成,10^-9、10^-8、10^-7mol/L的ET和AngⅡ分别使细胞CNP含量较对照组高1%(P＞0.05),49%(P＜0.05),117%(P＜0.01)和137%(P＜0.01),165%(P＜0.01),201%(P＜0.01),大剂量ET、AngⅡ可刺激CNP的释放。Hcy对内皮细胞CNP的生成没有影响,但10 ^-9、10^-8、10^-7mol/LHcy可使其释放增加17%(P＞0.05),84%(P＜0.01)和555%(P＜0.01)。结论:ET、Ang和Hcy可调节CNP的释放和/或生成。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管成纤维细胞激活

目的:观察外源性金属硫蛋白(MT)和ZnCl₂诱导内源性MT生成对同型半胱氨酸(HCY)激活大鼠血管成纤维细胞增殖的影响, 以探讨MT拮抗HCY血管损伤的可能机理。方法:采用[³H]-胸腺嘧啶([³H]－TdR)和[³H]-脯氨酸([³H]－Pro)掺入法测定细胞增殖及胶原生成, 自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量, 台盼蓝排斥法计算细胞存活率, 并用[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法检测细胞MT的含量。结果:HCY50、100、500μmol/L呈浓度依赖性刺激血管成纤维细胞增殖, 胶原合成和分泌(P＜0.05或P＜0.01), 500μmol/LHCY使细胞LDH漏出量增多, 细胞存活率降低。MT1×10^-5mol/L、1×10^-4mol/L与500μmol/LHCY共孵育组与单纯HCY组比较, [³H]-TdR、[³H]-Pro掺入、胶原分泌降低, LDH漏出量减少(P＜0.05或P＜0.01)。ZnCl₂预处理诱导细胞MT含量增加(P＜0.05), 而ZnCl₂处理与HCY50、100、500μmol/L共孵育组[³H]－TdR和[³H]－Pro掺入, 胶原分泌、LDH漏出量都明显低于单纯HCY组细胞, 且细胞存活率高于单纯HCY组(P＜0.05或P＜0.01)。结论:HCY刺激血管成纤维细胞增殖与胶原合成, MT无论外源应用或内源性诱导生成均能有效拮抗HCY的上述作用。MT对HCY作用的拮抗效应可能是其血管细胞保护的机理之一。     

雌激素对培养的兔平滑肌细胞增殖与移行的影响

目的: 探讨雌激素对培养的兔平滑肌细胞增殖与移行的影响。方法: 分别测定不同浓度雌激素作用下兔血管平滑肌细胞[³H]-TdR掺入量、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、血管平滑肌细胞(VSMC)移行的变化。结果: 低浓度(1 nmol/L)的雌激素组的培养细胞[³H]-TdR掺入量及VSMC平均光密度值、VSMC移行细胞数与对照组相比无明显差异(P>0.05), 较高浓度(10 nmol/L、100 nmol/L)的雌激素可以显著降低培养的[³H]TdR掺入量及培养VSMC平均光密度值, 并能显著减少VSMC移行细胞数目(P<0.01)。结论: 雌激素可抑制血管平滑肌细胞的增殖与移行, 从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

肾上腺髓质素对血管紧张素II的促血管平滑肌细胞增殖作用的影响

观察肾上腺髓质素前体N端20肽（PAMP）和肾上腺髓质素（ADM ）对血管紧张素II（AngII）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。用测定培养的大鼠VSMC3H-TdR掺入和蛋白激酶C（PKC）活性的方法。结果发现：10-8mol/L AngII刺激培养的VSMCs 3H-TdR掺入增加2.68倍（P＜0.01）、PKC活性增加1.02倍（P＜0.01）。而10-9mol/L-10-7mol/L的PAMP或ADM与10-8mol/L AngII同时孵育，则显著抑制AngII的上述作用（P＜0.01）。且两者的抑制作用无明显差异。PAMP和ADM均有抑制AngII所致的VSMC增殖作用，可能是通过抑制信号传导系统中的PKC活性来实现的。PAMP和ADM 与AngII相互作用，共同调节VSMC的增殖，从而维持循环系统功能的稳态。     

Probucol对碱性成纤维细胞生长因子和过氧化氢促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究probucol对bFGF和H₂O₂促大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:采用MTT、细胞计数和[3H]-TdR掺入法观察probucol对bFGF和H₂O₂促VSMC增殖的影响。结果:①Probucol抑制bFGF和H₂O₂刺激VSMC增殖和DNA合成,且呈剂量依赖性。Probucol+bFGF和probucol+H₂O₂组与bFGF和H₂O₂组比较,细胞计数、A值和[3H]-TdR掺入量分别下降了40.0%、39.1%、45.5%和46.9%、45.0%、39.5%(P＜0.05,P＜0.01)。②bFGF和H₂O₂刺激前给予probucol预处理24h能显著抑制VSMC增殖和DNA合成(P＜0.05),而bFGF和H₂O₂刺激后24h给予probucol则无明显影响(P＞0.05)。结论:Probucol能显著抑制bFGF和H₂O₂刺激的VSMC增殖和DNA合成,但对bFGF和H₂O₂预刺激诱导的细胞增殖无抑制作用。     

丝裂原活化蛋白激酶参与胰岛素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖研究

目的:探讨高血压血管平滑肌细胞(VSMC)在胰岛素作用下胞内信号转导途径之一丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响,及其与VSMC增殖的关系。方法:选用6周龄自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠,无菌分离主动脉,体外纯化培养VSMC至6~8代,加胰岛素干预和蛋白激酶C(PKC)抑制剂,采用胶内髓磷脂碱性蛋白原位磷酸化法测定VSMC中MAPK活性,并用Western Blot检测VSMC中MAPK的含量, [³H]-TdR测定VSMC的DNA合成量。结果:胰岛素作用后,SHR组的DNA合成量显著增加,MAPK活性及蛋白含量也显著增加,PKC抑制剂可明显降低MAPK活性。结论:SHR体外培养的VSMC增殖与MAPK活性增加有关,胰岛素可影响其活性,并且可能存在胰岛素-PKC-MAPK轴。     

尿本周氏蛋白及转化生长因子β1对肾近端小管上皮细胞增殖的影响

目的:研究多发性骨髓瘤(MM)患者尿本周氏蛋白(BJP)及转化生长因子β₁(TGF-β₁)在体外对肾近端小管上皮细胞(PTC)增殖的影响。方法:将自MM患者尿中提取的λ型BJP和/或TGF-β₁与大鼠NRK.52E株PTC共同培养, 用[H³]TdR掺入研究PTC增殖。并用ELISA法测定BJP与PTC培养上清液中的TGF-β₁含量。结果:①100-800μmol/LBJP以浓度依赖方式抑制PTC增殖, 当浓度≥400μmol/L与对照组比较有显著差异(P＜0.05), 当加入2μg/LTGF-β₁共同培养, 在BJP浓度为400μmol/L时, [H³]TdR掺入低于单用BJP(P＜0.05), 但与单用BJP浓度为800μmol/L无显著差异;②100-800μmol/LBJP与PTC共同培养液中的TGF-β₁含量均增加, 尤以BJP为400μmol/L明显大于对照组(P＜0.05);③外源性0.5-10μg/LTGF-β₁与PTC共同培养, [H³]TdR掺入随TGF-β₁浓度增加而减少。结论:MM患者λ型BJP可抑制PTC的增殖, 其部分机理可能与其促进对PTC增殖也有抑制作用的TGF-β₁过度产生有关。     

Salusins对大鼠离体心脏及心肌细胞的生物学效应的研究

目的:研究新发现的心血管活性肽salusin的心脏及心肌细胞的生物学效应。方法:利用Langendorff装置灌流的成年大鼠离体心脏及原代培养的乳鼠心肌细胞,测定心功能和心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入及[³H]-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量。结果:10^-12-10^-7mol/L salusin-α及salusin-β对成年大鼠离体心脏功能无明显影响;但10^-10-10^-6mol/L salusin-α及salusin-β均呈浓度依赖性地促进心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入及[³H]-Leu掺入,其效应在10^-8mol/L时达峰值;salusin-α及salusin-β对心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入的效应可被钙通道阻断剂尼卡地平(nicardipine)所拮抗,且与内皮素有协同效应。 Salusin-α及salusin-β对心肌细胞[³H]-Leu掺入的效应可被尼卡地平、钙调磷酸酶抑制剂FK506、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)阻断剂PD₉₈₀₅₉及蛋白激酶C(PKC)阻断剂chelerthine chloride等不同程度抑制。Salusin-β对心肌细胞 摄入的效应强于salusin-α,但[³H]-Leu掺入的效应两者之间无显著性差异。结论:Salusin-α及salusin-β对成年大鼠离体心脏功能无直接效应,但能促进乳鼠心肌细胞钙摄入及蛋白合成,其效应可能与钙通道、钙调神经磷酸酶、MAPK和PKC等信号转导途径有关。Salusin可能具有心肌生长、肥大的调节的作用。     

尾加压素Ⅱ通过ERK1/2途径诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和上调Egr-1表达

 目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ（UⅡ）及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径及早期生长反应因子1（Egr-1）在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用。 方法: 以组织贴块法原代培养大鼠PASMCs：(1) 采用BrdU掺入实验测定不同浓度（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01 μmol/L）UⅡ及其受体拮抗剂对大鼠PASMCs 增殖的影响;(2) 采用real-time PCR检测UⅡ及其受体拮抗剂对细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、应激活化蛋白激酶（SAPK）、p38 MAPK及Egr-1 mRNA 表达的影响;(3) 采用Western blotting检测UⅡ、urantide及ERK1/2抑制剂PD98059对PASMCs磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、p-SAPK、p-p38 MAPK和Egr-1蛋白表达的影响。 结果: （1）UⅡ在一定浓度范围（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01　μmol /L）呈浓度依赖性地促进肺动脉平滑肌细胞增殖(P＜0.01或P＜0.05),这种增殖作用可被urantide拮抗(P＜0.05);（2）UⅡ上调ERK1/2、SAPK及Egr-1 mRNA表达(P＜0.01或 P＜0.05),PD98059和(或)urantide可拮抗UⅡ诱导的ERK1/2、SAPK和Egr-1 mRNA的表达(P＜0.01或 P＜0.05),但对p-p38 MAPK无影响;（3）UⅡ可增加PASMCs p-ERK1/2、p-SAPK及Egr-1蛋白表达(P＜0.01或 P＜0.05),urantide及PD98059可拮抗UⅡ诱导的p-ERK1/2、p-SAPK和Egr-1蛋白表达(P＜0.01, P＜0.05)。 结论: UⅡ可能通过ERK1/2途径诱导PASMCs增殖和上调Egr-1表达,Egr-1可能通过激活ERK1/2途径参与了PASMCs的增殖。     

白三烯D4在促进培养的人气管 平滑肌细胞增殖中的作用

目的和方法:研究白三烯D₄(LTD₄)是否剌激培养的人气管平滑肌细胞(ASMC)增殖。将分离的人ASMC进行传代培养,在培养基中加入各种浓度的LTD₄,计数细胞并测定 [³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入量和三磷酸肌醇(IP₃)累积量。结果: LTD₄在一定范围内(0.1 nmoL·L^-1~10 nmoL·L^-1)以浓度依赖的方式增加人ASMC(P＜0.01)。LTD₄也增加[³H]-TdR的掺入量和IP₃累积量(P＜0.01)。磷脂酶C抑制剂新霉素(1 μmol·L^-1)阻止IP₃累积量的增加(P＜0.01)。结论:LTD₄剌激培养的人ASMC增殖并且可能在哮喘的气道重塑中起了作用。     

ADM和ADT对肺动脉平滑肌细胞胶原合成及磷酸化ERK1/2表达的影响

目的: 检测不同浓度的肾上腺髓质素(ADM)和肾上腺加压素(ADT)对培养的Wistar大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)Ⅰ、Ⅲ型胶原合成和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)表达的影响,探讨PASMCs增殖过程中ERK途径是否被激活。方法: 取健康雄性Wistar大鼠,行大鼠远端PASMCs分离并进行原代培养,采用小鼠抗人平滑肌α-actin单克隆抗体对培养细胞进行鉴定;在培养基内分别加入10^-7 mol/L ADM或ADT培养72 h 后加入兔抗大鼠Ⅰ型、Ⅲ型胶原抗体和兔抗大鼠p-ERK1/2抗体,0.01 mol/L PBS作阴性对照,FITC标记山羊抗兔IgG为Ⅱ抗,免疫荧光法观察PASMCs内Ⅰ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达。Western blotting检测10^-7mol/L、10^-8mol/L和10^-9 mol/L ADM或ADT对p-ERK1/2蛋白表达的影响。结果: 经平滑肌α-actin单克隆抗体对培养细胞进行鉴定,其纯度达97%。10^-7 mol/L ADM可抑制PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2的表达(P<0.05,P<0.01);10^-7 mol/L的ADT刺激后大鼠PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2的表达增强(P＜0.05,P<0.01)。Western blotting结果显示ADM可呈剂量依赖性抑制p-ERK1/2蛋白表达(P<0.01,P<0.05);而ADT也可呈剂量依赖性促进p-ERK1/2蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结论: ADM可抑制大鼠PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达,而ADT可促进PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达,提示PASMCs增殖过程中ERK通路被激活,ADM和ADT可能通过ERK1/2信号通路来调节PASMCs增殖。     

大鼠含抗肝纤维化中药的血清对肝星状细胞的作用

目的：观察抗肝纤维化中药复方“肝纤方”(本单位自拟科研方)对体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及其胶原合成的影响, 并探讨中药抗肝纤维化研究中的一些血清药理学实验方法。方法： 以16倍、8倍、4倍成人剂量肝纤方水煎液给大鼠灌胃, 于0.5、1、2、4 h后制备两类血清－门静脉血清和下腔静脉血清, 将之作用于从SD大鼠肝脏分离培养的HSC, 以[³H]TdR和[³H]Pro同位素掺入试验测定其对HSC增殖、胶原合成量的影响。结果：灌胃0.5、1、2 h后制备的门静脉和下腔静脉含药血清均能减少[3H]TdR的掺入量(P<0.05);以16倍和8倍成人剂量灌胃制得含药血清的作用强于4倍者(P＜0.05), 但前二者间无明显差异(P＞0.05);灌胃给药后1h制得的含药血清作用最强(P＜0.05)。门静脉含药血清亦能减少[³H]Pro的掺入量, 情况类似于上述对[3H]TdR的作用(P＜0.05);但下腔静脉含药血清无此作用(P＞0.05)。结论： 肝纤方能抑制HSC增殖、减少其胶原合成, 可能是其抗肝纤维化的一些具体作用。