抗人载脂蛋白CⅡ单克隆抗体细胞系的建立及其特性分析

载脂蛋白CⅡ(Apo CⅡ)是脂蛋白脂肪酶的激活剂,在富含甘油三酯脂蛋白的分解中起关键作用,研究Apo CⅡ的结构、功能及含量变化对探讨高甘油三酯血症和动脉粥样硬化发病机理有重要意义。测定血清中Apo CⅡ含量,需有高效特异的抗体,已报道的Apo CⅡ多克隆抗体,大都效低,灵敏度差。作者应用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了     

抗人载脂蛋白CⅠ、CⅢ单克隆抗体研制及免疫学特性初步分析

载脂蛋白(apo)CⅠ、CⅢ主要分布在富含甘油三酯的脂蛋白中,分子量分别为7kDa和8.5kDa。apo CⅠ是卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的激活剂,而且可能有激活脂蛋白脂酶(LPL)和抑制肝脂肪水解酶的作用。近来研究表明,apo CⅠ可将外周组织的胆固醇(TC)运至肝脏进行降解和排泄过程中以及防止极低密度脂蛋白     

鼠抗人FL单克隆抗体的研制及其生物学特性

目的：研制鼠抗人FL单克隆抗体（mAb）以及对其生物学特性的研究。方法：以人FL基因转染细胞株L929-FL为免疫原，采用B细胞杂交瘤技术，获取分泌抗人FLmAb的杂交瘤细胞株。快速定性试纸法鉴定mAb亚类，体内诱生腹水法制备mAb，免疫亲和层析法纯化mAb，MTT法检测mAb对白血病细胞株U937和HL-60生长的影响，Annexin V／PI染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。结果：建立了3株稳定分泌抗人FLmAb的杂交瘤，命名为3C2、3C6和8D10。快速定性试纸法鉴定3株mAb均属小鼠lgG2a亚类。3株mAb分别识别白血病细胞U937和HL-60上表达的FL分子。将3株mAb分别加入共表达FL／Flt3的U937和HL-60细胞的培养体系中，MTT法检测显示，3C2、3C6和8D10对白血病细胞的生长均具有抑制作用（P〈0．05）。Annexin V／PI染色FCM检测细胞凋亡，3C2和8D10均能增加白血病细胞凋亡的作用。结论：3C2、3C6和8D10是3株功能性抗FLmAb，对于研究FL／Flt3在白血病发生、发展中的作用具有潜在的应用价值。     

抗人血清载脂蛋白AⅡ单克隆抗体的制备及鉴定

载脂蛋白AⅡ(ApoAⅡ)为高密度脂蛋白(HDL)的重要成分之一,多数研究认为与动脉硬化、冠心病呈负相关,也有人认为不相关。这可能与免疫测定所用的特异性较价有关。因此,我们在国内首先制备了ApoⅡA的单抗,以期用于ApoAⅡ的测定和动脉硬化的诊断。     

抗人载脂蛋白E单克隆抗体制备及免疫学特性的研究

应用人血清纯化的ApoE免疫BALB/C小鼠,其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗人ApoE单克隆抗体的杂交瘤细胞株(E6C3,E4C2和E3C3),对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为8×10~(-5)～2×10~(-6),与其它载脂蛋白没有交叉反应,制备免疫亲和层析柱纯化了ApoE,单抗相加试验和双抗体夹心试验证明,两株MeAb识别ApoE的两个不同抗原决定簇,抗体亚型均为IgG_1型。应用ELISA双抗体夹心法测定了人血清ApoE含量。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定

目的:制备抗人DcR3单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性.方法:纯化的His-DcR3融合蛋白免疫小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化,纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价.结果:获得5株稳定分泌抗DcR3 mAb的杂交瘤细胞,均属IgG1亚型,其腹水抗体效价为1×10-5 ～1×10-7,Western blot显示5株细胞分泌的mAb均可识别DcR3蛋白,其中1株(1B1)可与SW480细胞成分反应.结论:成功建立稳定分泌抗人DcR3 mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体特异性强、效价高,为研究DcR3在组织中的表达、分布及研制ELISA试剂盒奠定基础.     

抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。     

抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定

目的制备抗人白细胞单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０细胞常规融合，用间接ＥＬＩＳＡ筛选ｍＡｂ，流式细胞仪及免疫组化染色ＳＰ法鉴定其组织特异性。　结果成功地制备１株抗人白细胞　ｍＡｂ，命名为ＳＺ－１０５。ＥＬＩＳＡ法测定其腹水效价为１×１０－５。琼脂糖双扩散鉴定为ＩｇＧ１类。流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化ＳＰ法测定表明，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应，而与红细胞及血小板不出现反应。该ｍＡｂ还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应。另外，在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面，也有ＳＺ－１０５抗原表达。ＳＺ－１０５抗原经亲和层析纯化，再经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ证实，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５识别的抗原是相对分子质量（Ｍｒ）为７５　０００左右的单链蛋白多肽。结论　获得１株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞ｍＡｂ　ＳＺ－１０５，其对研究白细胞的分化、免疫功能，以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义。     

抗人IgD单克隆抗体的制备及其特性鉴定

本文采用Ultrogel AcA34凝胶过滤,DEAE离子交换及亲和层析法,从骨髓瘤病人血清中分离高纯度的IgG,以此为抗原免疫小鼠,利用常规杂交瘤技术制备了3株分泌抗人IgD单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为ZD2、ZD61和ZD94,此3株杂交瘤细胞分泌的抗体与IgD有特异性反应,而与人其它类别的免疫球蛋白重、轻链无交叉反应,均属IgG1亚类。免疫转印结果显示,均能识别分子量为67kD的IgD重链条带。用ELISA法测定3株抗体分别识别两种不同的抗原决定簇。     

抗人肿瘤碱性蛋白单克隆抗体研制及免疫学特性的初步分析

抗人肿瘤碱性蛋白单克隆抗体研制及免疫学特性的初步分析刘菊林，赵满仓，宋梅，贾艳岩（空军石家庄医院，石家庄０５００８１）肿瘤是严重危害人类生命的主要疾病，早期诊断肿瘤是医学研究的一个重要课题。近年来认为肿瘤碱性蛋白（ＴＢＰ）是人体肿瘤的共同抗原，存在于...     

鼠抗人CD28功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

以天然表达CD28分子的人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞:XG-1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,CD28转基因细胞株(T-28)及XG-1为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和多次的克隆化培养,最终获得1株持续、稳定分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为10F3。对这株单抗生物学功能的研究结果表明,这株抗体能特异性地识别人CD28分子和介导有效的共刺激信号,激发T细胞的活化和增殖。     

抗人IL-11单克隆抗体的研制及生物学特性研究

以rhIL 11作为免疫原常规免疫BALB/c小鼠 ,采用细胞融合、ELISA检测和杂交瘤细胞克隆筛选等方法获得了 2株鼠抗人IL 11的单克隆抗体 (5A4、 1G12 ) ,分别属于IgG1亚类和IgG2a亚类。MTT法和细胞增殖试验分析表明 ,5A4、 1G12均不同程度地抑制IL 11对其依赖株细胞B9 11的增殖效应。表明成功地研制成了 2株鼠抗人IL 11的中和功能性单克隆抗体     

抗人红细胞生成素单克隆抗体的研制

红细胞生成素(EPO)在临床和基础研究中应用广泛。本文用从人尿中提取的EPO免疫动物制备出两株分泌抗EPO单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为HIEPO2和HIEPO11。经鉴定HIEPO2和HIEPO11均能与重组人EPO(rHuEPO)反应,其免疫球蛋白类型均为IgM,用HIEPO2和HIEPO11制备的亲和层析柱纯化人尿中EPO,前者效果优于后者。HIEPO2对EPO的活性有抑制作用,HIEPO11对EPO的活性无影响。     

抗人肺癌单克隆抗体(3D3)的研制及其特性鉴定

本文用人肺腺癌组织免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,获得1株单克隆抗体(McAb 3D3)。Ig类测定为IgG_1型。杂交瘤培养上清液和腹水的效价分别为1∶10~3～10~4和1∶10~6。采用间接免疫荧光法(IFA)观察到McAb3D3主要与肺腺癌细胞株A549和L342反应,与其它组织肿瘤细胞株没有反应。ABC免疫酶染色试验显示McAb3D3主要与肺腺癌组织反应,与正常肺组织没有反应。