黑线仓鼠及其白化突变系肌张力异常蛋白变体X1基因的克隆与序列分析研究

目的将黑线仓鼠及其白化突变系肌张力异常蛋白变体X1基因编码区进行序列比对分析,试揭示黑线仓鼠及其白化突变系肌张力异常蛋白变体X1基因编码区之间是否存在变异。方法根据小鼠与大鼠的同种型肌张力异常蛋白变体X1段基因设计6对引物,采用RT-PCR的方法,从黑线仓鼠及其白化系皮肤中扩增得到cDNA基因,并对其二者进行克隆测序。结果将由RT-PCR方法获得的基因序列进行比对后可知,二者编码区共有17处差异,氨基酸差异共24处,但无关键核酸蛋白出现变异现象。结论黑线仓鼠白化突变系白化性状产生,并不是由肌张力异常蛋白变体X1的这段基因编码区突变造成的,其白化性状产生的机制尚需要进一步的研究。     

旋毛虫感染黑线仓鼠及其白化突变系细胞因子变化比较分析

目的：比较旋毛虫感染黑线仓鼠及其白化突变系后两种动物免疫状态的变化,建立适合感染寄生虫的动物模型。方法用旋毛虫感染黑线仓鼠及其白化突变系后,通过检测血细胞生理值、脾脏 IL-2蛋白浓度和脾脏 IL-6基因表达水平,分析两种动物在感染旋毛虫前后免疫应答水平及免疫调控状态的变化。结果黑线仓鼠在感染旋毛虫后免疫细胞及细胞因子的水平高于白化突变系,反应程度更加剧烈。结论黑线仓鼠是旋毛虫感染的较为适宜的模型动物。     

黑线仓鼠及其白化突变系血液生理生化值的测定与分析

目的 测定黑线仓鼠及其白化突变系的血液生理生化参数,比较两者的差异,为医学实验研究提供参考.方法 用眼球取血的方法采集动物全血,分别制备抗凝血和血清,应用全自动生化分析仪和全自动血细胞分析仪进行测定.用SPSS10.0软件包对测定结果进行分析.结果 测定了黑线仓鼠及其白化突变系的血液生理生化正常值范围,并与其它动物的数据进行了比较.结论 确定了黑线仓鼠与其白化突变系的血液生理生化正常值范围,两者在多项指标上存在差异.而且,黑线仓鼠及其白化突变系的血小板计数均高于小鼠,约高出3倍,这一差异可能有利于两者作为血液凝集实验模型的研究.     

黑线仓鼠及其白化突变系毛囊中黑色素细胞的组织学分析

目的黑线仓鼠白化突变系是一种新的实验动物模型,本研究旨在组织水平上观察黑线仓鼠与白化突变系皮肤组织中黑色素细胞的分布与定位,以揭示黑线仓鼠白化突变系发生的细胞学机制。方法本实验选择黑线仓鼠和白化突变系各6只,取背部皮肤,制备石蜡切片,分别采用多巴染色、多巴-甲苯胺蓝复染,光镜观察、拍照。结果 Dopa染色显示,在黑线仓鼠与白化突变系皮肤组织中均有成熟黑色素细胞的分布,主要存在于毛囊毛乳头中,且黑线仓鼠黑色素阳性区要明显高于白化突变系。结论黑线仓鼠的酪氨酸酶活性要高于白化突变系。     

白化黑线仓鼠的生长发育

观察了白化黑线仓鼠的生长发育过程。初生幼仔无毛、眼闭，生后４ｄ长出绒毛，耳壳脱出，１３ｄ开眼、采食，２０ｄ可独立生活。２个月左右达到性成熟。记录了１４０只白化黑线仓鼠从出生至１００日龄的体重、体长、尾长和足长的增长情况，测定了６月龄白化黑线仓鼠脏器的重量系数，结果均与正常黑线仓鼠相似。     

白化黑线仓鼠的培育研究

在驯育过程中,我们发现了6只黑线仓鼠白化个体,经过三年半人工繁育建立了目前国内外唯一的白化黑线仓鼠种群.原种增殖采取杂合子,白化间互交,以及子代与亲代回交方式,用目睹试配与定期同居的交配方法进行繁殖扩大种群.驯育期间我们观察了动物的性周期、妊娠判断、繁殖力和幼仔的的生长发育.黑线仓鼠(Cricetulu barabensis)俗称中国地鼠是分布于我国北方的小型野生啮齿类.早在本世纪初我国就应用于医学实验。40年代末,斯万德克(Schwentker)将其引到美国,经过几年的研究获得实验室繁殖成功,现已广泛应用于遗传、肿瘤和糖尿病等的研究。目前国内亦有一些单位进行驯育。虽然黑线仓鼠在国外已培育成纯品系、糖尿病品系,但迄今未见有白他黑线仓鼠报道。我们在驯育过程中于1984年4～6月发现一对野生原种杂合子鼠繁育了2胎仔鼠(其中有白化个体6只),经过三年半人工繁育建立了目前国内外唯一的白化黑线仓鼠种群.     

黑线仓鼠及其白化突变系TYR、TYRP1的基因表达水平比较分析

目的本研究旨在研究TYR、TYRP1基因在黑线仓鼠与白化突变系皮肤组织中的表达情况,探索其与白化毛色性状的产生是否具有相关性。方法以黑线仓鼠和白化突变系皮肤组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,分别得到黑线仓鼠与白化突变系TYR和TYRP1基因的相对表达量。结果黑线仓鼠皮肤中的TYR和TYRP1基因的mRNA相对表达量分别是白化突变系皮肤组织中的2.5倍和5.3倍。结论表明黑线仓鼠皮肤中TYR、TYRP1的基因表达水平存在表达差异,白化突变系TYR、TYRP1基因发生表达下调,揭示出了TYR、TYRP1基因的表达量与白化突变系白化性状的产生有关。     

白化黑线仓鼠解剖学与组织学特性的比较研究

白化黑线仓鼠睾丸比同体积小白鼠睾丸显著大,发育正常;颊囊薄,微血管十分清晰;与大、小白鼠不同,该鼠细支气管上皮为假复层柱状上皮,与人类细支气管上皮更为相似;与普通黑线仓鼠相比,该鼠脾脏小,白髓不发达;其眼球体积为小白鼠的2～3倍;无胆囊。     

黑线仓鼠白化突变系的生物学特性与应用

黑线仓鼠白化突变系是我们在驯育野生黑线仓鼠时,对发现的6只该鼠白化突变体,通过6年半人工繁育建成的、目前国内外唯一的黑线仓鼠白化品系。培育过程中我们对其遗传、解剖、生理及生长发育等生物学特性进行了观察,并作了医学生物学的试验应用。遗传研究表明,黑线仓鼠的白化性状属单一隐性遗传,是由位于染色体上一个隐性基因控制的,测定试验结果符合孟德尔分离法则。白化型黑线仓鼠染色体G带核型与正常型黑线仓鼠类相同(2n=22)。     

人hole基因的克隆和序列分析

目的 克隆人的hole基因,并进行生物信息学分析.方法 以胚胎心脏cDNA文库为模板,进行PCR扩增得到hole基因的ORF.并进行亚克隆入PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,用Xho1进行酶切和测序鉴定阳性克隆.利用Internet和GeneBank数据库对测序结果正确的hole基因进行生物信息学分析. 结果克隆了hole基因,测序结果正确;生物信息学分析表明, hole基因开放读码为960 bp,编码319个氨基酸;同源性分析表明,人的hole与鼠、鸡hole蛋白具有高度同源性.多种组织的半定量RT-PCR研究表明,该基因在心脏、肝脏、肺、脑、肾脏、脾脏、胰脏均有表达,其心脏表达最高. 结论成功克隆hole基因,对其功能进行了初步预测,为进一步的功能研究打下基础.     

西藏小型猪MSTN基因分子克隆及序列分析

目的扩增西藏小型猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。方法提取西藏小型猪肝脏组织的RNA,反转录成为c DNA,利用RT-PCR方法扩增MSTN基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD19-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他12种物种构建系统进化树。结果西藏小型猪MSTN基因编码区全长1128bp,编码375个氨基酸,氨基酸序列同源性分析表明,与版纳微型猪MSTN氨基酸序列相似性最高,为99%。结论 MSTN基因西藏小型猪除了与鸡和斑马鱼亲缘关系较远外,与人、犬、版纳微型猪、绵羊、山羊、牛、马、黑猩猩、大鼠、小鼠的关系都较为接近,其中与版纳微型猪的亲缘关系最为接近。     

Uncv无毛小鼠无毛基因的分子克隆及序列分析

目的 探讨Unev无毛小鼠的无毛性状与无毛基因(hairless gene,hr)的相关性.方法 参照Gen-Bank上公布的小鼠的hr序列,设计5对引物,用RT-PCR方法对本单位培育的Unev无毛小鼠hr的编码区序列进行了克隆与分析.结果 获得了Unev无毛小鼠及野生型hr的全部编码区序列(3546 bp).Unev无毛小鼠hr基因与野生型小鼠hr基因的长度及序列完全一致,同源性为100%.与GenBank上发表的国外小鼠hr基因序列(Z32675)相比,同源性为99.7%,共10个碱基发生了突变,其中2个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;和昆明小鼠的hr(AY547391)相比,同源性为99.6%,共12个碱基发生了突变,其中3个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;但这些突变是由种属差异造成的.结论 Uncv无毛小鼠的无毛性状产生与hr基因无关.     

中国地鼠线粒体DNA 16S rRNA基因序列分析及分子系统发育研究?

目的 实验通过克隆分析中国地鼠16S基因的部分序列,对中国地鼠16S基因的结构和功能进行初步探索和揭示。方法 从GeneBank中已报到的啮齿动物16S基因保守区设计一对引物,进行PCR扩增,测序。用Blastn与Genbank中7种啮齿类动物的16S基因进行序列比较,分析其碱基组成及变异情况,并用邻接法(NJ)、非加权组平均法(UPGMA)构建分子系统树,在分子水平上探讨中国地鼠和其它啮齿类动物的进化关系,对中国地鼠的种属地位进行了进一步验证。结果 获得了中国地鼠线粒体16S基因的部分序列;进化树表明,中国地鼠、金黄地鼠与欧洲仓鼠先聚为一支,小鼠与大鼠先聚为一支,东方田鼠、台湾田鼠与东欧田鼠先聚为一支。结论 中国地鼠和金黄地鼠的亲缘关系最近,与传统的分类地位基本吻合。     

DNMT1靶向RNA干扰重组体的构建及序列分析

目的:本研究利用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术,以DNMT1(DNAmethyltransferase 1)为靶基因,设计构建重组体,并进行序列分析,为下一步探索肿瘤基因治疗的新途径打好基础.方法:设计有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pTZU6 1中构建重组体,转化JM109菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析.结果:将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,经测序鉴定确实为所需序列.结论:DNMT1靶向RNA干扰重组体的成功构建和序列分析,可进一步利用克隆所得的小RNA序列干扰DNMT1的mRNA转录,从而达到治疗肿瘤的目的.     

结核分枝杆菌MPT64诊断抗原基因的克隆及生物信息学分析

目的获得结核分枝杆菌MPT64诊断抗原基因,进行DNA测序、序列特性生物学特性分析,为研究结核病诊断抗原侯选基因奠定基础。方法以结核菌标准菌株H37Rv为模板,通过PCR技术扩增出结核分枝杆菌MPT64抗原基因,将其重组到pGEM-T载体后进行序列测定和生物信息学分析。结果成功扩增出结核分枝杆菌MPT64抗原基因,测序表明该片段由699bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为98%,推导编码氨基酸序列同源性为98%。结论经DNA测序证实,扩增出的片段确为MPT64,该片段阅读框完整。