MiR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶耐药性的影响

目的 探讨miR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶药物敏感性的影响。方法采用qRT-PCR检测BEL-7402细胞与BEL-7402/5-FU细胞中miR-195的表达水平。将miR-195质粒载体瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;MTT检测细胞药物敏感性的改变。结果相比于BEL-7402细胞,miR-195在BEL-7402/5-FU细胞中表达水平下调;miR-195转染组的细胞增殖抑制率较miRNA阴性对照组及未转染组明显增高。结论MiR-195能够增加BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性,抑制细胞增殖。     

MicroRNA-122-5p与MicroRNA-199a-5p在EMS患者血清的表达及临床意义

目的 探讨microRNA-122-5p（miR-122-5p）与microRNA-199a-5p（miR-199a-5p）在子宫内膜异位症（EMS）患者血清的表达及临床意义。方法 前瞻性设计,随机选取2016年1月—2017年12月华北石油管理局总医院诊治的EMS患者90例（EMS组）及同期不孕症检查的患者70例（对照组）为研究对象。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）检测两组人群血清的miR-122-5p和miR-199a-5p的表达及白细胞介素-6（IL-6）的表达,并分析其与临床特征的相关性。构建受试者操作特征（ROC）曲线。结果 EMS组患者的血清及腹腔液中IL-6、miR-122-5p、miR-199a-5p的表达与对照组比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,EMS组均增高。miR-122-5p的表达与IL-6水平（r?=0.578,P?<0.05）、miR-199a-5p表达（r?=0.721,P?<0.05）呈正相关。miR-199a-5p的表达与IL-6水平（r?=0.562,P?<0.05）呈正相关。miR-122-5p和miR-199a-5p检测EMS的敏感性分别为94.7%和92.1%,特异性分别为90.5%和88.6%。结论 血清miR-122-5p和miR-199a-5p在EMS患者中的表达增加,miR-122-5p与miR-199a-5p有成为诊断子宫内膜异位症的生物标志物的潜力。     

不同构型人α防御素-5多肽抗HSV-2感染的实验研究

目的探讨不同构型人α防御素-5(HD-5)多肽对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)感染的抑制作用,分析不同构型HD-5抗HSV-2活性的差异。方法 HSV-2病毒感染体外培养的绿猴肾细胞(Vero细胞),分别给予100μg/mL的HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/A肽处理,72h后观察细胞病变效应(CPE),并通过CCK-8法测定细胞保护率;建立HSV-2感染豚鼠生殖器实验动物模型,按照症状评分方法对不同构型HD-5多肽的体内抗HSV-2病毒感染作用进行分析。结果 HD-5/N与HD-5/Acm均能显著抑制HSV-2感染体外培养的Vero细胞(P<0.01),而HD-5/A的抗病毒作用不明显;阴道内给予HD-5/N多肽12.5μg.kg-1.d-1治疗8d能显著改善HSV-2感染豚鼠的生存状况,提高动物30d存活率(P<0.01),外阴感染症状评分显著降低(P<0.01),而HD-5/Acm治疗效果并不明显。结论天然结构HD-5多肽(HD-5/N)在体外或豚鼠阴道内应用均可发挥显著抗HSV-2感染的作用,二硫键缺失会显著影响HD-5多肽的体内抗病毒效果。     

结肠癌组织中补体C5a/C5aR通路活化上调FGL2的表达

目的 探讨补体C5a/C5aR通路在结肠癌发病中对纤维介素蛋白-2凝血酶原酶(fibrinogen-like protein 2,FGI2)的调节机制,明确补体系统在结肠癌发病中的功能和作用.方法 收集2013年12月至2015年7月第三军医大学西南医院普外科、新桥医院消化科15例经病理活检确诊的住院临床结肠癌患者癌及癌旁组织.采用免疫组织化学方法检测结肠癌患者癌及癌旁组织中补体活化片段C5b-9、活化C3及C5aR的表达,佐证补体系统在结肠癌中的活化状态;进一步通过体内外实验(Western blot)验证结肠癌患者癌及癌旁组织MAPK信号通路中P38的磷酸化水平及FGL2的沉积,明确结肠癌发病中补体C5a/C5aR通路与二者的调节关系.结果 免疫组织化学及Western blot实验证实结肠癌患者癌组织C5b-9、活化C3及C5aR的表达明显高于癌旁组织,FGL2的沉积亦显著高于癌旁组织;体外结果提示C5a能促进巨噬细胞系Raw264.7 MAPK通路中P38的磷酸化水平(P =0.0013)及FGL2的产生能力(P =0.0071),加入C5aR阻断剂之后,二者表达随之减弱.结论 C5a/C5aR通路能通过MAPK信号途径中的P38信号完成对FGL2的调节作用进而参与结肠癌的发病进程.     

MiRNA-122对5-氟尿嘧啶诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响

目的探讨微水RNA-122(miR-122)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响。方法构建miR-122和阴性对照质粒瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-8,caspase-9和caspase-3蛋白表达水平。结果仅用miR-122处理BEL-7402/5-FU细胞时,与未转染组和转染对照组比较,miRNA-122转染组细胞凋亡率增加,用10μmol/m L 5-FU作用BEL-7402/5-FU细胞24 h后,与未转染组和转染对照组比较,miR-122转染组细胞凋亡率明显增加;与未转染组和转染对照组比较,转染了miRNA-122的BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达降低,活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达升高。结论 miR-122能够下调BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达,上调活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达,miR-122能促进5-FU诱导的BEL-7402/5-FU细胞凋亡。     

5/6肾切除大鼠残肾细胞凋亡的信号途径研究

目的 研究细胞凋亡及凋亡信号途径在5／6肾切除（SNx）中的作用及机制。方法 复制5／6肾切除大鼠模型．在1、2、4、8、12、16、26和40周，用原位末端标记法、免疫组化、RT-PCR、Western—blot分别检测细胞凋亡、caspase-3,-8,-9的mRNA和蛋白质的水平。结果 模型熏盛幽现肾小球硬化和肾间质纤维化，肾小球、肾小管和肾间质的细胞凋亡数明显高于对照组（P〈0.05，P〈0．01）；caspase-3，-8，-9的mRNA和蛋白质的变化趋势一致，与对照组比较病变过程中呈波浪式上调，高峰分别在4周和40周（P〈0.05），caspase-9的增长幅度明显高于caspase-8。结论 5／6肾切除大鼠的疾病进展与肾小球、肾小管和肾间质的细胞凋亡有关，死亡量体和线粒体信号途径均参与其中．线粒体信号途径起主要作用。     

C5-siRNA沉默补体C5对大鼠心肌缺血损伤影响的病理学研究

目的 探讨小分子干扰RNA片段(siRNA)沉默补体C5表达对大鼠的缺血心肌组织病理学的影响.方法 30只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组),心肌缺血组(Ischemia组)和C5.siRNA干预组.假手术组及心肌缺血组的大鼠冠状动脉左前降支支配区注人生理盐水(100μl/kg),C5-siRNA干预组大鼠冠脉左前降支支配区注入C5-siRNA(100 μl/kg),实验结束后测定鼠的心脏指数和左心室重量指数,光镜下观察鼠心肌形态学改变及C5的免疫组织化学染色结果.结果 缺血4 h后,检测3组之间的心脏指数和左心室重量指数无统计学意义的差别(P>0.05).光镜下见干预组鼠心肌组织水肿、变性较心肌缺血组轻,心肌问质可出现少量红细胞.C5的免疫组织化学结果显示,Ischemia组与干预组的C5表达量均明显高于Sham组(P<0.001),而干预组的C5表达量虽与Isehemia组相比有所降低,但二者没有统计学意义的差别(P=0.132).结论 C5-siRNA减轻心肌缺血的病理学损伤及降低心肌C5表达.     

CK5/6在浸润性乳腺癌中的表达及预后意义

目的 探讨细胞角蛋白(CK5/6)在乳腺癌中的表达以及与临床病理因素、预后之间的关系。方法 174例浸润性乳腺癌患者经手术治疗,临床及病理资料完整,应用免疫组化法检测肿瘤组织中CK5/6及ER、PR、Her-2、Ki-67的表达情况,分析CK5/6与临床病理特征的相关性及预后意义。结果 174例乳腺癌患者年龄27~85岁,平均年龄52.84±12.62岁,中位年龄52岁,体重指数(BMI)为16.3~37.58kg/m²,平均BMI为24.03±4.01kg/m²。CK5/6 阳性表达者47例(27.01%),阴性表达者127例(72.99%)。CK5/6的表达与患者的年龄、肿瘤直径、腋窝淋巴结有无转移、家族史、病理类型无明显关系 (P>0.05),而与乳腺癌的组织学分级、ER、PR、Ki-67、EGFR有关 (P=0.000)。三阴性、Her-2阳性型、Luminal型浸润性乳腺癌中CK5/6阳性表达率为78.37%、45.00%和7.69%,各组间比较差异有统计学意义(P=0.000)。Logistic回归分析显示,高组织学分级、EGFR阳性、ER阴性是影响CK5/6表达的独立危险因素(P<0.05)。K-M生存分析及Log-Rank检验显示,CK5/6对浸润性乳腺癌患者无转移生存率(FDM)的影响比较,差异有统计学意义(P=0.020),对总生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌肝转移者CK5/6阳性表达为0,骨转移者CK5/6阳性表达率100%,其他转移灶CK5/6阳性表达率为42.86%,组间比较差异有统计学意义(P=0.050)。结论 CK5/6作为分子标志物具有较好的预后预测价值,临床在对乳腺癌进行分子分型的同时可常规检测 CK5/6 表达并评估预后。     

抗PLC/PRF/5肝癌细胞单克隆抗体及其部分特性研究

本文采用杂交瘤技术获得了3株分泌抗PLC/PRF/5细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,经间接ELISA和间接免疫荧光法检测证实,所分泌的抗体为抗PLC/PRF/5肝癌细胞的单抗,具有较好的细胞特异性。3株中2株属IgG_1亚美,1林分泌IgG_2a亚类抗体。     

TBX5 基因靶序列单核苷酸多态性 与先天性心脏病的关系

目的 探讨TBX5 基因3'' 非翻译区靶序列SNPs 与先天性心脏病（CHD）遗传易感性的关系, 为CHD 的分子机制研究提供线索。方法 利用HaploView 软件筛选TBX5 基因3'' 非翻译区功能性单核苷酸 多态性（SNP）,并应用高分辨率熔解曲线检测TBX5 基因3'' 非翻译区SNP。采用病例对照研究分析SNP 位 点与CHD 的关联。结果 HaploView 软件筛选出TBX5 基因3'' 非翻译区有意义的标签SNP rs883079,高分 辨率熔解曲线法成功检测该SNP位点（rs883079）的G/G、G/A及A/A 3种基因型。TBX5 基因rs883079（ G>A） 位点等位基因或基因型分布频率比较,差异有统计学意义（P <0.05）;与CHD 易感性关联,A 是CHD 的危 险等位基因,A/A 为CHD 的危险基因型（P <0.05）。结论 TBX5 基因rs883079 位点SNP 与CHD 有关系, rs883079（G>A）携带突变纯合子基因型A/A 个体患CHD 的危险性升高。     

脂溶性HHRT与水溶性MMC、5-Fu对人Tenon's囊成纤维细胞抑制作用的研究

目的比较脂溶性高杉尖三酯碱(HHRT)与水溶新丝裂霉素C(MMC)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)三种药物对人Tenon's囊成纤维细胞(HTFs)增殖率的抑制情况。方法采用冻存的人眼Tenon's囊成纤维细胞,常规复苏体外培养稳定后,接种于96孔板,分别加入不同浓度HHRT、MMC及5-Fu,继续培养;采用MTT法于加药后24h、48 h、72 h检测不同浓度HHRT、MMC及5-Fu对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞增值率的抑制情况。结果一定浓度的HHRT、MMC及5-Fu,对HTFs的抑制作用呈现不同的剂量和时间依赖性,在药物浓度达到相应程度作用72 h后三者对HTFs的最大抑制率均可达70%以上,且组间对比差异有统计学意义。结论三种药物均对人眼Tenon's囊成纤维细胞增殖具有明显抑制作用,其最大抑制率均可达70%以上,三种药物对成纤维细胞抗增殖效应的时间浓度依赖性有所差别。     

奥沙利铂联合5-Fu/CF治疗晚期大肠癌临床观察

目的:观察应用奥沙利铂联合治疗晚期大肠癌的近期疗效及毒副反应。方法:72例晚期大肠癌随机分为两组,一组为治疗组,奥沙利铂联合5-Fu/CF;另一组为对照组5-Fu/CF。结果:治疗组有效率52.8%,对照组有效率30.6%,有显著性差异(P<0.05)。毒副反应主要是恶心、呕吐、贫血和感觉神经毒性,对白细胞和血小板影响较小。结论:奥沙利铂联合5-Fu/CF,治疗晚期大肠癌有效而安全。     

组蛋白去甲基化酶KDM5C在疾病中的功能研究

赖氨酸去甲基化酶5C(lysine demethylase 5C, KDM5C)可以催化组蛋白H3上第4位赖氨酸残基二甲基和三甲基(histone H3 lysine 4 di-/trimethylation, H3K4me2/3)去甲基化为H3K4me1。KDM5C主要在人的大脑和骨骼肌中表达,其编码的蛋白质参与各种生物学效应。KDM5C与X连锁智力迟钝有关,在神经系统疾病中发挥重要作用;KDM5C在肿瘤中是一把双刃剑,具有促癌和抑癌的特性。KDM5C在前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、膀胱癌、肝细胞癌、食管癌、鼻咽癌、胃癌、肺癌和弥漫性大B细胞淋巴瘤中过表达并促进肿瘤生长,在肝内胆管癌、子宫颈癌、套细胞淋巴瘤和甲状腺乳头状癌中低表达,在肾透明细胞癌和前体B细胞急性淋巴细胞白血病中易失活突变,并与不良预后相关,在乳腺癌中发挥双重作用。本文就KDM5C在疾病中的功能研究做一简述。     

建立H5N1流感病毒感染雪貂动物模型

目的建立甲型H5N1流感病毒感染雪貂动物模型[1-3]。方法 H5N1流感病毒株A/Vietnam/1203/2004病毒以103和104 TCID50滴度分别感染雪貂。对4～10月龄去势雪貂经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死。感染后每天记录雪貂一般临床变化。感染前0 d采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量和病毒滴度。处死时取雪貂气管、肺、心、肝、脾、肾、小肠、脑组织作病毒滴度检测和病理检查。结果 H5N1103和104 TCID50的病毒分别感染雪貂,雪貂死亡都率在33%。103TCID50和104 TCID50病毒分别感染雪貂,动物都出现持续3 d体温升高,104 TCID50组出现超过20%的体重下降。上呼吸道排毒呈现上升趋势,并可在除呼吸系统以外的组织器官中分离到病毒。感染的雪貂病理表现为重度肺炎。结论雪貂感染H5N1病毒株后在临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H5N1病毒动物模型已建立,104 TCID50病毒滴度是一个建立感染动物模型比较合适的剂量。     

艾迪注射液联合5-Fu／CF治疗大肠癌的临床观察

自2005年2月至今，笔者应用艾迪注射液联合5-Fu／CF方案对19例大肠癌患者进行治疗。并与应用5-Fu／CF方案治疗的16例大肠癌患者进行比较，2种方法有效率分别为52．6％、12．5％，经统计学分析比较，二者有显著性差异（P〈0．05），且2组患者均未见严重毒副作用发生。因此，认为艾迪注射液联合5-Fu／CF方案治疗大肠癌近期疗效好，值得临床进一步研究。     

大鼠5／6肾切除慢性肾衰竭模型的制作

目的：制作大鼠5／6肾切除建立慢性肾衰竭模型。方法：大鼠5／6大部分肾切除诱发慢性肾衰竭,测定血清中肌酐、尿素氮的含量,取肾组织进行Masson染色,评价模型的制作效果。结果：5／6肾切除后大鼠血清中尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、血肌酐（se-rum creatinine,SCR）的含量明显增高,肾脏病理 Masson 染色组织学检查发现肾小球节段性硬化、肾小管萎缩、肾间质节段性纤维化。结论：成功建立大鼠5／6肾切除慢性肾衰竭模型,血液生化指标及形态学符合肾衰竭病理生理特点。     

C5a/C5aR通路在硕大利什曼原虫易感小鼠免疫病理发生中的作用及其机制

目的研究C5a/C5aR通路在对硕大利什曼原虫(Leishmania major,L.major)易感的BALB/c小鼠免疫病理发生中的作用及机制探讨。方法以C5aR KO小鼠(BALB/c背景)为模型,观察比较了WT和C5aR KO的BALB/c小鼠在L.major感染后的病变情况,有限稀释法检测了各组感染小鼠体内寄生虫的负荷,并进一步通过FACS检测了相关细胞因子如IL-17和IL-4的产生,来探讨C5a/C5aR通路在L.major易感型BALB/c小鼠免疫病理发生中的作用机制。结果相比WT小鼠,C5aRKO小鼠感染L.major后的病变程度明显减轻(P<0.05),体内寄生虫负荷也显著降低(6.952±0.398vs 4.340±0.434,P<0.01);同时,FACS胞内染色结果表明CD4+IL-4+T细胞亚群百分比显著降低(0.960 0±0.148 3 vs0.314 0±0.042 6,P<0.01),但CD3+IL-17+T细胞亚群的百分比在两组之间无显著差异(0.792 0±0.051 3 vs 0.858 0±0.084 5,P=0.522 3)。结论 C5a/C5aR通路通过调节Th2细胞关键细胞因子IL-4的产生,在L.major易感小鼠的免疫病理发生中发挥作用。     

黄精煎剂中5-羟甲基糠醛的含量测定

【目的】通过对11批黄精煎剂中5-羟甲基糠醛含量的考察,为黄精的物质基础与质量控制研究奠定基础。【方法】采用煎煮法获得供试品溶液,高效液相色谱(HPLC)法测定其含量。色谱条件:HypersilODS2色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),甲醇—体积分数0.05%磷酸溶液(体积比为10:90)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为280nm。【结果】11批黄精煎剂中5-羟甲基糠醛含量的差别达30倍,在0.0200～2.0000μg(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均回收率为100.3%(sR=1.9%,N=6)。【结论】该方法简便、结果准确,为黄精物质基础研究与质量控制提供了一定参考。     

C5a/C5aR通路对约氏疟原虫增殖和小鼠生存的影响

目的观察C5a/C5aR通路对约氏疟原虫17XL(P.y17XL)的增殖及其对BALB/c小鼠致死率的影响。结论将实验小鼠分为正常BALB/c组和C5aR-/-BALB/c组,每组5只,相同剂量的P.y17XL(2×105)分别感染正常BALB/c组小鼠和C5aR-/-BALB/c组小鼠,于感染后0、2、4和6d观察两组小鼠原虫血症和存活率的变化,并且采用ELISA检测感染P.y17XLBALB/c小鼠血清中C5a的水平。结果与正常组小鼠相比,C5aR-/-组小鼠生存期缩短,P.y17XL在C5aR-/-组小鼠的原虫血症较野生株小鼠高(P<0.05),而P.y17XL感染小鼠的血清中C5a含量低于未感染的小鼠。结论 C5a/C5aR能够抑制P.y17XL的增殖,并能延长感染小鼠的生存期。