环状RNA在系统性红斑狼疮中的研究新进展

环状RNA(circRNA)是一种新近发现和被认知的非编码RNA,在多种疾病中具有生物标志物作用和生物学功能.目前环状RNA在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的研究有了较大的进展,提示环状RNA有可能成为SLE患者诊断及治疗上有意义的生物标志物,本文基于较新的研究报道,...     

环状RNA hsa_circ_0006689在系统性红斑狼疮中的分子机制的初步研究

目的:研究环状RNA hsa_circ_0006689在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达并初步分析其分子机制.方法:选取广西医科大学第一附属医院皮肤性病科2019年3月至2020年9月收治的SLE患者30例(观察组)和健康志愿者34例(对照组),采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测h...     

RNA测序探讨COPD患者外周血单个核细胞环状RNA表达差异

目的:通过RNA测序技术检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)差异环状RNA并阐述其可能的功能与调控机制.方法:分别采集5例COPD患者与5名正常人外周血,分离单个核细胞,进行去线性化得到环状RNA,并建库测序,以变化倍数Foldchange绝对值≥2且P<0.05统计分析差异环状RNA,并通过来源基因功能与信号通路聚类分析...     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞双向电泳分析

目的 分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞蛋白质表达谱的变化.方法 分别抽取系统性红斑狼疮患者及健康对照者外周血,分离单个核细胞,抽提总蛋白,进行双向电泳,电泳胶银染显色,用ImageMasterTM 2D Platinum 5.0软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质.结果 对照组凝胶蛋白点匹配率为(71±4)%,SLE组匹配率为(72±4)%.对照组凝胶共检出蛋白点(791±17)个,SLE组检出(781±17)个.有11个蛋白点在SLE患者组表达上调,9个表达下调.结论 SLE患者外周血单个核细胞蛋白质表达发生了明显改变,为从淋巴细胞蛋白质谱变化的整体角度上阐明SLE发生的分子机制及免疫调控通路奠定了基础.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中微小RNA-146a的表达

目的 采用生物信息学和分子生物学技术相结合,寻找在系统性红斑狼疮(SLE)中特异性表达的微小RNA,为进一步研究微小RNA在SLE发病机制中的作用打下基础.方法 查找与SLE发病相关的基因,采用微小RNA靶基因预测数据库预测SLE相关基因上的可能微小RNA靶位点,选择其相对应的微小RNA-146a,即hsa-miR-146a,采用实时荧光定量PER方法检测SLE患者与正常人外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA的表达差异.结果 SLE患者外周血PBMCs中hsa-miR-146a的循环阈值的差值高于正常对照组(4.52±1.18比2.76±1.38,P=0.02),hsa-miR-146a的表达量显著低于正常对照组.结论 SLE患者PBMCs中hsa-miR-146a的表达水平降低,表明hsa-miR-146a在SLE发病机制中可能发挥一定的作用.     

Graves病患者外周血单个核细胞中环状RNA表达谱分析

目的： 探讨Graves病患者外周血单个核细胞（PBMCs）中环状RNA（circRNA）的表达谱及其潜在的诊断价值。方法： 选取5例Graves病患者和5例健康对照者,采用二代高通量测序技术分析PBMCs中circRNA表达谱。另选取40例Graves病患者和40例健康对照者验证差异表达的circRNA;根据CircInteractome数据库预测可能与差异表达的circRNA相结合的微小RNA（miRNA）;运用生物信息学分析差异表达的circRNA潜在的生物学功能;ROC 曲线分析差异表达的circRNA对Graves病的诊断价值。结果： 二代高通量测序数据显示,与健康对照相比,Graves病患者PBMCs中circRNA有23 215个表达上调,13 695个表达下调,其中显著差异表达（差异倍数≥2, P≤0.05）的有669个,包括360个上调和309个下调的circRNA。实时荧光定量PCR验证显示hsa_circ_0114427、hsa_circ_0007470、hsa_circ_0048232、hsa_circ_0002672表达水平与高通量测序结果一致,且两组间差异具有统计学意义（P<0.01和P<0.05）,hsa_circ_0039161和hsa_circ_0002600表达两组间无明显差异。GO富集分析显示,上调的circRNA与高分子代谢、细胞内膜结合细胞器、转移酶激活等过程关系密切。KEGG分析显示,差异表达的circRNA可能参与甲状腺激素信号、磷脂酰肌醇信号系统、非小细胞肺癌等相关信号通路。ROC曲线显示hsa_circ_0114427具有较大的曲线下面积。结论： Graves病患者PBMCs中存在明确差异表达的circRNA,hsa_circ_0114427可能与Graves病的发生发展有关。     

miR-203在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中miR-203的表达水平与疾病活动度?肾脏受累情况等临床表现之间的关系,初步探讨miR-203在SLE中的临床意义?方法:收集31例SLE患者?16例健康志愿者外周血标本,根据肾脏受累分为狼疮肾炎21例和SLE无肾脏受累10例?采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quota polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中miR-203表达,比较各组间miR-203表达水平的差异,并分析其与SLE临床指标之间的关系?结果:SLE患者miR-203表达明显低于正常对照组,差异具有统计学意义(P < 0.05);狼疮肾炎组患者miR-203表达低于SLE无肾脏受累组和正常对照组,差异具有统计学意义(P < 0.01);SLE患者miR-203表达水平与24 h尿蛋白?肾脏急性指数呈明显负相关(P < 0.01)?结论:SLE患者PBMCs中miR-203的表达水平降低,表明miR-203在SLE发病机制中可能发挥一定作用;狼疮肾炎患者miR-203的表达降低,提示miR-203可能参与了狼疮肾炎的发病?     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TNIP1基因表达

目的 探讨TNIP1 基因在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中的表达情况,以及与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、单核苷酸多态性(SNP)位点rs10036748的相关性.方法 收集61例SLE患者和66例正常对照的临床资料及血样,采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞中TNIP1 mRNA表达量;应用Sequenom MassArray技术对所有病例对照SNP rs10036748位点进行基因分型.结果 SLE患者TNIP1基因 mRNA表达低于正常对照组(P=0.000 4);TNIP1基因 mRNA表达水平与SLEDAI和SNP rs10036748基因型之间无相关性.结论 TNIP1基因在SLE发生中可能起着某种作用.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞单链DNA表达研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中单链DNA(ssDNA)表达情况.方法 流式细胞术检测26例SLE患者(SLE组)外周血ssDNA表达阳性的PBMC细胞百分比(ssDNA阳性率),设立正常对照组(n=17)和其他结缔组织病(CTD)对照组(n=7).结果 SLE组、正常对照组和CTD对照组外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为(0.906±0.838)%、(0.216±0.371)%和(0.270±0.311)%.统计学分析表明,SLE组患者外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率显著高于两对照组(P<0.01, P<0.05);SLE组内有与无狼疮肾炎患者的外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为(1.228±0.259)%和(0.510±0.436)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 SLE和狼疮肾炎的发生和发展可能与患者外周血表达ssDNA的B淋巴细胞异常增多有关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞单链DNA表达研究

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中单链DNA（ssDNA）表达情况。方法流式细胞术检测26例SLE患者（SLE组）外周血ssDNA表达阳性的PBMC细胞百分比（ssDNA阳性率）,设立正常对照组（n=17）和其他结缔组织病（CTD）对照组（n=7）。结果 SLE组、正常对照组和CTD对照组外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为（0.906±0.838）%、（0.216±0.371）%和（0.270±0.311）%。统计学分析表明,SLE组患者外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率显著高于两对照组（P〈0.01,P〈0.05）;SLE组内有与无狼疮肾炎患者的外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为（1.228±0.259）%和（0.510±0.436）%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SLE和狼疮肾炎的发生和发展可能与患者外周血表达ssDNA的B淋巴细胞异常增多有关。     

热休克蛋白90在系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中的表达

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法使用免疫组化SP法和细胞原位杂交技术检测45例SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)中HSP90蛋白、HSP90mRNA的表达情况,另取15例健康血样进行正常对照。结果45例SLE患者PBMC中HSP90蛋白阳性表达17例(37.78%),15例正常对照组中未见明显阳性细胞。半定量分析SLE活动组PBMC中HSP90蛋白表达的平均吸光度(A)值为(0.412±0.230),显著高于正常对照组(0.117±0.033)和SLE非活动组(0.187±0.019)(均P<0.01);SLE非活动组也显著高于正常对照组(P<0.05)。45例SLE患者中HSP90mRNA阳性表达20例(44.44%),15例正常对照组中未见阳性细胞。半定量分析SLE活动组PBMC中HSP90mRNA表达的平均A值为(0.350±0.225),显著高于正常对照组(0.114±0.009,P<0.01)和SLE非活动组(0.221±0.040,P<0.05);SLE非活动组与正常对照组比较也显著升高(P<0.05)。SLE中抗心磷脂抗体阳性患者HSP90水平明显高于阴性患者。结论SLE患者中存在HSP90的过度表达,且在抗心磷脂抗体阳性的患者中尤其明显,并与疾病的活动性相关。提示HSP90可能在SLE的发病机制中起着重要作用。     

B细胞刺激因子在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞上的表达及意义

目的 探讨B细胞刺激因子(Blys)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞上的表达情况及临床意义.方法 应用流式细胞仪技术,检测50例SLE患者(其中活动期和稳定期各25例)外周血单个核细胞上Blys的表达,与25例健康献血人员作比较.并分析SLE患者外周血单个核细胞上Blys的表达与病情活动、其他实验指标及自身抗体的关系.结果 SLE患者外周血单个核细胞上表达Blys的百分率上调(P＜0.001),活动期和稳定期SLE患者Blys的表达率均高于健康对照组(P＜0.001和P＜0.05);其中,活动期和稳定期SLE患者比较,活动期患者Blys的表达更高(P＜0.05).SLE患者外周血单个核细胞上Blys的表达水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.702,P＜0.001),与免疫球蛋白IgG、IgM呈正相关(r=0.695,P＜0.001和r=0.356,P＜0.01),与补体C3、C4呈负相关(r=-0.42,P＜0.001和r=-0.31,P＜0.05).dsDNA抗体( )组患者外周血单个核细胞上Blys的表达较dsDNA抗体(-)组高(P＜0.05).Clq抗体( )组患者外周血单个核细胞上Blys的表达也较C1q抗体(-)组高(P＜0.05).结论 Blys在SLE外周血单个核细胞上的表达率升高.Blys的表达在一定程度上反映了病情的活动,并与自身抗体的产生相关.     

miR-29a在系统性红斑狼疮患者血浆中的表达及意义

目的 分析microRNA-29a（miR-29a）在系统性红斑狼疮（SLE）患者血浆中的表达水平及与SLE临床特征的相关性。方法建立检测miR-29a的实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法,分析48例SLE患者和20例健康体检者血浆中miR-29a的表达水平,ROC曲线评估其作为SLE诊断标记物的意义,统计分析其表达与SLE患者临床特征的相关性。结果与健康体检者比较,SLE患者血浆miR-29a表达水平明显上调（Z=3.476,P=0.0009）;血清miR-29a诊断SLE的ROCAUC为0.794（95%CI:0.689~0.898）,具较好诊断SLE的效能;抗β2GP1抗体＞20RU/ml患者的血浆miR-29a水平明显升高（P=0.033）,Pearson相关分析显示,SLE患者血浆miR-29a表达水平与抗β2GP1抗体水平呈正相关（r=0.584,P=0.001）,而与不同SLEDAI评分及其他SLE活动相关指标等差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论miR-29a在SLE患者血浆中的表达水平明显上调,且血浆miR-29a上调与SLE患者自身抗体水平相关,其调节机制尚待进一步的研究。     

增殖诱导配体mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的 检测增殖诱导配体（APRIL）mRNA在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达水平，探讨APRIL在SLE发病中的意义。方法 采用半定量RT-PCR法检测36例SLE患者及17例正常人PBMC的APRILmRNA表达，并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）进行相关性分析。结果 SLE患者活动期组和非活动期组APRIL mRNA表达水平均明显高于正常对照组（P〈0．05或P〈0．01），活动期组较非活动期组增高更明显（P〈0．01）；SLE患者APRILmRNA表达水平与SLEDAI评分呈正相关（r=0．6725，P〈0．01）。结论 SLE患者APRILmRNA表达水平的增高，可能在SLE的发病机制中具有重要作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中PDCD5 mRNA的表达及意义

目的 通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡相关基因程序化细胞死亡因子5(PDCD5)mRNA 表达变化,从而探讨PDCD5基因与SLE发生与发展的关系.方法 应用逆转录PCR(RT-PCR)半定量检测67例SLE患者和50例健康者PBMC中PDCD5 mRNA的表达.结果 SLE活动期患者PDCD5 mRNA 阳性表达率明显高于健康者(P＝0.00);SLE活动期患者PDCD5 mRNA表达水平明显高于稳定期患者和健康者(P<0.01),稳定期患者PDCD5 mRNA比健康者也明显升高(P<0.01).SLE活动期患者PBMC中PDCD5的表达与反应SLE疾病活动的指标如SLEDAI、补体C3、抗ds-DNA抗体等呈显著相关(P<0.05).狼疮性肾炎患者和非狼疮性肾炎患者PDCD5表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 SLE患者PBMC中PDCD5表达上调,且与SLE疾病活动相关,提示PDCD5通过增加表达量而导致异常淋巴细胞凋亡,参与SLE的发生、发展.     

PDCD5与Bcl-2在系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中的表达

①目的研究凋亡相关基因PDCD5和Bcl-2在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达及意义。②方法应用逆转录PCR检测67例SLE患者和50例健康对照的PBMC中PDCD5和Bcl-2 mRNA的表达。③结果 SLE患者PDCD5mRNA的阳性表达率和表达水平显著高于正常对照（P〈0.05）;SLE患者Bcl-2 mRNA的阳性表达率和表达水平显著低于正常对照（P〈0.05）;PDCD5和Bcl-2 mRNA的表达水平呈显著负相关（P〈0.05）。④结论 SLE患者PBMC中PDCD5表达上调和Bcl-2表达下调,提示凋亡相关基因可能导致异常的淋巴细胞凋亡参与SLE发病。     

系统性红斑狼疮患者单个核细胞（PBMC）中ITGAL的表达及意义

目的 探讨ITGAL基因在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中的表达及其意义.方法 分离SLE患者及正常人群PBMC,采用Qiagen RNA/DNA mini kit提取RNA,实时-定量PCR检测ITGAL mRNA的表达,对SLE患者的ITGAL表达与红斑狼疮疾病活动指数（采用SLEDAI评分）进行相关分析.结果 活动性SLE患者中ITGAL mRNA表达较正常对照组明显升高,两组比较有统计学意义（P〈0.001）,与SLEDAI评分呈正相关（r=0.376,P〈0.05）.结论 活动性SLE患者PBMC的ITGAL mRNA表达明显上升,其变化与疾病活动程度呈正相关,ITGAL表达可能与SLE发病有关.     

RNA干扰技术在治疗系统性红斑狼疮中的应用

系统性红斑狼疮是典型的自身免疫性疾病,免疫系统的多种要素均可能成为狼疮治疗的靶点。RNA干扰是一种序列特异的转录后基因沉默,是一项新兴的基因阻断技术,其作用相当于基因剔除,导致相应基因的表型缺失。同治疗肿瘤一样,对免疫系统疾病的治疗也在不断寻找新的方法,可以避免传统药物治疗的不良反应,更精确地直达治疗靶点,最大程度地保护健康的细胞或组织。小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）成为治疗系统性红斑狼疮的新方法、新靶点,在免疫系统疾病的诊断治疗中,siRNA具有广阔的应用前景。