三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移的比较研究

目的采用活体成像技术比较三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移情况,为研究肿瘤转移提供理想的动物模型以及活体分析方法。方法以荧光素酶(luciferase,Luc)作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1、66c14和4TO7中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆并扩大培养。标记细胞稀释成1×107cells/mL,取0.1 mL进行乳腺原位及尾静脉接种BALB/c小鼠,制作小鼠乳腺原位和尾静脉移植瘤模型,比较三株细胞在小鼠体内生长及转移情况。结果获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆,将Luc标记的4T1、66c14、4TO7细胞对BALB/c小鼠乳腺原位接种后7 d,均有肿瘤生长,接种后28 d,4T1细胞乳腺原位移植瘤最大,66c14细胞瘤体次之,4TO7细胞瘤体最小;接种后35 d,三株细胞乳腺原位移植瘤大小较一致,但4T1和66c14原位移植瘤均发生转移,其中4T1细胞较66c14细胞转移严重,而4TO7细胞未见转移;接种后42 d,三株细胞乳腺原位移植瘤大小无明显差别,而4T1和66c14细胞随天数的增加,移植瘤转移程度逐渐严重,4T1较66c14细胞转移更严重,呈广泛性转移,4TO7细胞仍未见转移。将Luc标记的4T1、66c14、4TO7细胞对BALB/c小鼠尾静脉接种后7 d,小动物活体成像发现小鼠肺部均能检测到荧光,其中4T1细胞接种的小鼠肺部荧光信号最强,且小鼠陆续死亡;4TO7细胞接种小鼠肺部荧光信号次之;66c14细胞接种小鼠肺部荧光信号最弱。尾静脉接种后14 d,4TO7和66c14细胞随着观察天数的增加,转移程度逐渐严重,4TO7细胞接种小鼠肺部荧光信号较66c14细胞强且小鼠陆续死亡。结论乳腺原位自发转移模型较尾静脉转移模型更真实反应了肿瘤细胞在体的转移特性,且能完整地呈现肿瘤转移的全过程,可作为研究肿瘤转移的最理想模型。     

小鼠乳腺癌细胞4T1对不同品系小鼠乳腺癌模型的影响

目的:将小鼠乳腺癌细胞4T1接种到两种不同品系的小鼠脂肪垫,观察植瘤小鼠的生物学状态、成瘤大小、转移情况以及生存周期等指标,为建立不同品系小鼠的乳腺癌模型提供参考。方法:将小鼠乳腺癌细胞4T1胰酶消化去除上清,用PBS洗两遍,最后用生理盐水调整细胞数量为1×106个,分别接种到裸鼠和BABL/c小鼠的脂肪垫。比较各组老鼠的成瘤率、成瘤时间以及生存期等实验指标。结果:原位注射1×106个4T1细胞时两组均能成瘤,但是裸鼠的成瘤率高于BABL/c小鼠;裸鼠的成瘤大小明显大于BABL/c小鼠;裸鼠的生存期明显短于BABL/c小鼠;裸鼠出现肺转移结节明显多于BABL/c小鼠。结论:不同免疫能力的小鼠对接种相同数量的细胞数可能会产生不同的实验结果,在选择构建小鼠乳腺癌模型的时候一定要综合考虑所选用品系的小鼠是否会对实验结果带来影响。     

抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌影响的研究

乳腺癌是危害妇女身心健康的重大疾病,目前越来越多的肿瘤医家们将目光投向了多靶向性、毒副作用低且价格低廉的抗肿瘤中药的研发。中医认为,乳腺肿瘤属“乳岩”、“乳石痈”等范畴,主要由正气亏虚、脏腑阴阳失调引发。《医宗金鉴》云:“乳癌由肝脾两伤,气郁凝结而成”。湖南中医药大学附属第一医院肿瘤科结合临床乳岩处方经验,研制出了抗癌防移片这一效验方,该方由红参、黄芪、半枝莲、重楼、姜黄、莪术等16味中药组成。综观全方,诸药大都归于肝、脾二经,使得湿热瘀毒得清,先天、后天之本得固,标本同治,符合肿瘤的治疗原则,临床上用于控制乳腺癌术后复发与转移,获得了可喜的疗效。【目的】 观察抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌的影响。 【方法】 通过建立4T1乳腺癌小鼠模型,动态观察给药期间小鼠生活状况。经过小鼠体质量增加百分数、测量剥离瘤体积、计算瘤体积抑制率以及计数肺转移瘤灶个数的测定来观察抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌的影响。 【结果】 抗癌防移片组接种部位肿瘤体积较模型组显著缩小,乳腺癌肺转移瘤结节数较模型组也明显减少,同时与模型组比较,抗癌防移片组小鼠生活质量改善,体质量明显增加(6.58% vs 2.89%),差异均有统计学意义。 【结论】 抗癌防移片能抑制4T1小鼠乳腺癌生长与转移,改善小鼠生存质量。鉴于实验得出的数据,我们进行了分析讨论。实验结果证实了该复方既有抑制4T1小鼠乳腺癌生长与向肺部转移的作用,同时也能一定程度上增加小鼠体质量,改善小鼠生存质量,为抗癌防移片用于临床乳腺癌的治疗提供了依据。     

抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌影响的研究

目的观察抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌的影响。方法建立4T1乳腺癌小鼠模型．随机分为空白对照组、模型组、环磷酰胺组和抗癌防移片组,分别给予药物或生理盐水,动态观察给药期间小鼠生活状况。给药4周后处死小鼠,测定小鼠体质量增加百分数,测量剥离瘤体积,计算瘤体积抑制率以及计数肺转移瘤灶个数。结果与模型组比较,抗癌防移片组小鼠肿瘤生长缓慢,肺转移瘤灶数量明显减少（P〈0．05）;与环磷酰胺组比较,抗癌防移片组药物毒副作用小（P〈0．05）,生活质量高,但其抑瘤防转移作用不及环磷酰胺（P〈0．05）。结论抗癌防移片能抑制4T1小鼠乳腺癌生长与转移,改善小鼠生存质量。     

黄芪注射液对小鼠Lewis肺癌细胞生长与转移的影响

黄芪属于补益类中药 ,近年来常用于肿瘤治疗 ,其抑制肿瘤的主要机制人们认为是它对细胞免疫及体液免疫有增强和调节作用 [1 ,2 ]。然而也有报道认为黄芪有免疫双向调节作用 [3] ,故而不同浓度的黄芪对肿瘤的生长和转移可能存在不同的作用 ,黄芪在肿瘤治疗的临床应用上带来疑问。本实验观察了不同浓度的黄芪注射液对肿瘤生长与转移的作用 ,以期为临床用药提供实验依据。1　材料和方法1.1　材料　黄芪注射液 ,购自成都地奥九泓制药厂 (批号 :990 30 78) ,10 m l/支 ,相当于生药 2 0 g;环磷酰胺 (CTX)粉针剂 ,0 .2 g/支 ,购自上海华联制药集…     

活体生物发光示踪术观察中国被毛孢抑制小鼠4T1-luc乳腺癌肺转移作用

[目的]利用活体生物发光成像技术,探讨中国被毛孢菌丝体对小鼠乳腺癌肺转移的影响。[方法]4T1-luc乳腺癌细胞原位接种于50只BALB/c小鼠2周后,取40只荷瘤小鼠,分成4组,即模型组(10mL.kg-1NS)、HSM低剂量组(1.0g.kg-1HSM)、HSM高剂量组(2.0g.kg-1HSM)、阳性组(20mg.kg-1CTX),每组10只,连续给药21d;测定各组小鼠原位肿瘤体积和重量,并用活体生物发光成像仪观察各组小鼠乳腺癌肺转移情况。[结果]小鼠灌胃给予1.0g.kg-1、2.0g.kg-1HSM后,原位肿瘤体积和重量明显降低(P<0.05,P<0.01),原位肿瘤抑瘤率分别为22.92%和32.50%;给予2.0g.kg-1HSM的小鼠乳腺癌肺转移明显减少(P<0.01),乳腺癌肺转移的抑制率为51.77%。[结论]中国被毛孢菌丝体具有较好的抑制小鼠乳腺癌肺转移作用。     

RTN4C裸基因抑制人肝癌细胞生长及转移的体内实验研究

目的:研究RTN4C裸基因直接注射抗肝癌生长及转移复发作用.方法:将RTN4C装入逆转录病毒载体,扩增提取RTN4C裸基因,以LacZ为对照组.将不同裸基因和生理盐水与LCI-D20裸鼠人肝癌同时皮下接种或待LCI-D20肝癌成瘤后注射,观察对肿瘤成瘤和生长影响.LCI-D20肿瘤裸鼠皮下接种后10天,分别瘤内注射不同裸基因,观察其对肿瘤生长转移影响.LCI-D20肿瘤肝内接种,接种后22天行肝癌切除术,术中经切缘或脾内注射不同裸基因,观察其对术后转移复发的影响.结果:不同裸基因与LCI-D20肝癌同时皮下接种对照组、LacZ组、RTN 4C组,肿瘤直径分别为(1.81±0.12)cm,(1.61±0.27)cm、(0.43±0.04)cm.裸基因肿瘤内注射对照组、LacZ组、RTN4C组,瘤径(cm)分别为0.91±0.09,0.90±0.06,0.25±0.04;肝癌切除术应用裸基因转移灶累及部位数、切缘复发瘤直径、肝内转移灶数目,转移灶累及肝叶数在对照组、LacZ组与RTN4C组间存在显著差异.脾内注射效果优于肝切缘组注射.结论:RTN4C裸基因注射具有抑制LCI-D20肝癌生长及防治肝癌切除术后转移复发作用.     

重组人白介素-2抑制小鼠LA795肺腺癌高转移株肺转移的研究

目的探讨不同剂量的重组人白介素-2抑制LA795肺腺癌高转移株皮下肿瘤生长及肺转移的作用.方法皮下接种LA795肺腺癌高转移株于T739同系小鼠,腹腔注射不同剂量的重组人白介素-2,观察抑制肿瘤生长及肺转移的作用.结果rhIL-2 1.5×105U/d能明显地抑制肿瘤生长.肿瘤体积,瘤体湿重以及肺转移结节数较对照组小和少,抑制率分别达66.03%、76.03%、97.54%(P＜0.01).小剂量rhIL-2 2.6×103U/d,抑制肿瘤生长的抑制率仅为5.13%(P＞0.05),而对肺转移有68.75%的抑制率(P＜0.01).结论大剂量的rhIL-2仅能有效地抑制LA795肺腺癌的肺转移,且能较好地抑制肿瘤生长.小剂量的rhIL-2仅对LA795肺腺癌转移有一定的抑制作用.因此rhIL-2治疗肿瘤应使用大剂量.     

T1肺鳞癌及腺癌纵隔淋巴结转移

目的：探讨T1肺鳞癌及腺癌淋巴结转移的规律和特点。方法：按Naruke等肺癌淋巴结分布图对162例T1肺鳞癌及腺癌行肺切除加系统性纵隔淋巴结清除术患者进行回顾性临床分析。结果：162例T1肺癌患者中22例出现纵隔淋巴结转移（N2淋巴结转移），N2转移率为13．6％（22／162）。瘤体直径≤1．5cm组和1．6～3．0cm组的N2转移率分别为2．8％和22．2％，其中瘤体直径≤1．5cm鳞癌组未见N2转移。T1肺鳞癌及腺癌的N2转移率分别为5．6％和20．0％，差异显著。T1高、低分化肺鳞癌及腺癌的N2转移率分别为4．3％和23．2％，差异显著。结论：T1肺癌中，N2淋巴结转移频度与肿瘤瘤体大小、分化程度、病理类型相关，且存在跳跃式转移的特点。故针对T1肺鳞癌及腺癌行肺切除术时施行系统性纵隔淋巴结清扫是非常必要的。     

薯蓣丸对化疗4T1 乳腺癌小鼠 T 淋巴细胞亚群的影响

目的 评价薯蓣丸对化疗后4T1 乳腺癌小鼠免疫功能的影响,并探讨其作用机制。方法 随机 将32 只BALB/c 小鼠分为对照组、模型组、化疗组、中药组,每组8 只。除对照组外,其余组注射4T1 细胞 悬液复制荷瘤模型。成瘤后第1 天化疗组、中药组小鼠予以多西他赛治疗,1 次/7 d,共21 d ;注射多西他赛 后第2 天对中药组小鼠行中药灌胃,1 次/d,共21 d。治疗完成后处死小鼠取脾脏研磨,用流式细胞仪检测小 鼠脾脏中CD4 ＋、CD8 ＋、CD4 ＋ CD25 ＋ Foxp3 ＋调节性T 细胞（Treg）表达水平。结果 与模型组比较,化疗 组、中药组CD4 ＋、CD8 ＋、CD4 ＋ CD25 ＋ Foxp3 ＋ Treg 细胞表达水平降低,CD4 ＋ /CD8 ＋比值升高（P <0.05）; 与化疗组比较,中药组CD4 ＋细胞表达水平、CD4 ＋ /CD8 ＋比值升高,CD4 ＋ CD25 ＋ Foxp3 ＋ Treg 细胞表达水 平降低（P <0.05）。结论 薯蓣丸能改善化疗后乳腺癌小鼠免疫功能。     

IL-4协同雌二醇对小鼠乳腺癌细胞生长的促进作用及其机制

目的：探讨白细胞介素4（IL-4）协同雌二醇对小鼠乳腺癌4T1细胞对其生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养4T1细胞,加入不同浓度（0、12.5、25.0、50.0和100.0 μg·L^-1） IL-4或雌二醇（0、6.25、12.50、25.00、50.00 nmol·L^-1）,作用72 h后MTT法检测乳腺癌4T1细胞增殖率。将乳腺癌4T1细胞分为对照组（不进行任何处理）、IL-4组（加入50.0 μg·L^-1 IL-4）、雌二醇组（加入12.50 nmol·L^-1雌二醇）和联合组（加入50.0 μg·L^-1 IL-4+12.50 nmol·L^-1雌二醇）,MTT法检测各组乳腺癌4T1细胞增殖率,流式细胞术检测各组不同细胞周期乳腺癌4T1细胞百分比,Western blotting法检测各组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、Erk、p-Erk、P70S6K、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平。结果：与0 μg·L^-1 IL-4组比较,25.0、50.0和100.0 μg·L^-1IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与0 nmol·L^-1雌二醇组比较,12.50、25.00、50.00 nmol·L^-1雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）;与对照组比较,雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）;与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中S期和G₂/M期细胞百分比升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）;雌二醇组乳腺癌4T1细胞中S期细胞百分比明显升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）。与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞中S期和G₂/M期细胞百分比升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高,雌二醇组乳腺癌4T1细胞中p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平升高（P<0.05）;联合组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：IL-4协同雌二醇可促进小鼠4T1乳腺癌细胞膜IL-4受体（IL-4R）和雌激素受体（ER）表达,增强乳腺癌4T1细胞中Erk1和p70S6K激酶的激活及下游分子S6蛋白的磷酸化。     

鼻咽癌细胞株中乳腺癌转移抑制基因表达的研究

目的:检测乳腺癌转移抑制(BRMS1)基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中的表达情况。方法:应用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链式反应法在mRNA和蛋白2方面检测人鼻咽癌细胞株高分化磷癌、低分化磷癌、低分化细胞株、高成瘤高转移性细胞株、低成瘤低转移性细胞株中BRMS1的表达。结果:5种细胞株中BRMS1的蛋白表达皆为阳性,在不同转移习性的细胞株中其表达强度明显不同。4种细胞株中扩增出BRMS1 mRNA,而BRMS1 mRNA在高转移性细胞株中未扩增出,高分化鳞癌、低分化鳞癌、低分化细胞株BRMS1mRNA表达水平均显著高于低成瘤低转移性细胞株(P<0.01)。结论:BRMS1的表达与细胞株的转移能力有明显相关性,表明BRMS1可能作为鼻咽癌细胞转移的重要指标。     

枸杞多糖对自发乳腺癌MMTV-PyMT小鼠肿瘤生长和转移的作用

目的 以MMTV-PyMT小鼠为乳腺癌模型探讨枸杞多糖对乳腺癌生长和转移的作用。方法 扩群鉴定转基因自发乳腺癌MMTV-PyMT小鼠,将阳性雌性小鼠随机分为LBP组和对照组,每组8只,小鼠8周龄时给药,LBP组给予LBP（50 mg/kg,腹腔注射）治疗,对照组给予生理盐水,每2 d给药一次测量肿瘤体积一次,4周后脱臼处死,肺Bouin’s溶液固定后观察肺表面转移结节数目,肿瘤组织固定包埋后免疫组化法检测肿瘤细胞增殖及血管密度。结果 MMTV-PyMT阳性小鼠成瘤率100%,与对照组相比,LBP组的肿瘤重量（4.208±0.4463 g）明显地比对照组（6.477±0.3724 g）轻,肿瘤体积也明显比对照组小;LBP组肺表面结节数目（12±1.155个）明显比对照组（20±2.745个）少,免疫组化染色结果显示LBP组肿瘤组织中细胞增殖数目及微血管密度明显比对照组少。结论 枸杞多糖可通过抑制MMTV-PyMT小鼠乳腺癌的生长和转移,并抑制肿瘤细胞增殖和血管新生,MMTV-PyMT小鼠可作为乳腺癌肺转移模型运用于抗肿瘤药物研究。     

原发性肝癌患者肿瘤转移与T细胞亚群及其细胞因子的相关性分析

目的 探讨原发性肝癌患者肿瘤转移与T细胞亚群及其细胞因子的相关性.方法 2014年1月至2016年1月前瞻性收集原发性肝癌患者97例,根据患者是否发生转移,将患者分为转移组和非转移组,其中转移组38例,非转移组59例.所有患者均取得手术标本,使用流式细胞仪测定肝癌组织、癌旁组织和外周血CD4+、CD8+T细胞比例,同时使用酶联免疫吸附试验测定外周血中白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)水平.结果 与非转移组相比,转移组患者肝癌组织中CD4+T细胞比例显著升高(P=0.002);CD8+T细胞显著降低(P=0.015).两组患者癌旁组织中CD4+T细胞比例差异无统计学意义P=0.328).转移组患者癌旁组织中CD8+T细胞比例显著高于非转移组(P=0.021).两组患者外周血中CD8+T细胞比例差异无统计学意义(P=0.362).转移组患者外周血CD4+T细胞比例显著低于非转移组(P=0.032).与非转移组比较,转移组患者外周血IL-6水平显著降低(P=0.012);IL-10水平显著升高(P=0.006);TNF-α水平显著降低(P=0.000);IFN-γ水平显著降低(P=0.035).结论 原发性肝癌患者肿瘤转移存在明显的T细胞亚群和细胞因子平衡失调.     

人子宫颈癌PD-L1的表达及其与肿瘤内浸润T细胞的相关性研究

目的 观察负性免疫调节分子程序性死亡配体1(programmed death receptor-ligand 1,PD-L1)在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内T淋巴细胞浸润的关系.方法 免疫组织化学染色观察5例正常宫颈组织、7例高级别宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CINⅡ-Ⅲ)组织和67例子宫颈癌组织中PD-L1的表达和淋巴细胞PD-1的表达,免疫荧光染色观察相应组织内浸润的CD4+T和CD8+T细胞数量,TUNEL法检测淋巴细胞凋亡.结果 正常子宫颈上皮不表达PD-L1;宫颈瘤变上皮不表达或弱阳性表达PD-L1,70%(47/67)的宫颈癌表达PD-L1.肿瘤内浸润的部分淋巴细胞表达PD-1.子宫颈瘤变上皮与子宫颈鳞状细胞癌PD-L1表达存在明显差异(P<0.01),浅表浸润的子宫颈鳞状细胞癌PD-L1 的表达略低于深部浸润的鳞状细胞癌,但无显著差异;PD-L1阳性病例肿瘤局部CD8+T细胞数量显著减少,且PD-L1 表达与CD8+T细胞数量明显负相关(r=-0.82,P<0.01),但与肿瘤局部CD4+T细胞数量无明显相关性(r=-0.05,P>0.05);部分PD-L1阳性的子宫颈癌局部浸润的淋巴细胞存在凋亡现象.结论 子宫颈癌细胞表达PD-L1,且PD-L1的表达与肿瘤局部浸润的CD8+T细胞数量减少有关,但与浸润的CD4+T细胞数量无关.癌细胞表达PD-L1可能促进了肿瘤内浸润的淋巴细胞凋亡.     

肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在不同转移潜能癌细胞中的表达

目的 探讨新发现的肿瘤转移抑制基因ＫＡＩ１／ＣＤ８２与人癌细胞转移潜能的关系,方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法,检测３组８种不同转移具有转移性的前列腺癌细胞系ＰＣ３和ＰＣ３Ｍ及高转移性的人肺ＰＧ细胞,ＫＡＩ１ｍＲＮＡ的表达降低（积分吸光度分别为０．０３１９,０．０２６６和０．０５４９）而在无转移性的人肺ＰＡａ细胞则为高表达（积分吸光度     

苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

目的研究苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用。方法苦豆子总生物碱提取并纯化,处理成澄清的药物溶液后用于细胞给药。CCK-8法测定不同浓度的苦豆子总生物碱作用24h后4T1细胞存活率。流式细胞术检测给药24h后4T1细胞凋亡率。结果与对照组比较,实验组药物浓度为5.00mg/mL时,4T1细胞存活率为63.05%;药物浓度为10.00mg/mL时,4T1细胞存活率为20.30%,随着给药浓度的增加,细胞存活率呈明显下降趋势。实验组药物浓度为6.25mg/mL时,细胞凋亡率为11.4%;药物浓度为10.00mg/mL时,细胞凋亡率为41.7%,随着给药浓度的增加,细胞凋亡率明显增加。结论苦豆子总生物碱能诱导细胞凋亡,对小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖有明显抑制作用。