隐孢子虫感染小鼠动物模型的建立

目的 建立免疫抑制小鼠的隐孢子虫感染模型。方法 饮水中加地塞米松（DEX）抑制4周龄小鼠免疫功能，人工灌喂隐孢子虫卵囊（CSO）感染小鼠。通过观察小鼠粪便中CSO排出情况和小鼠生存情况，比较5个品系小鼠（BALB／c,C57,ICR,NIH,KM)的易感性，比较不同DEX剂量（1mg/L,2.5mg/L,5mg/L,5mg/L,10mg/L)对小鼠免疫功能的影响，比较不同CSO接种剂量（10^5,10^6)对小鼠感染的影响，从而确定适宜的模型小鼠，DEX剂量和CSO接种剂量，建立小鼠感染模型。结果 （1）5个品系小鼠中KM鼠的CSO排出量最多，而且持续整个实验期，小鼠死亡数较少（NIH鼠全部死亡）；（2）10mg/L，5mg/L DEX组小鼠CSO排出量较多，2．5mg/L，1mg/L组小鼠死亡数少，但卵囊排出量明显低于前两组，且不能持续整个实验组；（3）10^5与10^6个CSO接种量的小鼠CSO排出量没有明显差别，但前者的小鼠死亡数较少。结论 KM鼠饮水中加入DEX5mg/L，每只小鼠接种10^5个CSO，可以建立稳定的感染模型。     

隐孢子虫感染小鼠动物模型的建立

目的　建立免疫抑制小鼠的隐孢子虫感染模型。　方法　饮水中加地塞米松 ( DEX)抑制 4周龄小鼠免疫功能 ,人工灌喂隐孢子虫卵囊 ( CSO)感染小鼠。通过观察小鼠粪便中 CSO排出情况和小鼠生存情况 ,比较 5个品系小鼠( BAL B/c、C5 7、ICR、NIH、KM)的易感性 ,比较不同 DEX剂量 ( 1mg/L、2 .5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L)对小鼠免疫功能的影响 ,比较不同 CSO接种剂量 ( 10 5、10 6 )对小鼠感染的影响 ,从而确定适宜的模型小鼠、DEX剂量和 CSO接种剂量 ,建立小鼠感染模型。　结果　 ( 1) 5个品系小鼠中 KM鼠的 CSO排出量最多 ,而且持续整个实验期 ,小鼠死亡数较少 ( NIH鼠全部死亡 ) ;( 2 ) 10 mg/L、5 mg/L DEX组小鼠 CSO排出量较多 ,2 .5 mg/L、1mg/L 组小鼠死亡数少 ,但卵囊排出量明显低于前两组 ,且不能持续整个实验期 ;( 3) 10 5与 10 6个 CSO接种量的小鼠 CSO排出量没有明显差别 ,但前者的小鼠死亡数较少。　结论　 KM鼠饮水中加 DEX5 mg/L,每只小鼠接种 10 5个 CSO,可以建立稳定的感染模型。     

大鼠肺孢子虫肺炎动物模型的实验研究

目的建立肺孢子虫肺炎(PCP)的大鼠实验动物模型。方法将34只雌性清洁级SD大鼠随机分成实验组和对照组,每组17只。实验组采取每周2次每次每只皮下注射地塞米松1mg诱导的方法建立PCP动物模型;对照组则注射与地塞米松等体积的灭菌生理盐水。所有大鼠的饮水中加入1g/L盐酸四环素预防继发性细菌感染。12周后解剖全部大鼠,并分别制作肺组织印片,姬氏染色,检查肺孢子虫包囊。同时制作肺组织病理切片,HE染色,观察肺组织的病理学变化。结果用地塞米松诱导大鼠5周,肺组织印片均查见肺孢子虫包囊,肺组织也出现典型的病理学改变。连续诱导12周,均未见实验鼠死亡。实验组大鼠体重下降明显,与对照组比较,差异有非常显著性(P<0.01)。结论应用皮下注射地塞米松免疫抑制诱导的方法可成功建立PCP的大鼠动物模型。     

不同方法建立卡氏肺孢子虫大、小鼠动物模型的比较

目的筛选简便、有效并稳定的肺孢子虫造模方法。方法 SD大鼠和昆明小鼠分别采用皮下注射、灌胃和饮水中加地塞米松三种方法造模,观察感染动物体质状态,计算肺孢子虫包囊感染率和死亡率等。结果 SD大鼠皮下注射和灌胃法造模肺孢子虫感染率分别为75.0%和66.7%;在SD大鼠饮水中加入地塞米松及对昆明小鼠实施造模,感染率低。结论 SD大鼠灌胃和皮下注射地塞米松方法可以建立相对稳定的肺孢子虫动物模型。     

隐孢子虫感染小鼠动物模型

目的建立隐孢子虫感染小鼠动物模型,为药物筛选和分子生物学研究奠定基础。方法饮水中添加地塞米松(DEX)抑制鼠免疫功能,5d后经口灌喂隐孢子虫卵囊感染小鼠。比较粪便中排卵囊量和小鼠生存情况,从不同品系小鼠(KM、BALB/c)、不同鼠龄(乳鼠断乳2d、56周、1012周)、不同免疫抑制剂量(0,2.5,5,7.5,10,12.5mg/L)、不同卵囊接种量(75,1.5×102,1.5×103,1.5×104,3.0×104)及不同保存时间(1,2,6,8个月)等影响小鼠感染的因素中,选出最佳条件,建立稳定的隐孢子虫感染小鼠动物模型。结果(1)KM、BALB/c两种小鼠都能感染微小隐孢子虫,BALB/c组小鼠开始死亡的时间比KM组的早,BALB/c组收集的卵囊数比KM组的少;(2)乳鼠组小鼠排卵囊的数量总体大于其他年龄段小鼠,但是其生存时间较短;(3)7.5,10mg/LDEX剂量组排卵囊数量较多,且持续整个实验期,低于此剂量组小鼠排卵囊数量少,多于此剂量组易死亡;(4)接种75个以上微小隐孢子虫卵囊均能使小鼠感染;(5)保存1,2,6,8个月的微小隐孢子虫卵囊均能感染小鼠。结论采用56周龄的KM雌性鼠,在饮水中添加7.5～10mg/LDEX,接种75个以上保存时间在8个月内的微小隐孢子虫卵囊可以建立较稳定的感染模型。     

低剂量隐孢子虫感染正常和免疫抑制小鼠的效应研究

目的 研究低剂量隐孢子虫感染正常和免疫抑制小鼠的相关效应指标，了解低剂量隐孢子虫感染的风险及相关效应。方法 采用地塞米松作为免疫抑制剂，建立小鼠的免疫抑制模型，再给予不同剂量的隐孢子虫攻击，比较不同的效应指标。结果 免疫抑制组小鼠脾重指数、胸腺指数与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。免疫抑制小鼠IgG、IgM含量与对照组比较差异亦有显著性（P〈0．05）。免疫抑制情况下粪便白细胞计数与相应的对照组比较，50、100、500个卵囊剂量组之间差异均有显著性（P〈0．05）。免疫抑制组与对照组的腹泻发生率，500个剂量组差异有显著性（P〈0．05）。将剂量对数和腹泻发生率作回归分析，免疫抑制和对照组的剂量对数和腹泻发生率呈现较好的线性关系（P〈0．05）。结论 较低剂量（10～50个卵囊）的隐孢子虫即可引起小鼠感染并出现腹泻症状，且出现粪便白细胞排出增加。在较低剂量条件下，免疫抑制小鼠粪便白细胞、腹泻发生率均高于相应的对照组，且潜伏期缩短，免疫抑制小鼠感染低剂量隐孢子虫发病的风险更大。     

不同免疫状态小鼠感染隐孢子虫的阈剂量研究

目的求出健康小鼠和免疫抑制小鼠感染隐孢子虫的ID5（5%感染剂量）,为原虫卫生标准的制定提供参考依据。方法以地塞米松为免疫抑制剂,建立免疫抑制小鼠模型,感染不同剂量的隐孢子虫卵囊,粪检法观察感染率,对感染剂量和感染率作线性回归分析,计算相应的ID5,并与非免疫抑制组比较。结果免疫抑制组的胸腺指数、脾脏指数、血清IgG、IgM含量与相应的非免疫抑制组比较差异均具有统计学意义（P〈0.05）;免疫抑制组小鼠感染隐孢子虫的ID5为4个卵囊,非免疫抑制小鼠的ID5为12个卵囊。结论免疫抑制小鼠对隐孢子虫的易感性增加,制定卫生标准需要对此情况加以考虑。     

双氢青蒿素哌喹对大鼠肺孢子虫肺炎的治疗效果

目的观察双氢青蒿素哌喹（科泰复）对大鼠肺孢子虫肺炎（PCP）的治疗效果，并探讨其可能的作用机理。方法以每周2次连续6周皮下注射地塞米松诱导SD清洁级大鼠建立肺孢子虫肺炎动物模型，采用科泰复40mg／kg，连续3d，双氢青蒿素（科泰新）60mg／kg，连续6d治疗实验大鼠，以复方新诺明为治疗对照组，通过存活率、体重回升率、肺重／体重比、肺印片的每视野包囊均数、大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞亚群和血清一氧化氮（NO）、γ-干扰素（IFN-γ）、α-肿瘤坏死因子（TNF-α水平等指标考核其疗效。结果科泰复、科泰新治疗组的大鼠存活率提高，治疗后大鼠体重增加，肺重／体重比、肺印片的每视野包囊均数和血清NO和TNF-α水平均显著低于PCP模型阳性对照组（P〈0．05），而科泰复和科泰新治疗组大鼠外周血CD4^＋T淋巴细胞亚群和IFN-γ水平则均显著高于PCP模型阳性对照组（P〈0．05）。结论科泰复、科泰新对大鼠肺孢子虫肺炎具有治疗和免疫调节作用。     

建立微小隐孢子虫感染小鼠模型方法的研究

目的探索微小隐孢子虫传代和扩增模型小鼠的最佳性别、日龄、免疫抑制时间和免疫抑制剂地塞米松磷酸钠(DEXp)的最佳剂量。方法25、50、75日龄雌性和雄性BALB/c小鼠各3组,免疫抑制3 d后接种卵囊;各剂量组小鼠1 L饮水中含DEXp分别为1 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg;各免疫抑制时间组小鼠分别在免疫抑制前6 d、3 d和免疫抑制后0 d、3 d、6 d、9 d感染卵囊。以上各组小鼠经口感染保存时间和方法相同的微小隐孢子虫卵囊的剂量均为2.0×105个,感染后逐日收集鼠粪,用饱和蔗糖漂浮法分离纯化卵囊。结果雌性小鼠排卵囊强度均较同日龄雄性小鼠大,而不同日龄小鼠中又以50日龄(26 g-28g)小鼠排卵囊量最多;各剂量组小鼠中,15 mg/L组排卵囊强度较其他各组大;免疫抑制时间组中,免疫抑制3 d感染组排卵囊强度最大。结论适合于卵囊扩增和传代的最佳鼠模型是50日龄(26-28g)雌性小鼠;DEXp的最佳剂量是15 mg/L;最佳免疫抑制时间是感染前3 d。     

大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的实验病理学研究

目的　动态观察大鼠卡氏肺孢子虫肺炎不同病程的病理学变化。方法　将 4 0只清洁级 5 0的雌性SD大鼠随机分为实验组和对照组。前者皮下注射地塞米松磷酸钠 ,每周 2次 ,1mg/次 ,共 12周 ;后者皮下注射相同剂量的生理盐水。观察两组大鼠的发病情况并每隔 3周两组各取 5只动物进行病原学、病理学检查。结果　实验组大鼠 5周后开始发病 ,肺印片中可查到卡氏肺孢子虫包囊及滋养体 ,其组织病理学观察可见间质性肺炎随诱导时间存在明显病理学改变。实验组大鼠第 6周主要表现为肺泡壁毛细血管轻度充血 ,间质内慢性炎性细胞浸润 ;第 9至 12周可见间质细胞增生、间质水肿、肺泡内出现粉红色泡沫样渗出物、部分肺组织呈现大片状实变区。对照组大鼠无异常表现 ,病原学检查阴性 ,肺部无明显病理学改变。结论　大鼠卡氏肺孢子虫肺炎以炎症、渗出、细胞浸润、间质细胞增生等为主并随病程存在明显病理学改变     

双氢青蒿素对大鼠体内卡氏肺孢子虫作用的超微结构研究

目的 研究双氢青蒿素（DHA）治疗对大鼠体内卡氏肺孢子虫（PC）超微结构的影响。方法 以地塞米松磷酸钠对Wistar大鼠进行皮下注射，建立卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）动物模型，用60mg／kgDHA治疗实验大鼠，杀鼠取肺，用透射和扫描电镜观察大鼠肺内PC的超微结构变化，并与感染对照组进行比较。结果 透射电镜发现PC滋养体表膜和核膜破裂，胞质中出现大量空泡和高电子密度颗粒，PC包囊中也出现空泡，囊内小体变性坏死；扫描电镜发现PC滋养体丝状伪足和微绒毛稀疏、变短甚至脱落，表膜出现缺损。结论 DHA可破坏PC滋养体和包囊。     

经双氢青蒿素治疗后卡氏肺孢子虫肺炎大鼠的肺部病理学变化

目的　研究经双氢青蒿素治疗后卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)大鼠肺部病理学变化。方法　以地塞米松磷酸钠皮下注射Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型 ,用 6 0mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠 ,杀鼠取肺 ,用光镜和电镜观察肺部病理学变化 ,同时设有感染对照组和正常对照组。结果　肺印片中卡氏肺孢子虫 (Pc)包囊数目显著减少 ,肺组织炎症明显减轻 ,Pc滋养体表膜和核膜破裂 ,胞质中出现大量空泡和高电子密度颗粒 ,Pc包囊中也出现空泡 ,囊内小体变性坏死。结论　双氢青蒿素可杀死Pc滋养体和包囊 ,从而减轻肺组织的炎症反应。     

卡氏肺孢子虫低死亡率SD大鼠动物模型的建立

目的建立低死亡率卡氏肺孢子虫肺炎(PCP) SD 大鼠动物模型. 方法将雌性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用按体重定量皮下注射地塞米松免疫抑制的方法诱导建立PCP动物模型,对照组注射与地塞米松等体积的生理盐水.分别制作肺印片,经瑞-姬氏复合染色后,检查卡氏肺孢子虫包囊.制作肺组织病理切片,经HE染色后观察肺组织病理变化.制作感染大鼠肺组织超薄切片,透射电镜观察Pc包囊和滋养体. 结果用地塞米松诱导后,实验组SD大鼠死亡率为0,肺印片阳性率为76.7%(23/30).肺组织出现典型的病理变化,并可观察到Pc包囊.实验组SD大鼠体重下降明显,与对照组体重比较具有极显著性差异(P<0.01).电镜下可观察到Pc包囊和滋养体的形态结构. 结论采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法可建立低死亡率PCP动物模型.     

大蒜素治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的研究

目的　研究大蒜素对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的治疗效果。　方法　地塞米松连续肌肉注射Wistar大鼠8周,建立大鼠PCP动物模型。用大蒜素治疗实验大鼠,同时设复方新诺明治疗对照组和PCP模型空白对照组。通过各组大鼠肺重、肺重/体重比值、肺印片中每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数等指标考核疗效。　结果　大蒜素治疗组大鼠平均肺重为1.73±0.17、肺重/体重比值为0.84±0.12,显著低于PCP模型对照组的 2.31±0.35、1.25±0.35(P<0.01)。肺印片中包虫数较PCP模型对照组减少62.9% ,其与复方新诺明治疗对照组接近。　结论　大蒜素对实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎有明显的治疗作用,治疗效果接近复方新诺明。     

双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫超微结构的影响

目的　观察双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫超微结构的影响。方法　以醋酸可的松皮下注射 Wistar大鼠 6周 ,诱导建立肺孢子虫肺炎动物模型 ,用双氢青蒿素治疗大鼠 ,并用电镜观察大鼠肺切片中肺孢子虫超微结构。结果　双氢青蒿素可使肺孢子虫滋养体胞浆及包囊内出现空泡 ,线粒体肿胀、核膜破裂、内质网肿胀 ,囊内小体溶解破坏等超微结构改变。结论　双氢青蒿素主要对卡氏肺孢子虫膜系结构产生破坏作用     

卡氏肺孢子菌肺炎大鼠超氧化物歧化酶和过氧化脂质变化的研究

24只SD大鼠分为卡氏肺孢子菌肺炎感染组(18只)和健康对照组(6只)。感染组以地塞米松磷酸钠3.5mg/(只.次),每周2次,连续8周腹股沟皮下注射SD大鼠,建立卡氏肺孢子菌肺炎动物模型。肺组织印片六亚甲基四胺银染色和肺组织病理切片伊红-苏木素(HE)染色观察实验大鼠肺组织的病理学变化。分光光度法检测肺组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活力和过氧化脂质(LPO)含量。结果显示,感染组大鼠可见卡氏肺孢子菌包囊并发现典型病理改变;感染组SOD值[(31.49±7.18)U/mgprot]与健康对照组[(54.41±8.97)U/mgprot]相比,差异有统计学意义(P<0.01);感染组LPO值[(2.26±0.21)nmol/mgprott]与健康对照组[(1.63±0.01)nmol/mgprot]相比,差异有统计学意义(P<0.01)。     

大鼠支气管肺泡灌洗液中肺孢子虫的超微结构观察

目的观察大鼠支气管肺泡灌洗液中肺孢子虫的超微结构。方法Wister大鼠皮下注射地塞米松8周,诱导建立肺孢子虫肺炎的动物模型。乙醚麻醉下处死大鼠,收集大鼠的支气管肺泡灌洗液,浓缩病原体,扫描电镜下观察肺孢子虫的超微结构。结果扫描电镜下可见Wister大鼠源肺孢子虫有两种形态一种虫体表面光滑,近球形,大小3~5μm,且部分光滑型虫体表面有2~3个脐形凹陷,凹陷上可见数个微孔;另一种虫体表面粗糙,形态近球形或不规则形,大小5~9μm,虫体表面可见不同形态的突起、伪足、微孔、凹陷等。结论扫描电镜下大鼠源肺孢子虫有光滑型及粗糙型两种形态,认为前者是包囊后者为滋养体。