补阳还五汤对急性脑缺血大鼠血管新生影响的实验研究

目的探讨补阳还五汤对急性脑缺血大鼠血管新生的影响。方法采用大脑中动脉线栓法建立急性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和尼莫地平组,给予不同处理,给药7d后处死大鼠,采用免疫组织化学法观察脑缺血区微血管密度（MVD）的变化及脑组织血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达情况,同时评价动物神经功能。结果与模型组比较,补阳还五汤组能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,MVD显著升高,并增强VEGF和bFGF的表达。结论补阳还五汤可促进急性脑缺血大鼠缺血区血管新生,增强脑组织VEGF和bFGF的表达,可能是其抗脑缺血的作用机制之一。     

补阳还五汤对脑缺血大鼠模型ITGαvβ3表达及脑皮质区新生血管的影响

目的研究补阳还五汤对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用,并观察对脑组织VEGF和ITGαvβ3的表达及脑皮质区新生血管的影响。方法采用"线栓法"制备大鼠脑缺血-再灌注模型;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中内皮生长因子(VEGF)、ITGαvβ3的含量;免疫组化法测定各组模型缺血侧大脑皮质区VEGF及CD34的表达。结果补阳还五汤可以显著升高血浆中VEGF和ITGαvβ3的表达(P<0.01),增加缺血侧大脑皮质区VEGF的表达和微血管密度(P<0.01)。结论补阳还五汤能够促使血管生成,改善脑循环,促进缺血脑组织的修复。     

补阳还五汤诱导脑缺血后血管生成促进侧脑室下区神经母细胞迁移

目的: 研究补阳还五汤诱导脑缺血后血管生成对侧脑室下区神经母细胞迁移的影响及机制. 方法: 采用线栓法诱导小鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血30 min,分假手术组、模型组、补阳还五汤组和内皮抑素组.补阳还五汤组缺血后24 h开始灌胃补阳还五汤(20 g·kg^-1),内皮抑素组在灌胃补阳还五汤同时皮下注射内皮抑素(10 μg/只),每天1次,连续14 d.缺血后第14天,采用免疫荧光法检测缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和蛋白表达. 结果: 与模型组比较,补阳还五汤组缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量显著增多(P<0.01),SDF-1和BDNF mRNA和蛋白表达增加(P<0.01);与补阳还五汤组比较,内皮抑素组小鼠缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量显著减少(P<0.01),SDF-1和BDNF mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.01). 结论: 补阳还五汤促进脑缺血后血管生成有助于侧脑室下区神经母细胞向缺血周边区迁移,机制可能与上调SDF-1和BDNF表达有关.     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子及其受体Flk1的影响

目的探讨补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Fetal liver kinase1,Flk1)的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、补阳还五汤组,大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组织化学法和酶联免疫法检测各组动物脑内VEGF、Flk1的表达和蛋白水平,同时评价动物神经功能。结果在正常大鼠脑内有少量VEGF和Flk1阳性细胞,脑缺血后VEGF和Flk1阳性细胞增加;与模型组比较,尼莫地平、补阳还五汤均能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,增强VEGF和Flk1的表达,提高VEGF蛋白水平(P<0.05);于7、14d补阳还五汤作用强于尼莫地平(P<0.05)。结论补阳还五汤增强大鼠局灶性脑缺血后VEGF及Flk1的表达和提高VEGF蛋白水平,是其抗脑缺血的可能作用机制之一。     

补阳还五汤对中风后遗症“气虚血瘀”大鼠模型血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨中风后遗症"气虚血瘀"大鼠模型血管内皮生长因子(VEGF)的表达及补阳还五汤对其表达的影响。方法:采用机械开颅电凝法阻断大脑中动脉24h后,用随机电脉冲刺激仪每天刺激大鼠2h,连续刺激15天,复制中风后遗症"气虚血瘀"大鼠模型。治疗组在造模结束后灌服补阳还五汤水煎液,连续给药15天。通过重量法观察脑含水量的变化,并采用免疫组织化学方法和酶联免疫方法检测VEGF的表达和蛋白水平。结果:与模型组相比,补阳还五汤能降低模型大鼠脑含水量(P<0.05),VEGF阳性细胞数量明显增多(P<0.05),蛋白水平提高(P<0.05)。结论:补阳还五汤能改善中风后遗症大鼠脑水肿,并增强VEGF的表达和蛋白水平,这可能是其发挥抗脑缺血损伤作用的机制之一。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的保护作用,阐明该方抗脑缺血的机理。方法采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,造模后24 h给药,补阳还五汤组给予补阳还五汤灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃。造模后7 d,评价各组大鼠神经功能并处死取材,四氮唑红染色观察大鼠脑组织梗死体积,HE染色观察大鼠脑微血管的一般形态,ELISA检测大鼠脑组织内基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平及血清中血管性血友病因子(vWF)的表达。结果与模型组比较,补阳还五汤组能显著改善神经功能行为评分,减少脑梗死体积,降低MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF水平。病理观察结果显示,补阳还五汤组脑组织病理变化较模型组减轻。结论补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其作用可能与保护血脑屏障,抑制MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF的表达有关。     

补阳还五汤及其拆方对大鼠脑缺血后神经发生的影响

目的研究补阳还五汤及其拆方对大鼠局灶性脑缺血后神经发生（neurogenesis）的影响及作用机制。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90min后再灌注,分假手术组、模型组、补阳还五汤组、补气组、活血组,缺血后24h灌胃给药,连续14天。并腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bro-modeoxyuridine,BrdU）,1次,天,连续14天。在缺血后第1、7、14天,采用改良的神经症状严重程度评分（mNSS）和角实验评价神经功能;缺血后第14天,采用免疫荧光双标检测BrdU／Nestin、BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞,Westernblot检测脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达。结果与模型组比较,全方组及补气组大鼠mNSS评分降低和右转次数减少（P〈0．05,P〈0．01）,侧脑室下区BrdU／Nestin免疫阳性细胞、缺血皮层周边区BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞数量增多（P〈0．05,P〈0．01）,BDNF和VEGF蛋白表达增加（P〈0．01）;但补气组BrdU／GFAP差异无统计学意义（P〉0．05）,活血组各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）。与全方组比较,补气组和活血组大鼠BrdU／Nestin、BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞显著减少（P〈0．01）,BDNF和VEGF蛋白表达下降（P〈0．01）。结论补阳还五汤能显著促进脑缺血后神经发生和神经功能恢复,机制可能与上调BDNF和VEGF蛋白有关,方中补气药和活血药具有协同作用。     

补阳还五汤对脑缺血后神经血管单元的保护作用研究

目的探讨补阳还五汤对脑缺血后神经血管单元功能的保护作用。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,并将大鼠随机分为治疗组和对照组;治疗组给予补阳还五汤灌胃治疗,对照组给予等量0.9%Na Cl溶液灌胃,疗程7天。采用NRSS神经行为学评分评价大鼠脑缺血后行为学表现,采用TTC染色检测梗死面积,采用免疫组织化学染色的方法评价神经元数量情况,IGG染色评价神经血管单元的结构完整性。结果干预处理后,与对照组比较,治疗组NRSS行为学评分降低、脑梗死面积缩小、神经元数量增多及神经血管单元完整性良好(P0.05)。结论补阳还五汤可通过保护神经血管单元的完整性以促进脑缺血后的康复。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经功能、脑梗死体积和血清IL-10含量的影响

目的:观察补阳还五汤对局灶性脑缺血模型大鼠神经功能、脑梗死体积和血清细胞因子含量的影响。方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血的动物模型,在缺血后24h进行神经功能行为评分,采用TTC染色法测定脑梗死体积,采静脉血以酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中IL-10含量的变化。结果:脑缺血24h后大鼠神经功能行为评分、脑梗死体积和血清中IL-10水平均显著升高(P<0.01);中医方剂补阳还五汤能显著降低神经功能行为评分,减少脑梗死体积,升高血清IL-10水平(P<0.01)。结论:补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠脑损伤具有保护作用,其对血清细胞因子的影响是其对脑缺血保护作用的可能机制之一。     

天花粉对脑缺血再灌注大鼠高同型半胱氨酸血症的影响

目的研究天花粉对脑缺血再灌注大鼠高同型半胱氨酸血症（Hhcy）的影响,并通过对缺血周围区细胞周期蛋白A的检测,进一步探讨天花粉对缺血再灌注影响的分子机制。方法采用大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、天花粉组、补阳还五汤组。术后分12、24、48h 3个时间点行神经功能评分;检测血浆中Hcy含量;免疫组化观察缺血周围区细胞周期蛋白A表达强度。结果神经功能评分显示与模型组比较,天花粉组、补阳还五汤组神经功能有显著改善;血浆Hcy含量与模型组比较,各治疗组均显著减少;细胞周期蛋白A阳性细胞表达水平缺血再灌注12h,与模型组比较,天花粉组、补阳还五汤组阳性细胞数显著减少。缺血再灌注24h和缺血再灌注48h,治疗组与模型组比较,阳性细胞数均显著减少,天花粉组与补阳还五汤组比较也显著减少。结论天花粉能减轻缺血再灌注后大鼠Hhcy的程度,和补阳还五汤相比其改善脑缺血再灌注的机制可能和细胞周期蛋白相关。     

不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后神经干细胞增殖的影响

目的: 研究不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后室下区神经干细胞增殖的影响。 方法: 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血24 h后分别ig黄芪剂量为120, 60, 30, 15 g的补阳还五汤(剂量分别为13.07, 7.61, 4.88, 3.55 g·kg^-1),并ip 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50 mg·kg^-1),1次/d,连续14 d。在缺血后第1, 7, 14天,采用改良的神经症状严重程度评分和角实验评价感觉运动功能;缺血后第14天,采用BrdU/Nestin免疫荧光双标检测室下区神经干细胞增殖情况。 结果: 与模型组比较,在缺血后第7, 14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著改善神经症状评分和减少大鼠右转次数(P<0.01或P<0.05);缺血后第14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著促进室下区神经干细胞增殖(P<0.01)。 结论: 大剂量黄芪组方的补阳还五汤能显著促进脑缺血后室下区神经干细胞增殖和神经功能恢复,以黄芪剂量为120 g的效果最佳。     

补阳还五汤和星蒌承气汤促进脑缺血大鼠神经修复和对肝肾功能的保护研究

目的:观察补阳还五汤和星蒌承气汤对脑缺血大鼠神经功能修复的作用,并从对谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的影响观察其对肝肾功能的保护作用.方法:SD大鼠120只随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、星蒌承气汤和补阳还五汤组;线栓法制备大脑中动脉阻塞模型;大鼠灌胃用药14 d,分别于14,28 d进行神经功能评测,检测大鼠肝肾功能变化.结果:与假手术组相比,模型组大鼠14,28 d神经功能评分均明显降低,AST,ALT,Cr,BUN明显升高.与模型组相比,各药物组大鼠14、28 d神经功能评分均明显升高,28 d AST,ALT水平降低;星蒌承气汤降低14 dAST水平作用明显,补阳还五汤降低28 d Cr作用明显.与尼莫地平及星蒌承气汤组比较,28 d补阳还五汤组神经功能评分明显升高,Cr显著降低.与14 d组比较,各药物组大鼠28 d神经功能评分均明显升高;28 d补阳还五汤组AST,ALT,Cr降低明显.结论:脑缺血后大鼠神经功能的自然修复缓慢,补阳还五汤和星萎承气汤对脑缺血远期的神经修复具有促进作用,以补阳还五汤的作用尤为明显;脑缺血可引起肝肾功能受损,星萎承气汤和补阳还五汤在缺血后不同时期保护肝肾功能的作用存在差异,其中以补阳还五汤保护肝肾功能的作用尤为全面而显著.     

补阳还五汤及其有效部位组方对沙鼠脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构的影响

目的：比较研究补阳还五汤及其有效部位对脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构的影响。方法：采用沙鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血模型,分别腹腔注射补阳还五汤及其有效部位组方,于再灌注后5天取脑以透射电镜观察。结果：补阳还五汤及其有效部位组方均可对抗CA1区神经元变性死亡,对海马CA1区超微病理改变均有改善作用,两均可减少缺血再灌注后发生神经元凋亡的例数,两的改善程度相近。结论：补阳还五汤及其有效部位组方均可防止脑缺血再灌注后海马CA1区神经元迟发性损伤,且具有抗脑缺血后神经元凋亡的作用。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞迁移的影响

目的:观察补阳还五汤对大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)后神经干细胞(neural stem cells,NSCs)迁移的影响.方法:采用MCAO模型,缺血90 min后再灌.将造模成功的大鼠分层并随机分组分为模型和补阳还五汤组,24 h后ig补阳还五汤12g.kg-1,1次/d,连续3周.另16只不阻塞动脉大鼠设为手术组.分别在给药后1,2,3周进行行为学评分;并在第4天和18天ip 5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)50 mg· kg -1,各连续3d.2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色测量梗死面积;免疫组化检测BrdU阳性细胞;酶联免疫法(ELISA)检测基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,模型组1周和3周神经行为学评分显著升高(P ＜0.05或P＜ 0.01),脑梗死面积、缺血侧室管膜下区(subventricular zone,SVZ)及纹状体区BrdU阳性细胞数均显著增加(P＜ 0.05或P＜ 0.01).与模型组相比,补阳还五汤能显著改善大鼠MCAO神经功能缺失症状,药后1,2,3周神经功能评分为(1.33±0.60),(o.89±0.58),(0.50±0.31)分,明显低于模型组的(1.72±0.46),(1.56±0.51),(1.89±0.50)分(P＜0.01);降低脑梗死面积,药后1,3周分别为(16.1±5.2)％,(10.3±0.40)％,明显低于模型组的(35.2±6.3)％,(29.8±6.9)％,(P＜0.01),提高SVZ和纹状体区BrdU阳性细胞数,药后1周分别为(71.17±5.19),(83.8±3.83)个,明显高于模型组的(52.17±6.52),(60.20±6.72)个,药后3周分别为(43.33±6.06),(54.60±5.77)个,明显高于模型组的(35.83±4.88),(22.00±3.87)个(P＜0.01);给药3周时显著提高SDF-1表达,3周时为(36.3±2.71) pg·mg-1,明显高于模型组的(28.65±3.47)pg·mg-1(P＜ 0.05).结论:补阳还五汤能促进MCAO大鼠缺血侧NSCs迁移,其可能机制是通过上调SDF-1蛋白的表达水平实现的.     

补阳还五汤对小鼠脑缺血后NOS活性的影响

目的：观察补阳还五汤对小鼠局灶性脑缺血后脑组织内NOS活性的影响。方法：局灶性脑缺血模型由丝线结扎一侧带迷走神经的颈总动脉制成，用NOS试剂盒和紫外分光光度测定NOS活性。结果：缺血后脑组织内NOS显升高，以缺血4h达高峰．补阳还五汤组NOS活性比缺血对照组显降低，以缺血4h最明显。结论：补阳还五汤能抑制缺血后脑组织内NOS活性的升高，对缺血后脑组织具有保护作用。     

补阳还五汤和黄芪对沙土鼠脑缺血再灌注后脑组织热休克蛋白70表达的影响

目的：探讨补阳还五汤和黄芪对脑缺血再灌注后脑组织HSP70mRNA及蛋白表达的影响。方法：采用沙土鼠双侧颈动脉夹闭脑缺血模型,运用Northern blot和Western blot分别检测补阳还五汤和黄芪对沙土鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白70基因（HSP70）及蛋白的表达。结果：在脑缺血再灌注后48h,HSP70mRNA及蛋白表达明显增强,补阳还五汤可明显抑制HSP70的转录,而黄芪则除了可明显抑制其转录外,还可轻度降低HSP70的翻译。结论：补阳还五汤和黄芪对脑缺血再灌注后,HSP70的抑制作用有可能对于脑缺血引起的损伤具有保护作用。     

补阳还五汤有效部位对局灶性脑缺血再灌注后caspase表达的作用

目的 研究补阳还五汤中4类有效部位抗脑缺血再灌注损伤作用是否是通过抑制脑组织caspase表达而实现的.方法 采用大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血模型,缺血2 h再灌注46 h,分别于缺血前和缺血后12、24、36 h给予由补阳还五汤提取的生物碱、苷、多糖和苷元,以尼莫地平为对照药.以免疫组化法检测caspase-1、caspase-3、caspase-8蛋白表达.结果 脑缺血再灌注后,缺血侧脑组织caspase-1、caspase-3蛋白表达增强,caspase-1主要表达在脉络膜,caspase-3在海马、皮质和髓质均有表达.补阳还五汤中生物碱、苷、多糖和苷元均可抑制caspase-1表达,尼莫地平对caspase-1表达无显著影响.生物碱可抑制海马和髓质区caspase-3表达,苷和苷元可抑制海马、皮质和髓质caspase-3表达,尼莫地平可抑制海马和髓质caspase-3表达,而多糖对其无显著影响.各组caspase-8表达均无显著差异.结论 补阳还五汤中生物碱、苷、多糖和苷元可能通过抑制caspase-1表达,减少炎性细胞因子的产生,从而对抗缺血后炎症反应.生物碱、苷和苷元可能通过抑制caspase-3表达,抑制缺血后神经元凋亡,从而对抗神经元迟发性死亡.生物碱、苷、多糖和苷元可能是补阳还五汤抗缺血性脑损伤的主要物质基础.     

复方水蛭合剂对大鼠局灶脑缺血损伤的影响及与补阳还五汤的对比

目的:探讨复方水蛭合剂对脑缺血损伤的保护作用.方法:检测大鼠大脑中动脉缺血后6、24小时脑组织匀浆Na -K -ATP酶、脑含水量、MDA、NO的变化及复方水蛭合剂对其影响并与补阳还五汤比较.结果:复方水蛭合剂、补阳还五汤能提高脑缺血损伤大鼠Na -K -ATP酶的活性、降低MDA、NO及脑含水量,复方水蛭合剂作用比补阳还五汤强.病理学检查复方水蛭合剂、补阳还五汤较均较轻,复方水蛭合剂组比补阳还五汤组损伤轻.结论:复方水蛭合剂、补阳还五汤对缺血大鼠脑有保护作用,复方水蛭合剂比补阳还五汤作用强.