22例慢性淋巴细胞白血病荧光原位杂交研究

为了解我国慢性淋巴细胞白血病（慢淋）１２号染色体三体（＋１２）的发生率，采用１２号染色体着丝粒特异性ＤＮＡ探针（Ｄ１２Ｚ３）对２２例慢淋患者进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）研究，并将结果和细胞遗传学发现相比较。染色体检查揭示：５例有核型异常，其中３例有＋１２。ＦＩＳＨ检测除证实上述３例的＋１２外，还发现１例核型正常者有＋１２小克隆存在（５．３４％）。研究表明，ＦＩＳＨ在检测慢淋的染色体数目异常方面比常规细胞遗传学方法快速、准确和敏感；与西方国家慢淋＋１２检出率（２０％～３２．５％）相比较，本组慢淋＋１２阳性率偏低（１８．１％），提示我国慢淋和西方慢淋之间可能存在着生物学差异。     

21例伴有4号染色体三体细胞的急性白血病的分析

目的探讨伴有4号染色体三体细胞的急性白血病（acute leukemia，AL）的临床和实验室特点。方法对21例伴有4号染色体三体细胞的AL患者的临床和实验室资料进行回顾性分析。21例均采用骨髓细胞直接法或短期培养法制备染色体，用R显带技术进行核型分析；其中5例核型分析揭示t（8；21）易位者，采用AMLl／EqO双色探针和间期荧光原位杂交技术进行AMLl／ETO重排检测；应用SpectrumGreen标记的4号着丝粒探针，对其中13例AL患者进行荧光原位杂交检测。结果21例AL中2例为继发性白血病，其余均为原发性白血病。4号染色体三体异常主要见于AML-M2（9／21例），21例中7例为单纯4号染色体三体，14例同时伴有其他异常，以t（8；21）最常见（8／14例）；临床上16例初诊白细胞计数大于10×10^9／L；15例有不同程度的肝、脾和淋巴结肿大；进行免疫表型分析的15例患者中6例为髓系和淋系抗原共表达，11例有CD34表达。双色荧光原位杂交研究揭示其中5例核型分析显示t（8；21）者均有AMLl／EqO重排，单色荧光原位杂交也证实14例为4号染色体三体阳性。结论伴有4号染色体三体异常的急性白血病有着独特的临床和实验室特点，其预后不良。     

8号染色体三体38例临床及实验研究

目的 探讨8号染色体三体(8三体)在血液病尤其是髓系疾病发生、发展中的作用及其预后价值。方法 应用8号染色体着丝粒探针对38例染色体核型为8三体的患者进行荧光原位杂交(fluoresence in situ hybridization，FISH)检测。结果 38例患者中32例为髓系疾病(骨髓增生异常综合征、急性髓细胞白血病、慢性髓细胞白血病等)，占84．2％，17例单纯的中8三体患者中14例为髓系疾病(骨髓增生异常综合征、急性单核细胞白血病等)(82．4％)；髓系疾病8三体的发生率高于淋系疾病(5％比1．3％)，而8三体在急性单核细胞白血病中的发生率明显高于其它急性髓细胞白血病(6．1％比2．4％)，在慢性粒-单核细胞白血病中的发生率亦高于其它骨髓增生异常综合征患者(25％比13．2％)；17例患者核型为单纯8三体，其它21例同时伴其它异常，主要有t(9；22)、 22、t(15；17)、 9、 11、i(17q)、 19、 21、 12、5q-、-15、1q-等；FISH检测10例单纯8三体患者，结果均为阳性；10例化疗的急性白血病，7例获得缓解(急性早幼粒细胞白血病3例，急性粒细胞白血病部分分化型、急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病大细胞为主型及急性混合细胞白血病各1例)，3例未获缓解(急性粒细胞白血病部分分化型、急性单核细胞白血病及急性混合细胞白血病各1例)。结论 8三体可能在恶性血液病尤其是髓系疾病的发生发展中具有重要作用；8三体可能与单核细胞的分化异常有关。     

应用组合荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病的基因组异常

目的 探讨应用组合荧光原位杂交(panel fluorescence in situ hybridization，panel FISH)技术对慢性淋巴细胞性白血病(chronic lymphocytic leukaemia，CLL)基因组异常检测的价值。方法 分别应用3号、12号、18号的着丝粒探针和序列探针D13S272(13q14．3)、ATM(11q23)等5种荧光素标记的DNA探针，对22例CLL患者进行FISH检测，并和常规细胞遗传学检测结果进行比较，以确定何种方法对检测CLL的染色体和基因组异常更为敏感可靠。结果 22例CLL患者中，常规细胞遗传学检测出8例(36．3％)有染色体异常，包括单纯 123例； 3、 12l例； 3、 12、 18 1例；t(5；15)1例；13q-1例；3q-、18p 1例；4q 和13q-1例；组合FISH检测出15例(68，1％)有染色体异常，包括 34例、 126例、 18l例、11q-6例、13q-8例。结论组合。FISH技术是检测CLL患者染色体基因组异常的有效手段，与常规细胞遗传学方法相结合则可明显提高CLL染色体异常的检出率。     

荧光原位杂交技术与细胞遗传学分析在慢性淋巴细胞白血病检测中的评价应用

目的比较常规细胞遗传学分析（CCA）及荧光原位杂交（FISH）两种技术在慢性淋巴细胞白血病（CLL）染色体异常检测中的灵敏度和特异性。方法CCA法采用骨髓短期培养法,核型分析采用R带技术。FISH法采用间期FISH。结果采用CCA法,CLL患者的染色体异常检出率为35．71％,而采用FISH技术染色体异常检出率为64．2％。结论采用组合探针的FISH更为敏感和特异。     

染色体异常伴幼淋巴细胞白血病一例

患者　男 ,80岁 ,因乏力、左上腹部包块 1年 ,伴体重减轻 2月 ,于 2 0 0 2年 8月入院。既往有慢性支气管炎病史 ,曾从事采油厂建筑工作多年。病程中无明显诱因出现乏力、低热、夜间盗汗。查体 :T36 .5℃ ,R18次 /分 ,P80次 /分 ,BP17/ 8k Pa,贫血貌 ,皮肤无出血 ,巩膜无黄染。浅表淋巴结未扪及肿大。心肺无异常。腹部膨隆 ,肝肋下 3cm,脾大 ,甲乙线 2 0 cm,甲丙线 18cm,丁戊线 1cm,质硬 ,无触痛 ,无腹水。实验室检查 :血常规 :Hb6 4 g/ L,WBC2 14 .5× 10 9/ L,分叶核粒细胞0 .0 4 ,淋巴细胞 0 .2 9,幼稚淋巴细胞占 0 .6 7,PL T113×…     

17例伴8号三体染色体异常的慢性粒细胞白血病

17例慢粒均为1995年至2005年在我院就诊的门诊或住院患者，男7例，女10例，男：女=1：1．43。年龄13～47岁，年龄分布：10～19岁2例，20～29岁7例，30～39岁4例，40～49岁4例。临床分期：慢性期4例、加速期8例、急变期5例。慢粒的诊断系根据患者的临床表现、血象、骨髓象和中性粒细胞碱性磷酸酶结果，诊断符合《血液病诊断及疗效标准》。     

恶性血液病8号染色体数目异常的间期荧光原位杂交检测

目的　探讨间期荧光原位杂交 (fluorescenceinsituhybridization ,FISH)技术在检测恶性血液病 8号染色体数目异常中的价值。方法　采用常规细胞遗传学 (conventionalcytogenetics ,CC)和 8号染色体着丝粒特异性探针间期FISH技术对 8例CC检测显示 8号染色体数目异常的急性髓细胞样白血病患者、10例慢性髓细胞样白血病加速期或急变期患者和 3名正常人骨髓进行 8号染色体数目检测。结果9例CC检测为三体 8的患者中 ,FISH检测结果均与其一致 ,其中例 5经CC检测仅发现存在二体 8、三体8和四体 8克隆 ,而FISH检测不但证实了三体 8和四体 8克隆的存在 ,还发现存在一个较小的五体 8克隆。例 3和例 17经CC检测只发现一个细胞有三体 8,无法确定是否为三体 8克隆性畸变 ,FISH检测证实有三体 8克隆存在。例 9经CC检测未发现三体 8,FISH检测发现有三体 8克隆存在。与CC检测结果相比 ,除例 16三体 8检出率FISH结果明显高于CC检测结果外 ,其余均低于或接近CC检测结果。结论　间期FISH技术对检测 8号染色体数目异常具有重要价值 ,当CC检测正常、不肯定或中期分裂相质量差、数量少时作用更大 ,是CC的重要补充。     

应用CpG-寡脱氧核苷酸免疫刺激进行慢性淋巴细胞白血病的染色体研究

目的 验证CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)免疫刺激是否能提高B细胞慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)核型异常检出率.方法 抽取57例B-CLL患者的骨髓或外周血,分别加入CpG-ODN DSP30+白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)、美洲商陆(pokeweed,PWM)和IL-2后进行培养,5 d后按常规收获并制备染色体,应用R显带技术进行核型分析.应用Cen12、D13S25、Rb1、ATM、P53、MYB和IgH探针对其中19例核型正常的患者进行组合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测.抽提骨髓或外周血单个核细胞基因组DNA,应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增免疫球蛋白重链可变区(immunoglobulin variable heavy chain,IgVH)并进行DNA序列分析.应用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测白血病细胞的CD38和ZAP70表达.结果 DSP30+IL-2组的异常核型检出率(43.85%)明显高于PHA组(15.09%)、PWM组(17.31%)和IL-2组(3.13%)(P<0.01).DSP30+IL-2组共检出畸变52种.数目异常以+12或+12伴其它异常为最多见(9例);结构异常以易位为最多见(14例),包括平衡易位11例和不平衡易位3例,前者中又以14q32重排为最多见(7例).FISH显示19例正常核型患者中13例(68.42%)显示1种或多种异常,包括12三体和p53缺失各l例,IgH重排和部分缺失各1例,13q14.3缺失11例,其中5例合并RB1缺失,1例合并RB1部分缺失,未见ATM和MYB缺失者.PCR揭示10/18例有IgVH突变(55.55%).FCM检测揭示10/45例CD38+,35/45例CD38-,11/27例ZAP70+,16/27例ZAP70-.同时进行CD38和ZAP70检测的26例中,5例为CD38+ZAP70+,13例为CD38-ZAP70-,2例为CD38+ZAP70-,6例为CD38-ZAP70+.统计学分析揭示复杂核型异常与IgVH无突变之间有相关性,但未发现CD38或ZAP70表达与核型之间有相关性.结论 CpG-ODN可显著提高CLL的核型异常特别是各种平衡和不平衡易位的检出率;FISH是常规核型分析的重要补充,二者结合能提供更全面的遗传学信息.     

慢性B-淋巴细胞性白血病MDM2表达与12号染色体三体畸变

目的 探讨慢性B－淋巴细胞性白血病（B chronic lymphatic leukemia,B-CLL）原癌基因MDM2（murine double minute 2）表达与12号染色体三体（＋12）畸变的关系。方法 采用流式免疫荧光技术对20例慢性B－淋巴细胞性白血病MDM2蛋白表达进行定量分析，采用荧光原位杂交检测＋12畸变，并将结果与传统细胞遗传学检查进行比较。结果 在6例病例中发现＋12的克隆，而且该6例病例MDMD2蛋白表达量较其余14例有显著增高（P＜0.01）。结论 ＋12畸变可作为B－CLL分型的独立指标，MDM2扩增与＋12畸变密切相关，可能是B－CLL的发生、发展机理之一。     

荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病

目的 探讨对慢性粒细胞白血病进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测的意义.方法 对158例慢性粒细胞白血病标本采用24 h短期培养法制备染色体,然后应用双色双融合BCR/ABL探针进行FISH检测,部分标本同时采用R显带技术进行染色体核型分析.结果 158例中共检出Ph阳性标本98例,其中69例(70.4%)为典型双色双融合BCR/ABL探针信号模式(1R1G2F),其余29例(29.6%)为3类12种非典型模式.各种非典型信号模式中出现频率较高的依次为:1R1G1F7例(7.1%)、2R1G1F 5例(5.1%)、1R1G2F&1R1G3F 4例(4.1%)、2R2G1F 3例(3.1%).对18例有核型资料的非典型信号的病例分析显示:其中3例特殊信号系由变异Ph易位引起;2例中出现的3个融合信号来源于附加的Ph染色体;4例核型与FISH结果不吻合,提示染色体分析存在错漏之处;3例染色体为典型Ph易位,而FISH结果为单个融合信号,系由der(9)号的部分缺失所致;3例核型中未发现Ph染色体.但FISH显示40%～64%的细胞中存在一个融合信号,从而明确慢性粒细胞白血病诊断;3例是移植或经格列卫治疗后的患者,染色体均为正常核型,而FISH检测到极小比例的阳性细胞.结论 FISH在慢性粒细胞白血病诊断、判断变异易位、隐匿Ph易位、衍生9号缺失、干扰素及格列卫的疗效观察以及移植后监测等诸多方面均具有重要价值.     

应用荧光原位杂交技术检测84例慢性淋巴细胞白血病遗传学异常及预后分析

 摘要 目的：探讨荧光原位杂交 (fluorescence in situ hybridization,FISH) 技术检测慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)患者的遗传学异常,并分析与其他预后指标的相关性及预后价值。方法：回顾性分析采用FISH技术进行着丝粒探针CSP12(12p11.1～12q11.1)和序列特异性探针D13s25(13q14.3)、ATM (11q22.3)、RB1(13q14)、p53(17p13.1)检测过的84例CLL患者的临床以及实验室资料。分析FISH技术检测CLL患者中遗传学异常的发生率,并分析遗传学异常与CLL患者年龄、性别、Binet分期、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、CD38表达、生存期之间的相关性。结果：(1)84例CLL患者中,62例有至少有一种遗传学异常。遗传学异常的检出率为73.8%。(2)共发现5种遗传学异常,依次为13q14缺失（56%）、P53缺失（28.6%）、-12（16.7%）、ATM缺失（13.1%）、+12（13.1%）。其中-12为CLL病人中新发现遗传学异常。(3)分析上述5种遗传学异常与年龄、性别、Binet分期、LDH水平、CD38表达的关系,在>60岁年龄病人里,+12阳性率显著高于<60岁病人(24%VS3%, P=0.042),与性别、Bient分期、LDH水平、CD38表达无关。(4)在LDH增高组中,CD38高表达的病例比例增高（67%VS20%, P=0.015）。(5) 伴有del(17p13)或del(11q22)或复杂异常中位生存时间为75个月,单纯具有del(13q14)异常组的中位生存时间为150个月,其他中位生存时间为120月,但两两比较没有达到统计学差异。结论：(1)FISH技术是一种在分析CLL患者遗传学异常方面较为快速、准确和敏感的方法; (2)CLL病人中除了常见13q14缺失、P53缺失、ATM缺失、+12之外,还可以出现-12异常。     

髓系白血病患者的临床和细胞遗传学研究

目的研究髓系白血病(myeloid leukemia,ML)患者细胞遗传学特点和相关临床表现及预后。方法采用骨髓细胞直接法和(或)不加植物血凝素的24h体外细胞培养法制备骨髓染色体。应用热变性姬姆萨显带技术为主、胰酶消化技术必要时补充,进行染色体核型分析。结果在578例髓系白血病中:急性髓系白血病(acute myeloid leuckemia,AML)420例,223例检出有克隆性染色体异常,占53.1%(223/420)。t(8;21)、t(15;17)、inv(16)、del(11)分别与M2b、M3、M4Eo、M5特异性相关。慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)158例,153例检出有克隆性染色体异常,占96.8%(153/158例)。t(9;22)与绝大多数CML及少部分M0、M1、M2特异性有关。本组髓系白血病中有18例(AML13例、CML5例)患者,占3.1%(18/578),其细胞遗传学检查未见克隆性染色体异常,与患者的临床表现、骨髓象形态学及免疫学的诊断不尽相同。为此我们应用了荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,其中15例结果完全符合临床和髓系白血病的血液学改变,同时也明显提高了临床的诊断率。结论染色体核型分析不但有助于髓系白血病的诊断和鉴别诊断,而且还是临床监测病情缓解和复发、判断疗效的重要指标。在染色体核型分析基础上选用合适的FISH技术,可对大多数髓系白血病患者作出精确的染色体分析。     

Chromosome aberrations in B-cell chronic lymphocytic leukemia: reassessment based on molecular cytogenetic analysis

In B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) clonal chromosome aberrations are detected in approximately 40–50% of tumors when using conventional chromosome banding analysis. Most studies find trisomy 12 to be the most frequent chromosome aberration, followed by structural aberrations of the long arm of chromosomes 13 and 14. Trisomy 12 and the ”14q+” marker are associated with shorter survival times, while the patients with 13q abnormalities have a favorable outcome, similar to those with a normal karyotype. The development of molecular cytogenetic techniques has greatly improved our ability to detect chromosome aberrations in tumor cells. Using fluorescence in situ hybridization, chromosome aberrations can be detected not only in dividing cells but also in interphase nuclei, an approach referred to as interphase cytogenetics. The prevalence of specific aberrations in B-CLL is currently being reassessed by interphase cytogenetics. By far the most frequent abnormality are deletions involving chromosome band 13q14, followed by deletions of the genomic region 11q22.3-q23.1, trisomy 12, deletions of 6q21-q23, and deletions/mutations of the TP53 tumor suppressor gene at 17p13. The evaluation of the true incidence of these aberrations now provides the basis for more accurate correlations with clinical characteristics and outcome. Deletions/mutations of the TP53 gene have been shown to be associated with resistance to treatment and to be an independent marker for poor survival. 11q deletions have been associated with extensive nodal involvement, rapid disease progression, and short survival times. Whether trisomy 12, 13q14, and 6q deletions have a prognostic impact awaits further study. The application of these molecular cytogenetic techniques will also contribute to the identification of the pathogenetically relevant genes that are affected by the chromosome aberrations in B-CLL. Received: 2 February 1998 / Accepted: 31 March 1998     

伴变异型Ph易位的慢性髓细胞白血病的分子遗传学研究

目的探讨荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）及多重荧光原位杂交（multiplex FISH．M-FISH）技术在检测伴变异型Ph易位（variant philadelphia translocation，vPh）的慢性髓细胞自血病（chronic myeloid leukemia，CML）中遗传学改变的意义。方法对10例常规R显带显示伴vPh的CML以双色双融合FISH技术检测其染色体标本。对于间期细胞中仅有单个融合信号的标本，观察其中期细胞，以确定是否为衍生9号染色体[der（9）]缺失。同时对这10例CML进行M—FISH技术检测。结果FISH技术在10例伴vPh的CML中检测到5例存在der（9）缺失。M—FISH检测到除22号染色体外，1、3、5、6、8、10、11和17号染色体也参与vPh，发现了常规细胞遗传学未发现的异常，包括2种未见报道的异常。结论对伴vPh的CML联合使用常规细胞遗传学、FISH、M—FISH技术可使遗传学诊断更加完善。     

Mitogen-induced maturation of chronic lymphocytic leukemia B lymphocytes

Peripheral blood lymphocytes from eight patients with untreated B-derived chronic lymphocytic leukemia (CLL) (only one had a serum monoclonal immunoglobulin) were stimulated byNocardia, phytohemagglutinin, and pokeweed mitogen. This stimulation resulted in the occurrence in all but one case of large cytoplasmic immunoglobulin-containing cells with a predominantly lymphoblastic (six cases) or plasmacytic (one case) appearance. These blast cells contained the same immunoglobulin chains as those of the surface immunoglobulins on fresh lymphocytes except for chains that were not found by cytoplasmic immunofluorescence. In three cases, intracytoplasmic immunoglobulin inclusions that were present in both small lymphocytes and stimulated blast cells provided further evidence of the differentiation of the leukemic clone. In another case, both small leukemic B lymphocytes and large B blast cells expressedin vitro a receptor for sheep erythrocytes. A switch from IgM to IgG synthesis was observed in this patient, whose cells showed the strongest response to the activators. The most effective activator wasNocardia, then phytohemagglutinin, whereas an effect of pokeweed mitogen was observed only when the fresh lymphocytes contained a fair percentage of T cells. Leukemic cells, in most patients, were able to differentiate without appreciable B-cell proliferation.This work was presented at the Fourth International Congress of Immunology, Paris, 1980 (Abstract 18.4.22).