转染血管内皮生长因子基因对大鼠任意皮瓣成活的影响

OBJECTIVE: To investigate the effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) gene transfection on survival of the random skin flap in rats. METHOD: Thirty SD rats were randomized equally into 3 groups: pcDNA3-VEGF165, pcDNA3 and control groups, with the former two groups transfected via liposome with pcDNA3-VEGF165 and pcDNA3 respectively 48 h before and during the operation. Ischemic random skin flaps ( 1 cmx7 cm) were constructed from the rats. Seven days later, the amount of viable tissue within the flap was measured by planimetry. After the animals were killed, and specimens from the random skin flaps were harvested for immunohistologic evidence of VEGF protein expression and for HE staining to examine the microvascular growth. RESULTS: The results of tissue survival planimetry of the skin flap of pcDNA3-VEGF165, pcDNA3 and control groups were 48.46% +/-3.35%, 30.20%+/-2.16%, and 31.35% +/-1.99%, which were highest in the VEGF- transfected group (P<0.05), in which immunohistochemical staining revealed increased deposition of VEGF in comparison with the other control groups P<0.05 . The VEGF group had also higher average vessel number as compared with the vector and control group (107.72+/-9.42 vs 91.35+/-7.28 and 89.85+/-7.66, P<0.05), and smaller average vessel lumen diameter (25.76+/-3.23 microm vs 32.12+/-1.58 microm and 33.49+/-2.29 microm, P<0.05). CONCLUSION: pcDNA3-VEGF165 transfection may enhance the survival of the ischemic skin flaps and achieve VEGF expression in the flaps in rats.     

脂质体介导血管内皮生长因子基因促进大鼠皮瓣成活的实验研究

目的:探讨脂质体介导血管内皮生长因子基因转染大鼠皮瓣,对皮瓣成活和断蒂时间的影响。方法:将30只SD大鼠作为实验模型,随机分为三组,每组10只,制作背部随意皮瓣,分别注入脂质体包裹的PcDNAVEGF165(目的基因组)、PcDNA(空白质粒组)、NS(生理盐水组)。术后3d断蒂,断蒂后7d处死大鼠观察:(1)断蒂后各组皮瓣成活率比较。(2)取皮瓣组织标本常规HE染色,检测平均微血管数目及内径。(3)取皮瓣组织标本行VEGF免疫组化染色检测VEGF表达情况。(4)取皮瓣组织标本在透射电镜下观察超微结构。结果:目的基因组皮瓣平均成活率明显高于空白质粒组和生理盐水组两对照组,平均血管数目明显多于两对照组,目的基因组皮瓣远端血管数目多于近端,免疫组化染色深度明显高于两对照组,均具有统计学意义(P<0.05)。超微结构可见VEGF基因转染组有新生血管形成,内皮细胞内可见较多粗面内质网、线粒体等结构,组织内成纤维细胞增多,细胞合成代谢旺盛。结论:局部注射VEGF基因后可以增加缺血皮瓣血管新生,提高皮瓣成活率,缩短带蒂时间,是一种相对简单、高效的治疗方法。     

血管内皮生长因子促进皮瓣成活的研究现状与进展

皮瓣借蒂部与本体相连保存了相当的血循环 ,大大提高了组织缺损修复和功能重建的效果 ,在整形外科应用广泛。多年来尽管皮瓣的设计和手术技巧在不断改善 ,也尝试采用一些药物学方法和非药物学方法改善皮瓣存活 ,但皮瓣坏死始终是一个常见的临床问题。伴随整形外科事业的发展 ,皮瓣坏死的防治及机制研究成为整形外科医生研究的热点。血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)又称血管通透因子 (vascularpermeabilityfactor,VPF) ,是 2 1世纪 80年代发现的一种能特异性作用于血管内皮细胞的促血管生成因子 ,具有维持血管正…     

血管内皮生长因子对皮瓣清除细菌的影响

皮瓣 (skinfiap)是具有自带血供的复合组织瓣。在整形外科中应用较为广泛 ,成为整形外科进行修复再造手术的重要手段。在外科临床实践中 ,伴有严重污染和感染的皮肤软组织创面颇为常见 ,这类创面常延迟愈合 ,有的甚至不能愈合 ,当伴有局部血运障碍时更增加了创面的愈合难度。单凭皮瓣本身的清除细菌能力改善皮瓣成活是有限的 ,多年来一些学者采用了一些药理学[1,2 ] 和非药理学[3 ] 的方法来改善皮瓣成活 ,提高抗菌力 ,但皮瓣感染、坏死仍是一个常见问题。随着人们对血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及其生理作用…     

局部应用血管内皮生长因子基因对大鼠皮瓣不同部位作用的实验研究

目的局部应用血管内皮生长因子基因转染大鼠皮瓣,初步探讨其对皮瓣成活率的影响及对皮瓣不同部分促血管作用效果。方法将30只SD大鼠作为实验模型,随机分为3组,每组10只,制作背部随意皮瓣,分别注入脂质体包裹的PcDNAVEGF165（目的基因组,实验组）,PcDNA（空白质粒组,对照组）,NS（生理盐水组,对照组）。术后4d断蒂,断蒂后7d处死大鼠观察：（1）各组皮瓣成活率比较。（2）取皮瓣远端活组织标本行常规HE染色,检测平均微血管数目及内径。（3）取皮瓣远端活组织标本行VEGF免疫组化染色观察VEGF表达情况。（4）取目的基因组皮瓣远段,中段,近段成活组织标本常规HE染色,检测平均微皮瓣血管数目。结果目的基因组皮瓣平均成活率明显高于空白质粒组和生理盐水组两对照组,平均微血管数目明显多于两对照组,且为管径较小的新生血管,均具有统计学意义（P〈0.05）。免疫组化染色强度高于两对照组。目的基因组皮瓣远端血管数目多于近端,具有统计学意义（P〈0.05）。结论局部注射VEGF基因后可以增加缺血皮瓣血管新生,提高皮瓣成活率,在皮瓣不同部位促血管增生作用不同。     

腺病毒介导的反义血管内皮生长因子基因转染治疗胰腺癌的实验研究

目的：构建并鉴定反向插入VEGF165cDNA的重组腺病毒,探讨腺病毒介导的VEGF165反义核酸治疗胰腺癌的可行性。方法：应用基因重组技术，将513bp的人VEGF165cDNA反向克隆入腺病毒粘粒载体pAxCAwt。重组粘粒与腺病毒DNA－TPC混合后以磷酸钙共沉淀法转染293细胞制备重组腺病毒。建立胰腺癌裸鼠皮下种植瘤模型，瘤体内直接注射重组腺病毒，观察肿瘤的生长及血管生长情况。结果：成功构建了反向插入VEGF165cDNA的腺病毒粘粒载体pAxCAwt-αVEGF并制备出高滴度的重组腺病毒。实验第5周时肿瘤生长速度Ad-αVEGF治疗组比PBS和Ad-LacZ对照组均明显减慢（P＜0．01）；肿瘤微血管密度Pd-αVEGF治疗组比两个对照组均明显减少（P＜0．01）。结论：腺病毒介导的VEGF165反义核酸可以抑制胰腺癌的血管生成和肿瘤的生长，为抗血管生成的基因治疗提供了实验依据。     

血管内皮细胞生长因子基因转染血管内皮祖细胞移植促进缺血皮瓣存活的实验研究

目的探讨VEGF165基因转染血管内皮祖细胞(EPCs)移植促进缺血皮瓣的血管新生,提高皮瓣存活率。方法体外分离、培养人脐血中EPCs,利用脂质体介导血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因体外转染EPCs,然后移植于裸鼠随意皮瓣,皮瓣早期断蒂。结果脐血中分离培养的EPCs表达CD34、KDR及CD133,VEGF165基因转染EPCs体外及体内检测均有VEGF165蛋白的表达。转染VEGF165基因的EPCs组和EPCs组移植裸鼠皮瓣后,EPCs整合到缺血部位新生血管中,与对照组的皮瓣存活率分别为97 2% ±2 8%、60 3% ±2 1%、34 2% ±1 8% (P<0 05 ),而且前二组毛细血管密度、血流灌注差异均有统计学意义(P<0 05),较对照组均有明显改善(P<0 05)。术后第7d时三组皮瓣中的EPCs密度分别为136个/mm2 ±10个/mm2、75个/mm2 ±6个/mm2、0个/mm2 (P<0 05 ); 第11天时EPCs密度分别为305个/mm2 ±26个/mm2、199个/mm2 ±18个/mm2、0个/mm2 (P<0 05)。结论脐血中的EPCs体外培养后移植体内可促进缺血皮瓣的血管新生,提高存活率,而转染VEGF165基因的EPCs具有更强大的促血管新生的作用。     

血管内皮生长因子与皮瓣存活

皮瓣部分坏死一直是修复重建外科领域的一大难题.不充分的血液灌注以及缺血-再灌注损伤被认为是导致组织和血管多维损伤的主要因素,最终导致皮瓣坏死.     

经心包腔转染腺病毒血管内皮生长因子165基因对猪冠脉血管形成的影响

目的:探讨以腺病毒为载体的血管内皮生长因子165(Ad-VEGF165)基因经心包腔转染的表达规律、合适的剂量及对缺血心肌血管生成的作用.方法:随机将20头中华小型猪分为实验组和对照组,每组10头.采用球囊堵塞前降支第一对角支远端建立心肌梗死模型.构建后即刻,实验组采用经皮剑突下穿刺,中心静脉导管插入心包腔内,以含胶原酶1 200 u及透明质酸酶3 000 u的生理盐水2 ml预处理心包后,在心包腔内注入含Ad-VEGF165基因2.0×109pfu的生理盐水1 ml;对照组同样方法预处理心包后,在心包腔内注射生理盐水1 ml.注射后3 d(n=2)、7 d(n=2)及28 d(n=6)分别用免疫组化、超声心动图检测缺血心肌血管新生情况及心功能,并以酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测血浆及心肌组织中Ad-VEGF165的表达.结果:Ad-VEGF165基因经心包腔转染缺血心肌组织后,在心肌组织中呈高表达,于7 d达到高峰,28 d降至基线水平,血浆中无目的基因的表达;28 d时,实验组缺血心肌微血管密度(MVD)、心功能均明显高于对照组(MVD(517.00±75.70)mm-2vs(226.50±54.10)mm-2,P=0.009;LVEF(%)(72.11±5.20)w(55.14±4.37),P=0.005).结论:用胶原酶及透明质酸酶预处理心包后,经其转染Ad-VEGF165可以诱导急性心肌梗死模型局部VEGF蛋白表达,促进缺血心肌组织血管新生并能改善心功能.     

血管内皮生长因子基因治疗心血管疾病的研究进展

心血管病的基因治疗为不断发展的分子医学领域提供了巨大的机会和挑战。血管内皮生长因子（VEG）也称血管内皮致有丝分裂国子，发现20余年来，对它的认识进展较快。对其基因、转基因治疗的研究近来有了新的较大进展。临床应用VEGF基因治疗选择性心血管疾病正在不断地接近实现。IVEG及其基因的特性80年代由Dvorak等发现的＼qZGF，起初被认为是一种使血管渗漏的因子，并取名为血管渗透因子。80年代后期又有人发现它有强力的血管生成作用一刺激内皮细胞移行和复制一l。VE（｝F是一种热稳定的二聚蛋白，许多细胞能产生＼工GF。在缺氧组…     

腺病毒载体介导的VEGF165基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究

目的 探讨局部应用以腺病毒为载体的血管内皮生长因子(Ad-VEGF165)基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响.方法 选用SD大鼠30只,体重350～400 g,随机分成3组,每组10只,在其背部形成8 cm×2 cm的全厚随意型皮瓣.于皮瓣远端皮下分别注射携带血管内皮生长因子基因的腺病毒(Ad-VEGF165目的基因组,简称VEGF165组),携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP基因组对照,简称GFP组),磷酸盐缓冲液(PBS空白对照组,简称PBS组),48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7天,测量皮瓣的成活面积,计算成活面积百分比,并采集成活皮瓣组织行免疫组化、组织学检查等.结果 皮瓣成活面积百分比VEGF165组为(69.4±1.3)%,GFP组为(52.2±1.7)%,PBS组为(52.9±2.9)%,VEGF165组皮瓣成活面积百分比明显高于GFP组和PBS组(P＜0.01).免疫组化显示VEGF165组毛细血管周围VEGF沉积,组织切片微血管密度明显高于GFP组和PBS组(P＜0.01).结论 局部皮下注射Ad-VEGF165可诱导局部VEGF蛋白表达,促进新生血管的形成,提高缺血皮瓣的成活面积,是一种简单有效的基因治疗方法.     

Vascular endothelial growth factor gene transfection to enhance the repair of avascular necrosis of the femoral head of rabbit

Avascularnecrosisofthefemoralheadisadebilitatingdiseasethatusuallyleadstodestructionofthehipjointandincreasingmusculoskeletalmorbidityinyoungandmiddleagedpatients Totaljointreplacementiscommonlyusedtotreatdisablingsecondaryosteoarthrosis Althoughthemostrecentimprovementsintotalhipreplacementmaydecreasefailure,thepatientsareusuallyyoungandcurrenthipprostheseswon’tfunctionwellfortheremaininglifeexpectancyofthesepatients Thus,it’snecessarytodelayoreliminatetheneedforhipreplacementbytreatingthis…     

大鼠颌下腺血管内皮生长因子cDNA的转移及表达

目的：探讨以颌下腺为靶器官,进行血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因治疗后,颌下腺中ＶＥＧＦ含量变化。方法：构建了ＶＥＧＦ基因表达的真核细胞表达载体,以阳离子脂质体为介质,向大鼠颌下腺转染外源性的ＶＥＧＦ基因,应用ＲＴ－ＰＣＲ技术观察ＶＥＧＦ基因的表达,ＥＬＩＳＡ方法检测颌下腺中ＶＥＧＦ的含量变化。结果：转ｐＢＫＣＭＶ－ＶＥＧＦ１２１基因后第１天,大鼠颌下腺内ＶＥＧＦ的表达及涎液中ＶＥＧＦ的含量即开始     

抗人VEGF发夹状核酶基因的合成、克隆、表达及活性鉴定

目的 构建抗人血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）发夹状核酶基因,并在体外检测其切割活性。方法 化学法合成的人ＶＥＧＦ核酶基因定向克隆人真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中,并在体外同时转录ｐｃＤＮＡ３－ＲＺ,检测核酶的切割功能。结果 经ＥｃｏＲＩ和ＶａｍＨⅠ酶切鉴定证实核酶基因片段大小正确,所产生的核酶具有切割活性。结论 成功地构建了抗人ＶＥＧ     

Vascular endothelial growth factor promotes angiogenesis in gastric carcinoma

Objective: To explore the role of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the angiogenesis and development of human gastric carcinoma. Methods: The expressions of VEGF and its receptor KDR (ki-nase-domain insert containing receptor) in human gastric cancer tissue and SGC-7901 cells were detected with immunohistochemical staining. Microvessel density (MVD) was obtained after immunostaining for Factor-VIII. VEGF in SGC-7901 cell line was detected with Western blot. VEGF levels were manipulated in human gastric cancer cell by using eukaryotic expression vector containing the complete VEGF165 complimentary DNA in either the sense or antisense orientation. Finally the biological characteristics of the transfectants were identified. Results: VEGF-positive rate in TNM grade I and IV gastric carcinomas (19. 0%) were significantly higher than that in grade I and I (72. 4%) (P<0. 05). Increased MVD was found in VEGF-positive tumors (16. 4±6. 7). which is significantly larger than in VEGF-negative tumors (6.     

局部应用血管内皮细胞生长因子对大鼠缺血皮瓣存活能力的影响

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)对大鼠缺血皮瓣存活能力的影响。探讨其作用机制和局部更有效的给药途径。方法将45只SD大鼠,随机分为A、B、C三组,每组15只。于背部作6 cm×1.5 cm蒂位于双侧髂棘连线上的全层缺血皮瓣。A组在皮瓣下注射生理盐水,B组皮瓣下注射VEGF生理盐水溶液,C组皮瓣下放置含VEGF生理盐水溶液明胶海绵,原位缝合皮瓣。术后第3,7,14 d观察缺血皮瓣的成活面积,并进行组织学观察,用RT-PCR方法检测皮瓣中VEGFmRNA的含量。结果14天时,C组皮瓣的成活面积率明显高于B组(P<0.05),且B组高于A组(P<0.05)。B组VEGFmRNA表达水平高于A组但低于C组(P<0.01)。结论VEGF的局部应用,可以加速皮瓣内血管再生,从而改善了大鼠缺血皮瓣远端的血供状态,尤其采用明胶海绵携带VEGF皮瓣下放置的方法,更能明显地增强缺血皮瓣的成活能力。     

Vascular endothelial growth factor gene transfer improves host endothelializat ion of xenogeneic biologic heart valve in vivo

Ｔｈｅｍａｊｏｒｃａｕｓｅｏｆｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎａｃａｒｄｉａｃｖａｌｖｅｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓｉｓｔｉｓｓｕｅｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ,ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ ,ｗｈｉｃｈｃａｎｄｉｒｅｃｔｌｙｉｎｆｌｕｅｎｃｅｔｈｅｌｏｎｇ ｔｅｒｍｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｕｌｔｓ Ａｂｏｕｔ 2 5 %ｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｒｅｃｅｉｖｉｎｇｂｉｏｌｏｇｉｃｖａｌｖｅｓｎｅｅｄｒｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎ10ｙｅａｒｓｏｆｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ａｌｔｈｏｕｇｈｓｏｍｅｒｅｓｅａｒｃ…