非综合征型遗传性聋家系系谱分析及mtDNA 12SrRNA tRNA^Leu（UUR） tRNA^Ser（UCN）基因突变分析

目的：探讨非综合征型遗传性聋(NSHL)家系中线粒体基因(mtDNA)突变所占比重以及母系遗传的统计学规律。探讨mtDNA突变与遗传性聋的关系及突变在这类家系及散发感音神经性聋(SNHL)中的发生率。方法：收集遗传性NSHL家系29个，行家系调查；对家系进行形式遗传学分析、分离分析；采取外周血，从白细胞中抽取DNA；以多重聚合酶链反应(PCR)法检测mtDNA(nt)1555^G、7445^G、3243^G点突变；行mtDNA 12SrRNA，tRNA^Leu(UUR)及tRNA^Ser(UCN)基因序列测定。结果：多重PCR检测示mtDNA突变家系12个；形式遗传学分析确定为显性遗传不规则外显的家系，mtDNA突变率高；分离分析结合mtDNA突变检测示：母系遗传不具有常染色体遗传基因分离比。经测序证实，12个家系具有mtDNA突变；形式为：1555^G突变家系10个，7445^G突变家系2个，未发现3243^G突变家系。结论：母系遗传与常染色体显性及隐性遗传基因传递分离比有差异；mtDNA突变在NSHL中占较高比例，主要形式是1555^G及7445^G突变。在散发病例中发生率很低；7445^G结合1555^G点突变筛查对SNHL的诊断有重要意义。多重PCR法是mtDNA多基因突变位点简便的检测方法。     

福建省486例耳聋患者致聋原因及线粒体DNA突变分析

目的 分析486例耳聋患者的致聋原因,探讨线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变与耳聋的关系.方法 对486例耳聋患者进行病因学调查,并同时进行线粒体DNA1 555、3 243、7 445突变位点的检测.结果 486例中发现家族遗传性聋126例(25.9%),药物性聋221例(45.5%),近亲结婚致聋39例(8.02%),高热或耳部疾病致聋76例(15.6%),不明原因致聋24例(4.9%);在486例耳聋患者中,mtDNA A1 555G突变阳性44例,突变阳性率为9.05%,其中32例为同质性突变,12例为异质性突变;检出1例mtDNA G7 444A突变;所有样本均未检出mtDNA A3 243G、mtDNA A7 445G突变.结论 遗传因素和使用耳毒性药物是导致耳聋的重要原因,mtDNA A1 555G突变是常见的突变形式,是氨基糖苷抗生素致聋的重要原因.     

一母系遗传氨基糖苷类抗生素致聋家系线粒体DNA A1555G突变检测

目的 应用耳聋基因芯片对一母系遗传氨基糖苷类抗生素致聋家系和散发的非综合征性耳聋患者进行分子病因学研究.方法 采集一母系遗传耳聋家系2代共12人和散发非综合征耳聋患者68人的外周静脉血,从白细胞中提取DNA,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,应用耳聋基因芯片检测中国人常见的药物性耳聋相关基因--线粒体DNA A1555G突变.结果 家系中有7份样品存在线粒体DNA 12S rRNA 1555位点A→G的突变.其余样品为A1555G点突变阴性;而散发的耳聋患者中未检测出一例携带此突变.结论 线粒体DNA A1555G点突变是导致该家系致聋的主要因素之一,具有母系遗传耳聋特点.     

云南省10个非综合征性聋家系mtDNA 12S rRNA A1555G突变流行病学调查及分析

目的:探讨云南省10个非综合征性感音神经性聋家系的mtDNA 12SrRNA A1555G突变筛查、流行状况、遗传规律及对于特定药物干预预防的意义。方法:对10个家系以现场问卷方式调查母系家族耳聋的发病情况并绘制出详细的母系家系图,然后对自愿参与检测的母系成员采外周静脉血提取DNA,PCR扩增目的片段、限制性酶切检测A1555G突变阳性个体。结果:10个家系中参与采血者共96例,其中听力正常36例,感音神经性聋患者60例;经过筛查,4例无A1555G位点突变,92例(95.8%)有A1555G位点突变,其中7例为异质性表现,85例为均质性突变;73例有明确氨基苷类抗生素用药史,其余抗生素用药史不明确。结论:云南省药物性聋患者的比例较大,并且mtDNA 12SrRNA A1555G突变率高,对该地区进行mtDNA 12SrRNA A1555G突变筛查及药物干预预防宣教有重要意义。     

母系遗传性聋线粒体基因的突变

目的为建立母系遗传性聋的基因诊断方法,从分子水平探讨其发病机理。方法收集母系遗传性聋2个家系（31名个体）和健康中国人对照组100例的外周血,提取DNA。PCR扩增mtDNA目的片段,分别以Alw261、Apal、Xbal、Bbvl限制性内切酶检测1555G、3243G、7445G、7598A点突变;行mtDNA 12SrRNA、tRNAleu（UUR）、tRNASer（UCN）、COⅡ基因测序。Bbvl酶切检测100个白种人7598A点突变作为另一组对照。结果D家系的7个患者和E家系的6个患者以及他们的母系后代和2例正常中国人CoⅡ基因片段有一个7684T→C（Leu33Leu）同义突变。D家系的7个患者以及母系后代和100例正常中国人对照组中2人有7598G→A（Ala5Thr）错义突变,D家系患者的配偶、E家系和100例正常白种人均未发现7598G→A点突变。所有被检对象1555G、3243G、7445G点突变均为阴性。结论7684T→C（Leu33Leu）,7598G→A（Ala5Thr）是2个新的线粒体基因的多态性改变,很可能还有其它线粒体点突变与母系遗传性聋有关。     

一个氨基糖甙类药物致聋家系线粒体DNA全序列分析

目的 评估线粒体单倍型对一个氨基糖甙类药物致聋家系中12S rRNA A827G突变表型的影响.方法 用基因组DNA抽提试剂盒提取外周血DNA,PCR扩增家系成员mtDNA 12S rRNA基因进行A827G突变的测序验证,对携带A827G突变的家系先证者进行mtDNA全序列PCR扩增和测序分析,结果 与修正的剑桥参考序列比对,识别除A827G以外的突变位点.结果 5名母系成员mtDNA 12S rRNA序列分析均检测到A827G突变.与修正的剑桥参考序列及家系配偶相比,先证者的mtDNA全序列分析显示出独特的多态性改变,除已知的12S rRNAA827G突变外,另检测到24个碱基变异,其中12S rRNA基因A783C、G786C以及ND4基因C11720A突变(L319A)为首次发现.系统进化法分析显示,上述多态性位点均位于mtDNA非保守区域.结论 线粒体单倍型对该家系mtDNA A827G突变的表型表达无明显影响.     

线粒体DNA突变致聋家系检测及单倍型分析

目的 探讨母系遗传氨基糖甙类抗生素诱发致聋家系的线粒体DNA突变情况及其单倍型背景.方法 收集贵州遵义地区6个母系遗传非综合征性耳聋家系的临床资料及血液样本,经PCR-RFLP(polymerase chain re-action-restriction fragment length Polymorphism,聚合酶链反应-限制性片段长度多态)及测序技术检测线粒体DNA1555G突变,并通过对各家系线粒体DNA高变区序列测定及编码区限制性片段多态性分析以划分单倍型类群.结果 经酶切及测序证实其中4个家系存在线粒体DNA 1555G突变,分别属于A、D6、G及M*单倍型.结论 该地区线粒体DNA 1555G突变引起氨基糖甙类抗生素高度敏感致聋的家系发生率较高,线粒体DNA1555G突变致聋家系呈现不同的线粒体单倍型类型.     

遗传性耳聋家系线粒体DNA 961delT/insC(n)突变的致病性分析

目的 探讨线粒体DNA 961delT/insC(n)突变与氨基甙类药物性耳聋的相关性.方法 对一个耳聋家系11个成员采集氨基甙类抗生素用药史、进行听力学检查、表型分析,采集外周静脉血样本,从白细胞中提取DNA,用聚合酶链反应扩增线粒体DNA(mtDNA)全序列,对扩增片段进行DNA测序,对发现的基因突变与耳聋表型进行分离分析.结果 参与研究的所有9例母系成员均检出mtDNA 961delT/insC(n)突变.有明确氨基甙类抗生素用药史的4例中只有2例耳聋患者,其中1例为用药之前出现的先天性聋,另1例为用药后38年出现的轻度耳聋.突变不与耳聋共分离.结论 本研究不支持mtDNA 961de1T/insC(n)突变是该家系耳聋的致病突变,mtDNA 961位点附近可能是一个多变异的区域,mtDNA 961delT/insC(n)可能是一个与氨基甙类药物性耳聋不明确相关的多态.     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA A1555G突变分析

目的 研究线粒体12S rRNA基因A1555G点突变与氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的关系，为建立相应的基因诊断方法提供依据。方法 收集了五个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的耳聋家系共23名成员的外周静脉血标本，从白细胞中提取DNA，PCR扩增线粒体DNA片段，限制性内切酶分析和DNA序列分析检测A1555G点突变。结果 五个家系有母系血缘关系的18份样品均为A1555G点突变阳性，5名配偶为A1555G点突变阴性。结论 线粒体DNA A1555G点突变是氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性最主要的原因，检测A1555G点突变对氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的预测有重要意义。     

Prev-DAF试剂盒分析线粒体基因1555A-G突变

目的建立应用标准试剂盒方法检测线粒体基因1555A-G(mtDNA1555A-G)突变的程序,进行母系遗传耳聋家系的基因型分析.方法采用Prev-DAF试剂盒分析14个母系遗传耳聋家系,共检测耳聋患者34个,正常个体11个,并以Alw26酶切和测序方法验证试剂盒检测的准确性.结果Prey-DAF试剂盒检测结果证实13个家系中33个耳聋患者携带有mtDNA1555A-G突变,另1个耳聋家系中的一名耳聋患者不携带此突变,11个正常个体中无此突变,试剂盒检测方法与Alw26I酶切法和测序结果完全吻合.结论在中国,mtDNA1555A-G氨基糖甙类抗生素致聋的家系多,分布广,Prev-DAF试剂盒在分析线粒体基因1555A-G突变方面具有简单、低耗、结果直观的特点,适合在中国用于进行此突变的大规模筛查或预防性检查.     

国人无综合征性耳聋患者的线粒体基因组7445^A→G突变263 …

OBJECTIVE: To study the Mitochondrial DNA 7445A-->G mutation in nonsyndromic deafness patients in Chinese population. METHOD: Polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) were used to screen the mitochondrial DNA 7445A-->G mutation among 128 nonsyndromic deafness individuals from 32 pedigrees, 135 sporadic nonsyndromic deafness patients and 100 normal subjects. RESULT: The 7445A-->G mutation did not appear in the experiment. CONCLUSION: Incidence of the mitochondrial 7445A-->G mutation was lower than that of mtDNA 1555A-->G mutation in nonsyndromic deafness patients in China.     

线粒体DNA突变与非综合征感音神经性聋

目的 分析非综合征感音神经性聋（non-syndromic sensorineural hearing loss,NSSNHL)患者及听力正常者中3种线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA)突变的发生频率，探寻mtDNA突变在NSSNHL发病中的可能作用。方法 收集年龄从3－84岁的61例散发的NSSNHL病例，6－68岁的19例听力正常人外周血，提取白细胞DNA，结合应用中断法聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)及引物交换PCR方法检测mtDNA^4977缺失，应用PCR方法及限制性片段长度多态性分析检测mtDNA^1555A→G和mtDNA3243A→G点突变，PCR产物以全自动激光荧光测序仪做序列分析。结果 （1）耳聋组及对照组的mtDNA^4977缺失检出率（缺失例数／总例数）分别为68．85％（42／61）及5．26％（1／19）；（2）所有样本均未检出mtDNA^1555A→G及mtDNA^3243A→G点突变。结论 NSSNHL组mtDNA^4977缺失发生频率明显高于听力正常组，提示mtDNA^4977缺失可能是NSSNHL患者发病的一个重要的作用因素；mtDNA^1555A→G点突变，mtDNA^3243A→G点突变在NSSNHL患者中不常见。     

Audiological and genetic features of the mtDNA mutations

CONCLUSIONS: Significant difference in the incidence of mitochondrial DNA (mtDNA) mutations was found between the Chinese and USA populations. The identification of the mtDNA A1555G mutation in a large proportion of Chinese probands with nonsyndromic sensorineural hearing loss (NSHL) provides a molecular explanation for the high prevalence of aminoglycoside-induced deafness in China. OBJECTIVE: The aim was to characterize the audiological and genetic features of NSHL due to mutations in mtDNA. SUBJECTS AND METHODS: The mtDNA and audiogram analyses were performed in 498 NSHL patients (290 from China and 208 from the USA) with and without history of aminoglycoside exposure. A PCR and restriction enzyme digestion protocol was used for mutational screening and the European Workshop on Genetic Hearing Loss criteria were applied for audiological classification. RESULTS: All Chinese probands (15.5%) with mtDNA mutation were found to carry the homoplasmic mtDNA A1555G mutation, whereas four probands (1.9%) from the USA were found to carry the mtDNA A1555G and two (1%) had mtDNA G7444A. Approximately 63% of the probands with mtDNA mutations had post-lingual hearing loss and 56.8% of them had a medical history of exposure to aminoglycosides. Hearing losses are bilateral, sensorineural, and symmetric. The main audiogram shapes found were sloping.     

湖南地区汉族非综合征型耳聋相关基因检测及热点突变分析

目的研究湖南地区汉族非综合征型耳聋（NSHL）患者中GJB2、SLC26A4基因的突变频率和突变热点,了解线粒体DNA（mtDNA）12SrRNA A1555G突变的频率。方法收集湖南地区汉族NSHL患者共139例,抽取外周静脉血并提取DNA;分别采用直接测序、变性高效液相色谱法（denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC）和聚合酶联-限制性片段变态（polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR RFLP）技术对患者进行GJB2、SLC26A4基因和mtDNA 12SrRNA A1555G突变的检测;对SLC26A4基因突变者进行回访并行高分辨颞骨CT检查。结果61例（43.9%）NSHL患者至少携带一种常见耳聋相关基因突变,GJB2、SLC26A4和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变的检出率分别为23%、18.7%和3.6%;共发现6种GJB2和13种SLC26A4基因已报道致病性突变,235delC和IVS7-2A〉G分别是GJB2和SLC26A4基因最常见的突变类型,分别占这两个基因突变等位基因的87.5%和46.5%;与SLC26A4基因突变有关的EVAS的发生率为14.4%,低于该地区GJB2基因相关性耳聋的发生率17.3%。结论湖南地区汉族NSHL中43.9%的患者携带常见耳聋基因突变,反映湖南地区遗传性耳聋高发的现象。GJB2基因突变是该地区NSHL最常见的原因,其次为SLC26A4基因。235delC、IVS7-2A〉G和A1555G突变分别是GJB2、SLC26A4和线粒体DNA基因的热点突变,占所有突变的71.2%。通过筛查,为其中35.3%的患者明确了分子病因。为该地区进一步开展遗传咨询、基因诊断和产前诊断提供了重要的依据,并为临床用药提供指导。     

Mitochondrial DNA A1555G mutation screening using a testing kit method and its significance in preventing aminoglycoside-related hearing loss

Mitochondrial DNA(mtDNA) mutations have beenfound to be associated with sensorineural hearing loss.(Fishel-Ghodsian 1999, and Joacobs 2003) In particular,the 12S rRNA gene has been shown to be a hot spot foraminoglycoside induced and non-syndromic hearingloss in different populations across the world. Severaldeafness associated mtDNA mutations have been identi-fied in this gene. Obviously, the A1555G mutation inthe highly conserved decoding site of the 12S rRNA hasbeen associated with…     

中国西北地区线粒体DNA12SrRNAA1555G和GJB2基因突变

目的研究mtDNA 12SrRNA A1555G突变和GJB2突变在西北地区非综合征型感音神经性聋患者中的流行情况,探讨GJB2基因与mtDNA A1555G点突变的关系。方法收集本地区221例非综合征感音神经性聋患者的基因组DNA,多聚酶链反应扩增线粒体DNA和GJB2基因目的片断,Alw26Ⅰ限制性内切酶检测A1555G点突变,对酶切阳性病例和全部的GJB2基因的PCR产物进行DNA测序。结果21例患者检出mtDNA 12SrRNA A1555G突变;发现GJB2基因11种序列改变,有44例患者检出GJB2致病突变,235delC占携带致病突变患者的54．54％：在21例A1555G突变患者中,11例为GJB2基因多态改变,9例未检出GJB2基因序列改变,1例为109G→A（V371）突变。结论mDNA 12SrRNA A1555G在这一地区人群中有较高的发生频率．235delC是本地区GJB2基因突变的主要形式,GJB2基因突变不是mtDNA A1555G突变致聋的主要修饰因素。     

线粒体DNAA1555G突变筛查在药物性耳聋预防和康复中的作用探讨

目的通过调查16个由线粒体DNA（mtDNA）A1555G突变导致的非综合征性感音神经性耳聋家系母系家庭成员耳聋的发病状况,分析在敏感人群中进行mtDNAA1555G突变基因筛查在预防药物性耳聋以及指导耳聋康复和治疗过程中的必要性。方法应用自主研制的线粒体DNAA1555G突变检测试剂盒筛查出16个mtDNAA1555G突变阳性个体,并对这些个体进行详细的家系分析,了解阳性病例所有母系家庭成员的听力状况,绘制详细家庭系谱图,对母系成员中未发病者进行耳聋预防和康复宣教。结果16例耳聋病例中均存在mtDNAA1555G突变,在家系调查中发现,存活母系家庭成员239人,耳聋发病19人（含先证者）,未发病220人。结论在耳聋人群中进行mtDNAA1555G突变基因筛查发现氨基糖甙类抗生素（AmAn）致聋敏感个体,进而对其未发病母系家庭成员进行防聋宣教是预防药物性耳聋发生、降低药物性耳聋发生率的有效措施,同时对于已经耳聋的敏感个体,明确其发病的原因也是指导其康复、避免听力恶化的重要环节。     

非综合征型聋患者线粒体DNA A1555G突变频率分析

目的分析甘肃地区非综合征型聋患者线粒体DNA 12SrRNA A1555G的突变频率。方法收集甘肃地区五所聋哑学校802例聋哑学生血样，经基因组DNA提取后进行聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增线粒体DNA目的片段，用A1w26I限制性内切酶检测A1555G点突变，对酶切阳性病例的PCR产物纯化后进行直接测序验证酶切结果，分析线粒体DNA 12SrRNA A1555G在甘肃地区的突变频率。结果802例聋哑学生中有67例经酶切及直接测序证实为线粒体DNA A1555G突变，突变频率为8．4％（67／802）。其中有15例母系家庭成员中还有2例以上耳聋患者。结论线粒体DNA 12SrRNA A1555G点突变在甘肃地区非综合征型聋患者中占有很高的比例，高于国内外其他地区的相关报道。此研究结果不仅为绘制中国人群线粒体DNA A1555G突变频谱增添新的内容，也为因地制宜地开展耳聋基因诊断、实施遗传咨询及积极预防耳聋的发生有重要的指导意义。     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA1555G点突变分析

目的考察１５５５Ｇ点突变与氨基糖甙类抗生素致聋的对应关系，建立相应的基因诊断方法提供依据。方法收集了３个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的母系遗传耳聋家系１３人（包括聋人和听力正常者）的外周静脉血标本，聚合酶链反应扩增线粒体ＤＮＡ，Ａｌｗ２６Ｉ限制性内切酶分析、ＤＮＡ斑点杂交和ＤＮＡ序列分析检测１５５５Ｇ点突变。结果家系１和３的７份样品均为１５５５Ｇ点突变阳性，家系２的６份样品为１５５５Ｇ点突变阴性。结论发现１个１５５５Ｇ点突变阴性的氨基糖甙类抗生素致聋家系，说明线粒体ＤＮＡ１５５５Ｇ点突变不是氨基糖甙类抗生素遗传易感性唯一的分子基础。