矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞向成骨细胞样细胞的分化

目的:探讨矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞(HDPSCs)向成骨细胞样细胞分化的潜力.方法:矿化液诱导前磨牙HDPSCs 28d,于诱导的第7、28天时,应用酶化学染色检测碱性磷酸酶(ALP)表达;第14、21、28天时,应用茜素红染色观察细胞矿化情况;于诱导的第0、3、5、7、14、21、28天时,采用RT-PCR法检测其ALP、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨涎蛋白(BSP)和骨钙素(OCN)的基因表达;Western印迹分析、免疫细胞化学染色检测BSP及OCN蛋白的表达.结果:经矿化液诱导后,前磨牙HDPSCs ALP染色阳性,形成钙结节.诱导第3天,细胞ALP mRNA呈高表达;DSPP始终不表达;BSP、OCN mRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高;BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致;第5天时OCN染色阳性.结论:前磨牙牙髓干细胞具有向成骨细胞样细胞分化的潜能,有望成为骨组织工程的种子细胞.     

人骨形成蛋白－2对人牙髓细胞增殖和分化的影响

目的：探讨骨形成蛋白－2（BMP－2）对体外培养的人牙髓细胞（DPCs）增殖和分化的影响。方法：体外培养人DPCs,分别与不同浓度的BMP－2（50、100、200 ng／mL）共同培养;分别检测各组细胞的增殖情况、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性、钙化结节形成量以及牙本质涎磷蛋白（DSPP）、牙本质基质蛋白－1（DMP－1）各成牙本质相关基因的表达水平。结果：50～200 ng／mL 的BMP－2对DPCs的增殖均无明显促进作用;但是,能呈剂量依赖性地提高细胞的ALP活性、促进钙化结节的形成、上调DSPP和DMP－1 mRNA的表达水平,各浓度BMP－2组均高于对照组（P ＜0．05）。结论：BMP－2对体外培养的人DPCs增殖无明显影响,但可明显促进DPCs的成牙本质细胞方向分化。     

高迁移率族蛋白B1在人牙髓细胞成牙本质分化中的表达

目的:检测人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)诱导矿化过程中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)的表达变化,探讨HMGB1在人牙髓细胞损伤修复中的可能作用。方法:组织块法分离培养hDPCs,收集矿化诱导0、3、7、11、14d后hDPCs的mRNA、蛋白质及细胞爬片,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(western blot)分别检测HMGB1、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1, DMP1)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的mRNA及蛋白表达水平;并检测ALP活性,免疫荧光检测HMGB1在hDPCs矿化过程中的表达。结果:hDPCs矿化诱导后,DMP1、DSPP、ALP及HMGB1的mRNA表达显著性上调,DMP1、DSPP和ALP的mRNA以及碱性磷酸酶活性在诱导7 d、11 d和14 d后与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),HMGB1mRNA在矿化诱导11d和14d后与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05)。蛋白印迹法检测示细胞内各矿化标记的蛋白表达均较对照组上调,而细胞内HMGB1的蛋白表达较对照组下调。免疫荧光结果显示hDPCs矿化过程中,HMGB1逐渐从胞核转移至胞浆。结论:在hDPCs诱导成牙本质细胞分化过程中,HMGB1在mRNA水平上与DMP1、DSPP和ALP的表达变化趋势相似,而细胞内HMGB1蛋白水平表达下调,且HMGB1在hDPCs细胞内出现转位,提示HMGB1与hDPCs的成牙本质分化有关,可能在牙髓细胞损伤修复中发挥作用。     

慢病毒介导的Delta1-RNA干扰对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

目的 探讨Notch配体Delta1基因的特异性RNA干扰(RNA interference,RNAi)对人牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)增殖及分化的影响.方法 利用Delta1-RNAi慢病毒载体感染体外培养的DPSC获得稳定的Delta1-RNAi DPSC系;实验分3组:经Delta1-RNAi慢病毒感染的DPSC组(慢病毒组),经空慢病毒感染的阴性对照组和正常细胞的正常对照组,采用细胞生长曲线测定( cell counting kit-8,CCK-8)、流式细胞仪及免疫组化等方法检测细胞生长曲线、细胞周期、细胞核增殖抗原表达的变化情况;对各组细胞进行体外成牙本质分化诱导,采用茜素红染色法检测钙化结节数量的差别,并用碱性磷酸酶(ALP)活性检测ALP及蛋白质印迹法检测诱导后各组细胞中牙本质涎磷蛋白( dentin sialophosphoprotein,DSPP)表达量的区别.结果 与正常对照及阴性对照组相比,慢病毒组DPSC增殖能力显著降低,其S期细胞比例及增殖指数分别由正常对照组的22.32±2.35和33.68 ±4.19显著降低至5.44±0.91和16.0 ±6.07(P ＜0.05),细胞核增殖抗原的表达显著下降;慢病毒组细胞经诱导后形成钙化结节数量明显增多,ALP及DSPP表达含量较正常对照组及阴性对照组显著增高.结论 Notch配体Delta1基因被干扰下调后,人DPSC的体外增殖受到抑制,在体外成牙本质诱导培养条件下,细胞向成牙本质细胞的分化加快,证明Notch-Delta1信号转导途径对人DPSC的自我更新及分化的调控起着重要作用,为牙髓损伤后修复提供了理论基础.     

p38β在矿化诱导液诱导的人牙髓细胞成牙本质向分化中的作用

目的研究p38β丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)对矿化诱导液诱导的人牙髓细胞(h DPC)成牙本质向分化的影响。方法体外培养hDPC,Western blot检测hDPC矿化诱导0、3、7、14 d后p38β蛋白表达情况;构建3条慢病毒载体p38β鄄shRNA并分别转染hDPC,Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测p38β蛋白及基因表达;设立空白对照组、矿化诱导(OM)组、OM+空载体(NC)组、OM+sh鄄p38β组共4组。成牙本质向矿化诱导1、7、14 d,实时荧光定量PCR检测成牙本质向分化指标牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)的基因表达;Western blot检测成牙本质向分化指标DSPP蛋白的表达;成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节的形成情况。结果 Western blot结果表明正常牙髓组织中存在p38β蛋白;成功构建p38β稳定低表达的hDPCs(实时荧光定量PCR显示三条序列干扰效率分别为55.4%、68.3%、54.2%);实时荧光定量PCR显示沉默p38β的hDPCs经矿化诱导后,成牙本质向分化指标DSPP、ALP基因表达水平显著降低,Western blot结果显示成牙本质向分化指标DSPP蛋白表达水平显著降低;茜素红染色结果显示,矿化诱导+sh鄄p38β组与空白对照组较另外两组的矿化结节数量明显减少。结论 p38β在OM诱导的h DPC成牙本质向分化中发挥作用。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。     

金属蛋白酶解离素28对人牙髓干细胞生物学功能的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙髓干细胞(HDPSCs)增殖、分化、凋亡特性的影响和可能的作用机制.方法:体外分离培养、鉴定人牙髓干细胞(HDPSCs),应用基因重组构建ADAM28真核表达质粒并转染HDPSCs,应用四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28对HDPSCs生物学特性的影响.应用免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28对HDPSCs表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)的影响.采用SPSS13.0软件包的SNK检验进行统计学分析.结果:成功构建并转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPSCs的增殖活性、增殖指数显著低于空载体组和未转染组,碱性磷酸酶(ALP)分泌水平及凋亡细胞百分比明显上升,差异显著(P＜0.05);HDPSCs内DSPP的表达水平显著提高(P＜0.05).结论:ADAM28可显著抑制HDPSCs增殖,促进ALP的分泌活性和HDPSCs内DSPP的表达,显著诱导HDPSCs的凋亡.     

DLK1对人牙髓干细胞增殖和成牙本质分化的影响

目的研究DLK1在人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖分化中的作用。方法用免疫组织化学分析法来检测小鼠上颌第一磨牙中DLK1的表达。构建重组慢病毒使DLK1在hDPSCs中稳定过表达,用CCK8法和Ed U核素渗入法分别检测hDPSCs的细胞活力和增殖;hDPSCs进行成牙本质细胞向分化诱导后,通过ALP活性分析、ALP和茜素红染色,以及ALP、DSPP、DMP1等矿化相关基因的表达,研究hDPSCs的成牙本质细胞向的分化。结果 DLK1在小鼠上颌第一磨牙的成牙本质细胞和牙髓细胞中高表达,而且正常hDPSCs在成牙本质细胞向分化诱导14 d后,ALP蛋白水平增长1.6倍,DSPP增长1.16倍,DMP1增长1.42倍,DLK1增长1.54倍。hDPSCs中过表达DLK1后,相比于对照组增加了1.7倍,显著促进了细胞增殖,却抑制了其成牙本质细胞向分化。结论 DLK1在牙齿发育中发挥重要作用,DLK1过表达促进hDPSCs的增殖,但抑制其成牙本质细胞向分化。     

核心结合因子α1诱导人牙乳头细胞矿化的相关蛋白表达

目的 在人牙乳头细胞中探讨核心结合因子α1(core binding factor α1，cbfal)能否调控矿化相关蛋白的表达。方法 体外培养人牙乳头细胞，转染peDNA3-cbfal重组质粒，稳定表达cbfal后检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)和骨钙素(osteoealcin，OC)含量，同时采用免疫组化、免疫印迹和PCR等方法观察骨桥素(osteopontin，OPN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein，BSP)、骨连素(osteonectin，ON)、牙本质基质蛋白(dentin matrix protein 1，DMP1)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein，DSP)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphopmtein，DSPP)的表达。结果 建立了稳定表达cbfal基因和蛋白的人牙乳头细胞模型PC-3，发现转染后细胞的ALP和OC含量明显增高，OPN、BSP、ON、DMP1的表达也明显增高，但未发现牙本质特异性蛋白DSP及其编码基因DSPP的表达。结论 在人牙乳头细胞中，cbfal能上调ALP和OC含量，诱导多种矿化组织特异性蛋白的表达，在牙齿发育矿化中有重要作用，提示它与牙乳头细胞分化为成牙本质细胞的启动有关。     

釉基质蛋白（EMPs）对大鼠牙髓干细胞体外增殖、分化能力的影响

目的：研究釉基质蛋白（Enamel Matrix Proteins,EMPs）对大鼠牙髓干细胞（rat Dental Pulp Stem Cells,rDPSCs）体外增殖分化能力的影响。方法：酶消化培养法获得大鼠牙髓干细胞,有限稀释法分离纯化大鼠牙髓干细胞,形态学观察,计算细胞克隆形成率。乙酸法制备EMPs,用不同浓度的EMPs进行诱导,利用四唑盐比色法（MTD检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化。检测诱导后培养液中的碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP）。免疫组化染色和RT-PCR方法检测牙本质涎蛋白（dentin sialoprotein,DSP）、牙本质基质蛋白1（dentin matrixprotein 1,DMP—1）和牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphopmtein,DSPP）的mRNA表达。结果：大鼠牙髓干细胞呈集落状生长,在体外具有一定的克隆形成能力。EMPs对大鼠牙髓干细胞的增殖有促进作用,并呈现剂量和时间依赖性。200gg／ml EMPs组可显著促进大鼠牙髓干细胞的增殖。EMPs作用组能显著提高大鼠牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性。经细胞因子刺激后细胞表达DSP、DMP-1蛋白和DSPP mRNA。结论：EMPs在大鼠牙髓干细胞增殖和向成牙本质细胞分化方面具有积极的作用。     

腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2基因转染脂肪间充质干细胞的实验研究

目的 探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2（Ad-hBMP-2）基因转染大鼠脂肪间充质干细胞（ADSCs）的可行性及其成骨特性。方法 取4周龄SD大鼠腹股沟的脂肪组织,经体外分离培养的方法获得ADSCs,分别转染以腺病毒为载体的绿色荧光蛋白（Ad-GFP）基因和Ad-hBMP-2基因。用荧光显微镜每隔12 h观察转染Ad-GFP的细胞,并确定转染率,观察其形态变化,绘制生长曲线;利用免疫细胞化学法对转染Ad-hBMP-2的细胞作碱性磷酸酶（ALP）染色,用免疫细胞化学法作骨钙素（OC）检测确定成骨活性,Western blot法检测hBMP-2的表达。结果 12 h后荧光显微镜观察转染Ad-GFP的细胞,有52％的阳性表达细胞,48 h后转染率达95%;转染Ad-hBMP-2后倍增时间延长,ALP、OC检测为阳性表达,hBMP-2蛋白转染后48 h为阳性表达,并持续至第5代。结论 ADSCs可以作为腺病毒转染的载体,转染Ad-hBMP-2基因后有明显的成骨作用,可以作为骨组织工程的种子细胞。     

IGF-1通过PI3K/AKT信号通路促进牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的研究

目的:研究IGF-1对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用酶消化法分离培养原代人牙髓细胞。Western blot检测牙髓组织中IGF-1蛋白表达,不同浓度的IGF-1处理牙髓细胞7d,CCK8法检测细胞增殖。用IGF-1(100 μg/L)及LY294002(10 μmol/L)分别单独或同时处理牙髓细胞,培养7 d后MTT实验检测细胞增殖;在培养第3、5、7、14天时检测细胞ALP 活性;在培养第7天时用Western blot检测AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果:IGF-1在牙髓炎组织中低表达, IGF-1在20~100 μg/L浓度范围内从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞增殖(P<0.05或P<0.01),且具有剂量和时间依赖效应。LY294002能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,具有时间依赖性。IGF-1能促进p-AKT蛋白表达,而 LY294002能减低IGF-1对p-AKT蛋白表达的促进作用。结论:IGF-1可以促进牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性,且具有浓度和时间依赖性,作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。[关键词] 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶     

两型腺相关病毒对培养人牙髓细胞转染效率的研究

目的探讨两种不同腺相关病毒（AAV）介导的增强型绿色荧光蛋白rAAV2-EGFP和rAAV2/1-EGFP对人牙髓细胞的转染效率及对人牙髓细胞的毒性,为AAV携带目的基因治疗提供理论依据与实验基础。方法采用组织块加酶消化法培养人牙髓细胞并鉴定组织来源。按照感染复数（MOI）为10^4、10^5、5×10^5转染第2代人牙髓细胞,并选择最适MOI值;流式细胞仪检测转染后7d,rAAV2-EGFP和rAAV2/1-EGFP对人牙髓细胞的转染效率;MTT法检测AAV2-EGFP,AAV2/1-EGFP转染后4、6、8、10、12d人牙髓细胞的增殖活性。结果荧光显微镜下观察rAAV-EGFP对人牙髓细胞的转染效率及荧光蛋白强度,随着MOI值的增加而增高,其中105为转染最适MOI值,7d时,流式细胞仪检测AAV2-EGFP、AAV2/1-EGFP转染率分别为35.8%、76.9%;病毒转染细胞后,细胞生长正常,MTT显示转染后各转染组与未转染组的吸光度值差异无统计学意义。结论rAAV2-EGFP对体外培养的人牙髓细胞转染效率高于rAAV2/1-EGFP,是腺相关病毒中转染人牙髓细胞比较适合的载体。     

人骨形成蛋白7荧光真核表达载体的构建及体外生物学活性检测

目的构建携带人骨形成蛋白7（hBMP-7）基因的绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-hBMP-7，体外转染小鼠基质细胞系W-20-17，检测相关生物学活性的变化。方法应用亚克隆法构建真核表达载体pEGFP-hBMP-7，酶切电泳鉴定。脂质体法转染W-20-17细胞，检测瞬时转染效率及目的基因的表达，观察细胞形态及生长情况，检测碱性磷酸酶（ALP）、钙结节及骨钙素等成骨细胞表型。结果48h后，基因转染效率达到4｜D％，报告基因及免疫荧光证明目的基因的表达。目的基因转染后细胞形态未见明显变化，增殖能力无明显改变，ALP活性明显增高，钙结节增多，骨钙素表达增强。结论成功构建了具有生物学活性的pEGFP-hBMP-7，基因转染后能诱导W-20-17细胞向成骨细胞表型转化。     

EMPs对人牙髓干细胞增殖分化影响的实验研究

目的：将人牙髓干细胞（human Dental Pulp Stem Cells,hDPSCs）与釉基质蛋白（Enamel Matrix Proteins,EMPs）按一定浓度结合,测定牙本质涎磷蛋白（dentin sialoprotein,DSPP）、波形蛋白（vimentin）、碱性磷酸酶（alkaline phophatase,ALP）的表达,阐述EMPs对人牙髓干细胞增殖分化的影响.方法：分别将浓度为100 μg/mL、200μg/mL的EMPs加入培养中的人牙髓干细胞中,分别于3d、5d、7d、9d、11d对细胞进行免疫组化染色,检测细胞爬片DSPP、vimentin、ALP的表达.结果：未经EMPs诱导的人牙髓干细胞DSPP少量细胞阳性表达,vimentin表达阴性,ALP表现低活性.经200 μg/mL的EMPs诱导5d后,人牙髓干细胞DSPP、vimentin染色呈阳性表达,ALP活性明显增加.结论：EMPs对人牙髓干细胞增殖及分化具有促进作用,200 μg/mL的浓度效果最为显著.     

重组人结缔组织生长因子对牙髓细胞增殖与成牙本质分化的影响

目的：研究重组人结缔组织生长因子（recombinant connective tissue growth factor, rCTGF）对牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）增殖及分化的影响。方法：利用不同浓度（0、1、10、100 ng/mL）rCTGF分别处理牙髓细胞,CCK8法检测牙髓细胞增殖情况;茜素红染色和半定量试验检测细胞矿化结节的形成变化,qRT-PCR测定成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP和OC的表达情况,Western 免疫印迹法测定rCTGF刺激牙髓细胞后,ERK1/2信号通路的磷酸化水平。采用SAS 9.3软件包对数据进行统计学分析。结果：高浓度的rCTGF（100 ng/mL）可以促进牙髓细胞增殖;经矿化诱导后,10 ng/mL rCTGF促进牙髓细胞矿化结节形成的效果最好,钙盐沉积量最明显（P<0.05）,成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP的表达显著上调（P<0.05）。Western 免疫印迹结果显示,10 ng/mL rCTGF刺激牙髓细胞后,p-ERK1/2蛋白的表达升高。结论：rCTGF可能通过激活ERK1/2信号通路,促进牙髓细胞的增殖与分化。     

小分子鹰嘴豆芽素A对人牙髓干细胞成骨分化的影响

目的:探讨不同浓度鹰嘴豆芽素A (biochanin A,BCA)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成骨分化的影响及相关分子机制.方法:通过组织块法分离培养原代人牙髓干细胞,流式细胞术鉴定其细胞表型.通过CCK-8法检测不同浓度BCA对hDPSCs增殖活性的影响,通...     

脐静脉内皮细胞外泌体和内皮祖细胞外泌体对hDPSCs增殖及迁移能力的比较研究

目的 将人脐静脉内皮细胞外泌体(human umbilical vein endothelial cells-derived exosome,HUVECs-exo)和内皮祖细胞外泌体(endothelial progenitor cells-derived exosome,EPCs-exo)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖和迁移能力的影响进行比较研究,以期为外泌体在牙髓再生中的应用积累经验。方法 采用超速离心法分离提取外泌体,透射电镜观察外泌体形态,纳米粒子跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测外泌体粒径大小,Western blot蛋白印迹检测外泌体标志蛋白CD9、CD63、TSG101的表达。将两种外泌体按照5、10、20 μg/mL浓度梯度分别作用于hDPSCs,通过CCK-8实验检测hDPSCs增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验检测hDPSCs迁移能力。结果 透射电镜下观察两种外泌体均呈圆盘状,粒径集中在30～150 nm,阳性表达CD9、CD63、TSG101三种标志蛋白。与对照组(Control组)相比,两种外泌体在不同浓度下均对hDPSCs增殖能力无显著促进作用,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕实验和Transwell实验表明,与对照组相比,两种外泌体均可促进hDPSCs迁移,差异有统计学意义(P<0.05),其中10 μg/mL外泌体浓度作用效果最明显(P<0.01)。相同浓度的两种外泌体组间作用效果差异无统计学意义(P>0.05)。结论 本实验成功分离提取到两种细胞来源的外泌体并进行鉴定,将不同浓度的两种细胞来源的外泌体作用于hDPSCs,发现对其增殖能力无明显促进作用,但可以促进其迁移,尤以10 μg/mL外泌体浓度促进迁移效果最为明显。     

瘦素对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

目的 探讨瘦素(leptin)对体外培养的牙髓干细胞增殖、分化的影响.方法 体外培养牙髓干细胞,采用MTT法及流式细胞技术检测不同浓度瘦素对牙髓干细胞增殖作用的影响,通过碱性磷酸酶、Yon Kossa染色及矿化相关蛋白(DSP、OCN)的免疫组化染色来检测瘦素对牙髓干细胞分化的影响.结果 瘦素对牙髓干细胞增殖没有显著作用,但是对牙髓干细胞的ALP活性呈浓度依赖性促进.Von Kossa染色可见矿化结节形成,DSP及OCN表达阳性.结论 瘦素可促进牙髓干细胞向成牙本质细胞分化.