Establishment of Multiple Locus Variable-number Tandem Repeat Analysis Assay for Genotyping of Borrelia burgdorferi sensu lato Detected in China

Objective Human Lyme Borreliosis （LB）, which is caused by Borrefia burgdorferi sensu lato （B. burgdorferi）, has been identified as a major arthropod-borne infectious disease in China. We aimed to develop a multiple locus variable-number tandem repeat （VNTR） analysis （MLVA） assay for the genotyping of Borrelia burgdorJ：eri strains detected in China. Methods B. garinii PBi complete 904.246 kb chromosome and two plasmids （cp26 and Ip54） were screened by using Tandem Repeats Finder program for getting potential VNTR loci, the potential VNTR loci were analyzed and identified with PCR and the VNTR loci data were analyzed and MLVA clustering tree were constrcted by using the categorical coefficient and the unweighted pair-group method with arithmetic means （UPGMA）. Results We identified 5 new VNTR loci through analyzing 47 potential VNTR loci. We used the MLVA protocol to analyse 101 B. burgdorferi strains detected in China and finally identified 51 unique genotypes in 4 major clusters including B. burgdorferi sensu stricto （B.b.s.s）, B. garinii, B. a[zelii, and B. valaisiana, consistent with the current MLSA phylogeny studies. The allele numbers of VNTR-1, VNTR-2, VNTR-3, VNTR-4, and VNTR-5 were 7, 3, 9, 7, and 6. The Hunter-Gaston index （HGI） of five VNTR loci were 0.79, 0.22, 0.77, 0.71, and 0.67, respectively. The combined HGI of five VNTR loci was 0.96. Clustering of the strains of Xinjiang, Inner Mongolia and Heilongjiang was confirmed, and this situation was consistent with the close geographical distribution of those provinces. Conclusion The MLVA protocol esytablished in this study is easy and can show strains＇ phylogenetic relationships to distinguish the strains of Borrelia species. It is useful for further phylogenetic and epidemiological analyses of Borrelia strains.     

Optimization of Pulse-Field Gel Electrophoresis for Borrelia burgdorferi Subtyping

Objective To optimize the performance of Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) for the comparison of inter-laboratory results and information exchange of Borrelia burgdorferi subtyping. Methods A panel of 34 strains of B. burgdorferi were used to optimize PFGE for subtyping. In order to optimize the electrophoretic parameters (EPs), all 34 strains of B. burgdorferi were analyzed using four EPs, yielding different Simpson diversity index (D) values and the epidemiological concordance was also evaluated. Results The EP of a switch time of 1 s to 25 s for 13 h and 1 s to 10 s for 6 h produced the highest D value and was declared to be optimal for MluI and SmaI PFGE of B. burgdorferi. MluI and SmaI were selected as the first and second restriction enzymes for PFGE subtyping of B. burgdorferi according to discrimination and consistency with epidemiological data. Conclusion PFGE can be used as a valuable test for routine genospecies identification of B. burgdorferi.     

莱姆病螺旋体中国分离株外膜蛋白C基因的克隆与序列分析

目的了解引起我国莱姆病的伯氏疏螺旋体外膜蛋白Ｃ（ＯｓｐＣ）基因变异情况。方法应用聚合酶链反应从２株莱姆病螺旋体中国分离株ＢＴ０１和ＢＪ－９０１１全基因组ＤＮＡ中将ＯｓｐＣ基因调出,并插入质粒ｐＧＥＭ－３ＺＦ（＋）中,构建重组质粒ｐＧＥＭ－３ＺＦ（＋）－ＯｓｐＣ,经Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测序,并将之与国外其它分离株进行同源性比较。结果除信号肽序列外,２株莱姆病螺旋体分离株ＢＴ０１和ＢＪ－９０１１的ＯｓｐＣ基因依次为５７９ｂｐ和５７６ｂｐ,分别编码１９３和１９２氨基酸,两者核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为８６％和８３％,与国外分离株（ＰＢｉ、ＰＫｏ及Ｂ３１）的同源性均较高,其中ＢＪ－９０１１株与国际标准株Ｂ３１株之间核苷酸及氨基酸同源性达９９％。结论伯氏疏螺旋体Ｏｓ－ｐＣ基因在国内２个分离株之间存在一定差异,其与国外分离株之间也存在一定差异     

Touchdown PCR检测野生中缅树鼩伯氏疏螺旋体感染

目的用Touchdown PCR检测野生中缅树鼩的伯氏疏螺旋体感染。方法从昆明及其周边地区捕获30只野生中缅树鼩,乙醚深度麻醉后处死,取内脏-30℃保存备用。用总DNA提取试剂盒提取组织总DNA,用紫外可见光分光光度计测定样品的DNA含量,用热启动Touchdown PCR技术检测野生中缅树鼩的伯氏疏螺旋体flaB基因。对PCR产物做凝胶电泳,凝胶成像仪观察并照相。结果Touchdown PCR有良好的特异性和敏感性。实验重复3次,结果一致,野生树鼩的伯氏疏螺旋体DNA阳性率为63．33％（19／30）。结论野生树鼩存在伯氏疏螺旋体感染,并且感染率较高。     

云南省剑川县野鼠感染莱姆病螺旋体状况的初步调查

目的 调查云南省剑川县野鼠中伯氏疏螺旋体（莱姆病螺旋体）的感染状况,以评估其对人群的潜在威胁。方法 2017年1—4月在剑川县选取石龙、长乐、新松3个自然村作为调查点,用鼠笼法进行捕鼠;经鼠种鉴定后采集鼠肾脏及膀胱标本,用BSK-Ⅱ培养基对其进行分离培养;用实时定量PCR及巢式PCR分别检测伯氏疏螺旋体特异性recA基因及5S~23S rRNA基因间隔区。结果 ①共捕获10种439只鼠,其中齐氏姬鼠219只、大绒鼠165只,其余鼠种55只（中华姬鼠24只、贝氏树鼩13只、斯氏家鼠7只、巢鼠3只、灰麝鼩3只、赤腹松鼠2只、社鼠2只及大足鼠1只）;② 439份标本均未分离培养到伯氏疏螺旋体;③实时定量PCR检测,结果显示伯氏疏螺旋体总阳性率为2.51%（11/439）,其中中华姬鼠4.17%（1/24）、齐氏姬鼠4.11%（9/219）和大绒鼠0.61%（1/165）;④11份阳性标本皆来源于剑川县石龙村,其余2个村的鼠标本未检测到阳性;⑤11份实时定量PCR阳性标本的5S~23S rRNA基因间隔区的检测皆为阴性。结论 云南省剑川县野鼠中存在莱姆病螺旋体的自然感染,但鼠中病原体的载量较低,其传播给人群的风险不大。     

伯氏疏螺旋体与嗜吞噬细胞无浆体混合感染的实验研究

目的应用动物模型探讨蜱传病原体伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染对组织螺旋体载量、莱姆关节炎严重性、宿主免疫功能的影响。方法建立伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染和伯氏疏螺旋体单一感染小鼠模型,在不同时间点研究各组小鼠组织中的螺旋体载量、关节炎严重性和血清IgG效价,并对数据进行统计学分析。结果与单一感染组相比,在螺旋体感染后18d和30d,混合感染组小鼠组织螺旋体载量显著增高,关节炎明显严重,血清IgC效价显著偏低。结论伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染显著增加小鼠组织螺旋体载量、加重关节炎症状和病理改变,且抑制体液免疫功能。     

A Study of the Technique of Western Blot for Diagnosis of Lyme Disease caused by Borrelia afzelii in China

Objective To study the technique of Western blot for the diagnosis of Lyme disease caused by Borrelia afzelii in China and to establish the standard criteria by operational procedure. Methods FP1, which is the representative strain of B. afzelii in China, was analyzed by SDS‐PAGE, electro transfer and immunoblotting assays. The molecular weights of the protein bands of FP1 were analyzed by Gel‐Pro analysis software. In a study using 451 serum samples (159 patients with Lyme disease and 292 controls), all observed bands were recorded. The accuracy of the WB as a diagnostic test was established by using the ROC curve and Youden index. Results Criteria for a positive diagnosis of Lyme disease were established as at least one band of P83/100, P58, P39, OspB, OspA, P30, P28, OspC, P17, and P14 in the IgG test and at least one band of P83/100, P58, P39, OspA, P30, P28, OspC, P17, and P41 in the IgM test. For IgG criteria, the sensitivity, specificity and Youden index were 69.8%, 98.3%, and 0.681, respectively; for IgM criteria, the sensitivity, specificity and Youden index were 47%, 94.2%, and 0.412, respectively. Conclusion Establishment of WB criteria for B. afzelii is important in validating the diagnostic assays for Lyme disease in China.     

伯氏疏螺旋体与嗜吞噬细胞无浆体感染抑制Th1型细胞因子产生

目的 应用动物模型探讨蜱传病原体伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染对Th1型细胞因子产生的影响.方法 建立三种伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染小鼠模型和伯氏疏螺旋体单一感染小鼠模型.将小鼠分A组（同时感染组）、B组（伯氏疏螺旋体先于嗜吞噬细胞无浆体感染组）、C组（嗜吞噬细胞无浆体先于伯氏疏螺旋体感染组）、D组（伯氏疏螺旋体单感染组）和E组（无感染对照组）等共5组,每组16只,在不同时间点测定各组小鼠血清Th1型细胞因子浓度,并对数据进行统计学分析.结果 与单一感染组相比,在螺旋体感染后18d和30d,三种混合感染组小鼠血清中Th1型细胞因子显著偏低.结论 伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染显著抑制Th1型细胞因子产生.     

蛋白免疫印迹和荧光-PCR诊断早期先天梅毒研究

目的评价荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和血清IgM抗体蛋白免疫印迹实验（serum IgM western blot,IgM-WB）在新生儿先天梅毒早期诊断中的作用. 方法在知情同意的情况下,选取34例梅毒孕妇及其新生儿和40例非梅毒对照孕妇及其新生儿,分别给予荧光定量聚合酶链反应、血清IgM-WB试验和常规血清学方法（TPPA、RPR、19S-FTA-ABS）,以双盲对照的形式评价上述实验诊断方法和常规实验室检测（临床＋常规血清学方法RPR滴度的比较＋治疗）在先天梅毒早期诊断的作用. 结果 34例孕妇梅毒病例所生的新生儿中,按常规综合诊断方法3例确诊为先天梅毒,6例拟诊为先天梅毒.34例完成妊娠的梅毒孕产妇病例中,孕妇胎盘和脐带组织荧光定量聚合酶链反应11例阳性（9例常规方法诊断为先天梅毒）;新生儿血清IgM蛋白印迹试验10例阳性（9例常规方法诊断为先天梅毒）;40例作为对照的非梅毒孕妇及新生儿各项检查均为阴性. 结论胎盘组织荧光定量聚合酶链反应和血清IgM蛋白印迹试验诊断梅毒,结果显示可能高于现行的常规综合诊断方法的诊断价值,且优于常规综合诊断方法中的任何一种.     

我国天津地区莱姆病螺旋体宿主动物的初步调查

目的了解天津地区莱姆病螺旋体的宿主动物的感染情况。方法采用间接免疫荧光抗体法(IFA)对野鼠、野兔、牛、羊、狗进行了莱姆病螺旋体感染的血清学检测;用病原分离培养方法和PCR方法对野鼠进行了病原学检测。并通过基因测序方法确定基因型。结果野鼠的血清莱姆病感染阳性率最高为32.00%(32/100);并从大林姬鼠、社鼠、小林姬鼠的脾脏和/或肾脏中检查到莱姆病螺旋体的特异片断。通过序列同源性分析确定为Borreliagarinii基因型。结论首次从病原学证实天津林区鼠类为莱姆病螺旋体的重要储存宿主。     

不同乳腺癌细胞株雌激素和孕激素受体的Western blot检测

目的　建立人类雌激素受体 (estrogenreceptor,ER)和孕激素受体 (progesteronereceptor,PR)Westernblot检测方法 ,并对不同乳腺癌细胞株ER、PR表达情况进行测定。方法　取不同乳腺癌细胞株对数生长期细胞提取总蛋白 ,分别用ERα单克隆抗体 1D5和PR单克隆抗体PgR6 36以Westernblot方法对ER、PR的表达情况进行检测 ,并与同期固定细胞的流式细胞术 (FCM)检测结果进行比较。结果　T 4 7d、MCF 7、ZR 75 1细胞ERα的Westernblot检测可得到清晰且分子量正确的条带 ,T 4 7d、ZR 75 1细胞可见清晰且分子量正确的PR条带 ,同期固定细胞ER、PR阳性表达的FCM检测结果与Westernblot检测结果一致。结论　Westernblot检测ER、PR的方法是可行的。     

113例男性HIV-1抗体阳性吸毒者蛋白免疫印迹带型分析

目的分析HIV-1抗体阳性吸毒者的WB带型,了解惠州市男性吸毒人群WB带型的分布特征。方法对本实验室2007～2010年的HIV-1抗体确证检测阳性男性吸毒者的WB带型进行统计分析。结果 113份HIV-1抗体确证检测阳性男性吸毒者的WB带型中,gp160、gp120带型的出现率均在100%,p66、p51、gp41、p31、p24带型的出现率均在96%以上,p55,p17带型的出现率分别为71.68%和80.53%;WB全带型出现率为59.30%（67/113）;不同年龄组带型差异无统计学意义。结论抗env和gag基因编码蛋白的抗体gp160、gp120、gp41、p24阳性率高,是确证HIV-1感染的必备条件;惠州市的HIV亚型、传播途径和WB带型之间的关系有待进一步的调查和研究。     

Western blot法检测人脑胶质瘤中组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂-1的表达

目的:研究人脑胶质瘤组织中组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂(tPA)及其抑制剂-1(PAI-1)的表达,旨在了解其与人脑胶质瘤恶性生物学行为间关系,探讨其在人脑胶质瘤中的作用及其临床意义。方法:采用增强化学发光蛋白印迹法,测定人脑胶质瘤手术切除标本41例和颅脑外伤10例正常脑组织标本中的tPA及PAI-1蛋白表达水平。结果:tPA蛋白在高级别脑胶质瘤中呈低表达,在低级别的人脑胶质瘤中呈高表达,而正常脑组织中亦有表达。正常脑组织和低、高级别脑胶质瘤组间表达的差异无统计学意义(P>0.05)。tPA蛋白表达与脑胶质瘤病理级别间无明显相关性(P>0.05)。PAI-1蛋白则随着脑胶质瘤级别升高表达水平逐渐升高,而在正常脑组织中水平极低甚至不表达。正常脑组织组、低级别组脑胶质瘤及高级别组间表达差异有统计学意义(P<0.05);PAI-1蛋白表达水平与脑胶质瘤病理级别间呈正相关(P<0.05)。结论:PAI-1蛋白的高表达反映脑胶质瘤恶性生物学行为;tPA蛋白高表达可能是人胶质瘤组织分化良好的表现。     

支援西部地区医疗卫生工作取得双赢效果

通过回顾总结解放军总医院在支援西部地区医疗卫生工作的主要经验,探讨综合性医院在医疗帮带工作中取得双赢效果的具体做法,提出要建立全面互信的沟通渠道．努力扩大双方合作领域,定期总结不断提高帮带水平。     

基督教与中国近代西医教育的产生

西方基督教与近代中国西医教育有着不解之缘,基督教会采用＂医务传道＂策略,将西方医学传入中国。他们在中国开办医学院,培养医学人才,建立课程体系,为中国西医教育的产生和发展做出了贡献。由于受中国传统习惯和复杂的历史环境的影响,西医教育又是逐渐地被中国人所接受,并被纳入中国近代教育体系之中。     

中西医结合的灾难医学课程在规培教育中的实施效果研究

为培养规培医师的灾难应答响应能力,本研究参考国内外经验设计了中西医结合的灾难医学课程。该课程由8个模块组成,共26学时,分别介绍了灾难的定义和分类,以及中医药在灾难医学中的位置等。针对上海中医药大学附属第七人民医院急创中心84名规培医师进行中西医结合的灾难医学课程教学,并进行教学效果评价。结果显示,培训前后规培医师客观成绩课前测试分数为（45.00±2.51）,课后测试分数为（76.25±2.76）,差异具有统计学意义（P<0.001）。课程前后分别对规培医师进行中西医结合的灾难医学相关知识主观了解程度的问卷调查,结果显示课前测试分数为（50.88±1.41）,课后测试分数为（64.64±1.80）,差异具有统计学意义（P<0.001）。结果表明,通过灾难医学教学相关课程,规培医师的理论知识、技能、灾难救援中的综合能力都有了很大的提高,为中西医结合的灾难医学教育相关课程的建立提供了参考。     

西部省属医学院校教师激励机制的缺失与应对

总体上,我国西部省属医学院校教育滞后,运行体制特别是激励机制未能发挥应有的功能,直接导致教师工作积极性的严重下降,严重妨碍了西部省属医学院校的健康发展,加剧了地区教育发展的不平衡,影响了国家经济协调发展和总体进步。本文就西部省属医学院校激励机制失效的原因作了多方面分析,提出了西部省属医学院校师资管理的应对策略。     

膜-反向斑点杂交技术检测肺结核患者肺组织和肺泡灌洗液中的结核杆菌

目的探讨膜-反向斑点杂交技术（RDB）在病理石蜡组织和肺泡灌洗液检测结核杆菌的临床应用价值。方法以97例病理石蜡组织、97例肺泡灌洗液为研究对象,分别以膜-反向斑点杂交、实时荧光PCR（RT—PCR）、抗酸染色三种方法检测结核杆菌,对三种方法进行方法学评价。结果结核组病理石蜡组织、肺泡灌洗液三种方法检测的总阳性率分别为：抗酸染色为32．8％,RT—PCR阳性率为82．8％,RDB阳性率为89．9％,两两比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,对照组三种方法检测结果均为阴性;三种结核杆菌的检测方法的方法学评价,RDB灵敏度（90．6％）、约登指数（0．91）、符合率（93．9％）、阴性预测值（85．0％）均较好。结论膜-反向斑点杂交技术在病理石蜡组织和肺泡灌洗液结核杆菌的检测上有很高的临床应用价值,值得临床推广应用。     

西文图书招标采购评价指标探讨

结合首都医科大学图书馆的工作实际,分析了西文图书招标采购过程中涉及的图书价格、供应商服务、供应商资质与信誉等主要评价指标,探讨了这些评价指标的内在影响因素及建议分值,为图书馆公正合理地评价与选择图书供应商提供参考.