川芎嗪对白血病U937细胞增殖和凋亡的作用及其机制研究

目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白血病U937细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。 方法:应用CCK-8法检测TMP对U937细胞的增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,采用Real-time PCR法检测bcl-2,P27 mRNA表达,Western blot检测bcl-2,caspase-3,cyclin E1,CDK2,P27的表达。 结果:川芎嗪呈时间剂量依赖的方式抑制U937细胞的增殖,作用48 h的IC₅₀为160 mg·L^-1;并且诱导U937细胞凋亡,阻滞细胞周期于G₀/G₁期;Real-time PCR及Western blot结果显示川芎嗪使U937细胞中凋亡相关分子bcl-2表达下调,caspase-3上调,周期相关蛋白cyclin E1,CDK2表达下调,P27上调。 结论:川芎嗪对白血病U937细胞呈抑制增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是通过影响细胞周期分布,下调bcl-2的表达,最终激活caspase-3,启动凋亡途径,诱导细胞凋亡。     

蟾蜍灵诱导人白血病HL60细胞凋亡的初步研究

目的 :探讨中药蟾蜍灵诱导白血病HL60细胞凋亡作用。方法 :应用台盼蓝染色法测定HL6 0细胞的生长曲线 ,应用相差显微镜、电子显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等技术分析细胞凋亡。结果 :蟾蜍灵与HL60细胞共育时 ,能明显抑制细胞生长 ,细胞呈典型的凋亡形态学改变 :细胞皱缩 ,染色质凝集 ,沿核膜内侧分布 ,呈新月形 ,可见由膜包被细胞内容物的凋亡小体的产生 ;细胞DNA裂解成 180～200bp及其倍数的片段 ,电泳得到特有的梯形条带。结论 :蟾蜍灵诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。     

雪峰虫草不同提取部位对诱导NB4和U937细胞凋亡的影响

目的 探讨雪峰虫草不同提取部位对诱导NB4和U937细胞凋亡的影响机制.方法 将对数期2种细胞随机分为正常组、DMSO组、水提取物组、乙酸乙酯提取物组和醇提取物组,采用流式细胞仪检测雪峰虫草不同提取物诱导NB4、U937细胞凋亡作用,采用Western blot法检测NB4、U937细胞内Bcl-2、Cyt C、Bax...     

冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡

目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法。结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性。27μmol.L^-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化。ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-X_L表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用。结论:冬凌草甲素(27μmol.L^-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-X_L的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡。     

蟾蜍灵诱导白血病HL-60细胞分化及相关基因表达

目的：研究中药蟾酥中蟾毒成分蟾蜍灵(bufalin)的抗癌机制。方法：以早幼粒白血病HL－60细胞为靶细胞，应用电镜技术观察bufalin诱导的细胞分化，免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p21^WAF1的表达。结果：0．001μmol/L bufalin作用HL－60细胞，细胞向粒细胞方向分化，p21^WAF1表达显著升高，而PCNA表达显著下降，二者显著负相关（P＜0．01）。结论：bufalin诱导HL－60细胞分化，与其上调p21^WAF1的表达、下调PCNA表达有关。     

金花茶叶子提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制作用的研究

目的：观察金花茶叶提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制的作用。方法采用CCK-8（ Cell Counting Kit ）试剂盒测量不同浓度的金花茶叶提取物刺激白血病细胞U937细胞24～72h,分5个时段,观察各浓度吸光度值（optical density,OD值）、对应增殖抑制率、最佳药效时间。结果 CCK-8测试显示,800ug/ml浓度金花茶叶提取物刺激白血病细胞株U937细胞36h、48h、60h、72h,与正常组细胞数比较,OD值和增殖抑制率的差异均有统计学意义（P＜0.05）;当浓度为400ug/ml时,在48h、60h,OD值和增殖抑制率的差异均有统计学意义（P＜0.05）,表明最佳药效时间在48h～60h之间。结论高浓度的金花茶叶提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞有抑制作用。     

人参诱导早幼粒细胞性白血病细胞凋亡的作用

研究认为,人参的抗肿瘤作用与肿瘤免疫活性、抑制肿瘤转移以及诱导细胞凋亡有关。本次探讨了红参、白参含有的数种皂苷诱导早幼粒细胞性白血病细胞(HL-60)凋亡的作用。 方法:以添加10％FBS的RPMI 1640培养基(37℃,5％CO_2)培养HL-60细胞,每孔2×10~3个细胞分别注入96孔培养板(90μL)。24h后添加10μL     

蟾蜍灵诱导肝癌Huh7细胞的凋亡及其机制研究

目的:研究蟾蜍灵(bufalin)诱导肝癌Huh7细胞的凋亡及其凋亡的初步机制。方法:CCK-8法检测不同浓度蟾蜍灵作用细胞不同时间后的细胞活性;Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测蟾蜍灵诱导的细胞死亡方式并分析细胞凋亡率;细胞活性氧ROS特异性抑制剂NAC预处理细胞1小时后,检测蟾蜍灵对细胞活性的影响,并采用Hoechst 33342染色技术染细胞核,在共聚焦显微镜下观察NAC对细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪检测NAC对蟾蜍灵引起的细胞线粒体膜电位下降的影响。结果:10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol/L蟾蜍灵分别作用细胞12、24、48小时后,细胞的活性呈浓度和时间依赖性降低;用10~(-7)mol/L这一浓度为接下来的实验浓度,流式双染结果表明10~(-7)mol/L蟾蜍灵诱导的细胞死亡为凋亡,凋亡率为42.9%,与星形孢菌素组引起的细胞凋亡分布类似;NAC预处理细胞1小时,再用蟾蜍灵作用细胞24小时后细胞活性为60.9±2.5%,明显比没有NAC预处理的细胞活性高,而且共聚焦显微镜和流式细胞核染色结果分别显示NAC预处理细胞可以减少蟾蜍灵引起的细胞凋亡和升高蟾蜍灵引起的线粒体膜电位的下降,升高的百分率为9.5%。结论:蟾蜍灵可以诱导肝癌细胞Huh7凋亡,ROS参与了蟾蜍灵诱导的细胞凋亡和线粒体膜电位的下降,本实验结果将为蟾蜍灵的临床使用和研究提供实验依据。     

青蒿琥酯对U937细胞凋亡的诱导作用及其对Bcl-2、Bax、ICAD和Caspase-8表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法：采用MTT比色法检测青蒿琥酯对U937细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测U937细胞的凋亡;Western-blot法检测U937细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对U937细胞的生长有明显抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0.01）,呈浓度依赖性,48小时IC50值为24.48μg/ml;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导U937细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导U937细胞凋亡。     

蝎毒对白血病HL—60细胞生长的抑制和诱导凋亡作用研究

目的：研究蝎毒对HL－60细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法：应用MTT法观察蝎毒对细胞的抑制作用,光镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变,原位末端标记检测DNA断裂,流式细胞术分析凋亡细胞和bcl-2蛋白表达。结果：蝎毒可明显地抑制HL－60细胞生长和诱导细胞凋亡,作用在一定范围内呈对浓度和时间的依赖性,蝎毒并能下调HL－60细胞bcl-2蛋白表达。结论：蝎毒能抑制HL－60细胞生长和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与bcl－2蛋白表达的下降有关。     

蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL7402生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :探讨蒺藜皂苷 (STT)对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法 :应用MTT与SRB法检测蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL-7402的抑制作用 ,采用形态学观察以及流式细胞术 (FCM)检测了STT诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的效应 ,采用流式细胞术检测BEL-7402细胞Bcl-2蛋白表达。结果 :①STT能够剂量依赖地抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖 ;②细胞显现典型的凋亡形态学改变 ,FCM出现凋亡峰 ;③STT能降低BEL-7402细胞的Bcl-2蛋白表达。结论 :STT在体外能抑制BEL-7402细胞的增殖并能诱导细胞凋亡 ,其诱导凋亡作用的途径之一是下调Bcl-2蛋白表达。     

苦参碱抑制慢性粒细胞白血病K562细胞生长和诱导凋亡作用研究

目的研究苦参碱在体外对人慢性粒细胞白血病(慢粒)K562细胞的生长抑制作用并探讨可能的分子机制。方法光学显微镜下观察苦参碱作用前后K562细胞的形态学改变;联苯胺染色观测K562细胞的红系分化趋势;MTT法检测苦参碱对K562细胞的增殖抑制效应;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对K562细胞的周期改变及早期凋亡作用。结果与阴性对照组相比,0.05,0.1和0.2 g/L苦参碱作用下的K562细胞均出现红系分化趋势,其中0.05 g/L的分化趋势最明显;MTT结果显示0.2,0.5及1.0 g/L苦参碱对K562细胞的生长抑制率分别为25.88%,46.96%和63.04%(P均<0.01),其中效作用浓度(IC50)为0.6 g/L;苦参碱可使K562细胞周期阻滞于S期,阻止细胞的有丝分裂,同时可诱导K562细胞凋亡:0.05,0.1和0.2 g/L苦参碱对K562细胞的早期凋亡率分别是11.60%,69.81%和44.12%,明显高于对照细胞的自发凋亡率(1.49%)(P均<0.01)。结论苦参碱对体外培养的人慢粒K562细胞具有显著抑制增殖作用,且可诱导细胞向红系分化和早期凋亡。     

白花蛇舌草对白血病CEM细胞的抑制作用及诱导其凋亡的研究

目的 研究白花蛇舌草对白血病CEM细胞的抑制作用及其机制.方法 采用MTT比色实验检测白花蛇舌草对CEM细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察细胞凋亡形态结构的改变;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果 白花蛇舌草能明显抑制CEM细胞的生长,药物浓度在0.025 6 μg/ml即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为0.128 μg/ml;光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下呈新月形等典型的凋亡特征;流式细胞术证实白花蛇舌草能诱导CEM细胞凋亡,凋亡率也呈剂量和时间依赖性.结论 白花蛇舌草对白血病CEM细胞的生长具有明显的抑制作用,诱导细胞凋亡是其机制之一.     

姜黄素与5-FU联用对胃癌MGC-803细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究

目的：探索姜黄素与中低剂量化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）联用对胃癌MGC-803细胞生长、细胞凋亡和细胞周期的影响,为临床上应用姜黄素作为胃癌化疗药5-FU的增效剂,以减少5-FU使用剂量、降低其毒副作用提供实验依据。方法：应用MTT检测法检测药物作用对MGC-803细胞的抑制作用;应用基于AO/EB双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞凋亡的影响;应用基于PI单染的流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞周期的影响。结果：姜黄素（25 μmol·L^-1）分别与低剂量（2.4 μmol·L^-1）和中剂量（4.8 μmol·L^-1）的5-FU联合作用能有效地抑制MGC-803细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期,并呈剂量-时间的依赖关系。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果显著优于中剂量（4.8 μmol·L^-1）5-FU单用组（P < 0.01）,而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果显著优于高剂量（9.6 μmol·L^-1）5-FU单用组（P< 0.01）,提示姜黄素能显著增强5-FU抗胃癌MGC-803细胞的作用,并呈剂量-时间的依赖关系。结论：本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗胃癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。     

人参三醇对HL-60细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用

本文采用体外HL-60集落形成技术、细胞形态学变化、流式细胞术检测细胞凋亡百分率及琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段等方法观察了人参三醇对HL-60白血病细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用。实验结果表明：中高浓度(50-100mg／L)的人参三醇作用于细胞24、48和72h，能够显著抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡；低浓度(10—20mg／L)的药物作用不明显。提示人参三醇能有效抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡，作用呈时间一剂量依赖性，是人参总皂甙内抑制白血病细胞的有效成分，可为临床应用提供依据。     

纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用

目的: 研究纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用。 方法: 采用机械研磨法制备纳米雄黄。以白血病药物敏感K562细胞为靶细胞,采用MTT法检测纳米雄黄对K562细胞的增殖抑制作用,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,细胞流式细胞术检测Bax,Bcl-2,P-gp,BCRP,P-53蛋白的表达水平,Caspase-3活性。 结果: 雄黄经高能球磨机球磨10~50 h,扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察,电镜测量纳米雄黄的平均粒径为(72.72±22.18) nm,符合纳米颗粒的形貌特征。纳米雄黄对K562细胞有明显的增殖抑制作用。24,48,72 h的IC₅₀分别为43.48,20.52,16.07 mg·L^-1。20,50 mg·L^-1纳米雄黄作用48 h后Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增高,凋亡率分别为10.52%,73.25%。纳米雄黄作用48 h后Bax蛋白表达由对照的(75.80±2.40)%升高到(87.50±1.20)%和(99.60±0.10)%;Bcl-2蛋白表达由对照的(73.85±0.15)%升高到(94.80±2.00)%和(97.75±0.55)%。20,50 mg·L^-1纳米雄黄处理K562细胞24 h后,K562细胞Caspase-3蛋白表达水平由对照的(3.14±0.24)%升高到(8.87±2.74)%和(72.55±1.45)%;细胞的BCRP,P-gp蛋白,P53蛋白表达总体呈上升趋势,共表达也呈上升趋势。 结论: 纳米雄黄可以显著诱导白血病药物敏感K562细胞发生凋亡。     

白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的观察白屈菜红碱(che lerythrine)对人胃癌BGC 823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法通过M TT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果M TT实验显示白屈菜红碱抑制BGC 823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期。结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC 823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性。     

姜黄素对人肾癌Caki-2细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的:观察姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法:应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞12、24、36、48、72、96 h,采用MTT法评价姜黄素对Caki-2细胞的生长抑制作用;应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞36、48、72、96 h,采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒评价姜黄素对Caki-2细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测姜黄素对Caki-2细胞H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,β-actin作为内参蛋白。结果:不同浓度的姜黄素能显著抑制Caki-2细胞生长,36、48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;不同浓度的姜黄素能显著诱导Caki-2细胞凋亡,48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;姜黄素作用后,Caki-2细胞中H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达显著增加,ERK1/2、β-actin蛋白表达与空白组相比无统计学差异。结论:姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞有显著的生长抑制作用,其机制可能与通过抑制H-Ras蛋白表达、直接或间接下调ERK信号通路蛋白表达相关;同时,姜黄素对Caki-2细胞有显著的凋亡诱导作用,其机制可能与上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达相关。     

紫杉醇对人口腔鳞癌KB细胞生长抑制作用及诱导凋亡作用的研究

目的:研究紫杉醇对人口腔鳞癌KB细胞生长抑制及凋亡的作用。方法:MTT方法检测紫杉醇对人口腔鳞癌KB细胞生长抑制率,计算IC50;将0.25,0.5,1μmol·L-1的紫杉醇作用于KB细胞48 h,分别用DAPI染色和流式细胞术检测细胞凋亡,并用免疫印迹法检测紫杉醇对凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2和pro-caspase-3的影响。结果:紫杉醇对KB细胞的生长有明显的抑制作用,DAPI染色可见典型的凋亡细胞形态学特征,流式细胞术检测结果表明紫杉醇增加KB细胞凋亡率,免疫印迹结果显示紫杉醇可以增加Bax表达,减少Bcl-2表达,激活caspase-3。结论:紫杉醇对人口腔鳞癌KB细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,这可能与抗癌机制有关。     

八宝丹对骨肉瘤细胞U-2OS的抑制增殖和诱导凋亡实验研究

目的:探讨八宝丹(BBD)对骨肉瘤U-2OS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:应用形态学观察、Ki-67染色、MTT实验检测八宝丹对细胞增殖的抑制,原位末端标记、电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡。结果:MTT实验显示八宝丹抑制U-2OS细胞的增殖呈时间、浓度依赖的方式,实验组Ki-67指数降低,TUNEL检测阳性,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,随着作用时间延长和浓度增加,凋亡率增高;电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚,细胞表面出现凋亡小体。结论:八宝丹对骨肉瘤细胞U-2OS有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用表现出时间和剂量依赖关系。