健骨胶囊含药血清对体外培养破骨细胞活性和骨吸收作用的影响

目的：观察健骨胶囊含药血清对体外培养新生大鼠破骨细胞活性与骨吸收的干预作用。方法：3天给药法制备健骨胶囊含药血清;机械分离培养法将新生大鼠四肢长骨干体外分离和培养破骨细胞,应用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色,阳性破骨细胞计数、骨片吸收陷窝形态分析,评价健骨胶囊对破骨细胞的活性与骨吸收的作用。结果：健骨胶囊能减少体外破骨细胞的TRAP阳性细胞数及骨片吸收陷窝面积。结论：健骨胶囊含药血清对破骨细胞的活性与骨吸收具有抑制作用,为健骨胶囊治疗原发性骨质疏松症提供血清药理学依据。     

健骨颗粒对体外破骨细胞整合素αV及β3 mRNA表达的影响

目的:探讨补肾健脾中药健骨颗粒对体外破骨细胞整合素(Itg)αV、β3mRNA表达的影响。方法:采用破骨前体细胞系诱导培养法,通过M-CSF和RANKL诱导剂诱导RAW264.7细胞,分化为成熟破骨细胞。分别用健骨颗粒含药血清和生理盐水血清干预,运用实时荧光定量PCR法检测ItgαV、β3mRNA表达,并取骨片行甲苯胺蓝染色,骨陷窝和骨吸收面积计算分析。结果:经M-CSF和RANKL诱导后,RAW264.7细胞的形态特征、TRAP染色均符合成熟破骨细胞特异性表现;含药血清组破骨细胞ItgαV、β3mRNA表达水平明显低于生理盐水血清组(P<0.05),同时骨磨片的骨吸收陷窝数和面积亦呈同样变化趋势。结论:RAW264.7细胞经诱导分化后可以获取成熟破骨细胞;健骨颗粒能有效抑制破骨细胞Itgαv、β3 mRNA表达,影响破骨细胞功能活性。     

左归丸含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响以及成骨细胞对其的介导作用

目的:通过观察左归丸含药血清对破骨细胞(OC)骨吸收功能的影响,以及成骨细胞(OB)对其的介导作用,探讨其治疗骨质疏松症的作用机理。方法:体外分离培养大鼠OB与OC,观察左归丸含药血清对OC所致骨陷窝数目及面积的影响,以及OB在此过程中的作用。结果:OC与骨片共同培养的第7天,OVX血清能使OC所致的吸收陷窝数目和面积明显增加;而OVX含药大鼠血清能使OC活性明显下降。当OC与OB、骨片共同培养7d后,正常大鼠血清对OC单独培养和OC与OB共同培养所形成骨吸收陷窝的数目和面积没有明显的差异,但共同培养有增加的趋势。而在OVX血清的作用下,OC与OB共同培养所形成的骨吸收陷窝与OC单独培养相比,前者显著高于后者。本实验还发现,OVX含药血清与OB、OC共同培养的骨陷窝数目及面积明显低于OVX含药血清与OC单独培养。结论:在去势状态下,左归丸含药血清不仅对OC有直接的抑制作用,且可通过OB间接对OC产生抑制作用,这可能是其治疗骨质疏松症的作用机理。     

清络通痹颗粒含药血清对破骨细胞骨吸收的影响

目的:确定清络通痹颗粒(QLT)含药血清的制备方法并观察其对体外培养破骨细胞的活性和骨吸收的影响。方法:选用高效液相色谱外标一点法测定,QLT含药血清中青藤碱的含量以确定含药血清的制备条件;乳鼠破骨细胞1×108/mL加入96孔板,将QLT 3.6,7.2,14.4 g.kg-1给药的大鼠含药血清1∶10稀释,分别加入各孔培养48 h,观察其对破骨细胞增殖、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性及破骨细胞形成的骨吸收陷窝的影响。结果:QLT 7.2,14.4 g.kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的增殖能力和吸收陷窝面积(P<0.05,P<0.01),QLT 3.6,7.2,14.4 g.kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的TRAP活性(P<0.05,P<0.01)。结论:QLT含药血清可抑制破骨细胞增殖、TRAP活性和骨吸收能力,对破骨细胞引起的骨质破坏产生抑制作用。     

密骨片对破骨细胞基质金属蛋白酶-9mRNA表达的影响

目的:探讨白细胞介素-1(IL-1)诱导的破骨细胞性骨吸收过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA 的表达及补肾中药密骨片的调控作用。方法:从出生24 h 的乳鼠长骨中分离破骨细胞,从1月龄大鼠长骨中分离骨髓基质细胞,建立破骨细胞培养和骨髓基质细胞、破骨细胞培养系。在重组 IL-1α(rhIL-α)作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养20 h,计数骨吸收陷窝数及测算陷窝面积;并采用原位杂交技术研究破骨细胞 MMP-9 mRNA 的表达。结果:在基质细胞存在的条件下,IL-1可使骨吸收活性提高2～4倍,MMP-9 mRNA 呈高表达;而用密骨片药液处理后,MMP-9 mRNA 表达下降,作用呈量效关系。结论:密骨片可对抗 IL-1对基质细胞的影响,抑制破骨细胞重要的蛋白分解酶 MMP-9的表达而减少骨吸收。     

中药骨康对破骨细胞活性及凋亡的影响

为研究中药治疗骨质疏松症的作用机理.采用体外分离培养大鼠破骨细胞并分为空白组、固邦组和骨康组,分别添加相应的药物血清共同培养,然后进行指标检测.结果骨康组HE染色可见破骨细胞胞浆浓缩、核固缩深染,有的细胞出现核碎裂,TRAP阳性细胞数明显减少,象牙骨片上的吸收陷窝数量及面积减少,流式细胞仪监测时在G1期前出现凋亡峰,共聚焦显微镜观察可见细胞凋亡征象.检测结果接近固邦组,但与空白组具有显著性差异.表明中药骨康是通过抑制体外培养的破骨细胞活性并能诱导破骨细胞凋亡,而起到抑制骨吸收的作用的.     

增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外破骨细胞的影响

为阐明增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法治疗骨质疏松症的机理.从新生1天内的兔长骨骨干分离出破骨细胞,与骨磨片、盖玻片及添加增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号后共同培养,用相差显微镜及光镜观察骨吸收陷窝形态与破骨细胞形态变化,并进行骨陷窝计数.结果显示增骨Ⅰ号明显增加吸收陷窝数目(P＜0.01),破骨细胞形态小、数多、核少;增骨Ⅱ号明显抑制吸收陷窝数目(P＜0.01),破骨细胞形态大、数少、核多;增骨Ⅲ号对破骨细胞无影响(P＞0.05).表明增骨Ⅰ号能激活破骨细胞活性,增骨Ⅱ号能抑制骨吸收,增骨Ⅲ号对破骨细胞无作用.     

骨碎补提取液对体外分离破骨细胞性骨吸收的作用

目的 :研究骨碎补对体外分离破骨细胞性骨吸收的作用。方法 :体外分离出破骨细胞 ,与牛骨磨片共同培养 ,通过 Leica图像分析仪观察破骨细胞所形成骨吸收陷窝的数目与面积 ,反映破骨细胞性骨吸收情况。结果用 SPSS软件包分析。结果 :与空白血清组相比 ,2 0 %骨碎补提取液使骨磨片上形成的吸收陷窝数和面积从 ( 2 8.0 5± 2 .75 )个 /片和 ( 1 2 3 9.45± 5 2 3 .2 1 ) μm2减少到 ( 1 3 .2 0± 1 .2 6)个 /片和 ( 683 .1 7± 3 41 .3 8) μm2 ,空白血清组与 2 0 %骨碎补血清组比较差异具有显著性意义 ( P<0 .0 1 ) ,而 1 0 %低浓度骨碎补提取液对破骨细胞在骨磨片上形成的吸收陷窝数和面积从 ( 2 8.0 5± 2 .75 )个 /片和 ( 1 2 3 9.45± 5 2 3 .2 1 )μm2 减少到 ( 2 4.1 5±1 .1 2 )个 /片和 ( 82 3 .5 2± 5 2 7.1 8) μm2 ,二者比较无显著性意义 ( P>0 .0 5 )。结论 :骨碎补提取液对破骨细胞性骨吸收有抑制作用 ,但与浓度有关     

含补肾益精方的切卵大鼠血清对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的：观察补肾益精方治疗的切卵模型大鼠血清对体外培养破骨细胞骨吸收功能的影响。方法：将切除双侧卵巢造成骨质疏松症模型的30只大鼠随机分为3组,每组10只,分别给以补肾益精方0．75g/d(生药）,倍美力0．17mg/d,溶入饮用水中服用,以及正常饮食（模型对照组）;另设假切卵巢组10只,正常饮食喂养,治疗3个月后分离血清,用于细胞培养实验,自1日龄SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞,接种于象牙薄片底物上,以骨吸收陷窝数量变化为指标,观察各组血清的作用效果,结果：与假切卵组比较,模型对照组陷窝数量增加了74．1％,而补肾益精方和倍美力组的陷窝数量分别下降了65．7％和59．3％,分别与假切卵组比较,其差异均有非常显著意义（P＜0．01）,结论：补肾益精方具有明显的抑制破骨细胞活性的作用。     

补肾法对IL-1诱导的破骨细胞性骨吸收及破骨细胞MMP-9的影响

用从出生２４小时的乳鼠长骨中分离出来的破骨细胞,从１月龄大鼠长骨中分离出来的骨髓基质细胞,建立破骨细胞培养和破骨细胞、骨髓基质细胞培养系。在白细胞介素１（ＩＬ１α）作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养２０小时。计数骨片形成的陷窝数及测算吸收陷窝面积。并采用原位杂交技术,研究密骨片对破骨细胞基质金属蛋白酶９（ＭＭＰ９）ｍＲＮＡ表达的调控。结果显示,在基质细胞存在的条件下,ＩＬ１可使骨吸收性增强２～４倍,ＭＭＰ９ｍＲＮＡ呈高表达。密骨片则可对抗ＩＬ１对基质细胞的影响,间接地抑制破骨细胞活性,使ＭＭＰ９ｍＲＮＡ表达降低,减少骨吸收。