TIL细胞治疗对肺癌患者红细胞免疫功能的影响

应用TIL细胞治疗28例肺癌患者,TIL细胞的输注途径为静脉点滴和胸腔内注射,输注细胞数为2.0×10~3～5.0×11~9。输注TIL细胞后,绝大多数患者外用血红细胞C3b受体花环率(E-C3bRR)明显增高。而红细胞免疫复合物花环率(E-ICR)明显降低(P<0.01)。结果显示,TIL细胞的输注提高了肺癌患者红细胞免疫功能。     

CIK细胞体外培养的免疫表型

目的探讨体外培养过程中细胞因子激活的杀伤细胞(CIK)免疫表型的动态变化。方法通过向外周血单个粒细胞(PBMC)中加入白细胞介素2(IL-2)、γIL-1α、γ干扰素(γ-IFN)与抗CD3McAb,诱导出CIK细胞。经流式细胞分析法对CIK细胞进行动态表型分析。结果动态表型分析显示,在第14~21天时CD3 CD16 56 细胞为(31·6±5·5)%~(35·8±9·7)%,呈高表达的平台期。结论CIK细胞在体外培养14~21d,CIK细胞CD3 CD16 56 双阳性细胞呈高表达,此时临床应用可取得较好疗效。     

抗人CD3单抗在体外诱导LAK和TIL增殖的实验研究

目的 观察抗人ＣＤ３单抗（ａＣＤ３ＭｃＡｂ）对单核细胞（ＰＢＭＣ）和肿瘤组织中提取的浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）增殖的影响。方法 将外周血中分离出的ＰＢＭＣ和ＴＩＬ进行扩增培养,同时测定其活性。结果 ａＣＤ３ＭｃＡｂ和白细胞介素－２（ＩＬ－２）的浓度是包被法制备ＣＤ３单克隆抗体激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）的主要影响因素。经选择ａＣＤ３ＭｃＡｂ的最适蛋白浓度为０．１ｕｇ／ｍｌ,ＩＬ－２为２０Ｕ／ｍｌ。结论     

黄芪和地黄对食管癌TIL增殖及体外抗肿瘤作用的研究

目的：探索黄芪、地黄在促进食管癌ＴＩＬ增殖和特异性杀伤活性中的作用食管癌ＴＩＬ免疫治疗的可行性。方法：采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法。应用黄芪和地黄联合多种细胞因子对９例食管癌ＴＩＬ的增殖和特异性杀伤活性进行研究。结果：在促进ＴＩＬ增殖、杀伤活性中,黄芪联合ＩＬ－２、ＩＬ－２＋ＩＬ－４、ＩＬ－２＋ＴＮＦ－α均较单用这些细胞因子有明显增强作用（Ｐ〈０．０５或０．０１）。结论：食管癌ＴＩＬ免疫治疗是完全可行     

急性白血病细胞免疫表型分析

采用间接免疫荧光法检测 42例急性白血病 (AL )患者骨髓细胞的免疫标志。认为免疫分型是 FAB分型的必要补充 ,但仍需结合细胞形态学及组织化学检测 ,现报道如下。1　资料与方法1.1　临床资料 :我院 1997年 4月至 2 0 0 0年 12月门诊及住院病人 42例 ,其中成人 (15～ 82岁 ) 37例 ,男 2 1例 ,女 16例 ;儿童 (3.5～ 13岁 ) 5例 ,男 3例 ,女 2例。上述患者均经临床、外周血及骨髓细胞形态学、细胞化学和免疫学分型而确诊 ,诊断标准均符合血液病诊断及疗效标准 [1 ]。1.2　取材 :经肝素抗凝的骨髓 ,原始 幼稚细胞≥ 70 %。1.3　实验方法 :间…     

B,T淋巴细胞免疫表型染色分析

应用免疫组化方法探讨Ｂ，Ｔ淋巴细胞免疫表型染色的特异性和交叉反应性，发现Ｂ细胞表型标志的ＣＤ２０和ＣＤ７４细胞对非何杰金氏淋巴瘤染色阳性率达８８．２％～１００％，但ＣＤ７４特异性不强，而ＣＤ２０表现出高度的特异性，交叉反应性为０％，Ｔ细胞表型标志的ＣＤ４５ＲＯ，ＣＤ４３和ＣＤ３对Ｔ细胞非何杰金氏淋巴瘤染色阳性率达８５．７％～１００％，但ＣＤ４５ＲＯ和ＣＤ４３特异性不强，而多克隆性的ＣＤ３仅与５．９     

肿瘤的过继性细胞免疫治疗——LAK、TIL和转基因TIL

肿瘤的过继性细胞免疫治疗主要包括LAK、TIL和转基因的TIL。LAK具有广谱的抗瘤作用,过继输注LAK+IL-2显示了一定的抗瘤作用。TIL具有特异性抗肿瘤作用,其效高于LAK50～100倍。TNF—2基因修饰的TIL可使TIL抗瘤活性更强,故比单纯的TIL更具潜在的临床应用价值。     

77例T细胞非霍奇金淋巴瘤的临床病理特点和免疫表型分析

目的探讨T细胞非霍奇金淋巴瘤的临床病理特点和免疫表型。方法对77例T细胞非霍奇金淋巴瘤进行苏木素和伊红染色(HE)和免疫组织化学检查,按WHO 2008年《造血和淋巴组织肿瘤的病理学和遗传学》标准进行分类。结果 77例T细胞非霍奇金淋巴瘤中,鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤32例(41.6%),非特异性外周T细胞淋巴瘤20例(26.0%),间变性大细胞淋巴瘤11例(14.3%),前驱T淋巴细胞淋巴瘤9例(11.7%)。结论 T细胞非霍奇金淋巴瘤中,最常发生的亚型是鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤,其次为非特异性外周T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤和前驱T淋巴细胞淋巴瘤。其中,鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤预后较差,而间变性大细胞淋巴瘤预后相对较好。     

SD大鼠骨髓基质细胞体外培养及分化研究

目的 研究SD大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)的生物学特性及其成骨和成脂分化能力.方法 处死16只6月龄SD大鼠动物,非连续密度梯度离心分离大鼠MSCs,传代后分别在成骨及成脂培养基中诱导培养14天,观察细胞形态,绘制细胞生长曲线,通过组织特染对MSCs的成骨,成脂表型进行鉴定,计数阳性染色细胞百分比.结果 SD大鼠MSCs在体外具有成骨细胞分化潜力,油红0染色显示成脂诱导培养基可定向诱导其分化.结论 本实验成功分离SD大鼠MSCs且保持分化能力.     

人胃癌肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）两种分离诱导培养方法抗肿瘤作用的比较

对人胃癌肿瘤浸润淋巴细胞（TumorInfiltratingLymphocytesTIL），用直接分离和酶消化分离两种方法进行抗肿瘤作用比较，观察到直接法得TIL细胞数低，增殖快，酶消化法得TIL细胞数较多，增殖慢，两种方法制备的TIL细胞抗肿瘤效果无差异。有些肿瘤组织标本，质地坚硬，用直接法得TIL细胞太少，难以满足实验要求，本文认为两种方法合用，可互补其各自不足，是可取的。     

联合应用肿瘤浸润淋巴细胞,白介素2治疗恶性脑肿瘤的临床研究

为延长恶性脑肿瘤患者的生存期，测定肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）、白介素2（IL－2）在人体内杀肿瘤细胞的活性，在已经取得良好的实验室研究和动物实验研究的基础上，将TIL、IL-2联合应用于31例恶性脑肿瘤患者临床治疗。结果显示免疫治疗组与对照组1～3年生存率及死亡病例平均生存期均有显著差异。认为：从手术标本提取TIL，在体外经IL－2激活、培养、扩增3周，再回输入肿瘤手术残腔，能有效地杀灭残留的瘤细胞，可能是一种较为理想的恶性脑肿瘤的综合疗法。     

IL-2与化疗同期应用对非小细胞肺癌化疗耐药影响的临床观察

目的评价标准化疗方案无效时同期应用化疗和IL-2治疗晚期非小细胞肺癌患者的近期疗效和不良反应。方法 96例经4～6周期标准方案化疗无效的晚期非小细胞肺癌患者(单纯化疗组),按病理类型、性别、年龄、体质状况等配成48对,随机分入生物化疗组(A组)和单纯IL-2组(B组)。A组维持原化疗方案不变,按标准周期进行,并同期应用IL-2,100万IU,皮下注射,每周3次,连用8周,8周评价疗效。B组单独应用IL-2,100万IU皮下注射,每周3次,连用8周,8周评价疗效。结果 A组总有效率(CR+PR)为18.7%。治疗前后差异有显著性(P<0.05)。B组总有效率(CR+PR)为4.2%。两组间差异显著(P<0.05)。主要不良反应为发热、骨髓抑制、消化道反应,两组间差异无显著性。结论晚期非小细胞肺癌患者在标准化疗方案治疗无效时,保持原化疗方案不变同期应用IL-2可进一步提高疗效,不良反应无明显加大,且可耐受。     

导向治疗对肝癌肿瘤浸润淋巴细胞体外生长动力学的影响

对5份人肝癌标本的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）进行了体外培养，观察其生长动力学及杀肿瘤活性。结果显示：2份取自术前曾导向化疗且治疗有效的肝癌患者癌组织的TIL，分别于体外培养的第7、第8天即可见TIL细胞数有较明显增加，于第14、16天增殖达高峰，以后则增殖减慢。1份取自曾治但无效癌组织和另2份取自未治癌组织的TIL分别于体外培养的第18、19和16天方显示细胞数增加，于第30、33天增殖达高峰。所做的10次细胞毒性试验，有7次显示TIL对自体瘤细胞的杀伤率显著高于对肝癌细胞株的杀伤。     

人脑胶质瘤浸润淋巴细胞亚群分析及体外抗肿瘤活性研究

为检测人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（TIL）的来源及其体外抗肿瘤活性，本实验应用免疫组化方法分别测定10例人脑胶质瘤TIL提取前、提取后及体外经白细胞介素－2（IL－2）刺激增殖后不同时间的细胞成分及其亚型构成。发现TIL主要为T淋巴细胞，其中CD_8阳性细胞占84．29±2．15％，CD_4阳性细胞占8．33±3．43％，B淋巴细胞浸润极少、TIL体外扩增4周．平均增加69±28．17倍，最高达120倍。体外杀伤试验表明，TIL对自体胶质瘤细胞具有高度杀伤力；对异体胶质瘤及K_562细胞也有一定杀伤作用。新鲜分离的TIL无杀瘤活性。经IL－2刺激增殖3周的TIL，杀瘤活性最强。作者认为，从手术切除的脑胶质瘤中提取、扩增的TIL，术后回输入手术瘤床，以杀灭残留的肿瘤细胞，可能成为一种较为理想的过继性免疫治疗方法.     

HPLC法测定人尿中右美沙芬及去甲右美沙芬的含量及CYP2D6表型区分研究

目的:建立以高效液相色谱法测定人尿中右美沙芬及去甲右美沙芬含量的方法,并行CYP2D6表型区分。方法:尿样经酶水解,酸、碱提取纯化,直接进样。其中色谱柱为Waters Nova-Pak Phenyl,流动相为乙腈-水(60∶40),流速为1.0mL.min-1,激发波长为280nm,发射波长为310nm,柱温为25℃。结果:右美沙芬、去甲右美沙芬尿药浓度分别在0.065~4.148(r=0.9985)、0.353~22.592(r=0.9997)μg.mL-1范围内线性关系良好,最低检测限分别为0.016、0.018μg.mL-1,平均加样回收率各为90.5%、93.5%,日内RSD各≤3.26%、≤3.47%,日间RSD各≤3.65%、≤4.05%。8位受试者均为CYP2D6快代谢型。结论:本方法简便可靠,适用于人尿中右美沙芬及去甲右美沙芬含量测定和CYP2D6多态性的表型研究。     

人类非小细胞肺癌血管生成研究

目的研究人类非小细胞肺癌中的血管生成。方法应用免疫组织化学(S-P法)检测了80例非小细胞肺癌组织标本和40例肺良性病变组织中CD34的表达水平,计算MVD值。结果①非小细胞肺癌组织中MVD值(41.90±7.33)显著大于肺良性病变组织(12.26±3.37)(P<0.05);②非小细胞肺癌组织中MVD值大小与肺癌组织学类型,是否有淋巴结转移及患者P-TNM分期存在相关性(P<0.05)。结论血管生成是非小细胞肺癌侵袭转移的分子基础。     

雷公藤内酯醇诱导非小细胞肺癌细胞凋亡及其机制初探

目的:研究雷公藤内酯醇(Triptolide,TPL)对非小细胞肺癌细胞A549细胞增殖抑制作用和促凋亡影响的分子机制。方法:以A549细胞为研究对象,采用MTT法测定细胞增殖;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色法检测细胞凋亡;Caspase3活性检测试剂盒分析其凋亡机制。结果:在6.25～100 ng·ml~(-1),12～72 h范围内,TPL对A549细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01),48 h内其凋亡率随着时间延长而增加,Caspase3活性早期较对照组有显著提高(P<0.05),并于12 h达到最高值。结论:TPL能有效抑制A549细胞的增殖,这种抑制作用可能与TPL促进肿瘤细胞凋亡,激活Caspase3活性有关。     

鲜铁皮石斛提取物抗Lewis肺癌的机制研究

目的考察鲜铁皮石斛生物碱、多糖提取物对小鼠Lewis肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法制备Lewis肺癌实体瘤小鼠模型,将80只实体瘤模型小鼠均分为模型组、环磷酰胺（CTX）组、鲜铁皮石斛生物碱提取物高、中、低剂量（20,10,5g·kg^-1）组、鲜铁皮石斛多糖提取物高、中、低剂量（20,10,5g·kg^-1）组。除CTX组在开始给药后第3,6,9天腹腔注射CTX（40mg·kg^-1）外,其余各组连续给药20d。观察鲜铁皮石斛生物碱、多糖提取物对荷瘤小鼠瘤重、脾脏指数、血清中白细胞介素－2（interleukin－2,IL－2）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的影响。结果鲜铁皮石斛生物碱、多糖各剂量组的瘤体重量均低于模型组,多糖高剂量组,生物碱高、中剂量组抑制瘤重效果显著（P＜0．05）;鲜铁皮石斛生物碱、多糖各剂量组的脾脏重量、脾脏指数均高于模型组,多糖高、中剂量组效果最好（P＜0．05）;不同剂量生物碱和多糖组均能提高TNF-α、IL-2水平,生物碱高剂量组,多糖高、中剂量组提高效果显著（P＜0．05）。结论鲜铁皮石斛生物碱、多糖提取物对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤有明显的抑制作用,其作用机制可能与提高脾脏指数,调节血清中TNF-α、IL-2水平有关。