5-羟色胺对培养胃底平滑肌细胞内游离钙动员的影响

目的　研究 5 - HT诱导胃底平滑肌细胞内钙动员的机制 .方法　采用 Ca2 +指示剂 Fluo- 3/ AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的胃底平滑肌细胞 ,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化 .结果　基础状态下 SFSMC[Ca2 + ]i 荧光强度 (FI)为 2 6 4± 15 ,5 - HT 10μmol· L- 1 使荧光强度的变化 ΔFI为 16 .5± 2 .6 ;细胞外无钙时 ,5 - HT升高[Ca2 + ]作用被减弱 ,但除去细胞外钙 ,并使用内罗啶 (ryan-odine)孵育后 ,5 - HT 不再引起荧光强度的变化 ;10μmol· L- 1 米安舍林 (mianserin)可部分拮抗 5 - HT升高[Ca2 + ]i 的作用 ,赛更定 (cyprohetadine)不能抑制 5 - HT升高的胞内钙 ;Mn92 0 2和拉西地平 (lacidipine)均能完全抑制 5 -HT升高 [Ca2 + ]i 的作用 .结论　 5 - HT可通过促进外钙内流及钙池 (SR)释放使 [Ca2 + ]i 升高 ;在胃底平滑肌 5 - HT升高胞内钙部分通过 5 - HT2 受体 ,而不是通过 5 - HT1 C受体 ;5 -羟色胺通过 L型钙通道促外钙内流 ;二氢吡啶类钙拮抗剂能通过阻滞 L 型钙通道 ,而完全抑制 5 - HT促胞内钙升高的作用     

异紫堇啡碱抑制血管平滑肌由受体中介的细胞内游离钙的增高

目的　观察扩血管药异紫堇啡碱 (ISOC)对去甲肾上腺素 (NA)和高钾所致血管平滑肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 ]i)增高的影响 ,分析该药扩血管作用的原理。方法　利用钙荧光指示剂Fura 2 /AM负载的家兔血管平滑肌培养细胞 ,动态地观察在ISOC存在下 ,由NA和高钾所增加的 [Ca2 ]i的改变 ,分析ISOC对NA和高钾所致钙内流和 /或钙释放的影响。结果　ISOC对血管平滑肌静息 [Ca2 ]i无影响 ,该药在 10 -5和 5× 10 -5mol/L时对高钾所致 [Ca2 ]i的增高也无明显抑制 ,但能明显抑制NA所致细胞 [Ca2 ]i的增高。结论　ISOC抑制由受体中介的血管平滑肌 [Ca2 ]i的增高。     

鼠脾虚证与胃窦及十二指肠组织5-HT及其受体的关系

目的　探讨脾虚证与胃窦及十二指肠组织的 5 - HT及其受体的关系 .方法　成年 SD大鼠 30只随机分为 3组 .A组 :脾虚组 ( n=10 ) ;B组 :对照组 ( n=10 ) ;C组 :四君子汤治疗组 ( n=10 ) .采用免疫组化和医学图像分析系统相结合的方法 ,测定各组大鼠胃窦及十二指肠 5 - HT细胞的数目、面积、平均灰度、细胞内 5 - HT含量及 5 - HT受体阳性细胞内 5 - HT受体的含量 .结果　 1A组大鼠胃窦 5 - HT细胞的数目 ( 10 6±8) .HP- 1 ,面积 ( 35 .1± 4.0 )μm2 ,5 - HT含量 ( 0 .337± 0 .0 5 0 )AU,5 - HT受体含量 ( 0 .345± 0 .0 75 ) AU均高于 B组 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,平均灰度 ( 12 0± 8)较 B组降低 ( P<0 .0 5或P <0 .0 1) ;A组大鼠十二指肠 5 - HT细胞的数目 ( 10 9± 5 ) .HP- 1 ,面积 ( 30 .2± 2 .2 )μm2 ,5 - HT含量 ( 0 .341± 0 .0 31)AU ,5 - HT受体含量 ( 0 .319± 0 .0 31) AU均高于 B组 ( P<0 .0 1) ,平均灰度 ( 12 3± 4)较 B组降低 ( P<0 .0 1) . 2 C组的上述指标测定结果与 B组无显著差异 .结论　胃窦及十二指肠组织 5 - HT及其受体含量的增高可导致消化系统功能紊乱 ,有可能是脾虚证的一种重要病因或病机     

抗抑郁剂对慢性应激抑郁大鼠脑内5-HT1A受体和5-HT2A受体的影响

目的 以慢性不可预见性应激抑郁模型为基础,探讨三环类抗抑郁剂 (TCAs)和 5 羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)在 5 羟色胺受体水平的药理学机理。方法 将 24只SD雄性大鼠随机分对照组、抑郁模型组、阿米替林治疗组、氟西汀治疗组。应用 [3H]8 OH DPAT、[3H]Ketanserin作为标记配基,采用放射性配体受体结合法,分别测定大鼠海马 5 HT1A受体、大脑皮层 5 HT2A受体的特异性结合。结果 与正常对照组比较,抑郁大鼠海马 [3H] 8 OH DPAT特异性结合明显下降 ( 18. 78±5. 62vs26. 12±5. 52, P<0. 05),抑郁大鼠大脑皮层[3H]Ketanserin特异性结合显著增加(86. 28±4. 24vs112. 58±4. 21,P<0. 05)。阿米替林治疗 3周后,抑郁大鼠海马 [3H] 8 OH DPAT特异性结合回升到正常水平,大脑皮层 [3H]Ketan serin特异性结合下降至正常水平(P<0. 05)。氟西汀治疗 3周后,抑郁大鼠海马 [3H]8 OH DPAT特异性结合(26. 63±5. 50)、大脑皮层[3H]Ketanserin特异性结合 (83. 16±2. 54)与抑郁组比较差异无显著性 (P>0. 05)。结论 1.阿米替林通过增强海马 5 HT1A受体功能、抑制大脑皮层 5 HT2A受体功能发挥抗抑郁作用。2.氟西汀可能不通过影响海马 5 HT1A受体和大脑皮层 5 HT2A受体功能发挥抗抑郁作用。     

氧化低密度脂蛋白,低氧和5—HT对血管平滑肌细胞5—HT2A受？…

为探讨粥样硬化病变动脉对５－ＨＴ收缩反应增加的机制,观察要样硬化有关因子氧化低密度脂蛋白、低氧、５－ＨＴ对血管平滑肌细胞５－ＨＴ２Ａ受体及其基因表达,以及细胞「Ｃａ＾２＋」ｉ的效应。方法分别将大鼠主动脉平滑肌细胞单独以５０μｇ／ｍｌｏｘＬＤＬ培养８ｈ,２％,低氧处理２４和４８ｈ,１０μｍｏｌ／Ｌ５－ＨＴ处理３０ｍｉｎ,放射配基结合分析测定５－ＨＴ２Ａ受体;ＲＴ－ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测受体     

血管钠肽抑制低氧刺激心成纤维细胞c-fos的表达

目的　研究血管钠肽 (VNP)对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响 ,并对其机制进行探讨 .方法　分离纯化乳鼠心成纤维细胞 ,随机分为 4组 :对照组、低氧组 (2 0～ 30m L· L- 1 )、VNP组 (10 - 8～ 10 - 6 mol· L- 1 )和 VNP (10 - 6mol· L- 1 ) +低氧组 .以免疫组织化学染色方法观察各组 c-Fos的表达情况 ,采用激光共聚焦方法测定了 [Ca2 + ]i 水平 .结果　 1低氧组较对照组可以显著升高 Fos样免疫阳性细胞数及染色强度 (P<0 .0 5 ) ;2 VNP预处理心成纤维细胞可以减弱低氧的作用 (P<0 .0 5 vs低氧组 ) ,但 Fos的表达量仍高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;3对照组 [Ca2 + ]i 水平无显著变化 ,低氧组 [Ca2 + ]i 水平显著升高 ,而 VNP能使升高的 [Ca2 + ]i 水平较对照组和低氧组显著降低 (P<0 .0 5 ) .结论　 VNP能减弱低氧对心成纤维细胞生长的刺激作用 ,其机制可能与 Ca2 + 等信号转导分子及 c- fos表达有关     

5α-双氢睾酮对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动和细胞生长的影响

目的:探讨5α-双氢睾酮(DHT)对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动的影响及其机制.方法:应用Fura-2/AM Ca2 荧光探针法结合MiraCal荧光成像系统动态检测DHT刺激以及Ca2 通道阻滞剂干预后LNCaP细胞内钙离子浓度(Ca2 ]i) 的变化.应用MTT法观察细胞活力.流式细胞仪观察早期细胞凋亡率.结果:DHT浓度为1、10、100和1000 nmol/L时,能快速诱导[Ca2 ]i升高,在20 s～3 min升至峰值.细胞外液无(Ca2 ,1000 nmol/L DHT未能诱导[Ca2 ]i升高.细胞膜L一型电压门控Ca2 通道阻滞剂维拉帕米(50 ìmol/L)、地尔硫革(100 ìmol/L)或硝苯地平(5 mmol/L)37℃孵育细胞5 min后,能完全抑制1 000 nmol/L DHT诱导的[Ca2-]i升高.磷脂酶C抑制剂新霉素(1mmol/L)37℃孵育细胞5min或兰尼定受体阻滞剂普鲁卡因(50 mmol/L)37 C孵育细胞3 min后.对1 000 nmol/L DHT诱导的[Ca2 ]i升高没有影响.1000 nmol/LDHT作用细胞48 h后,与1 000 nmol/L DHT作用前用维拉帕米预孵细胞相比.细胞光密度(D)值[(0.67士0.10)VS(2.13士0.16))和早期细胞凋亡率[(14.3l±2.29)%VS(1.07士0.1 9)%]差异有统计学意义(P<0.01).结论:DHT可快速地、剂量依赖性地诱导I.NCaP细胞[Ca2 ]i升高;DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2 ]i的升高是通过细胞外Ca2 经细胞膜L-型电压门控Ca2 通道流入细胞内实现的.细胞内贮钙库未释放Ca2 .DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2 ]i升高促进细胞凋亡、抑制细胞生长.     

普罗托品对大鼠血管平滑肌收缩反应及细胞内游离钙浓度的影响

目的探讨普罗托品(protopine, Pro)对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.方法采用无Ca2 -复Ca2 的实验法,间接观察Pro对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的可能影响,再利用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的 [Ca2 ]i的升高的影响.结果在无钙Krebs液中,Pro 10、30、100 μmol/L对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2 后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用.在Fura-2/AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,Pro (50 μmol/L, 100 μmol/L) 对静息时的 [Ca2 ]i无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 50 μmol/L能明显降低NA所致[Ca2 ]i的升高,对KCl引起的 [Ca2 ]i 升高有降低趋势;当Pro的浓度增加到100 μmol/L时,对NA和KCl引起的 [Ca2 ]i升高均有明显的抑制作用.结论 Pro可能通过抑制Ca2 释放和(或)Ca2 内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2 ]i的升高,从而抑制血管平滑肌的收缩反应.     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的　探讨高密度脂蛋白 (HDL)对氧化型低密度脂蛋白 (ox L DL)诱导体外培养的人血管内皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法　 ox L DL 单独或与 HDL 共同处理体外培养的人脐静脉内皮细胞株 (ECV- 30 4 )后 ,通过流式细胞仪、DNA电泳检测细胞凋亡并测定 Caspase- 3酶活性。结果　 10 0 μg/ml和 2 0 0 μg/m l浓度 ox L DL 作用内皮细胞后 ,其细胞凋亡率分别为 2 8.4 0± 5 .30 %、34.72± 4 .6 4 % ,DNA电泳呈典型的梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性达到 16 6 .0 1± 16 .4 4、2 6 3.74± 4 6 .6 2 pmd/(m in· mg protein) ,与空白组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。HDL(2 0 0 μg/ml)与 ox L DL(10 0 μg/ml、2 0 0 μg/m l)共同作用后 ,凋亡率降至 8.0 6± 2 .35 %及 9.4 0± 2 .5 8% ,未出现梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性减低 (分别为 6 7.73± 14 .83、111.2 6± 2 7.13min· m g protein) ,与对应的 ox L DL 组比较均差异显著 (P<0 .0 1)。结论　 HDL 能减少 ox L DL 所致体外培养的内皮细胞凋亡 ,这一作用可能与降低Caspase- 3酶活性有关     

钙通道阻滞剂对胃泌素促人结肠癌细胞增殖的影响

目的　观察硝苯地平 ( Nif)对五肽胃泌素促人结肠癌细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法　采用流式细胞仪检测细胞内游离钙离子浓度水平 (〔 Ca2 +〕i) ,结合 MTT比色法测定细胞增殖情况。结果　 2 .5× 10 - 6mol/ L的五肽胃泌素 ( PG)作用于 HT2 9细胞后 ,可引起〔 Ca2 +〕i 水平迅速升高 ( P<0 .0 1)。 10 - 5 mol/ L的 Nif可使 PG引起的〔 Ca2 +〕i 水平升高幅度明显降低 ( P<0 .0 1) ,同时 10 - 5～ 10 - 6mol/ L 的 Nif可以抑制 PG促 HT2 9细胞增殖的作用 ( P<0 .0 5 )。结论　 Nif通过抑制胞外 Ca2 +内流 ,阻止〔 Ca2 +〕i 水平升高 ,是其抑制 PG促 HT2 9细胞增殖的一个主要机制     

不稳定心绞痛血浆oxLDL水平升高的临床意义

目的 :探讨血浆氧化低密度脂蛋白 ( ox L DL)水平与不稳定心绞痛 ( U A)严重程度和预后的关系。方法 :用 EL ISA法检测 69例不稳定心绞痛 ( UA组 ,包括低危组 16例、中危组 3 0例、高危组 2 3例 )及 42例稳定型心绞痛( SA组 )血浆 ox L DL水平。根据住院期间有无心血管事件 ,U A分为 :难治组 17例和趋稳定组 5 2例。结果 :U A组血浆 ox L DL 水平明显高于 SA组 ( P<0 .0 1) ;UA难治组明显高于 U A趋稳定组 ( P<0 .0 1) ;血浆 ox L DL 水平与 U A危险度分层具有极好的正相关性 ( P<0 .0 1)。结论 :血浆 ox L DL 水平升高是 U A的一个危险因子 ;ox L DL 可作为 U A危险度分层的一个指标     

单个结肠平滑肌细胞的制备

目的 :探讨离体肠道平滑肌细胞分离方法。方法 :采用混合酶法分离豚鼠结肠平滑肌细胞 ,通过台盼蓝染色法检查细胞成活率 ,并应用Ca2 + 荧光指示剂Fura 2 AM测定静息状态下结肠平滑肌细胞内游离钙浓度( [Ca2 + ]i)。结果 :成功地分离出单个结肠平滑肌细胞 ,其存活率为 ( 96.7± 2 .6) % ,在静息状态下且细胞外Ca2 + 浓度为 1.5mmol L时 ,豚鼠结肠平滑肌细胞 [Ca2 + ]i 为 ( 10 8± 9.4 )nmol L (n =6) ;细胞外Ca2 + 浓度为 0时 ,[Ca2 + ]i为( 72± 11.8)nmol L (n =6)。结论 :酶法分离的单个结肠平滑肌细胞活性好 ,可应用于肠道平滑肌细胞电生理、药理学研究。     

应用共聚焦激光扫描技术研究阿片受体介导胞内Ca2+增高的调节机制

目的　观察阿片激动剂急性和长时程作用于稳定表达 i NOS基因的 NG- L NCXi NOS细胞 ,对细胞内游离钙 ([Ca2 ]i)的影响及 G-蛋白的调节作用。方法　应用共聚焦显微镜和荧光探针 Fluo- 3,监测单细胞 [Ca2 ]i 含量变化。结果　 δ-阿片激动剂 DPDPE和吗啡急性刺激细胞诱发 [Ca2 ]i 增加 ,纳洛酮对其起翻转作用 ;用百日咳毒素预处理细胞后 ,吗啡急性刺激不能引起 [Ca2 ]i 增加 ;DPDPE和吗啡长时程处理细胞 ,再用相应的阿片激动剂急性刺激也造成 [Ca2 ]i 增加 ,但 [Ca2 ]i 增加水平较低 ,用纳洛酮戒断造成 [Ca2 ]i 明显增加。结论　阿片激动剂诱发[Ca2 ]i 增加是由阿片受体介导的 ,受对 PTX敏感的 G-蛋白调节 ,当细胞发生阿片耐受和依赖时 ,表现为受体介导 Ca2 系统的脱敏现象。     

酮替芬对新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的影响

目的　观察在不同外钙条件和激动剂作用下新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的变化及酮替芬 (ketotifen ,Ket)的影响。方法　通过荧光指示剂Fura - 2 /AM负载细胞 ,测定 [Ca2 ]i 值。结果　胞外正常钙 1.3mmol/L时 ,胞内静息 [Ca2 ]i 为(136 .49± 7.36 )nmol/L(n =10 )。Ket(5 0 0 μmol/L)对不同外钙条件下胞内静息Ca2 浓度无显著影响 (P >0 0 5 ) ,Ket(5 0～5 0 0 μmol/L)可以剂量依赖性抑制KCl和L -谷氨酸引起的 [Ca2 ]升高。结论　Ket对电压依赖性钙通道和受体依赖性钙通道均可能有抑制作用     

柴胡皂苷元D对C6大鼠神经胶质瘤细胞内游离Ca2+浓度的影响

目的探讨柴胡皂苷元D (Saikogenin D, SGD)对C6大鼠神经胶质瘤细胞内游离Ca2 浓度[Ca2 ]i的影响.方法采用 Fura-2/AM荧光指示剂测定SGD引起的C6大鼠神经胶质瘤细胞[Ca2 ]i变化.结果 SGD(1×10-5～1×10-4 mol/L)剂量依赖性地升高[Ca2 ]i,其EC50为3.5×10-5 mol/L.SGD的升高[Ca2 ]i作用被Thapsigargin显著降低.2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB, 1×10-4 mol/L) 和 U73122 (2×10-6 mol/L)显著降低组胺的升高[Ca2 ]i作用,但对SGD的升高[Ca2 ]i作用无影响.咖啡因和阿诺碱不影响SGD升高[Ca2 ]i.结论 SGD通过独立于肌醇三磷酸(IP3)受体系统和阿诺碱受体系统的机制,引起细胞内钙释放,导致[Ca2 ]i升高.     

大川芎方提取物对神经胶质细胞5-HT1D受体的影响

目的　探讨大川芎方提取物是否影响神经胶质细胞 5- HT1 D受体。方法　体外培养人神经胶质细胞中给予1～ 3# 被试大川芎配方药的提取物 (1 0 %浓度 ) ,剂量 (ml)分别为 0 .0 6、0 .1 2、0 .2 4 ,作用 0 .5 h后加入特异性的抗体 sc-5394,用 FCM(流式细胞仪 )检测受体的表达 ,并用同样的方法检测阳性对照物川芎嗪注射液对 5- HT1 D受体的影响。结果各种不同比例配伍药物的提取物均可使荧光强度增强 ,即 :引起 5- HT1 D受体表达增加。结论　大川芎方可引起 5- HT1 D受体表达增加 ,作为 5- HT1 D受体的激动剂应用于偏头痛 ,扩张小动脉等     

内皮素通过增强库容性钙内流促进肺血管平滑肌细胞增生

目的通过观察内皮素-1(ET-1)诱导人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增生的作用机制及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化,探讨ET-1在肺动脉高压(PAH)发病过程中的作用,为进一步干预治疗提供有效的基础依据。方法体外培养HPASMCs并分为:正常对照组和内皮素组(ET-1:0.01μmol/L,0.1μmol/L,1.0μmol/L)。分别应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和细胞计数检测细胞的增生情况,荧光钙成像法测定[Ca2+]i,运用RealTime-PCR、WesternBlotting检测编码钙库操控性钙通道(SOC)的规范瞬时受体电位1(TRPC1)基因及蛋白表达情况。结果ET-1可促进HPASMCs增生,且ET-1诱导的细胞增生依赖于细胞外Ca2+的内流,ET-1处理的细胞中[Ca2+]i和库容性钙内流(CCE)显著升高,同时TRPC1基因转录与蛋白表达也明显增加。结论ET-1能显著促进肺血管平滑肌细胞增生,其机制可能与上调编码SOC的TRPC1表达、增加库容性钙内流使肺血管平滑肌细胞的[Ca2+]i异常升高有关。     

5-HT2A受体基因A-1438G多态性与迟发性运动障碍的相关研究

[目的]探讨5-HT2A受体A-1438G基因多态与迟发性运动障碍是否关联。[方法]以166例精神分裂症患者(85例伴TD,81例不伴TD)为对象进行病例-对照研究。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)分析基因多态性。[结果]各基因型和等位基因TD组和非TD组间未见显著性差异(P>0.05)。[结论]广东地区汉族人群中5- HT2A受体A-1438G多态性与TD无关联。     

丙泊酚对人子宫平滑肌细胞Ca2+跨膜内流和肌浆网钙释放功能的影响

目的观察丙泊酚对足月产妇子宫平滑肌细胞Ca2+跨膜内流和肌浆网Ca2+释放功能的影响,探讨其抑制子宫平滑肌收缩功能的可能机制。方法取正常孕足月待产的子宫平滑肌组织,胶原酶消化法培养子宫平滑肌细胞。①40个孔板中活性良好的子宫平滑肌细胞随机等分为4组(n=10):对照组(C组)、低浓度丙泊酚组(P1组)、中浓度丙泊酚组(P2组)、高浓度丙泊酚组(P3组),用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色后,分别给予Hank液、10μmol/L丙泊酚(终浓度)、50μmol/L丙泊酚、250μmol/L丙泊酚处理20 min,然后加入40 mmol/L氯化钾,每个孔板在激光共聚焦显微镜下随机选定10个子宫平滑肌细胞,利用图形分析软件分析细胞内钙荧光强度,取钙荧光强度峰值的平均值反映子宫平滑肌细胞游离Ca2+浓度([Ca2+]i)。②再以20 mmol/L咖啡因代替氯化钾,其余处理及分组同前。结果①与基础值比较,各组加入丙泊酚后子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05),加入氯化钾后[Ca2+]i均升高(P<0.01);与C组相比,加入氯化钾后P1组子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05),P2组和P3组加入氯化钾后[Ca2+]i明显低于C组(均P<0.01),且P3组[Ca2+]i低于P2组(P<0.05)。②与基础值比较,各组加入丙泊酚后子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(均P>0.05),加入咖啡因后[Ca2+]i升高(P<0.01);加入咖啡因后各组子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚可浓度依赖性地抑制足月产妇子宫平滑肌细胞电压依赖型钙通道开放而减少Ca2+跨膜内流,而对肌浆网Ryanodine型Ca2+释放功能无明显影响。     

成年鼠骨髓间质细胞在体外培养中分化为平滑肌细胞

目的　探讨小鼠骨髓间质细胞在体外经条件培养基诱导定向分化成平滑肌细胞的可行性 ,为研究血管损伤后新生内膜形成机制奠定基础。方法　采用骨髓干细胞培养基和贴壁法从骨髓中分离骨髓间质细胞 ,通过补加人血管平滑肌条件培养基诱导骨髓间质细胞分化成平滑肌细胞 ,采用形态学和免疫荧光染色分析分化后的细胞特异性标志物 ,并测定 1μmol/L血管紧张素Ⅱ对细胞胞液钙离子浓度及细胞收缩功能的影响 ,通过加入氯沙坦抑制血管紧张素Ⅱ受体验证血管紧张素Ⅱ特异性激活钙通道引发的细胞收缩。结果　骨髓间质细胞经诱导在体外可传代生长 ,稳定传代 6代后 ,分化的细胞形态呈梭形平滑肌样 ,融合后形成峰谷状排列。表达平滑肌特异性蛋白标志物α 肌动蛋白、肌钙结合蛋白和平滑肌肌球蛋白。分化后的细胞经血管紧张素Ⅱ刺激产生瞬间胞液钙离子转移并偶联细胞收缩反应 ,细胞 [Ca2 + ]i呈现瞬间增高变化 ,[Ca2 + ]i为 2 131nmol/L± 14 0nmol/L ,经用氯沙坦后 [Ca2 + ]i被阻断 ,为 4 0 2nmol/L± 31nmol/L。结论　骨髓间质细胞经体外诱导可分化为有收缩功能的平滑肌细胞 ,可用于平滑肌细胞分化和血管损伤后新生内膜形成起源等研究。