异种抗体IgM对培养豚鼠主脏微血管内皮细胞的作用

目的：了解大鼠体内天然抗ＩｇＭ在非协调性异种心脏移植超急性排斥反应中的作用。方法：以培养豚鼠心脏微血管内此细胞为异种心脏移植的细胞实验模型,通过补体结合实验、免疫组化等方法研究大鼠抗体ＩｇＭ对该细胞的作用,了解异种抗体ＩｇＭ在异种移植超急性排斥反应中的作用机制。结果：在该模型中,大鼠抗体ＩｇＭ可与豚鼠心脏微血管内皮细胞结合并能激活补体,产生对该细胞的损伤,而经小鼠抗大鼠ＩｇＭ处理后的大鼠血清,对豚     

血红素加氧酶-1抗急性血管排斥反应的作用研究

目的探讨血红素加氧酶-1（HO-1）在异种心脏移植急性血管排斥反应中的作用。方法建立豚鼠到SD大鼠异位心脏移植模型,选用血红素分别诱导供体和受体,上调HO-1基因表达;眼睛毒蛇因子（CVF）、环孢素A抑制超急性排斥反应。采用免疫组织化学方法检测心脏组织中HO-1的表达;流式细胞仪检钡4受体血清异种抗体IgM的变化;免疫荧光方法观察异种抗体IgM在血管内膜的沉积情况;TUNEL方法检测心脏组织细胞凋亡情况。结果HO-1表达上调后,能明显延长移植心脏的存活时间,抑制异种抗体表达,减少心肌细胞的凋亡。结论HO-1在异种心脏移植中具有抗急性血管排斥反应的作用,对移植器官起保护作用。     

种植受者血管内皮细胞对抗异种移植超急性排斥反应的初步探讨

为探讨种植受者血管内皮细胞在抗异种移植超急性排斥反应方面的意义,选用豚鼠→大鼠移植模型,先分离、培养大鼠动脉内皮细胞,然后将其种植于去内皮的豚鼠动脉内壁,并以免疫组化技术检测了种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应的情况。结果显示：大鼠血清与正常的豚鼠动脉一起培养后,前者所含IgM、C3沿后者内皮细胞表面沉积;种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应后免疫荧光反应呈阴性,即无IgM和C3。以上结果表明,血管内皮细胞可在异种血管壁上种植,如将受者血管内皮细胞预先种植于供者的血管内壁,可能避免超急性排斥反应的发生。     

中华眼镜蛇蛇毒对大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的影响

观察了中华眼镜蛇蛇毒（CCV）粗提品对大鼠补体溶血活性及豚鼠到大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的影响。结果：一次性给予小剂量（0.25～0.5mg／kg）CCV腹腔注射后可明显降低大鼠血清补体溶血活性，4～24h后渐降至给药前1／2以下水平（均为P＜0．05），但均未能完全消除补体活性。CCV可明显延长异种移植心脏的存活时间达2．5～36h，对照组仅为25min；CCV与脾切除、前列腺素E1联用可进一步延长移植心的存活时间，最长1例达40h。病理结果提示，单核细胞可能参与延迟性异种移植排斥反应。证实补体系统在豚鼠对大鼠异种心脏移植超急性排斥反应中起主要介质作用。     

异种超急性排斥补体旁路作用机制的探讨

为探讨异种超急性排斥时补体旁路途径的作用机制，选择猪血管内皮细胞为靶，人血清为天然抗体和补体源，用四唑盐法行补体依赖的细胞毒反应，建立体外超急性排斥模型。     

协调性异种心脏移植排斥反应病理变化的动态研究

目的 建立小鼠→大鼠异种心脏移植延迟性异种移植排斥反应(delayed xenograft rejection, DXR)动物模型,动态观察移植心脏组织病理和免疫病理变化,探讨DXR发生机制.方法 袖套法建立小鼠→大鼠颈部异位异种心脏移植模型,设立未移植小鼠心脏为对照组(n=4),余组分别在移植术后3、8、16、24 h(每时相点n=4)供心仍跳动时取心,另一组(n=16)在供心停跳时取心并以此决定移植心脏存活时间.各组标本作HE染色和SABC法检测补体C3、IgM、IgG、E-selectin和巨噬细胞标记物CD68表达,结果行半定量评价.结果 移植心脏HE染色表现为血管内皮损伤、血栓形成、心肌实质损伤、间质出血、炎症细胞浸润等排斥反应随移植术后时间逐渐加重趋势,完全排斥时部分心肌凝固性坏死及溶解、广泛间质出血、血管结构崩解及血管内血栓形成、严重炎症细胞浸润.移植术后供心平均存活时间(49.3±16.2) h.移植心脏免疫组化检测示:移植后任何时段均无C3沉积;从移植后3 h开始即有显著IgM沉积,且IgG沉积也逐渐增加;移植后3 h即有E-selectin表达,且表达逐渐增强,排斥时达高峰;从移植后3 h 开始在浸润的炎症细胞中有逐渐增加的CD68阳性细胞.结论 小鼠→大鼠异种心脏移植可作为DXR研究动物模型.内皮细胞激活、IgM和IgG抗体、巨噬细胞浸润参与DXR发生,但其发生不依赖于补体参与.     

异种超急性排斥补体激活机制的探讨──猪血管内皮细胞与兔血清体外细胞毒反应

异种超急性排斥补体激活机制的探讨──猪血管内皮细胞与兔血清体外细胞毒反应赵中辛，杜竞辉，王学浩，钱建民，武正炎（南京医科大学第一附属医院外科）（中华实验外科杂志１９９６，１３（２）：１１１）通过体外培养猪内上细胞为靶，兔血清为天然抗体和补体源，行补体...     

中华眼镜蛇毒治疗对豚鼠移植于大鼠心脏存活时间的影响

本实验选用豚鼠移植于大鼠异种心脏移植模型,观察移植术前３日及术日中华眼镜蛇毒（ｃｈｉｎｅｓｅｃｏ－ｂｒａｖｅｎｏｍ,ＣＣＶ）０．２ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１腹腔注射对豚鼠移植于大鼠心脏存活时间的影响。结果显示：围手术期ＣＣＶ治疗能使移植豚鼠心脏存活达１８±１０．２小时,与单纯豚鼠移植于大鼠心脏存活时间０．２５±０．１２小时比较,差异显著（Ｐ＜０．０１）。单纯豚鼠移植于大鼠心脏被排斥时,组织病理学表现为超急性排斥反应,即心肌细胞溶解坏死,间质出血,血栓形成,未见炎性细胞浸润,大量补体Ｃ３沉积;而ＣＣＶ治疗下移植心脏被排斥时除有心肌细胞坏死,间质出血外,尚有大量的单核细胞浸润,未见补体Ｃ３沉积。上述结果表明,ＣＣＶ治疗能显著延长异种移植心脏存活时间,与其清除Ｃ３作用有关。     

改良豚鼠至大鼠异种异位心脏移植模型

在Ｃｕｆｆ技术的基础上进行改良，通过１１２例移植实验，成功地建立了豚鼠至大鼠异种劲部心脏移植模型，仅２例失败，手术成功率为９８．２％，豚鼠移植心平均存活时间１４．５±５．５ｍｉｎ。结果提示：改良豚鼠至大鼠异种颈部心脏移植术操作简便，出血少，手术成功的可重复性高，是研究非协调性异种心脏移植超急性血管排斥机制及抗排斥方面既实用可稳定可靠的实验动物模型。     

草麻黄中补体抑制成分抑制大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的实验研究

目的初步探讨草麻黄中补体抑制成分(complement inhibiting component,CIC)对异种心脏移植超急性排斥反应的作用.方法按是否给予CIC灌胃处理,将动物模型分为对照组和实验组,观察对照组和实验组术后供心存活时间,在术后早期及供心失活时取两组心脏组织行光镜、电镜病理检查,并在术后固定时间分别抽鼠血行血清学检查,用微量法测定CHs0、APHs0,用透射比浊法测定C3.结果实验组移植心脏存活时间为(51.00±3.46)min,与对照组(30.30±3.46)min比较差异极显著(P＜0.01).结论豚鼠至大鼠异种心脏移植后,补体的经典途径和替代途径均被激活.CIC能明显抑制补体活性,延缓超急性排斥反应的发生,从而使移植心脏的存活时间延长.     

Attenuation of hyperacute rejection from xenograft by reseeding of endothelial cell]

The potential solution to palliate the critical shortage of suitable donor organs for transplantation may be xenogenic transplantation. However, hyperacute rejection (HAR) after xenotransplantation is the main problem in this process. Since the vascular endothelial cell of donor organ is the primary target cell in rejection, the replacement of endothelium in donor organs with endothelial cell from recipients themselves may be beneficial to the prevention of HAR. Discordant xenotransplantation model (guinea pig-to-rat) was adopted in this study. Firstly, endothelial cell from rat abdominal aorta was separated and cultured. Secondly, the guinea pig abdominal aorta of which the endothelium had been removed was cultured with the suspension containing rat endothelial cells (4 x 10(6)/ml). The viability of cultured vessel was assessed using light microscopy and transmission electron microscopy. The guinea pig vessel reseeded with rat endothelial cell was then examined by immuno-fluorescence staining assay to find out whether IgM and C3 in rat serum were bound to it after preincubation with rat serum. It was found that rat endothelial cells grew into the monolayer endothelium on the inner surface of guinea pig vessel with previous endothelial loss. IgM and C3 in rat serum did not deposit along the new endothelium of guinea pig vessel in the treated group as shown by immuno-fluorescence microscopy, whereas possive results were observed in the untreated normal guinea pig aorta. These findings indicate that donor vessel reseeded with endothelial cell from recipients undergoes less severe rejection and this technique may be very useful for the attenuation of HAR.     

种植受体血管内皮细胞在异种血管移植中的实验研究

To investigate the possible significance and usefulness of reseeding the endothelial cell of recipient for the prevention of hyperacute rejection (HAR) resulting from the xenograft. METHODS: Discordant xenotransplantation model (guinea pig-to-rat) was adopted in this study. Firstly endothelial cells from rat abdominal aorta were separated and cultured. Secondly the guinea pig abdominal aorta of which the endothelium had been removed was cultured with the suspension containing rat endothelial cells (4 x 10(6)/ml). The viability of cultured vessel was assessed using light microscopy and transmission electron microscopy. Thirdly, the guinea pig vessels reseeded with rat endothelial cells were transplanted to rat in vivo. The thrombrosis time was observed. The condition of deposit of IgM and C3 in the recipient's transplanted vessel endothelium was examined by immuno-fluorescence staining assay. RESULTS: The thrombrosis time of the guinea pig vessel reseeded with rat endothelial cells (20.3 + 4.42 h) was significantly prolonged as compared with that of the normal guinea pig vessel (0.35 + 0.284 h) and the guinea pig vessel that had been deprived of endothelium (0.165 + 0.77 h). No deposit of IgM and C3 was seen in the new endothelium of guinea pig vessel in the treated group, whereas deposit of IgM and C3 was observed in the untreated normal guinea pig aorta. CONCLUSION: Donor vessels reseeded with endothelial cells from the recipient will undergo less severe rejection and this technique may be very useful in the attenuation of HAR.     

豚鼠-大鼠异种心脏移植急性血管排斥反应期组织因子mRNA的表达

目的 通过检测组织因子mRNA在异种心脏移植急性血管排斥反应期的动态表达与排异反应强度之间的关系，初步了解组织因子在该反应期的意义。方法 建立豚鼠-大鼠异种异位心脏移植动物模型，使用CVF抑制超急性排异反应，FK506抑制细胞免疫排斥反应，分别在移植术后4、8、12、16、24h切取移植心脏，通过病理切片观察排异反应和凝血强度，同时通过RT—PCR方法检测组织因子mRNA表达强度，未移植豚鼠心脏作对照。结果 在移植后，移植心脏的排异反应和凝血逐渐加重，豚鼠组织因子mRNA表达强度逐渐减弱，大鼠组织因子mRNA表达强度逐渐增强。结论 组织因子在异种心脏移植急性血管排斥反应期中起重要作用，其中供体的组织因子可能与凝血的激发有关，受体的组织因子可能与凝血的发展有关。     

一个简便的猪-猴异种心脏移植模型的建立

目的 建立一个简便的研究延迟性排斥反应的猪-猴异种心脏移植模型。方法 通过流式细胞仪法监测猕猴体内天然抗体水平在出生后0．5～3月龄的变化，选择新生梅山猪和2．5月龄中国猕猴分别作为供、受体，建立非协调性猪—猴异种移植模型。观察移植心存活时间，排斥后取移植心进行电镜、病理及免疫组化检查。结果 IgM类天然抗体水平出生后缓慢上升，3月龄时达到31％左右，而IgG类天然抗体水平始终处于低水平。移植心脏平均存活时间36h，电镜、病理及免疫组化显示为延迟性排斥反应。结论 选择新生梅山猪和2．5月龄中国猕猴建立非协调性猪—猴异种移植模型，可方便克服急性排斥反应，从而有助于延迟性排斥反应的研究。     

高纯度蛇毒因子抗非协调性大鼠异种肝脏移植超急性排斥反应的机制研究

目的　探讨高纯度眼镜蛇毒因子 (CVF)对非协调性异种大鼠肝脏移植超急性排斥反应(HAR)和存活时间的影响及其机制。方法　实验分为CVF治疗组和对照组 ,每组各 2 0对。在豚鼠到大鼠肝脏移植前 2 4h实验组大鼠静脉注射CVF(5 0 μg/kg) ,异种肝脏移植后记录受体生存时间 ,并观察移植肝的病理变化 ,免疫荧光法检测肝脏血管C3沉积情况 ,用大鼠TNF αELISA试剂盒检测异种肝脏移植术后 1h血清中细胞因子TNF α水平。结果　肝脏移植后 ,对照组均发生了HAR ,肝内小血管血栓形成 ,间质出血 ,肝窦和中央静脉可见C3沉积 ,肠系膜淤血明显。实验组均无HAR发生 ,可见延迟性异种排斥反应 (DXR)的病理特征 ,血管内皮细胞 (EC)肿胀 ,单核细胞和中性粒细胞浸润 ,肝窦和中央静脉无C3沉积 ,肠道淤血不明显 ,血清TNF α水平下调 ,受体平均存活时间显著延长 (1 8±0 6与 7 4± 2 1h ,P <0 0 1)。结论　高纯度CVF清除补体可克服非协调性异种肝脏移植的HAR ,延长受体存活时间。CVF用于豚鼠到大鼠肝脏移植这一生命支持模型可以更深入地研究非协调性异种肝脏移植的相关机制     

云南眼镜蛇毒因子用于预致敏大鼠同种心脏移植的实验研究

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子(Y-CVF)对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组,实验组(n=8)于心脏移植前24h静脉给予Y-CVF80μg/kg;对照组(n=7)不用Y-CVF。观察移植心的生存时间,移植心停跳后病理学检查排斥类型,免疫组织化学染色观察移植心IgG和补体C3的沉积。结果Lewis大鼠预致敏后抗BN大鼠抗体滴度由0升高至1∶1028~1∶2056。对照组移植心存活时间为12·71h±13·94h,实验组移植心存活时间为99·50h±38·72h,与对照组比较差异有统计学意义(t=5·599,P<0·01)。病理检查结果证实,实验组均未发生急性体液排斥,仅见以大量单核淋巴细胞浸润为特征的急性细胞排斥反应。对照组则见以小血管内血栓形成为特征的急性体液排斥反应。免疫组织化学IgG染色实验组和对照组均为阳性,C3染色对照组为阳性,而实验组为阴性。结论使用Y-CVF可克服预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的发生。     

猪-人异种移植超急性排斥反应中IL-1质量浓度的变化

为了探讨在猪 人异种移植超急性排斥反应中的细胞毒作用及细胞因子白细胞介素 1 (IL 1 )的变化 ,用体外培养的猪血管内皮细胞和人血清共同反应 ,建立猪 人异种移植超急性排斥反应的体外实验模型 ,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法观察补体依赖的细胞毒作用 ,换算出内皮细胞溶解率 ,将其作为评定血管内皮细胞激活和损伤的标志 ;采用ELISA法检测上清液中IL 1 β。结果 :1 )在相同时间点上 ,正常人血清组 (HS组 )的细胞溶解率明显高于对照组 ,与其他各组比较无明显差异 ;随着时间的延长 ,HS组内皮细胞溶解率逐渐增高 ,于 3～ 4h接近高峰。 2 )反应 0 .5h后 ,正常人血清组IL 1 β的质量浓度明显高于对照组 (P <0 .0 1 ) ;灭活人血清组、C1q缺乏组与对照组组间比较无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;随着时间的延长 ,HS组IL 1 β质量浓度继续升高 (P <0 .0 1 ) ,3～ 4h保持稳定。IL 1的变化过程与内皮细胞溶解率的变化趋势基本一致。结果提示 :在猪 人异种移植中 ,血管内皮细胞激活及IL 1的变化与超急性排斥反应的发生有一定的关系