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白细胞介素10基因转移抑制肾小球系膜细胞诱生炎症细胞因子 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:通过建立白细胞介素10(IL-10)的重组逆转录病毒载体基因转移系统,观察IL-10对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerularmesengialcel,GMC)中细胞因子的产生及其基因表达的影响。方法:通过构建的重组逆转录病毒载体pLX(IL-10)SN将外源基因IL-10转移至大鼠GMC:(1)应用聚合酶链反应(PCR),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA检测IL-10基因的整合和表达;(2)以RT-PCR观察IL-10基因转移对LPS诱导的GMC肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达的影响,以ELISA测定白细胞介素-1β(IL-1β)和TNF-α的蛋白质表达。结果:外源性IL-10基因已整合到靶细胞染色体DNA并有效地表达,它能抑制LPS诱生GMC过度产生IL-1β,TNF-α。结论:外源性IL-10基因可以转移到GMC并稳定表达,它能抑制GMC炎症效应中细胞因子的产生及其基因表达。 相似文献
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用限制性内切酶EcoRI和Sall将恶性疟原虫复合抗原基因PfCMR从质粒PWR450-1/PfCMR中切下,插入质粒PBV220/IL-2中人白细胞介素-2(IL-2)基因的EcoRI位点,重组质粒转化大肠杆菌DH5a,通过PCR扩增和酶切鉴定,筛选出自向插入的重组载体PBV220/PfCMR-IL-2。为表达PfCMR-IL-2融合蛋白打下基础。 相似文献
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用限制性内切酶EcoRI和SalI将恶性疟原虫复合抗原基因PfCMR从质粒pWR450-1/PfCMR中切下,插入质粒pBV220/IL-2中人白细胞介素-2(IL-2)基因的EcoRI位点。重组质粒转化大肠杆菌DH5a,通过PCR扩增和酶切鉴定,筛选出正向插入的重组载体pBV220/PfCMR-IL-2。为表达PfCMR-IL-2融合蛋白打下基础。 相似文献
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目的在COS7细胞中表达具有生物学功能的人可溶性IL-6R(sIL-6R),作为研究sIL-6R结构与功能关系的基础。方法首先利用PCR技术扩增出人可溶性IL-6R(hsIL-6R)编码基因片段,并重组入克隆载体pALTER-1。通过基因序列分析确定了目的基因的核苷酸序列,并进一步构建了由SV40晚期启动子和HCMV早期启动子控制的表达质粒pSVL6R和pCMV6R。用脂质体介导的方法将表达质粒转染COS7细胞,并分别在mRNA水平(斑点杂交)和蛋白水平(ELISA和Western-blot)检测sIL-6R基因在COS7细胞中的表达。在7TD1,LT12两种IL-6反应细胞系上检测转染细胞上清(含sIL-6R)的生物学活性。结果在mRNA水平和蛋白水平分别检测到sIL-6R基因在COS7细胞中的表达,表达产物分子量约为50000。表达产物在7TD1,LT12细胞系上检测到明显的生物学活性。结论天然sIL-6R基因在COS7细胞中的成功表达为进一步制备sIL-6R突变体及其结构与功能关系的研究奠定了基础 相似文献
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逆转录病毒介导的IL-2和TNF-α融合基因在卵巢癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞生长的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
IL-4和TNF-α是引人注目的抗肿瘤活性因子,两者在抗肿瘤及免疫调节方面具有协同作用。我们利用逆转录病毒载体Xd1构建了插入IL-2和TNF-α融合基因的重组逆转录病毒载体XdF,融合基因包括编码IL-2前导肽和IL-2和TNF-α成熟肽的序列。重组载体用Lipofectin方法引入病毒包装细胞PA317,挑选G418抗性克隆,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,获得一滴度为1×10 ̄4CFU/ml的高滴度克隆。超速离心浓缩这一重组病毒上清,转导人卵巢癌细胞系SKOV3,经G418筛选获得抗性克隆。PCR可从融合基因转导的细胞DNA中扩增出1.1kb的融合基因片断,证明目的基因完整的整合在细胞的基因组DNA中,测其上清中的IL-2和TNF-α活性结果显示:IL-2的活性为8-15U/10 ̄6cells/24h,TNF-α的活性为150-400U/10 ̄6cells/24h。这一结果表明逆转录病毒介导的融合基因可以在卵巢癌细胞中获得有效表达,表达的融合基因产物在体内和体外部对肿瘤细胞的生长具有抑制作用。 相似文献
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肺巨细胞癌不同转移亚克隆生长因子表达及反应性差异的探讨 总被引:6,自引:0,他引:6
目的研究肺巨细胞癌高转移亚系PGbE1和中度转移亚系PGLH7细胞之间部分生长因子的表达及反应性差异。方法利用RT-PCR技术检测了生长因子TGFα、TGFβ1、IL-6、IL-8、bFGF和ANG及受体EGFR、IL-6R和IL-8R的表达状况;其次采用3H-TdR掺入法观察了重组TGFα、TGFβ1和IL-6对此两个细胞生长的影响。结果PGbE1细胞中TGFα、EGFR、IL-6和IL-6R的表达水平明显高于PGH7细胞,而TGFβ1、bFGF、IL-8、IL-8R和ANG的表达在两个细胞间无明显差别;重组TGFα和IL-6对两个细胞均具有生长刺激作用;TGFβ1具有双重效应。结论TGFα、TGFβ1、bFGF、IL-6、IL-8、和ANG等生长因子可能以自分泌方式参与肺巨细胞癌的生长增殖调控,而TGFα和IL-6在肺巨细胞癌的转移中发挥更为重要的作用。 相似文献
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亚急性重型肝炎患者TNF-α和IL-1表达及IL-4对其的调控 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:分析IL-4对亚急性重型肝炎(亚重肝)患者外周血单个核细胞(PBMCS)TNF-α和IL-1的调控作用,评价IL-4在亚重肝治疗中的潜在价值。方法:应用细胞生物学、免疫组化和RT-PCR等方面测定PBMCS TNF-α、IL-1的表达。结果:亚重肝患者PBMCS TNF-α、IL-1表达水平均较正常人显著增高血糖素含量和虽然IL-4 MRNA及蛋白质的表达与正常人比较一差异无但IL-4 MR 相似文献
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人α—防御素HNP1基因在气管上皮细胞传染的表达研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨人α-防御素HNP1基因在气管上皮细胞转染表达的可行性。方法 采用脂质体转染法将HNP1 cDNA重组真核表达质粒pBabe-Neo-HNP1导入无血清培养的人、兔气管粘膜上皮细胞,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及免疫组化法,分别在核酸水平及蛋白质水平检测HNP1的表达。结果 用RT-PCR在人和兔的转染的上皮细胞总RNA提取物中均扩增出1条319bp的DNA片段,与HNP1c 相似文献
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利用PCR技术从TF1细胞中克隆和扩增IL-4RcDNA胞外片段,经DNA测序正实后,定向插入到原核表达载体,pBV220中,并获得了高效表达,表达蛋白经纯化和复性后具有IL-4结合活性。 相似文献
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BPI23-Fcγ1重组融合蛋白在E.coli中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 构建pBV-BPI600-Fcγ1700重组表达载体,转化E.coli DH5α诱导表达BPI23-Fcγ1抗菌重组蛋白。方法 采用RT-PCR技术,从HL-60细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码PBI23和IgG1Fc(Fcγ1)的基因;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体;转化感受态E.coli DH5α细胞,通过温控诱导表达BPI23-Fcγ1重组蛋白。结果 (1)RT-PCR 相似文献
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对32例哮喘性哮喘患者20名正常对照者,分别用ELISA,RT-PCR,细胞培养技术探讨哮喘患者白细胞介素-10(IL-10)的变化。结果发现,哮喘患者血浆和细胞培养上清液的IL-10值比正常对照组明显降低(P〈0.01),RT-PCR也显示出正常对照组的扩增条带明显强于哮喘组,本研究说明,哮喘患者外周血淋巴细胞的IL-10基因表达和血浆IL-10水平均明显减少,可能与哮喘的发生发展有关。 相似文献
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重型病毒性肝炎患者PBMCs中TNF—α,IL—1α和IL—4… 总被引:1,自引:0,他引:1
本实验应用半定量RT-PCR检测了8例急重肝,13例亚急重肝和16例慢重肝患者PBMCsTNF-α,IL-1α和IL-4mRNA的表达水平对其意义进行了探讨。结果表明,急重肝和亚急重肝患者PBMCsTNF-α和IL-αmRNA的表达水平较正常人明显增高,且与内毒素血症和病情轻重相关,而慢重肝仅TNF-αmRNA略增高,提示TNF-α和IL-1α在急重肝和亚急重肝的发病机理中可能起重要的作用,而在慢 相似文献