人白细胞分化抗原CD59基因克隆及序列分析

为了获得人ＣＤ５９ｃＤＮＡ完整序列,以建立表达人ＣＤ５９分子的小鼠Ｔ细胞模型,更深入地探补体ＭＡＣ及ＣＤ５９分子与Ｔ细胞活化的关系。方法通过设计和合成成引物,提取细胞总ＲＡＮ进行逆转录反应,经ＰＣＲ扩增目的片段,并将基克隆于ＰＵＣ１８及ＰＵＣ１９质粒上,测定其ＤＮＡ序列。     

人CD34抗原基因克隆及鉴定

ＣＤ３４抗原是一个阶段特异性白细胞分化抗原，在早期造血调控方面起着重要的作用，本文采用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从高效表达ＣＤ３４抗原的ＫＧ－ｌａ细胞系中成功地克隆出ＣＤ３４抗原全长ｃＤＮＡ，并对重组基因进行了酶切鉴定和序列分析，结果表明除胞内区有一碱基改变，其它序列与报道完全一致。     

可溶性CD8α链基因克隆及序列分析

可溶性 CD8抗原(sCD8)是从 CD8~ 细胞分泌或脱落至细胞外的白细胞分化抗原,sCD8与免疫调控和再生障碍性贫血等疾病有着密切关系。为从膜 CD8抗原基因中获得具有编码可溶性 CD8分子的基因,我们以 CD8抗原复合体分子的主要亚基α链基因为改构对象,采用逆转录重组 PCR 方法,在基因扩增的同时进行 DNA 重组拼接,除去编码 CD8α链穿膜序列的 DNA,从而克隆出 sCD8α链基因,并对重组的sCD8α链基因进行了序列分析.sCD8α链基因的克隆为进一步研究其表达及可溶性 CD8抗原在免疫调控中的功能奠定了基础.     

人CD38抗原胞外段基因克隆及表达

目的 克隆并表达人CD38抗原分子的胞外估基因。方法 采用RT－PCR法，从高表达CD38抗原的Daudi细胞系中，扩增CD38全长cDNA，并将其插入pGEM-T载体中。重新设计引物，从重组pGEMT载体中，扩增CD38抗体分子的胞外段基因，再亚克隆到表达载体pET28a( )，转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导表达。结果 经酶切鉴定及序列分析表明，克隆的CD38外段基因的序列与文献^[1,2]的报道完全一致。将该片段亚克隆到表达载体pET28a( ) ,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21中获得表达。结论 获得了人CD38抗原分子胞外段基因及其原核表达产物，对进一步制备单克隆抗体，研究CD38分子的功能具有重要的意义。     

抗人CD154单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析

目的:克隆抗人CD154抗体轻重链可变区基因,并分析其核苷酸序列,为基因工程抗体的构建奠定基础。方法:从分泌能抑制免疫反应的抗人CD154单克隆抗体杂交瘤细胞株 7E8中提取总RNA,合成cDNA第一链后,经PCR扩增获得抗人CD154单抗轻链可变区 (VL)和重链可变区 (VH)基因,分别克隆入pUC18载体,并进行序列分析。结果:①抗体的轻链可变区基因全长为 341bp,编码113个氨基酸,归属于Ig的Vκ2基因,氨基酸序列分析结果显示轻链可变区含有明确的 4个骨架区和 3个抗原决定簇互补区,在第 2 3位和第 93位氨基酸为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸;②抗体的重链可变区基因全长为 354bp,编码118个氨基酸,归属于小鼠IgVH基因,D、J区基因分别属于DSP2.9和JH2,氨基酸序列分析结果显示,重链可变区含有明确的 4个骨架区和 3个抗原决定簇互补区,在第 2 3和第 97位氨基酸为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别为抗体的轻、重链可变区基因.     

中国人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的基因克隆及序列分析

目的 克隆人幽门螺杆菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）尿素酶Ｂ基因（ｕｒｅＢ）,并分析其核苷酸序列的特性。方法 用ＰＣＲ技术从临床分离的Ｈｐ菌株基因组中扩增出ｕｒｅＢ基因,将其克隆至ｐＨＰ质粒上进行序列分析。结果 克隆得到的ｕｒｅＢ基因长度为１７１３ｂｐ,其核苷酸序列与ＧｅｎＢａｎｋ公布的序列有６１个碱基存在差异,同源为９６４４％,推定的氨基酸序列同源性为９９．６５％。结论：我们所     

中华产鳖MHC Iα2链基因克隆及序列分析

目的：为了探明中华鳖ＭＨＣ的结构与功能和寻找该种群的分子标记,对只结鳖ＭＨＣｃｌａｓｓＩ α２基因中由两个半胱氨酸形成二硫键的区域进行了克隆和序列分析。方法：根据人和动物的ＭＨＣ Ｉａα２链中两个半胱氨酸侧冀的保守序列设计了混合型引物,采用ＰＣＲ法从中华鳖基因组ＤＮＡ中克隆了ＭＨＣ Ｉα２链（Ｔｒｓｉ－ＢＸ１）。结果：经氨基酸序列的同源性分析,Ｔｒｓｉ－ＢＸ１存在抗原多肽结合位点（Ｔ－１４３、Ｋ－     

人CD23基因的亚克隆与部分序列测定

已构建的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因克隆ｐＢＣＤ９７６，以ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ双酶切，回收ＣＤ２３全基因，定向插入ｐＵＣ１８载体，构建ｐＵＣ１８－ＣＤ２３全基因重组体（ｐＵＣｄ９７６）。进一步利用该基因中第３９９位的ＨｉｎｄⅡ酶切点，在ｐＵ１８中构建了ＣＤ２３Ｎ端４０３ｂｐ和Ｃ端６０７ｂｐ的二个亚克隆，分别称为ｐＵＣＤ４０３Ｎ和ｐＵＣＤ６０７Ｃ。并对ｐＵＣＤ６０７Ｃ进行测离，最终确认其为ＣＤ２３基因。     

巴西利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的克隆化与序列分析

根据硕大利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因序列 ,设计并合成无鞭毛体蛋白基因特异性引物 ,以巴西利什曼原虫基因组为模板 ,进行多聚酶链反应 ( PCR)技术扩增 ,获得 550 bp的基因片段 ,经测序证实 ,巴西利什曼原虫无鞭毛体蛋白的基因含有唯一的开放读码框架 ( ORF) ,为 552 nt,编码的无鞭毛体蛋白由 1 83个氨基酸残基 ( aa)组成。与硕大利什曼原虫及亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白一级结构的同源性分别为1 0 0 %和 93.4 4%。     

一例46,XY女性SRY基因开读框架的克隆及序列分析

采用ＰＣＲ、基因克隆及次克隆和序列分析等分子生物学技术，对一例４６，ＸＹ女性ＳＲＹ基因的开读框架进行了序列分析。结果表明该例患者ＳＲＹ开读框架未发生突变，提示后者不是造成此类性反转的唯一原因。     

人白细胞介素13cDNA的克隆及序列测定

用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术从中国人外周血淋巴细胞中克隆了ＩＬ－１３ｃＤＮＡ，序列测定表明克隆的ＩＬ－１３ｃＤＮＡ含成熟的ＩＬ－１３蛋白全部编码，且存在编码第９８位Ｇｌｎ的密码子ＣＡＧ，这为进一步表达ＩＬ－１３并深入探究功能奠定了基础。     

8例46,XX男性和16例46,XY女性的SRY序列研究

为探讨Ｙ染色体性别决定区基因（ＳＲＹ）在性分化中的作用。在染色体核型分析的基础上，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和直接测序技术，对８名４６，ＸＸ男性和１６名４６，ＸＹ女性患者进一步作了ＳＲＹ序列的分析研究。结果发现：２例４６，ＸＸ男性的ＤＮＡＰＣＲ扩增出现特异的ＳＲＹ序列扩增片段；１例４６，ＸＹ女性的ＳＲＹ核心序列ｃｏｄｏｎ１１３出现Ａ→Ｔ的新生突变；１例４６，ＸＹ女性的ＳＲＹ编码序列上游ＡＡＣＡＡＧ区（转录因子结合位点）处碱基Ｇ→Ａ突变。上述研究结果提示：ＳＲＹ基因是性发育的重要遗传学基础，并为进一步揭示ＳＲＹ基因的结构与功能的关系和在临床上对性反转综合征患者的诊断、治疗提供有价值的科学资料。     

用PCR技术建立CD23全基因的无性繁殖系

参照国外已发表的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因序列，自行设计并合成一对ＤＮＡ引物（２５ｍｅｒ和１８ｍｅｒ），以ＣＤ２３阳性细胞株ＨＦＢｄ２／３ＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ技术，成功地扩增了ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因（９８７ｂｐ，含人工设计的酶切点），并定向克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０，构建了ｐＢｖ２２０－ＣＤ２３全基因重组体，经６种限制性内切酶酶切鉴定，结果与已发表序列的酶切图谱完全一致，初步证实为ＣＤ２３全基因。这将为今后ＣＤ２３基因的序列测定和表达，进一步在基因水平上探讨ＣＤ２３的生物学功能提供了物质基础。     

鸽CDC10 cDNA全序列的克隆与测序

目的　自鸽视盖克隆CDC10全长cDNA。　方法　建立鸽左侧单眼剥夺模型 ,采用cDNA末端快速扩增法和RNA转录物转换机制技术分别克隆鸽CDC10基因的 3′和 5′半分子并进行序列分析。　结果　鸽CDC10cDNA全长为 2 32 9bp ,开放阅读框为 12 5 7bp ,推测编码 4 19个氨基酸残基 ,氨基酸水平与人CDC10有 87%的同源性。结论　鸽CDC10全长cDNA序列的克隆为进一步研究该基因在视觉发育中的作用提供条件     

TA克隆及双链DNA：测序：介绍一种快速克隆及分析PCR产物的方法

将人酸性纤维母细胞生长因子’（ａＦＧＦ’）ｃＤＮＡ的ＰＣＲ产物以ＴＡ连接方式克隆入ｐＣＲ￣（ＴＭ）ＩＩ质粒，然后采用Ｔ７和Ｓｐ６启动子特异性引物对克隆的片段以双脱氧未端终止法进行双链ＤＮＡ测序。结果表明这项技术是一种快捷而可靠的克隆及分析ＰＣＲ产物的方法     

埃及伊蚊钠通道基因克隆与序列分析

电压依赖性钠离子通道是许多神经毒性药物的作用靶标。本研究采用RT PCR技术 ,利用简并引物从埃及伊蚊中扩增的钠通道基因片段为460 9bp ,编码 1 5 3 6个氨基酸 ,经Clustal软件分析发现与黑尾果蝇钠通道基因 (para)和家蝇钠通道基因 (Vssc1 )有很高的相似性 ( 80 % ,78% )。     

椰毒假单胞菌部分16SrRNA序列测定及其系统发育地位

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了椰毒假单胞菌代表菌株Ｔ７７０７的部分１６ＳｒＲＮＡ基因片段，将扩增片段克隆到Ｍ１３ｍｐ１９噬菌体，扩增后提取其单链ＤＮＡ，用ＤＮＡ测序仪进行测序。所得结果与已发表的其它已知假单胞菌的相应序列进行比较，计算出各菌之间的差异，并据此进行聚类。结果表明椰毒假单胞菌在系统发育上与Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ属的成员关系密切，而与其它假单胞菌种的关系很远。这表明，椰毒假单胞菌应为Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ属的一个种。     

布氏菌544A基因片段的PCR扩增及其序列分析

利用ＰＣＲ和ＤＮＡ重组技术，成功的扩增了牛布氏菌５４４Ａ基因。回收含Ｂｒ．ａｂｏｒｔｕｓ５４４ＡＤＮＡ片段，插入ＳｍａＩ单酶切的ｐＵＣ９载体中，进行核苷酸序列分析，证实克隆的ＤＮＡ片段长度为２２４ｂｐ，在该序列中含有单个开放新闻记者框架。将重组用Ｋｐｎ１和ＢａｍＨ１双酶切下Ｂｒ．ａｂｏｒｔｕｓ５４４ａＤＮＡ片段标记探针，均与６种布氏菌杂交出现阳性结果。说明Ｂｒ．ａｂｏｒｔｕｓ５４４Ａ２２４ｂｐＤＮ