新城疫病毒感染体外诱导胃癌细胞热休克蛋白70的表达及意义

目的 :观察NDV在体外抗胃癌细胞活性 ,研究NDV感染诱导胃癌细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及其意义。方法 :应用倒置显微镜观察细胞形态 ,MTT法测细胞生长抑制状况 ,血凝试验检测NDV在细胞中的增殖状况 ,免疫组化染色观察细胞中HSP70表达情况 ,流式细胞术检测胃癌细胞HSP70的表达。结果 :NDV在体外可使BGC 82 3胃癌细胞形成明显的细胞病变效应及生长抑制作用 ,且这种抑制作用与肿瘤细胞被NDV感染后HSP70表达增加呈正相关。结论 :NDV的抗BGC 82 3胃癌细胞活性显著 ,其杀伤机制之一为通过感染而诱导BGC 82 3产生过多的HSP70。     

手术联合热休克蛋白70对荷瘤小鼠的治疗作用

目的 :研究手术联合应用肿瘤来源热休克蛋白 70 (HSP70 )对荷肝癌HCaF的 6 15系小鼠的治疗作用。方法 :用液相色谱法纯化小鼠肿瘤细胞株中的HSP70 ,用SDS PAGE及Western blot对纯化产物进行定性分析 ,毛细管电泳鉴定其纯度。通过动物实验观察HSP70及手术对荷瘤小鼠的治疗作用。结果 :HSP70 10 μg组平均生存期 [>(5 9 2± 2 9 6 )d]与对照组 [平均生存期 (17 8± 3 8)d]比较差异有显著意义 ,P <0 0 2 5。手术与HSP70 10 μg联合应用组平均生存期 [>(82 0± 17 9)d]与对照组及单纯手术相比差异有显著意义 ,P <0 0 2 5、P <0 0 5。结论 :HSP70能提高生存率 ,手术与适当剂量的HSP70联合应用使生存率更加提高 ,证明手术与HSP70免疫治疗联合应用优于单一治疗     

肿瘤热休克蛋白70对几种Thl型细胞因子的诱升作用

目的：研究肿瘤热休克蛋白70(HSP70)免疫后小鼠体内几种Th1型细胞因子水平的变化，探讨肿瘤来源的热休克蛋白70的抗肿瘤免疫机制。方法：用肿瘤细胞中提纯的HSP70免疫小鼠，ELISA法测定免疫前后体内细胞因子水平的变化，并观察其抗移植肿瘤的效果。结果：HSP70有明显的抗肿瘤作用，HSP70免疫后的小鼠外周血中IL—2、TNF-α、TNF—β、IFN-γ水平较对照组明显升高，差异具有极显著性(P＜0．01)，IFN-γ在升高后4周后仍未见下降。结论：HSP70对Thl型细胞因子有明确的诱升作用，Th1型细胞因子的升高对于机体产生及维持抗肿瘤免疫效应是HSP70抗肿瘤免疫作用的一个重要方面。     

磷脂酶C-γ1在高温诱导热休克蛋白70表达中的作用

目的:研究磷脂酶 C -γ1(phospholipaseC -γ1,PLC- γ1)对高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP 70)表达的影响。方法:以基因敲除方法建立的缺失 plcg1 基因(plcg1 / )及野生型(plcg1+/+ )小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western 免疫印迹 增强化学发光法检测它们在高温诱导时的HSP 70表达,并以酶联免疫吸附( ELISA)法做半定量分析,MTT法对比分析两种细胞的热耐受力。结果:两种细胞经43℃与45℃高温诱导 30 min,都能引起HSP 70合成,但plcg1 / 细胞HSP 70表达水平显著低于 plcg1+/+ 细胞,P<0 01;较低温度(41℃)不能诱导 plcg1 / 细胞 HSP 70 表达,却能引起 plcg1+/+ 细胞 HSP - 70 表达,且 pl cg1 / 细胞的热耐力亦明显低于 plcg1+/+ 细胞。结论:PLC- γ1 参与了热诱导成纤维细胞 HSP70表达的信号转导。     

热休克蛋白70和90α在人胃癌组织中表达及其与胃癌生物学行为的关系

目的:研究热休克蛋白70和90α在人胃癌组织和正常黏膜组织中的表达,探讨其表达与胃癌生物学行为的关系。方法:41例胃癌组织和相应的正常黏膜组织分别行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,分析检测结果。结果:热休克蛋白70和90α在胃癌组织中表达分别为75·6%(31/41)和80·5%(33/41),明显高于正常黏膜组织中的表达,在分化较差的肿瘤类型中表达分别为85·2%和88·9%,高于分化较好的肿瘤类型,在淋巴结转移阳性的病例中分别为82·8%和86·2%,高于淋巴结转移阴性的病例,在TNM分期Ⅲ、Ⅳ期的病例中表达分别为80·6%和83·9%,高于其他分期。结论:热休克蛋白70和90α在胃癌组织中明显表达升高,且在晚期的病例中表达高于相对较早期的病例,与胃癌的生物学行为有关。     

NH小鼠S180肉瘤热休克蛋白70的纯化

目的建立热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)/肽复合物分离、纯化和鉴定的技术平台.方法NH小鼠接种S180肉瘤细胞,将肉瘤组织热休克处理后经Sephacryl S-200HR分子筛、ConA和ADP柱序列层析进行分离,所得蛋白经电泳及Western blot进行相对分子质量及性质鉴定,用Lowry标准曲线法对各阶段洗脱液进行蛋白定量分析,并计算蛋白得率.结果纯化蛋白经鉴定确系相对分子质量为70×103的HSP70蛋白;每克湿重瘤组织可纯化约50 mg HSP70.结论用上述蛋白层析法可分离获得较纯的HSP70蛋白,为临床实际应用提供基础.     

热休克蛋白70在人食管癌组织中的表达

目的：探讨人食管癌组织热休克蛋白70(HSP70)表达的规律及意义。方法：SABC法检测人食管癌组织HSP70的表达。结果：40例食管癌组织中有80％(32／40)存在HSP70的表达，不同癌组织存在胞浆、胞膜和胞核表达强度及部位的差异。结论：人食管癌组织存在HSP70的表达，癌组织的异质性出现了胞浆、胞膜和胞核的表达差异，HSP70在人食管癌组织的表达规律为以后实验的研究作了铺垫。     

Bcl-2/Bax蛋白表达与大鼠脑胶质瘤恶性程度的关系研究

目的:探讨大鼠脑胶质瘤中Bcl-2和Bax蛋白表达与其恶性程度的关系。方法:经病理和免疫组织化学染色证实的不同恶性程度的大鼠脑胶质瘤20例,用免疫组织化学法和原位缺口末端标记(TUNEL)法分别检测10例正常大鼠脑组织和20例不同恶性程度的大鼠脑胶质瘤中Bcl-2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率。结果:正常大鼠脑组织中未见Bcl-2和Bax蛋白阳性表达,且凋亡细胞百分率仅为(0.5±0.1)％;不同恶性程度的大鼠脑胶质瘤间Bcl-2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率的差异有显著性(P<0.05),且随着恶性程度的增高,Bcl-2蛋白表达阳性率有降低的趋势,而Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率均有升高的趋势。相关分析显示,大鼠脑胶质瘤的恶性程度与Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率呈正相关(r=0.891,P<0.05),而与Bcl-2蛋白表达阳性率呈负相关(r=-0.889,P<0.05)。结论:Bcl-2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率可能与大鼠脑胶质瘤的恶性程度有关。     

促血管生成素表达与人脑胶质瘤血管生成的关系研究

目的:研究促血管生成素(angiopoie-tins,Angs)蛋白表达水平与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factar,VEGF)和肿瘤内微血管密度(microvascular density,MVD)的关系,探讨其在人脑胶质瘤血管生成中的作用。方法:采用免疫组化方法检测42例人脑胶质瘤组织中Ang-1、Ang-2和VEGF的蛋白表达水平,并以抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞,根据CD34阳性的血管计数来判定MVD。结果:42例人脑胶质瘤中,Ang-1+肿瘤的MVD比Ang-1-肿瘤高,但两者差异无统计学意义,P=0·156;Ang-2-和Ang-2+平均MVD分别是27·67和49·63,Ang-2+肿瘤MVD显著高于Ang-2-肿瘤,P=0·000。VEGF阳性表达时,Ang-2+肿瘤平均MVD显著高于Ang-2-肿瘤,分别为56·00和36·75,P=0·001;而VEGF阴性组中,Ang-2+肿瘤平均MVD与Ang-2-肿瘤几乎相等,分别为53·17和47·36,P=0·109。随胶质瘤恶性程度增加,Ang-1和Ang-2阳性表达率均升高,但Ang-2升高更明显,不同级别间Ang-2表达水平差异有统计学意义。结论:Ang-2高表达与人脑胶质瘤血管新生密切相关,Ang-2可以作为评价胶质瘤血管生成及恶性程度的一个重要指标。VEGF存在时,Ang-2过表达可促使肿瘤血管生成。肿瘤防治杂志,2005,12(19):1472-1475     

增殖核抗原、热休克蛋白70在星形胶质细胞瘤组织中的表达及意义

目的　观察增殖细胞核抗原 (PCNA)和热休克蛋白 70 (HSP70 )在星形胶质细胞瘤组织中的表达 ,探讨PCNA ,HSP70与胶质细胞瘤生物学行为的关系及意义。方法　采用鼠抗人PCNA单克隆抗体 ,鼠抗人HSP70单克隆抗体对 5 0例胶质瘤手术标本进行了SABC免疫组化染色 ,检测其PCNA与HSP70蛋白的表达水平 ,并比较两者的相关性及其与胶质瘤病理分级的关系。结果　随着胶质瘤病理级别的升高 ,PCNA的表达强度增加 (P <0 0 5 ) ,Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤的PCNA阳性率分别为 12 %、2 2 %、2 0 %、2 6 % ,Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤的HSP70阳性率分别为 14%、2 2 %、30 %、34 %。PCNA与HSP70表达存在正相关 (P <0 0 5 )。结论　PCNA与HSP70蛋白的表达对分析判别胶质瘤的病理分级及生物学行为有一定意义。     

促血管生成素表达与人脑胶质瘤血管生成的关系研究

目的：研究促血管生成素（angiopoietins,Angs）蛋白表达水平与血管内皮生长因子（vascular endotheljal growth factar,VEGF）和肿瘤内微血管密度（microvascular density,MVD）的关系,探讨其在人脑胶质瘤血管生成中的作用.方法：采用免疫组化方法检测42例人脑胶质瘤组织中Ang-1、Ang 2和VEGF的蛋白表达水平,并以抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞,根据CD34阳性的血管计数来判定MVD.结果：42例人脑胶质瘤中,Ang 1＋肿瘤的MVD比Ang-1-肿瘤高,但两者差异无统计学意义,P=0.156;Ang-2和Ang-2^＋平均MVD分别是27.67和49.63,Ang-2^＋肿瘤MVD显著高于Ang-2肿瘤,P=0.000.VEGF阳性表达时,Ang-2^＋肿瘤平均MVD显著高于Ang 2肿瘤,分别为56.00和36.75,P=0.001;而VEGF阴性组中,Ang-2^＋肿瘤平均MVD与Ang-2^-肿瘤几乎相等,分别为53.17和47.36,P=0.109.随胶质瘤恶性程度增加,Ang-1和Ang-2阳性表达率均升高,但Ang-2升高更明显,不同级别间Ang-2表达水平差异有统计学意义.结论：Ang-2高表达与人脑胶质瘤血管新生密切相关,Ang-2可以作为评价胶质瘤血管生成及恶性程度的一个重要指标.VEGF存在时,Ang-2过表达可促使肿瘤血管生成.     

脑胶质瘤组织PCNA和Ki-67及p53的表达研究

目的:探讨PCNA、Ki-67和p53与胶质瘤的分级及预后的关系。方法:采用免疫组化SP法检测48例脑胶质瘤标本和对照组10例标本PCNA、Ki-67和p53的表达。结果:48例胶质瘤标本中,PCNA、Ki-67和p53表达阳性率分别为85·4%(41/48)、68·8%(33/48)和45·8%(22/48);对照组10例标本均不表达PCNA、Ki-67和p53,两组比较,差异有统计学意义,χ2=7·348~23·563,P<0·01。结论:胶质瘤中PCNA、Ki-67及p53的阳性表达率与其恶性度相关,均可作为判断胶质瘤恶性程度及预后的指标。     

胃癌组织中HSP70与Cyclin D1的表达及意义

目的:探讨热休克蛋白70 (heatshock protein 70,HSP70)与细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在胃癌组织中的表达。方法:应用免疫组化SABC 与SP 法检测胃癌、不典型增生、萎缩性胃炎及浅表性胃炎组织中HSP70 与Cyclin D1 的表达。结果:HSP70与Cyclin D1 在浅表性胃炎、萎缩性胃炎、不典型增生和胃癌中的表达阳性率,随病变的进展而升高。HSP70 的表达阳性率分别为42. 9% (12/28)、57. 1%(24/42)、64. 3%(9/19)和77 .1%(37/48),其中萎缩性胃炎、不典型增生及胃癌与浅表性胃炎相比,差异有统计学意义,P<0 .05。Cyclin D1 的表达阳性率分别为7 .1% ( 2/28 )、19 .0% ( 8/48 )、35 .7%(5/14)和52. 1% (25/48),其中不典型增生、胃癌与萎缩性胃炎相比,差异有统计学意义,P<0. 05。大多数受检胃癌组织中,HSP70与Cyclin D1的表达有相关性。结论:HSP70与Cyclin D1 过度表达,在胃癌的产生过程中可能起重要作用。     

热休克诱导人肝癌HepG2细胞HSP70和P-gp的表达及槲皮素对二者的抑制作用

背景与目的:研究提示热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)可抑制细胞凋亡,降低肿瘤热疗、化疗的疗效,但其与细胞化疗耐受性的内在关系尚不甚明确;P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是一种耐药蛋白,在肿瘤耐药中起重要作用。本研究拟通过热休克诱导人肝癌HepG2细胞表达HSP70和P-gp,并观察槲皮素(quercetin,Qu)对二者表达的抑制效应。方法:恒温水浴法,42℃热休克HepG2细胞90min,分别采用免疫组化、流式细胞术检测热休克前及热休克后2h、4h、8h、12h、24h时HSP70和P-gp的表达情况;并于热休克前1h应用不同浓度槲皮素作用于HepG2细胞,观察其热休克后4h二者的表达。结果:(1)热休克诱导后,免疫组化显示细胞内HSP70表达增多,“核内迁移”;流式细胞术示HSP70阳性细胞数升高,4h达到最高(11.47%),较对照组(6.64%)升高近一倍(P<0.01),24h后回落到低值;P-gp阳性细胞数随HSP70升高后升高,12h达到最高值(96.31%),较对照组(33.95%)升高近两倍(P<0.01),24h后回落到低值。(2)热休克前应用槲皮素能有效抑制热休克诱导HSP70和P-gp的过量表达,以100～200μmol/L槲皮素作用明显(P<0.01),呈浓度依赖性。结论:热休克可诱导HepG2细胞HSP70和P-gp的过量表达,P-gp的表达可能与HSP70的表达有关;槲皮素可阻断热休克诱导HepG2细胞HSP7     

给药时间与胶质瘤细胞缓激肽B2受体内化关系的研究

目的研究给药时间与大鼠C6胶质瘤细胞缓激肽(bradykinin, BK)B2受体内化的关系.方法用免疫电镜法和Western-blot法测定不同给药时间下缓激肽B2受体的位置变化和受体在膜上的表达水平.结果给药前细胞膜上缓激肽B2受体表达水平的整合密度值(integrated density value,IDV)为25 767±4 817.01 (n=6),给药10 min B2受体表达水平的IDV为3 528.50±977.86 (n=6),与给药前相比其IDV值最低,仅为给药前表达水平的13.69%,P=0.000, 此时它多见于胞质中.而后B2受体在膜上的表达水平逐渐增加.给药15 min时,IDV为10 233.67±3 428.60 (n=6),P=0.000;20 min时,IDV为14 680.00±3 326.47 (n=6),P=0.000;30 min时,IDV达到17 143.17±2 984.38 (n=6),P=0.001;给药60 min时,细胞膜上B2受体已恢复到给药前表达水平的87.43%,其IDV为22 528.33±6 228.29 (n=6).给药时间与细胞膜上B2受体表达水平的恢复存在线性回归关系, P＝0.000.结论缓激肽B2受体内化是一个短期调节的过程,给药时间与缓激肽B2受体内化水平密切相关,明确两者之间的关系对临床给药方案有一定指导意义.     

联合测定hTERT和Ki-67的表达对胶质瘤分级的评价

目的:探讨人脑胶质瘤恶性程度评定的客观标准。方法:采用组织微阵列技术,通过免疫组化的方法对60例不同级别人脑胶质瘤组织的hTERT和Ki-67表达水平进行测定,并与10例正常组织比较。结果:Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤与对照组Ki-67表达阳性细胞标记指数分别为1.90±0.29、8.39±1.26、21.19±3.06与0.35±0.13,各组间差异有统计学意义,P<0.001;hTERT表达阳性细胞标记指数分别为5.30±0.65、28.63±3.59、53.62±4.68与0,各组间差异有统计学,P<0.01。hTERT与Ki-67表达阳性指数显著正相关,r=0.94,P<0.01,hTERT表达水平越高,Ki-67的表达也越高。结论:联合测定Ki-67和hTERT表达水平可以作为评价胶质瘤生物学行为、判断临床预后的重要参考指标。