056 粘膜佐剂的研究进展

哺乳动物的粘膜免疫系统是一个完整的淋巴细胞网络,正常情况下可对经粘膜侵入的外来有害抗原物质发生免疫应答.由粘膜途径进行接种疫苗可在感染部位直接诱导局部保护性免疫应答,防止感染和疾病.大多数免疫原性弱的抗原经粘膜供给时易引起免疫耐受,阻碍了粘膜疫苗的进一步研制和开发.为了克服粘膜疫苗使用中面临的问题,人们设计出多种粘膜佐剂以增强相应抗原经粘膜供给时促进机体发生免疫应答的能力.本文将重点介绍现在研究较多的一些粘膜佐剂类型,如微生物及其代谢产物、细胞因子、CpG基序及化学合成类佐剂等的研究情况.深入了解粘膜佐剂作用的分子机理,有益于促进安全、有效的粘膜疫苗的开发.     

粘膜佐剂的研究进展

哺乳动物的粘膜免疫系统是一个完整的淋巴细胞网络，正常情况下可对经粘膜侵入的外来有害抗原物质发生免疫应答。由粘膜途径进行接种疫苗可在感染部位直接诱导局部保护性免疫应答，防止感染和疾病。大多数免疫原性弱的抗原经粘膜供给时易引起免疫耐受，阻碍了粘膜疫苗的进一步研制和开发。为了克服粘膜疫苗使用中面临的问题，人们设计出多种粘膜佐剂以增强相应抗原经粘膜供给时促进机体发生免疫应答的能力。本文将重点介绍现在研究较多的一些粘膜佐剂类型，如微生物及其代谢产物、细胞因子、CpG基序及化学合成类佐剂等的研究情况。深入了解粘膜佐剂作用的分子机理，有益于促进安全、有效的粘膜疫苗的开发。     

不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的研究

目的 研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础.方法 鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备黏膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠3次,取尾静脉血,采用ELISA检测血清IgG及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液sIsA;采用FAC检测脾淋巴细胞表型的变化.结果 PorB重组蛋白佐剂疫苗组和蛋白体佐剂疫苗组较无佐剂组体液免疫抗体水平高、蛋白体佐剂疫苗组好于PorB重组蛋白佐剂疫苗组,但无显著性差异.结论 PorB重组蛋白佐剂疫苗和蛋白体佐剂疫苗均能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫应答,且PorB重组蛋白佐剂疫苗免疫效果可与蛋白体佐剂疫苗相媲美,可进一步论证是否可用PorB重组蛋白佐剂替代蛋白体佐剂,这为鼠疫粘膜疫苗的研制奠定了基础.     

044 能够刺激免疫的关联寡脱氧核苷酸一个新的粘膜佐剂

大多数感染因子是通过粘膜进入人体的。因此 ,开发致粘膜免疫的预防接种技术显得很重要。然而 ,若使非复制型的变应原产生强的免疫应答 ,则需要佐剂进行粘膜传递。目前尚没有完全有效的粘膜佐剂用于人类。最近研究表明能够刺激免疫的关联寡脱氧核苷酸 (ＩＳＳ ＯＤＮ)是一种有效的粘膜佐剂。把抗原物质和ＩＳＳ ＯＤＮ由鼻腔送入则会在呼吸道局部、肠的远端 ,以及生殖道产生分泌型ＩｇＡ。ＩＳＳ ＯＤＮ将会成为开发抑制粘膜病病原体疫苗的理想粘膜佐剂。粘膜免疫系统相对有效地阻止感染。但呼吸系统、胃肠和生殖器粘膜是病原体主要门户。在…     

口服幽门螺杆菌苗免疫小鼠后胃粘膜的免疫应答

目的 观测Hp全菌抗原和粘膜佐剂LT口服免疫Balb/c小鼠后的胃肠粘膜免疫反应。方法 采用ELISPOT法检测了胃粘膜、肠粘膜相关淋巴组织PP结抗原特异性形成细胞（AFC）。结果 抗原免疫组、抗原 佐剂组胃肠粘膜抗原特异性sIgA-AFC、IgG-AFC数量明显增加,尤以sIgA-AFC为甚。并且抗原 佐剂组明显高于单纯抗原组和对照组。结论 口服菌苗可有效诱导胃肠道粘膜免疫应答。局部sIgA可能在抗Hp感染中具有重要作用。     

双价痢疾候选疫苗诱导小鼠产生粘膜免疫应答机制的初步研究

目的探讨痢疾疫苗诱导粘膜产生免疫应答的调节机制，为研制安全有效的痢疾疫苗提供免疫学的理论依据。方法以本室构建的两株福氏２ａ、宋内氏双价痢疾候选疫苗ＦＳ－２１１７与ＦＳ－５４１６经不同途径免疫小鼠，分离小鼠ＰＰ结（Ｐｅｙｅｒｓｐａｔｃｈｅｓ）与脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞并以ＭＴＴ法检测其对疫苗不同抗原成分的增殖反应。结果（１）口服痢疾疫苗可诱导ＰＰ结中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生显著的增殖反应，而未对脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生刺激作用；（２）皮下注射痢疾疫苗能使小鼠脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生显著的增殖反应，但未见ＰＰ结中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生明显的免疫应答；（３）痢疾疫苗可能有多种抗原成分参与了刺激肠粘膜ＰＰ结中ＣＤ４＋Ｔ细胞的增殖反应。结论口服痢疾候选疫苗可有效地诱导肠道粘膜产生免疫应答；免疫应答的产生可能依赖多种抗原成分的共同作用。ＰＰ结中ＣＤ４＋Ｔ细胞的特异性活化可能是诱导肠道粘膜免疫应答最重要的早期事件。     

口服幽门螺杆菌疫苗后小鼠粘膜免疫应答研究

为观测幽门螺杆菌 (Hp )全菌抗原和粘膜佐剂LT口服免疫Balb/c小鼠后的粘膜免疫应答 ,采用ELISPOT和ELISA法分析免疫小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (PP )抗原特异性抗体分泌细胞和小肠粘液唾液sIgA抗体。结果表明抗原免疫组、抗原 +佐剂组胃粘膜、PP抗原特异性sIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,并且抗原 +佐剂组明显高于单纯抗原组和对照组 ;小肠粘液唾液特异sIgA水平两免疫组均明显高于对照组 ,提示口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 ,局部特异sIgA在抗Hp感染中具有重要作用     

感染性疾病疫苗佐剂的研究进展

新型疫苗 ,尤其是重组蛋白和DNA疫苗比传统疫苗更优越 ,但其免疫原性减弱 ,急需发展新的或改进的疫苗佐剂。佐剂对一些感染性疾病的疫苗研究及应用非常重要。根据佐剂的作用机制 ,可把佐剂分为免疫刺激性佐剂和疫苗传送系统两大类。免疫应答机制的进一步研究将会促进疫苗佐剂的研究发展。     

CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响

目的 研究CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗和解决流感疫苗产能不足的问题提供依据.方法 以不同剂量的2009 H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、氢氧化铝以及CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂为疫苗佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、血凝抑制试验和假病毒中和试验等方法评价体液免疫效果,通过ELISPOT、胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤等方法评价细胞免疫效果.结果 与无佐剂对照组相比,CpG-ODN或氢氧化铝单独使用能够在一定程度上增强体液免疫,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高3～6倍、2～4倍和4～8倍.CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂具有更强的佐剂效应,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高23～ 57倍、9～20倍和16～64倍.根据体液免疫结果,复合佐剂能够使流感病毒裂解疫苗的抗原用量降低至少16倍.此外,复合佐剂能够显著增强流感病毒裂解疫苗的细胞免疫应答,不但能够促进抗原特异性CD4+T细胞的IFN-γ分泌,而且能够促进抗原特异性CD8+T细胞的CTL杀伤活性.结论 CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂能够增强流感病毒裂解疫苗的体液免疫和细胞免疫应答并显著降低抗原用量.     

细胞因子佐剂对核酸疫苗免疫效果的影响及作用机制

细胞因子佐剂包括白细胞介素、干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、趋化因子等,其作为佐剂可显著增强抗原的免疫原性,调节机体的体液免疫和细胞免疫应答水平.在核酸疫苗的研究中,细胞因子佐剂已被证实具有重要的调节作用.现就细胞因子佐剂对核酸疫苗免疫效果的影响及作用机制进行综述.     

基因佐剂在DNA 疫苗中的应用

基因佐剂可将编码某些具有佐剂作用成分的基因与DNA疫苗共免疫,在体内表达相应的蛋白,增强T、B细胞对疫苗成份的体液及细胞免疫应答.目前研究较多的基因佐剂有细胞因子基因佐剂如IL-12、IL-2、IFN-γ、GM-CSF等;共刺激分子基因佐剂如 B7-2、CD40L 等;免疫刺激DNA序列基因佐剂如CpG、ODN 等.基因佐剂在体内与疫苗基因共表达,改善抗原的周边微环境,提高疫苗的免疫效果.因此,基因佐剂是目前DNA疫苗研究中的热点问题之一.     

基因佐剂在DNA疫苗中的应用

基因佐剂可将编码某些具有佐剂作用成分的基因与DNA疫苗共免疫，在体内表达相应的蛋白，增强T、B细胞对疫苗成份的体液及细胞免疫应答。目前研究较多的基因佐剂有：细胞因子基因佐剂如IL-12、IL-2、IFN—γ、GM-CSF等；共刺激分子基因佐剂如B7—2、CD40L等；免疫刺激DNA序列基因佐剂如CpG、ODN等。基因佐剂在体内与疫苗基因共表达，改善抗原的周边微环境，提高疫苗的免疫效果。因此，基因佐剂是目前DNA疫苗研究中的热点问题之一。     

记忆性C D8+ T细胞免疫应答机制

免疫记忆是高等脊椎动物获得性免疫应答的显著特征。体液免疫应答与细胞免疫应答构成免疫记忆的两大重要分支。免疫记忆是指机体在对某一抗原产生特异性识别及应答的同时,记住该抗原,当再次遭遇同一抗原时,能发生快速和强烈的免疫应答。记忆性T细胞与感染免疫、肿瘤免疫、疫苗设计、自身免疫性疾病和移植排反应都有着密切的关系,深入研究记忆性T细胞的生成、维持、功能和调控机制不仅能指导新型疫苗的设计,有望更好的治疗疾病。     

空肠弯曲菌PEB1-LTB DNA疫苗构建及其对小鼠免疫保护性的研究

目的:研究粘膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)辅助的空肠弯曲菌(C.jejuni)外膜蛋白PEB1基因重组DNA疫苗诱导小鼠免疫应答水平。方法:构建pcDNA3.1(-)-PEB1-LTB真核重组表达载体,转染Hela细胞,Westernblot鉴定蛋白表达。滴鼻免疫BALB/c小鼠,末次免疫后2周,测定小鼠血清中IgG、IgA及气管、小肠粘膜冲洗液sIgA抗体;脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平。末次免疫后4周,采用空肠弯曲菌重复攻击的方式进行灌胃攻击,攻击后,根据动物疾病指数评价疫苗临床保护率。结果:构建的重组表达质粒能在Hela细胞内表达,重组蛋白。疫苗免疫小鼠后,不仅诱导了高水平血清IgG、IgA抗体,而且诱导了高水平粘膜sIgA抗体。其诱导的特异性免疫应答能有效保护免疫后小鼠免遭空肠弯曲菌的感染攻击。结论:构建的DNA疫苗经粘膜免疫能诱导小鼠产生较高水平的特异性免疫应答,能有效预防空肠弯曲菌感染。     

可经粘膜途径递送DNA疫苗的减毒伤寒沙门菌载体的研究进展

DNA疫苗的本质是在哺乳动物细胞内表达重组蛋白抗原的质粒DNA,DNA疫苗能刺激机体产生体液及细胞免疫,有效的DNA疫苗载体可向细胞内高效传送质粒DNA.伤寒沙门菌是细胞内寄生菌,可通过黏膜途径感染,穿过黏膜上皮细胞屏障侵入黏膜相关淋巴组织(MALT),被MALT内专职抗原递呈细胞(APC)吞噬,并可在细胞吞噬泡内存活和增殖,同时细菌本身的病原相关分子模式(PAMP)是天然佐剂,因此可诱导机体产生有效的系统和局部经黏膜免疫应答,是极有发展潜力的经黏膜途径递送DNA疫苗的载体.     

CpG-ODN疫苗佐剂的研究进展

含胞嘧啶-鸟嘌呤（ CpG ）二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸链（ CpG-ODN）是一种具有巨大开发潜力的佐剂，这是一类合成的、包含有1个或多个非甲基化的CpG基序的单链DNA。研究表明， CpG-ODN能够选择性地增强脊椎动物的细胞和／或体液免疫应答，有效提升多种疫苗的免疫效果［1］。它能直接活化树突状细胞、巨噬细胞和B细胞，增强抗原提呈能力，促进抗体的分泌；间接活化T细胞和NK细胞等免疫效应细胞，增强其功能及细胞因子的分泌，诱导Th1型免疫应答，产生细胞及体液免疫，因此， CpG-ODN是一种理想的疫苗佐剂。目前国外研究CpG-ODN作为感染性疾病和肿瘤疫苗佐剂已进入Ⅰ／Ⅱ期临床试验阶段［2，3］，并已证实CpG-ODN是一种高效低毒的新型免疫佐剂。     

口服免疫机制及口服疫苗的研究进展

口服免疫可诱导机体产生有效的免疫应答和免疫耐受。其通过胃肠粘膜进行抗原递呈 ,较经传统注射途径的免疫效果和依从性好 ,且简易便捷 ,是更为理想的免疫途径。口服疫苗有多种载体系统 ,某些经改造的细菌如沙门氏菌、大肠杆菌、特别是乳酸菌属被认为是有前景的口服疫苗载体 ,因口服后可在肠道寄生繁殖 ,故可大大提高免疫的效率。本文围绕口服免疫主要的机制和口服疫苗的研究进展进行综述。     

Flt3L及CCL5对prime/boost免疫策略中抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用

目的:研究Flt3L与CCL5作为联合佐剂在prime/boost免疫策略中对HBc抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用.方法:将两种细胞因子质粒与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法共免疫小鼠, 免疫3次后再用原核表达的HBc颗粒蛋白或HBc DNA疫苗加强, 观察对稳定表达HBcAg 的小鼠黑色素瘤细胞(B16-HBc)的生长抑制作用;并分别采用MTT法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖、流式细胞术检测脾CD8 T淋巴细胞中IFN-γ表达、ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清IL-2、IL-4含量及乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL杀伤活性.结果:与对照组相比, 佐剂联合DNA疫苗免疫经蛋白加强组(DDP/Adj)显著抑制肿瘤生长;佐剂联合DNA疫苗免疫组(DDD/Adj)及DDP/Adj组均可促进特异性淋巴细胞增殖反应(P＜0.05), 且DDP/Adj 高于DDD/Adj组(P＜0.05);DDD/Adj 及DDP/Adj组小鼠脾脏CD8 T淋巴细胞中IFN-γ表达、IL-2 表达水平及CTL杀靶活性均高于对照组(P＜0.01或P＜0.05), IL-4 表达水平在各组无显著区别(P＞0.05).结论:在prime/boost免疫策略中, 采用Flt3L与CCL5两种细胞因子联合应用可显著促进荷瘤小鼠产生抗原特异性免疫应答及抗肿瘤作用.     

幽门螺杆菌全菌抗原口服免疫BLAB／c小鼠的免疫应答机理研究

目的 分析幽门螺杆菌全菌抗原的口服免疫应答反应。方法 ELISA分析免疫小鼠血清、唾液、粪便提取物特异抗体水平,ELISPOT分析胃粘膜、派伊尔小结（PP）抗原行异性抗体分泌细胞（ASC）,RT－PCR分析PP T细胞因子mRNA表达水平。结果 ①口服免疫可诱导强烈的血清IgG反应和唾液、粪便提取物特sIgA反应;②胃粘膜、PP结产生大量抗原特异性抗体分泌细胞（ASC）,尤以sIgA-ASC型居多,PP结抗原特异性形成细胞（ASC）数量与特异抗体水平密切相关;③加佐剂免疫组小鼠PP T细胞,体外抗原刺激下,早期高表达IFN－γ晚期高表达IL－4。结论 全菌抗原和粘膜佐剂免疫可诱导H.pylori特异的系统、粘膜免疫应答,局部sIgA可能在抗H.pylori感染中具有重要作用,肠粘膜免疫主要诱导部位PP早期表现为TH1型优势应答,晚期则转为TH2型优势应答。     

人用疫苗佐剂及其免疫学机制研究现状

疫苗佐剂能够提高机体对抗原的适应性免疫应答,在疫苗研发中具有重要的作用。目前,常用的铝佐剂、MF59乳剂佐剂、AS系列乳剂佐剂等几个为数不多的佐剂均是被美国或者欧盟批准。随着疫苗佐剂研究的不断深入,近年来国内外出现了一些具有临床应用前景人用的佐剂。本文对临床批准的铝盐佐剂、MF59、AS系列及纳米佐剂等现状及其机制进行综述,为后期寻找并研制出具有我国自主知识产权的新型人用疫苗佐剂提供新思路和研究新策略。