多重和套式聚合酶链反应检测血液、腹膜透析患者血清中HBV DNA和HCV RNA

利用免疫学和聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，对３５例血液透析（血透）、１４例腹膜透析（腹透）患者的８４份血清进行了检测。血透组抗－ＨＣＶ阳性率８２．９％，ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ阳性率５１．４％；腹透组抗－ＨＣＶ阳性率仅７．１％，ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ均阴性。ＨＢｓＡｇ和（或）ＨＢｅＡｇ在二组的阳性率分别为２５．７％和２１．４％；ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ阳性率分别为４５．７％和６４．２％。透析患者ＨＣＶ和ＨＢＶ感染率显著高于一般人群。血、腹透两组ＨＣＶ感染率相差非常显著，血透患者抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ阳性高于腹透患者，表明血透过程在丙型肝炎传播方面起重要作用。作者还采用多重和套式ＰＣＲ方法，将ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ在合并的逆转录和ＰＣＲ扩增系统中，连续进行逆转录和第一轮多重ＰＣＲ扩增，再进行第二轮多重ＰＣＲ，具有特异、敏感、简便、快速和经济等特点，适于临床应用。     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患…

为了更准确，简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究，发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平，检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清…

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人君中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶ ＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ者的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶ ＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶ     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者心肌组织中HBV DNA

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１８例乙型肝炎（乙肝）患者石蜡包埋心、肝组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ，并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明：在肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ复制。心肌组织中ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率为５５．６％，不存在ＨＢＶ的复制。心脏病理检查可见一些非特异性改变，如脂变、水肿和纤维素样坏死等。病理变化与心电图、临床症状、体征及ＰＣＲ检测结果无相关性     

聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义

应用ＰＣＲ对１７１例肝病血清检测结果，ＨＢＶＤＮＡ阳性率５９．１％，ＥｌｉＳＡ检测ＨＢｓＡｇ阳性率４３．２７％，二者比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ阳性率７９．５％，而ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）组主５７．９％，ＨＢｓＡｇ（－）／抗－ＨＢｓ（＋）组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率３６．８％。     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA

为了更准确、简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究。发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平。检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）、ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝炎１３例（Ｂ组）、ＨＢｓＡｇ阴性和乙型肝炎病毒核心抗体（抗－ＨＢｃ）阳性正常对照组３０例（Ｃ组）及ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（－）肝硬化患者１２例（Ｄ组），分别有４５．５％、３０．８％、１３．３％和１００％患者血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性。ＨＢＶＤＮＡ在一些抗－ＨＢｓ（＋）肝病患者和所谓健康人的血清中也存在。Ａ、Ｂ两组检出有ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ感染患者分别占８１．８％和５３．８％。提示套式和免疫套式ＰＣＲ是简便、快速而又高度敏感的检测方法；ＨＢＶ感染可能是引起ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝病的重要原因，且ＨＢｓＡｇ阴性肝病病因大多与病毒感染有关；应该重新认识自然感染者血清中抗－ＨＢｓ的临床意义。     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶ ＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢属于无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者肝外组织中的乙型肝炎病毒DNA

应用巢式聚合酶链（ＰＣＲ）技术对１８例石蜡包埋的胆囊、肾、脾、肾上腺、心、睾丸、胰腺及肝脏组织的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ进行了检测，并与其免疫组化及原位杂交方法作比较。二组引物检测的结果表明：肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ的复制。肝外组织中ＨＢＶ检出率分别为胆囊８５．７％、７５．０％、肾７２．７％、肾上腺６６．７％、心脏５５．６％、睾丸５５．６％和胰腺５４．５％，但均未检测出ＨＢＶ的复制，ＰＣＲ检测发现与免疫组化及原位杂交结果基本一致。ＨＢＶ可以感染肝外组织但并不在这些组织中复制的发现可以解释受感染的肝外组织可以作为肝外感染源，但并不引起这些脏器出现明显的病理变化。     

PCR检测血清中HBV—DNA及其临床意义

应用聚合酶链反应(PCR)结合Southern blot核酸杂交和DNA直接杂交技术,检测50例乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同血清学标志的血清标本及5例无任何HBV血清学标志的血清标本中的HBV DNA,并与血清学检查结果比较。结果发现PCR结合Southern blot核酸杂交的灵敏度明显高于DNA直接杂交技术,而且还能直接反映患者血液是否有感染性。此外,前者还能直接反映病毒在体内的复制情况,澄清模棱两可的血清学结果。     

改良聚合酶链反应检测HBV共价闭合环状DNA

目的:建立一种基于聚合酶链反应(PCR)的简便快速、具有较高敏感性和特异性的检测乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的方法.方法:分别提取HepG2.2.15细胞内的cccDNA及培养上清中的松驰环DNA(rcDNA)样品,试剂盒纯化;设计2对特异性引物,其扩增区域跨越rcDNA单链区;设计2对非特异性引物,扩增区域位于rcDNA双链区.经单链特异性绿豆芽核酸酶(MBN)分别消化cccDNA及rcDNA样品;以特异性引物和非特异性引物对消化前后的两种样品分别进行PCR扩增,并改变PCR扩增参数如底物数量、循环次数等,观察特异性引物能否顺利扩增消化后的cccDNA,同时又不扩增消化后的rcDNA.HBV基因组质粒样品作为对照.此外还采用实际乙型肝炎患者体内病毒样本检验此策略的实用性.结果:分别以非特异性引物和特异性引物扩增不同模板数的HBVrcDNA样品,2对非特异性引物可扩增出模板数在102以上的HBVrcDNA样品,2对cccDNA特异性引物也可以扩增出模板数在104以上的样品.特异性引物在PCR反应模板数较多时将不能区分消化前的rcDNA和cccDNA.不同数量HBVcccDNA和rcDNA模板在MBN消化前后,分别应用非特异性引物和特异性引物进行PCR扩增,发现不同数量的cccDNA模板分子经过MBN消化后,仍可用特异性引物和非特异性引物扩增出相应条带;rcDNA样品经过MBN消化后,非特异性引物可扩增出产物条带,而特异性引物无法扩增出条带.采用此种策略,我们发现慢性乙肝患者血清HBV核酸样品主要成份为rcDNA,并带有少量cccDNA,而肝细胞内HBV核酸样品富含cccDNA,与实际情况一致.结论:联合应用MBN选择性消化和cccDNA特异性引物的PCR检测法简便快速,敏感性和特异性均较满意.     

逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。     

聚合酶链反应检测血液病患者合并丙型肝炎病毒感染

聚合酶链反应检测血液病患者合并丙型肝炎病毒感染杨桂玲，陈文 ，杨碧云，曹瑞生，文艺丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染是输血后非甲非乙型肝炎的主要原因。在免疫抑制群体如恶性血液病，尤其是化疗或骨髓移植治疗后，以及再生障碍性贫血，常需输血治疗，大大增加了感染的机...     

用EIA和PCR检测牛血清中类HBV的研究

本文报道了用ＥＩＡ（ｅｎｚｙｍｅ－ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，酶免疫测定）从５０头奶牛和１２０头黄牛的血清中共检测出４１份人ＨＢＶ（乙型肝炎病毒）标志物呈阳性的样品；并进一步用ＰＣＲ（ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ聚合酶链反应）测定其中的部分阳性（５份ＨＢｓＡｇ，５份ＨＢｅＡｇ，２份ＨＢａＡｇ＋ＨＢｅＡｇ，７份抗ＨＢｃ，１份ＨＢｓＡｇ＋ＨＢｅＡｇ，７份抗ＨＢｃ，１份ＨＢｓＡｇ＋抗ＨＢ     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA的结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢性无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而在ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１６例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ中，９例肝内仅见局灶性ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，其中４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性，说明部分ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ也存在极低水平病毒复制。     

逆转录—套式—聚合酶链反应快速诊断黄病毒感染

为了早期快速诊断黄病毒感染，应用闻和转录－套式－聚合酶链反应检测子流行性乙型脑炎患者血清标本２２份和登革热患者血清标本７８份。