4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231诱导分化作用及可能的机制研究

目的观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-anino-2-trifluoromethyl-phenyl retimate,ATPR)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231抑制增殖诱导分化作用,探讨其可能的作用机制。方法体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化,酶联免疫法检测粘蛋白MUC-1活性,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测维甲酸受体(retinoic acid receptors,RAR)RARα、RARβ、RARγ和维甲类受体(retinoid X receptors,RXR)RXRα、RXRβ、RXRγ基因和蛋白的表达。结果 ATPR能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,具有浓度-时间依赖性,染色后镜下观察MDA-MB-231细胞生长密度降低,形态趋于正常。ELISA结果显示,ATPR作用后明显降低MDA-MB-231细胞培养上清中MUC-1的浓度;流式细胞术结果显示,MDA-MB-231细胞中G0/G1期表达量增加,S期表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期比例增加。q-RT-PCR和Western blot结果显示,ATPR作用后,RARγ的mRNA和蛋白表达水平降低,RXRs mRNA和蛋白水平无明显变化。结论 ATPR可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖并诱导其分化,其机制可能与RARγ的表达有关。     

RXRγ、RARβ在9-cis-RA抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用

目的:探讨维甲类X受体(RXR)γ、RARβ在RXR激动剂9-顺维甲酸(9-cis-RA)抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用.方法:体外培养SGC7901细胞给予9-cis-RA干预,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、HE染色、免疫组化染色、Western-blot检测9-cis-RA作用后SGC7901细胞生长情况、凋亡率、细胞周期的改变、RXRγ及RARβ表达情况.结果:SGC7901细胞与9-cis-RA共同培养48 h后,肿瘤细胞生长受到抑制,其作用具有浓度及时间依赖性.流式细胞仪检测显示处于G0/G1期的细胞增多,凋亡率增高,免疫组化及Western-blot 检测显示20 μmol/L 的9-cis-RA 作用72 h后,RXRγ、RARβ蛋白表达增加.结论:9-cis-RA可通过上调RXRγ、RARβ蛋白表达诱导细胞凋亡从而抑制人胃癌SGC7901细胞生长.     

塞来昔布联合维甲酸对SW620细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨塞来昔布联合全反式维甲酸抑制结肠癌SW620细胞增殖和促进凋亡的作用及机制。方法:不同浓度塞来昔布和全反式维甲酸作用SW620细胞48或72 h后应用MTT法和流式细胞仪分别检测细胞的增殖抑制和凋亡率,Western Blot检测细胞AKT、p-AKT及survivin的表达。结果:与单药作用相比,塞来昔布和全反式维甲酸联合作用可明显增强对SW620的增殖抑制和促进凋亡作用(P均<0.01)。Western Blot提示全反式维甲酸和塞来昔布联合作用SW620细胞可抑制AKT活性,下调p-AKT和survivin蛋白表达。结论:塞来昔布在抑制结直肠癌细胞增殖和促进其凋亡中与全反式维甲酸起协同作用,抑制AKT磷酸化、阻断PI3K/Akt通路和下调survivin是其可能作用机制。此结果有望为临床提供可行的联合用药方案,推广维甲酸的诱导分化和凋亡治疗。     

藻蓝蛋白联合全反式维甲酸诱导HeLa细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨全反式维甲酸和藻蓝蛋白联合用药对HeLa细胞生长的影响,并分析两者联合用药诱导细胞凋亡可能的分子机制。方法 MTT法检测全反式维甲酸和藻蓝蛋白单独及联合用药对HeLa细胞生长的影响,TUNEL法检测单独及联合用药HeLa细胞凋亡情况,免疫组化法检测Bcl-2基因的表达情况,Westren blot法检测Caspase-3的表达情况。结果 全反式维甲酸和藻蓝蛋白均具有抑制HeLa细胞生长的作用,当达到相同的抑制率时,联合藻蓝蛋白使用可以显著降低全反式维甲酸的使用剂量从而达到降低毒副作用的目的。2种药物联合用药处于中高抑制率时,2种药物为协同作用。两者联合用药可以显著下调Bcl-2和增加Caspase-3的表达水平从而引发细胞凋亡。结论 2种药物单独使用均能抑制HeLa细胞的生长,联合用药时该抑制作用更为显著。全反式维甲酸和藻蓝蛋白联合用药诱导HeLa细胞凋亡的分子机制可能是通过抑制bcl-2基因的表达、促进Caspase-3蛋白的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞死亡的。 关键词：全反式维甲酸;藻蓝蛋白;HeLa细胞;凋亡;增殖抑制     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对MCF-7细胞增殖和分化的影响及其机制研究

目的研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-ami-no-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和分化的作用及其可能机制。方法不同浓度的ATPR作用MCF-7细胞后,绘制细胞生长曲线,分析细胞增殖情况;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学改变;酶联免疫法(ELISA法)检测粘蛋白(mucin 1,MUC-1)活性;RT-PCR法检测维甲酸受体(RARα、RARβ、RARγ)、维甲酸受体诱导基因1(RRIG1)、雌激素受体(ERα、ERβ)mRNA的表达;Western blot法检测RARα、RARβ、RARγ蛋白的表达。结果 ATPR明显抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度和时间增加而逐渐增强;镜下观察ATPR作用72 h后MCF-7细胞形态趋向正常细胞分化;ELISA结果显示ATPR明显降低MCF-7细胞培养上清MUC-1浓度(P<0.05);ATPR作用MCF-7细胞72 h后,RARβ、RRIG1、ERβ表达增强(P<0.05),RARγ表达下调(P<0.05),RARα和ERα表达则无明显变化。结论 ATPR可明显抑制MCF-7细胞增殖并诱导其分化程度增高,其机制可能与调节维甲酸受体和雌激素受体平衡,并上调RRIG1表达有关。     

全反式维甲酸对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用。方法选择NCI-H446细胞株MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜下观察形态,流式细胞仪进行细胞周期分析。RT-PCR法分析维甲酸受体亚型基因。结果全反式维甲酸诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期。结论全反式维甲酸诱导分化能有效抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞株的增殖,促进凋亡。     

内源性上调pp-GalNAc-T4基因表达抑制全反式维甲酸诱导NB4白血病细胞分化的机制研究

目的上调PP—GalNAc—T4基因表达抑制全反式维甲酸诱导的NB4白血病细胞分化的机制探讨。方法用全反式维甲酸处理NB4白血病细胞和转染了PP—GalNAc—T4基因的NB4细胞及转染了空载体的NB4细胞,用实时PCR观察这三组细胞的PML—RARα基因表达情况。结果用全反式维甲酸处理转染了pp—GalNAc—T4基因的NB4细胞（NB4-T4细胞株）后,癌蛋白PML—RARα基因表达在NB4一T4细胞株,明显高于未转染PP—GalNAc—T4基因的NB4细胞和转染空载体的NB4细胞（P〈0．01）。结论内源性上调pp—GalNAc—T4后,接着用全反式维甲酸诱导NB4-T4细胞。NB4-T4细胞中PML—RARα基因表达升高,而且NB4-T4细胞没有分化。这些提示,PP—GalNAc—T4可以抑制全反式维甲酸诱导的NB4细胞的分化作用,可能和癌蛋白PML—RARα有关。     

全反式维甲酸诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2表达碱性磷酸酶

目的分析全反式维甲酸对小鼠间充质干细胞C3H10T1/2表达碱性磷酸酶的影响。方法全反式维甲酸（10-6M）、维甲酸核受体RAR的激动剂Ch55与MAPK信号通路的阻滞剂处理C3H10T1/2细胞,钙钴染色检测碱性磷酸酶活性,定量RT-PCR方法检测量效关系以及时相分布;采用萤光素酶报告基因检测碱性磷酸酶的启动子是否接受维甲酸的调控。结果维甲酸处理C3H10T1/2细胞24h即能够明显上调ALP的活性,具有明显的剂量依赖特性,与RAR有关,无MAPK信号通路的参与,在其转录起始位点上游-512bp的范围内检测到核受体RAR的调控位点。结论维甲酸能够通过核受体RAR直接上调碱性磷酸酶的转录水平。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯通过PTEN/PI3K/Akt抑制YAC-1细胞增殖和诱导其分化

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对鼠淋巴瘤YAC-1细胞增殖和分化的作用及其可能机制。方法不同浓度的ATPR作用鼠淋巴瘤YAC-1细胞后,MTT检测细胞生长抑制率;LDH法检测细胞毒性;瑞氏-吉姆萨染色法检测细胞形态;NBT检测细胞分化阳性率;RT-PCR和Western blot法检测维甲酸受体mRNA和蛋白表达变化;Western blot法检测PTEN/PI3K/Akt和cyclinD的蛋白表达。结果 ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol·L-1)用药后72 h明显抑制YAC-1细胞增殖,其抑制作用随浓度和时间增加而逐渐增强;随着药物浓度升高,ATPR对YAC-1细胞毒性增强;ATPR(10-5¹0-9mol·L-1)作用72 h后可诱导YAC-1细胞形态呈现高分化趋势,且NBT阳性率升高;ATPR(10-5mol·L-1)体外用药72 h可诱导RARα的mRNA和蛋白表达升高,但RARβ和RARγ表达无明显变化;而且可诱导PTEN表达升高并下调p-Akt和cyclinD的蛋白表达。结论 ATPR可明显抑制YAC-1细胞增殖并诱导其分化,其机制可能是与RARα结合后参与调节PTEN/PI3K/Akt信号通路,从而抑制cyclinD的过表达。     

双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞株143B增殖和凋亡的作用

目的观察双氢青蒿素(dihydroarteminin,DHA)对人骨肉瘤细胞143B的增殖和凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞株143B;MTT比色法和克隆形成实验检测不同浓度DHA对骨肉瘤细胞存活与克隆形成能力的影响。Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态变化。构建β-Catenin荧光素酶报告基因(β-Catenin-Luc,p-Top)检测DHA作用143B后细胞内β-Catenin活性变化。不同浓度的DHA作用后,Western blot检测与细胞增殖(如PC-NA、Cyclin D1、c-Myc)、凋亡(如Bad、Bcl-2、Caspase-3)密切相关的标志物蛋白质表达变化。结果 DHA作用于143B细胞24 h后,MTT结果显示143B细胞的增殖活性受到明显抑制,且其克隆形成能力减弱(P<0.05),在DHA浓度达35μmol.L-1时,抑制效率最明显。Western blot结果显示PC-NA表达下调;而促凋亡蛋白Bad和Caspase-3表达上调,Bcl-2蛋白表达明显减弱。结论双氢青蒿素具有较明显的抑制人骨肉瘤细胞的增殖且促进其凋亡的作用,可能通过下调细胞增殖相关蛋白PCNA、Bcl-2和上调促凋亡蛋白Bad和Caspase-3,启动凋亡程序,致143B细胞发生凋亡。     

肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响

目的研究中药有效成分肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。方法肉桂酸处理MG-63细胞前后,台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞仪检测细胞周期时相变化;光镜和电镜观察细胞形态和超微结构;VanGieson染色检测细胞Ⅰ型胶原表达;茜素红染色观察钙化骨结节形成;免疫细胞化学检测骨粘素和骨钙蛋白表达。结果肉桂酸明显抑制MG-63细胞增殖,D7抑制率达54.94%±4.69%。周期分析结果显示,肉桂酸处理后G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P<0.01)。光镜和电镜结果显示,肉桂酸处理组MG-63细胞形态和超微结构发生明显改变,呈现相应正常细胞的形态和超微结构特征。肉桂酸促进成骨细胞分化标志物Ⅰ型胶原、骨粘素和骨钙蛋白的表达与钙沉积以及典型骨结节的形成。结论肉桂酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖并诱导其向成骨细胞分化。     

NF-kB/IκB-α信号通路对ATRA诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的探讨NF-kB/IκB-α信号通路对全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞凋亡的影响。方法将HL-60细胞与不同浓度的ATRA共同孵育,MTT法观察ATRA对细胞增殖作用,流式细胞术及电镜分析细胞凋亡,Western-Blot检测NF-κB及IκB-α的变化。结果MTT显示ATRA呈时间-剂量依赖方式抗HL-60细胞增殖,作用72h流式细胞术DNA直方图上出现典型的亚二倍体凋亡峰,透射电镜下见细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成,Western-Blot产物显示HL-60细胞NF-κBp65下降,而IκB-α上升。结论ATRA能抗HL-60细胞增殖诱导凋亡,该过程可能与抑制IκB-α的降解阻止NF-κB的活化有关。     

利多卡因调控微小RNA-195对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的 探讨利多卡因(lidocaine)对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其可能的作用机制.方法 研究于2018年5―12月,体外培养骨肉瘤MG63细胞,不同浓度的利多卡因干预MG63细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测MG63细胞存活率及顺铂半抑制浓度(IC50值);流式细胞术检测细胞凋亡率;实时...     

全反式维甲酸联合阿司匹林对体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖和促凋亡的作用及其机制

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）联合阿司匹林（ASA）体外抑制肺癌A549细胞增殖,促凋亡作用和机制。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞,5,10 μmol·L^-1的ATRA单独及分别联合5,10 μmol·L^-1的ASA进行干预48 h、72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法观测药物作用48 h后细胞凋亡状态;RT-PCR法检测药物作用后肺腺癌A549细胞COX-2 mRNA的表达;Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、COX-2和caspase-3蛋白的表达。结果： ATRA与ASA联用对A549增殖具有协同作用;TUNEL法结果显示ATRA可诱导A549细胞凋亡,与ASA联用凋亡率显著升高（P<0.05）;RT-PCR显示A579细胞中COX-2 mRNA呈现高表达状态,ASA可下调COX-2表达,ATRA无此作用;Western blot结果显示ATRA和ASA协同作用使A549细胞中Bcl-2、COX-2蛋白表达受到抑制,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax值降低,对凋亡通路的影响大于单药作用（P<0.05）。结论： ASA联合ATRA可协同抑制肺腺癌细胞A549的增殖及以及促进其发生凋亡,其作用机制可能是ASA通过抑制COX-2蛋白表达,与ATRA共同通过Bcl/caspase通路诱导肿瘤凋亡实现的。     

Synergistic apoptotic effect of crocin and cisplatin on osteosarcoma cells via caspase induced apoptosis

Crocin is well-known traditional Chinese medicine which is extracted from saffron. However, its role in osteosarcoma has not been well understood. Therefore, we used crocin and cisplatin individually or jointly on MG63 and OS732 cells so as to explore whether crocin could induce cellular apoptosis and suppress the ability of invasion of osteosarcoma cells. Cell survival rates, changes of cellular shape, cell apoptosis and cell invasion were analyzed, respectively, by 3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-2,5-di- phenytetrazoliumromide (MTT) assay, inverted phase contrast microscope and fluorescence microscope, ?ow cytometry, and Transwell invasion chamber methods. The expressions of caspase-3 and caspase-8 were detected by Western blot. The survival rate of combined application was significantly lower than that of the individual application. Apoptosis-inducing effect of combined application was much stronger than that of individual application. The invasion ability of MG63 and OS732 cells was restrained significantly in the combined group compared with the individual group and control group. Combined group has the effect of up-regulating the expressions of cleaved-caspase-3 and caspase-8. The results suggested that combination of crocin and cisplatin has a strong killing effect on osteosarcoma cells and suppresses the ability of invasion of MG63 and OS732 cells which might be related to up-regulate the expression of caspase-3 and caspase-8.     

全反式维甲酸对血管平滑肌细胞增殖和转化生长因子-β mRNA表达的影响

目的：研究全反式维甲酸对血管平滑肌细胞增殖，ＤＮＡ合成和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）基因表达的影响。方法：采用血管平滑肌细胞培养，细胞计数，３Ｈ－ＴｄＲ参入，斑点杂交和图像分析方法。结果：全反式维甲酸（Ａ－ＴＲＡ，０．０１，０．１，１μｍｏｌ·Ｌ－１）明显抑制胎牛血清（ＦＣＳ）促进的血管平滑肌细胞增殖和ＤＮＡ合成，其最大抑制率分别是２２．４％和８７．１％；全反式维甲酸明显抑制ＦＣＳ促进的血管平滑肌细胞ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达。结论：ＡＴＲＡ具有抗血管平滑肌细胞增殖作用，其机制与抑制ＴＧＦ－β基因表达有关。     

Okadaic acid induces apoptosis through the PKR, NF-κB and caspase pathway in human osteoblastic osteosarcoma MG63 cells

Okadaic acid (OA) is the major component of diarrheic shellfish poisoning toxins and a potent inhibitor of protein phosphatase 1 and 2A. However, the underlying regulatory mechanisms involved in OA-induced cell death are not well understood. In the present study, we examined the effects of OA on apoptosis of MG63 cells by characterizing apoptotic morphological changes of the cells and DNA fragmentation. The roles of double-stranded RNA-dependent protein kinase (PKR), nuclear factor-κB (NF-κB) and caspase in OA-mediated apoptosis in MG63 cells were also examined. Results showed that OA induced cytotoxicity and apoptosis in MG63 cells at IC₅₀ of 75 nM. A functional PKR pathway is required to induce apoptosis in response to OA treatment. Blockade of NF-κB by ammonium pyrrolidinedithiocarbamate (PDTC) resulted in down-regulation of apoptosis. The caspase-3 and caspase-8 inhibitors blocked apoptosis in MG63 cells. In conclusion, our results imply that OA can induce MG63 cell apoptosis through the PKR, NF-κB and caspase pathway.