补阳还五汤治疗血管性痴呆临床观察

目的:观察补阳还五汤治疗血管性痴呆临床疗效.方法:将2014年1月~2016年1月在我院门诊或住院治疗的90例血管性痴呆患者随机分为对照组(n=45)和治疗组(n=45).对照组口服尼莫地平片,治疗组在对照组基础上加用补阳还五汤,治疗8周后进行疗效统计分析.结果:总有效率,对照组73.33%,治疗组66.67%,两者比较有显著差异(P<0.05)结论:补阳还五汤治疗血管性痴呆,能明显提高有效率,无不良反应,值得临床推广.     

补阳还五汤精简方对大脑中动脉阻塞模型大鼠海马组织Cdk5的调控

目的评价补阳还五汤精简方对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠海马组织周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,Cdk5)的调控。方法将♂SD大鼠随机分为假手术组、MCAO模型组、补阳还五汤干预组(灌胃3.15 g·kg~(-1))及补阳还五汤精简方干预组(灌胃2.41 g·kg~(-1)),每组按给药后1、3、7、14、28 d再各分5小组。采用免疫组化法、Western blot法和RT-PCR法考察不同时间点各组大鼠海马组织中Cdk5的表达。结果 MCAO模型大鼠海马组织中,脑缺血后1 d即出现Cdk5上调趋势,并随着脑缺血的加剧,Cdk5的表达继续上调,其中mRNA及蛋白水平在7~14 d达最大,28 d则出现下降趋势,与各时间点假手术组比较P<0.01,提示脑缺血损伤将激活Cdk5信号转导途径;补阳还五汤精简方干预后的3、7、14、28 d均能明显降低Cdk5的表达,与各时间点模型组比较P<0.05,且随着干预时间的延长,下调趋势越明显,干预28 d后,Cdk5的表达接近假手术组,提示补阳还五汤精简方可下调Cdk5的异常表达,与补阳还五汤原方比,两方对Cdk5的调控差异无统计学意义(P>0.05)。结论补阳还五汤精简方可能通过调控Cdk5的表达水平对脑缺血海马组织发挥保护作用。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对血管性痴呆(VD)小鼠对海马转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达的调节作用。方法采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型。90只雄性昆明小鼠随机分为3组,假手术组(30只)、模型组(30只)及盐酸多奈哌齐治疗组(30只)。在术后第29、30天,经跳台试验和水迷宫试验进行行为学测试,用免疫组织化学和Western blot方法检测各组小鼠海马CREB的表达变化。结果盐酸多奈哌齐治疗组小鼠的学习和记忆成绩明显高于VD模型组小鼠(P<0.05);盐酸多奈哌齐治疗组小鼠海马CA1区CREB蛋白阳性表达的平均吸光度值显著高于VD模型组(P<0.05)。结论盐酸多奈哌齐能够上调VD小鼠CREB的表达。     

三七制剂对血管性痴呆大鼠海马神经元ERK的影响

目的:探讨三七制剂对血管性痴呆大鼠海马神经元ERK的影响。方法:采用改良2-VO即不同时间点分别永久性结扎左右颈总动脉的方法制备血管性痴呆大鼠动物模型;将24只Wistar雄性大鼠分为四组:正常对照组、假手术组、血管性痴呆组和三七制剂灌胃组;制作实验大鼠脑组织标本,通过HE(苏木精-伊红)染色、免疫组织化学染色方法进行观察比较。结果:①各组大鼠海马CA1区HE染色:假手术组大鼠海马HE染色观察CA1区锥体细胞体积完整,排列规则,胞核呈圆形或椭圆形,核仁显现明显,染色质质地均匀,细胞数量多,相比较模型组大鼠锥体细胞破碎不完整,坏死明显,结构松散,排列紊乱,细胞数量明显减少;治疗组大鼠正常细胞胞核呈圆形或椭圆形、核仁清晰、染色质丰富、排列较密,少见固缩变性的神经元,神经元数量较多。②各组大鼠海马CA1区免疫组化海马ERK结果:痴呆组大鼠海马CA1区神经元ERK的表达量与正常对照组和假手术组相比较,有明显降低(P<0.01);治疗组大鼠海马CA1区神经元ERK的表达量较痴呆组升高,与正常对照组和假手术组相比较ERK的表达量降低(P<0.01)。结论:三七制剂可减少血管性痴呆大鼠海马神经元的缺血坏死,减轻脑组织的不可逆损害,具有神经元保护作用,ERK参与血管性痴呆的发生发展过程。     

补阳还五汤对高脂血症模型大鼠脂质代谢及肝组织的影响

目的:探讨补阳还五汤对高脂血症模型大鼠脂质代谢及肝组织的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(辛伐他汀0.004 g/kg)和补阳还五汤低、高剂量组(3.5、14.0 g/kg,按生药总量计),每组10只。除空白对照组大鼠灌胃水外,其余各组大鼠均按体质量灌胃脂肪乳剂复制高脂血症模型。从造模第21天开始,各组大鼠上午继续灌胃水或脂肪乳剂,下午灌胃水或相应药物,连续20 d。末次给药后,检测各组大鼠血浆中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶(LCAT)、磷脂转移蛋白(PLTP)、肝脂酶(HL)含量以及肝细胞中脂蛋白脂肪酶(LPL)、微粒体三酰甘油转运蛋白(MTP)、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的含量,并观察各组大鼠肝组织的病理形态学变化。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠TG、TC、LDL-C、ALT、HMG-CoA还原酶含量均显著升高(P<0.05或P<0.01),HL、LPL、MTP含量均显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠TG、TC、LDL-C、HMG-CoA还原酶含量以及补阳还五汤低、高剂量组大鼠ALT、AST含量均显著降低(P<0.05或P<0.01),各给药组大鼠HL、MTP含量以及阳性对照组大鼠LPL含量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。病理切片显示,模型组大鼠肝细胞排列不规则,可见明显的细胞脂肪变性;阳性对照组和补阳还五汤高剂量组大鼠肝细胞较空白对照组几乎无异常变化,补阳还五汤低剂量组大鼠肝组织有轻微细胞脂肪变性。结论:补阳还五汤对高脂血症模型大鼠的降脂作用显著,这作用可能与该方通过调控脂质代谢相关酶及转运蛋白的表达而调节脂质的吸收、转运、代谢有关。     

补阳还五汤精简方对大鼠脑缺血后血管新生及Nrf2/HO-1信号途径的影响

目的观察补阳还五汤精简方对大鼠脑缺血后血管新生及核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号途径的影响。方法 120只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,各组给予相应处理。在d 1、3、7三个时间点取脑组织进行检测,免疫组织化学法检测血浆Ⅷ因子相关抗原(v WF),测定微血管密度(MVD)。采用Real-time PCR和Western blot法检测大鼠脑组织中Nrf2、HO-1基因及蛋白表达。结果 1与假手术组比,模型组v WF阳性表达微血管在d 3时表达明显升高(P<0.05),给药组d 7与模型组比较差异有显著性(P<0.05);2假手术组Nrf2、HO-1mRNA及蛋白呈少量表达,模型组Nrf2蛋白表达水平d 3与同时间点假手术组比较差异有统计学意义(P<0.01),各给药组能上调Nrf2mRNA及蛋白表达,其中Nrf2mRNA在d 7,Nrf2蛋白表达在d 1及d 7上调最明显,与同时间点模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。模型组HO-1mRNA及蛋白在d 7与同时间点假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),各给药组HO-1mRNA在d 3,HO-1蛋白在d 3及d 7上调最明显,与同时段模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论补阳还五汤精简方促进脑缺血后血管新生,这一作用可能与调控Nrf2/HO-1信号途径的表达有关。     

SA4503对抑郁大鼠海马CREB及BDNF的影响

目的 观察SA4503对抑郁大鼠海马环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(CREB)及脑源性神经营养因子(BDNF)的影响.方法 雄性Wistar大鼠32只随机均分为对照组(C组)和三个剂量SA4503组(K1-3组).实验药物干预前1d,大鼠强迫游泳15 min建立抑郁大鼠模型.药物干预当日,分别腹腔注射1ml等容量的生理盐水(C组)、SA4503 2.5mg/kg(S1组)、5 mg/kg(S2组)、10 mg/kg(S3组).给药30 min后将大鼠再次行强迫游泳实验5 min,记录其不动时间.随后取海马组织测定CREB及BDNF含量.结果 与C组相比,S1-3组呈剂量依赖性地减少大鼠强迫游泳不动时间及增加海马CREB和BDNF表达(P＜0.05).结论 SA4503对大鼠的抗抑郁作用可能与前额皮层CREB及BDNF表达上调有关.     

天智颗粒对血管性痴呆大鼠海马Tau蛋白、β淀粉样蛋白及VEGF表达的影响

目的研究天智颗粒对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马Tau蛋白、β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法将135只大鼠随机分为3组,模型组,假手术组和治疗组。采用双侧颈总动脉结扎法制备VD大鼠模型,治疗组应用天智颗粒5g/kg灌胃,模型组和假手术组应用等量蒸馏水灌胃,1次/d,在相应时间点通过免疫组织化学法测定各组大鼠海马CA1区Tau蛋白、Aβ及VEGF表达。结果治疗组大鼠1个月和2个月时Tau蛋白表达与模型组相比明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);3组Aβ表达两两比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗组各个时间点VEGF表达较其余两组明显上调,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组2个月时表达最高,各亚组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论天智颗粒可抑制Tau蛋白磷酸化,使VEGF表达上调,对Aβ的表达无明显影响。     

Beclin-1与Bcl-2在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及意义

【摘要】目的观察自噬相关蛋白Beclin-1与凋亡相关蛋白Bcl-2在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及变化情况。方法60只实验大鼠随机分为假手术组和血管性痴呆模型组（模型组）,每组又随机分为模型制备成功后1、2、4、8和12周5个亚组（各6只）。采用四血管阻断法制备血管性痴呆模型,Morris水迷宫法测试学习记忆能力,免疫组化法检测自噬相关蛋白Beclin-1及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果模型组大鼠海马CA1区1周时可见Be clin-1、Bcl-2蛋白阳性表达,4 周达到高峰,8周开始下降,至12 周仍较高。与假手术组比较,模型组各时间点的Be clin-1、Bcl-2蛋白表达均明显增高,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。模型组大鼠海马CA1区的Beclin-1阳性表达数与Bcl-2阳性表达数呈正相关（r=0.809,P < 0.05）。结论血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬和凋亡同时发生,且表达趋势一致。     

激光散斑衬比成像技术观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后脑微血流的影响

目的：建立脑缺血再灌注大鼠模型,观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后脑微血流的影响。方法：将动物分为对照组、模型组、补阳还五汤组、重组人血管内皮抑制素组、补阳还五汤+重组人血管内皮抑制素组,应用激光散斑衬比成像技术观察大鼠梗死区域脑血流状态,测定脑组织的含水量,并检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白及基因表达水平。结果：与对照组相比,脑缺血再灌注大鼠模型大鼠脑血流速度明显降低（P<0.01）,脑组织含水量增高（P<0.01）,VEGF蛋白和基因的表达减少（P<0.01）;与模型组相比,补阳还五汤组能明显提高脑缺血再灌注大鼠模型大鼠脑血流速度（P<0.01）,降低脑组织含水量（P<0.01）,提高VEGF蛋白和基因的表达（P<0.01）。结论：补阳还五汤具有改善缺血再灌注后脑血流的作用,而调节VEGF蛋白及基因的表达水平是其参与改善脑血流的主要途径之一。     

五味子乙素对慢性应激抑郁大鼠海马BDNF/TrkB/CREB通路的影响

目的 研究五味子乙素对慢性应激抑郁大鼠海马脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶B（TrkB）/环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）信号通路的影响。方法 40只SD大鼠随机选择10只作为对照组,其余大鼠采用慢性不可预知温和应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）结合孤养制备抑郁症模型,造模结束后随机分为3组：模型组、盐酸氟西汀（3 mg·kg^-1）组、五味子乙素（5 mg·kg^-1）组,每天ig给药1次,连续8周。分别于造模前、造模后及给药后进行旷场、悬尾、强迫游泳行为学实验;通过苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马形态学改变;免疫组织化学染色（IHC）法观察大鼠海马BDNF蛋白表达;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测大鼠海马BDNF、TrkB、CREB mRNA相对表达量;Westernblotting检测大鼠海马BDNF、TrkB、CREB蛋白相对表达量。结果 与对照组比较,模型组大鼠旷场实验水平、垂直得分显著降低（P＜0.05）,悬尾不动时间和强迫游泳漂浮时间显著增加（P＜0.05）;HE染色结果显示海马神经元结构损伤,IHC结果显示海马BDNF表达明显降低;海马BDNF、TrkB、CREB mRNA及蛋白相对表达显著降低（P＜0.05）。与模型组比较,盐酸氟西汀及五味子乙素组大鼠水平、垂直得分显著增加（P＜0.05）,不动时间和漂浮时间显著减少（P＜0.05）;海马神经元结构明显复原,海马组织中BDNF染色明显增加;BDNF、TrkB、CREB mRNA和蛋白相对表达量显著增加（P＜0.05）。结论 五味子乙素可以改善慢性应激抑郁大鼠抑郁样行为、海马区神经元数量及形态,其机制可能与上调BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。     

芍药苷调控环磷酸腺苷 /蛋白激酶 A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路对脑卒中大鼠的影响

目的探讨芍药苷调控环磷酸腺苷( cAMP)/蛋白激酶 A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白( CREB)通路对脑卒中大鼠的影响。方法该研究起止时间为 2019年 12月至 2020年 12月。 40只 SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、药苷组(灌胃 30 mg/kg芍药苷)、 H89组［腹腔注射 1 mg/kg H89(PKA抑制剂)］、芍药苷 +H89组(灌胃芍药苷后腹腔注射 H89)芍,除假手术组仅进行动脉分离,其余各组均构建缺血性脑卒中模型,模型构建成功后进行药物干预,持续给药 2周,模型组、假手术组以生理盐水代替。根据 Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能缺损评分, Morris水迷宫测定大鼠记忆行为学能力,酶联免疫吸附测定( ELISA)试剂盒检测大鼠血清炎性因子水平,苏木精 -伊红( HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化,蛋白质印迹法检测大鼠脑组织 cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组脑组织受损严重,大鼠神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著升高( P<0.05)记忆行为学能力、脑组织中 cAMP［( 0.31±0.05)比( 1.03±0.23)］、 PKA［( 0.30±     

丹参酮B调控LRP6/Wnt1/β-catenin通路对血管性痴呆性小鼠认知功能的影响

目的探究丹参酮B对血管性痴呆小鼠认知功能障碍的保护机制。方法C57BL/6雄性小鼠,分Control组、模型组(VD组)、丹参酮B低、中、高剂量组(TSB 2、4、8 mg·kg^-1)、盐酸多奈哌齐1 mg·kg^-1,每组各10只。采用小鼠双侧颈总动脉缩窄法构建VD模型,造模成功10 d后分别给药,Control组和VD组小鼠腹腔注射等量生理盐水,共计20 d。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力;分光光度法测定MDA、SOD、GSH-Px;HE染色观察病理学改变;Western blot检测p-LRP6、LRP6、Wnt1、β-catenin蛋白表达。结果与Control组相比,VD组小鼠记忆能力降低,MDA含量升高,SOD和GSH-Px活性降低(P<0.01),海马区域病理损伤明显,p-LRP6、Wnt1以及β-catenin蛋白表达均明显降低(P<0.01)。与VD组相比,TSB治疗组小鼠学习记忆能力提升,MDA含量降低,SOD和GSH-Px活性升高,海马区域病理损伤明显改善,p-LRP6、Wnt1以及β-catenin蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论TSB能改善VD小鼠认知功能障碍,可能与LRP6/Wnt1/β-catenin通路有关。     

反式白藜芦醇对Aβ_(25-35)损伤大鼠海马旁回caspase-8、caspase-9的影响

目的观察反式白藜芦醇(TR)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)损伤大鼠的海马旁回的作用。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、TR高、低剂量组、多奈哌齐对照组。在大鼠海马内注射Aβ25-35后分别灌胃给相应药物10 d,采用TUNEL法检测5组大鼠海马细胞及周围皮质凋亡情况;采用real time RT-PCR法检测5组大鼠海马及皮质caspase-8、caspase-9 mRNA表达。结果大鼠海马及周边脑组织细胞凋亡情况,模型组与其他各组差异显著(P<0.01),说明造模成功。TR对caspases-8、caspase-9表达水平的下调非常显著(P<0.01),低剂量组与高剂量组之间也有统计学差异(P<0.05)。结论 TR对损伤的大鼠海马周围皮层神经元有保护作用,其机制可能部分与下调caspase-8、caspase-9 mRNA表达有关。     

缓激肽诱导胶质瘤细胞内cAMP反应元件结合蛋白磷酸化的实验研究

目的观察缓激肽作用下,大鼠C6胶质瘤细胞中转录因子cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element bind-ing protein,CREB)磷酸化的动态变化,并探讨其可能的意义。方法应用免疫细胞化学和Western blot方法,观察1μmol.L-1缓激肽作用C6胶质瘤细胞在不同时相点(0,5,10,15,20,30min)CREB磷酸化的动态变化。结果1μmol.L-1缓激肽作用C6胶质瘤细胞的5到30min的各时相点均能检测到CREB的磷酸化(P<0.01),其中以15min的磷酸化最强(P<0.01)。结论缓激肽可促进大鼠C6胶质瘤细胞中转录因子CREB的磷酸化,此作用可能与其促进血肿瘤屏障的选择性开放有关。     

夏天无总生物碱对痴呆大鼠学习记忆障碍及中枢胆碱能神经系统功能的影响

目的　观察夏天无总生物碱 (Xiatianwutotalalkaloids,XA)对喹啉酸损毁海马所致大鼠学习记忆障碍和中枢胆碱能神经系统功能的影响。方法　采用双侧海马CA1区微注射喹啉酸造成大鼠学习记忆障碍模型 ,在造模前 1wk至造模后 3wk内 ,大鼠每天igXA 0 2 5 ,0 5 ,1mg·kg-1。采用三等分Y迷宫测定大鼠学习记忆能力 ,并采用比色法检测海马乙酰胆碱酯酶 (acetylcholinesterase ,AChE)活性和大脑皮层乙酰胆碱 (acetylcholine ,ACh)含量的变化。结果　大鼠双侧海马内微注射喹啉酸可引起大鼠学习记忆功能障碍 ,海马中AChE活性下降 ,大脑皮层ACh含量减少 ;XA可显著改善喹啉酸诱导的痴呆大鼠学习记忆功能障碍 ,同时明显抑制模型大鼠海马的AChE活性 ,提高大脑皮层ACh含量。结论　XA可改善喹啉酸损毁海马造成的痴呆大鼠学习记忆功能障碍 ,而其机制可能与抑制脑AChE活性 ,从而提高ACh含量 ,增强中枢胆碱能系统的功能有关。     

多奈哌齐对血管性痴呆模型小鼠海马p38 MAPK mRNA表达的影响

目的探讨多奈哌齐对血管性痴呆模型小鼠海马p38 MAPK mRNA表达的影响。方法双侧颈总动脉线结反复缺血—再灌注法制备血管性痴呆小鼠模型,设多奈哌齐治疗组,采用多奈哌齐连续治疗4 wk,并设假手术组及模型组为对照组,利用跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,用原位杂交技术观测其p38 MAPK mRNA的表达变化。结果多奈哌齐组小鼠学习、记忆成绩明显优于血管性痴呆模型组(P<0.05),其海马p38 MAPK mRNA表达明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论多奈哌齐影响血管性痴呆小鼠海马p38MAPK mRNA表达,改善血管性痴呆小鼠学习、记忆功能。     

Induction of cyclooxygenase-2 by bovine type I collagen in macrophages via C/EBP and CREB activation by multiple cell signaling pathways

Bovine type I collagen (Col-I) is utilized for medical purposes such as cosmetic surgery and wrinkle removal. Cyclooxygenase-2 (COX-2) plays roles in pathophysiological processes including inflammation and tumorigenesis. This study examines the effects of Col-I on the COX-2 expression and the signaling pathways in macrophages. Col-I increased the levels of COX-2 protein and mRNA in serum-stimulated Raw264.7 cells in a time- and concentration-dependent manner. Treatment of cells with Col-I increased CCAAT/enhancer binding protein (C/EBP) DNA binding. Antibody supershift experiments revealed that C/EBP DNA binding activity induced by Col-I depended largely on C/EBPbeta and C/EBPdelta. Immunocytochemistry showed that Col-I induced nuclear translocation of C/EBPbeta and C/EBPdelta, whose activation contributes to COX-2 induction. Overexpression of the dominant-negative mutant form of C/EBP abolished COX-2 induction by Col-I. Col-I also increased cyclic-AMP response element binding protein (CREB) binding to DNA. Inhibition of focal adhesion kinase (FAK) or downstream phosphoinositide 3-kinase and p70S6 kinase by specific chemical inhibitors prevented COX-2 induction by Col-I, and C/EBP and CREB from binding to their consensus DNA oligonucleotides. Experiments using chemical inhibitors or dominant-negative mutant vectors showed that the mitogen-activated protein (MAP) kinase pathways including p38-kinase and extracellular signal-regulated kinase (ERK1/2), but not c-Jun N-terminal kinase (JNK1), simultaneously regulated COX-2 induction by Col-I. This was in agreement with inhibition of Col-I-inducible C/EBP and CREB DNA binding by concomitant treatment with SB203580 and PD98059. These results provide evidence that Col-I induces COX-2 in serum-stimulated macrophages and that the multiple cell signaling pathways involving Src-focal adhesion kinase, phosphoinositide 3-kinase, and MAP kinases regulate COX-2 induction by Col-I via C/EBP and CREB activation.