Zileuton对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的影响

目的观察5-脂氧合酶(5-1ipoxygenase,5-LOX)抑制剂Zileuton对胃癌SGC-7901细胞异质黏附、侵袭、迁移、诱导新生血管形成能力的影响,并初步探讨其可能机制。方法用Zileuton处理SGC-7901细胞,MTT法检测其黏附能力的变化;Transwell Chamber观察其侵袭及迁移能力的改变;观察SGC-7901细胞条件培养基诱导内皮细胞形成血管管腔能力;RT-PCR和Western blot检测SGC-7901细胞中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和尿激酶纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)的表达变化。结果经6.30×10-5mol.L-1的Zileuton处理后,SGC-7901细胞游走与侵袭穿膜细胞数、诱导内皮细胞形成血管管腔数与管腔长度均低于对照组(P<0.01);黏贴率、OPN和uPA表达均较对照组明显降低(P<0.05)。结论 5-LOX抑制剂Zileuton能有效抑制SGC-7901细胞的侵袭转移,其作用机制可能与抑制OPN和uPA的表达有关。     

灵菌红素体外对肿瘤转移相关生物学行为的影响

目的探明灵菌红素(Metacycloprodigiosin,MP)对肿瘤转移相关生物学行为的影响。方法利用MTT法检测MP对HUVEC和4TO7细胞增殖的影响;划痕法检测其对HUVEC细胞迁移能力的影响;Matrigel模仿基底膜检测MP对HUVEC细胞管腔形成的影响;黏附实验检测MP对4TO7细胞黏附能力的影响;划痕法及Transwell小室法分别检测MP对4TO7细胞迁移及侵袭能力的影响。结果MP在小于10μmol·L-1的浓度下对HUVEC及4TO7细胞增殖能力无影响,在0.01、0.1、1μmol·L-1浓度下能抑制HUVEC细胞的迁移及管腔形成,并且能明显抑制4TO7细胞的黏附、迁移和侵袭。结论MP可能通过抑制血管内皮细胞管腔形成,以及影响肿瘤细胞黏附、迁移及侵袭,进而抑制肿瘤的转移。     

Effects of the extract of salvia chinensis benth on biological behavior of vascular endothelial cells

目的 探讨石见穿醇提取物体外对血管内皮细胞生物学行为的影响.方法 采用人脐静脉内皮细胞( HUVECs)原代培养模型,通过MTT法观察石见穿醇提取物对HUVECs及人肝癌HepG2细胞增殖的影响;通过Transwell小室迁移、体外小管形成实验,观察石见穿醇提取物对HUVECs迁移、小管形成能力的影响.结果 12.5-200 μg/ml的石见穿醇提取物作用于HUVECs48 h,细胞增殖抑制率为17.73％-59.70％,明显高于其作用于人肝癌HepG2细胞的7.19％-39.66％(P＜0.01);12.5-200 μg/ml石见穿醇提取物作用HUVECs 12 h后,迁移抑制率为1.83％-64.51％,且抑制作用与药物浓度呈正相关(r=0.940,P＜0.05); 12.5-200 μg/ml石见穿醇提取物作用于HUVECs 24 h后,形成管腔数目明显减少,管腔不完整甚至消失.结论 石见穿醇提取物在体外能够明显抑制HUVECs增殖、迁移和小管形成,改变血管内皮细胞生物学行为.     

石见穿醇提取物对血管内皮细胞生物学行为的影响

目的探讨石见穿醇提取物体外对血管内皮细胞生物学行为的影响。方法采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养模型,通过MTT法观察石见穿醇提取物对HUVECs及人肝癌HepG2细胞增殖的影响;通过Transwell小室迁移、体外小管形成实验,观察石见穿醇提取物对HUVECs迁移、小管形成能力的影响。结果 12.5-200μg/ml的石见穿醇提取物作用于HUVECs48h,细胞增殖抑制率为17.73%-59.70%,明显高于其作用于人肝癌HepG2细胞的7.19%-39.66%(P<0.01);12.5-200μg/ml石见穿醇提取物作用HUVECs 12h后,迁移抑制率为1.83%-64.51%,且抑制作用与药物浓度呈正相关(r=0.940,P<0.05);12.5-200μg/ml石见穿醇提取物作用于HUVECs 24h后,形成管腔数目明显减少,管腔不完整甚至消失。结论石见穿醇提取物在体外能够明显抑制HUVECs增殖、迁移和小管形成,改变血管内皮细胞生物学行为。     

粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响

目的:研究粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响。方法:采用细胞黏附试验观察粉防己碱对A549细胞黏附作用的影响;通过细胞迁移试验检测粉防己碱对A549细胞迁移能力的影响;通过血管生成拟态试验观察粉防己碱对A549细胞体外类血管生成的作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测粉防己碱对A549细胞血管生成拟态相关基因表达的影响。结果:5、10、20μmol/L粉防己碱作用A549细胞30 min后,细胞的黏附作用受到抑制,并与浓度呈正相关;与对照比较,5、10、20μmol/L粉防己碱处理A549细胞12、24 h后,A549细胞迁移数减少,A549细胞管腔形成数明显减少,管腔长度明显缩短;A549细胞以粉防己碱处理后,血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达减弱。结论:粉防己碱可抑制A549细胞黏附、细胞迁移和血管生成拟态,其机制可能与抑制血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达有关。     

丹酚酸B对血管内皮细胞迁移及管腔形成的影响

目的探讨丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的作用,了解其对血管新生的影响和作用机制。方法采用3H参入法检测Sal B对HUVECS增殖作用;Transwell观察Sal B对HUVECS迁移的影响;用体外毛细血管管腔结构形成试验检测Sal B对HUVECS管腔形成的影响;分别采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和Westen blot法检测Sal B处理后HUVECS分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平和VEGF表达的变化。结果3H参入法,结果显示Sal B对HUVECS增殖具有促进作用;Transwell试验显示,Sal B可以促进HUVECS迁移;管腔形成实验显示,与空白组比较,Sal B可以使HUVECS管腔形成数增多,管腔长度增长。经Sal B处理后,与空白组比较,HUVECS上清中VEGF含量增加,VEGF表达上调。结论Sal B对HUVECS增殖,迁移和管腔形成有促进作用,其作用机制可能是通过上调HUVECS中VEGF的表达,从而促进血管新生。     

紫草素对内皮细胞血管新生活性的影响

目的:探讨紫草素对内皮细胞的作用,明确其抗血管新生机制。方法:利用塞唑兰(MTT)法测定紫草素对内皮细胞增殖的影响,利用迁移实验和体外管腔形成实验观测紫草素对内皮细胞迁移及管腔形成能力的影响。结果:紫草素可在体外抑制内皮细胞的血管新生活性,20μmol·L-1的紫草素对内皮细胞增殖、迁移及管腔形成能力的抑制率分别为38.66%±0.05%、79.69%±0.03%及80.95%±0.05%。结论:紫草素可直接作用于内皮细胞,通过抑制其增殖、迁移及管腔形成而发挥其抗血管新生作用。     

紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌细胞增生影响的差异及意义

目的探讨紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌增生影响的差异及意义.方法将兔血管平滑肌细胞接种于共培养体系上室、内皮细胞接种于下室建立体外内膜修复模型,观察紫杉醇对兔血管平滑肌和内皮细胞3H-TdR掺入、细胞计数和迁移率的影响,用直线回归法计算紫杉醇对平滑肌和内皮细胞增生迁移的半数有效抑制浓度IC50.结果在1 nmol·L-1～1 μmol·L-1之间,紫杉醇呈浓度依赖地抑制平滑肌细胞3H-TdR掺入、细胞计数和迁移(n=6, P＜0.01).在10 nmol·L-1～1 μmol·L-1之间,紫杉醇呈浓度依赖地抑制内皮细胞3H-TdR掺入、细胞计数和迁移(n=6, P＜0.01).1 nmol·L-1紫杉醇对内皮细胞3H-TdR掺入和细胞计数有抑制倾向,但与对照组相比无统计学差异.而1 nmol·L-1的紫杉醇却已显著抑制内皮细胞迁移(n=6, P＜0.01).紫杉醇对兔血管平滑肌细胞增生、迁移抑制的IC50分别为 10.09±0.47、9.16±0.54 nmol·L-1,对内皮细胞增生、迁移抑制的IC50分别为 19.05±0.35、5.37±0.51 nmol·L-1.10 nmol·L-1紫杉醇作用 20 min 在观察时间内能持续抑制融合内皮组平滑肌增生,而对数内皮组平滑肌增殖在10 d时明显高于对照组.结论紫杉醇在抑制兔血管平滑肌细胞增生的同时也抑制内皮增生,紫杉醇干预后平滑肌细胞增生延迟与内皮细胞再生延迟密切相关.     

环磷腺苷葡胺对人脐静脉血管内皮细胞增殖、迁移、管腔形成及凋亡的影响

目的 探索环磷腺苷葡胺（meglumine cyclic adenylate，MCA）对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）增殖、迁移、管腔形成及凋亡的影响。方法 通过显微镜观察、MTT法、划痕修复试验、管腔形成试验、Western blotting观察不同浓度MCA对HUVEC细胞形态、增殖、迁移、管腔形成能力及凋亡相关蛋白表达的影响。结果 显微镜观察发现，随着MCA剂量增加，HUVEC细胞形态由多角形变为卵圆形。MCA可呈浓度依赖地抑制HUVEC增殖、迁移、管腔形成，并且高剂量的MCA还可诱导细胞凋亡，表现为细胞凋亡数目增加，Bax、Cleaved-PARP蛋白表达上调，PARP、Bcl-2蛋白表达下调。结论 MCA可抑制HUVEC细胞增殖、迁移、管腔形成，并诱导细胞凋亡。     

维泰醇对小鼠淋巴白血病细胞促进凋亡的作用及其机制

维泰醇(alternol)是利用红豆杉树皮中一种微生物菌诱变株,经过发酵、纯化等工艺分离出的新型单体化合物。本研究探讨维泰醇对小鼠淋巴白血病(L1210细胞)的作用及其机制。采用MTT法检测维泰醇对细胞活力的影响，用形态学方法、 DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡，以Western blotting法检测与凋亡相关蛋白的表达。维泰醇对L1210细胞的增殖有明显抑制作用；处理后的细胞表现出凋亡特有形态学改变，细胞凋亡比率的增加有时间依赖性；维泰醇能降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)，增加细胞内活性氧(ROS)的水平，并引起细胞DNA发生片段化，形成典型的梯状条带；维泰醇能下调Bcl-2/Bax表达比率，并且上调caspase-3和caspase-9的表达，但是对caspase-8的表达没有明显的影响。维泰醇可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导L1210细胞凋亡。     

白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用

目的比较白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用。方法白藜芦醇和紫檀芪5～50μmol·L-1分别与小鼠黑色素瘤细胞B16F1和内皮细胞ECV304作用48 h,再分别用磺基罗丹明B染色法测定细胞增殖率。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1与细胞作用48 h,用划痕实验评价B16F1和ECV304细胞体外迁移能力,用明胶酶电泳和ELISA测定B16F1细胞分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)的活性和含量。用重建基底膜法观察白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用24 h对ECV304细胞拟管腔形成的抑制作用。结果白藜芦醇和紫檀芪作用48 h均能显著抑制B16F1和ECV304细胞增殖,抑制B16F1细胞增殖的IC50分别为119.7μmol·L-1和37.3μmol·L-1,抑制ECV304细胞增殖的IC50分别为72.2μmol·L-1和37.2μmol·L-1。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用48 h,B16F1细胞愈合率分别为58.0%和36.8%,ECV304细胞愈合率分别为61.8%和28.9%,明显低于正常对照组的67.7%和88.4%(P<0.01),而且紫檀芪组明显低于白藜芦醇组(P<0.01)。与正常对照组相比,白藜芦醇和紫檀芪10μmo·L-1作用48 h使B16F1细胞MMP-2蛋白表达分别降低7.4%和13.9%(P<0.01),MMP-2活性分别降低19.3%和78.9%(P<0.01)。白藜芦醇和紫檀芪作用24 h均可使ECV304细胞管腔样结构破坏,且紫檀芪的作用较白藜芦醇更加明显。结论白藜芦醇和紫檀芪均具有抑制B16F1和ECV304细胞增殖和转移的作用,并能抑制ECV304细胞拟管腔形成;浓度为10μmol·L-1时紫檀芪的抑制作用强于白藜芦醇。     

吉非替尼通过抑制EGFR/Akt信号通路特异性抑制平滑肌细胞增殖

目的:探讨表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂吉非替尼对平滑肌细胞(smooth muscle cells, VSMC) 和内皮细胞 (ndothelial cells, EC) 增殖的影响,以及对EGFR和Akt蛋白表达及磷酸化的影响。方法:将大鼠VSMC及EC置于含0.01~10 μmol·L的吉非替尼的培养基中培养24~72 h,以MTT法测定细胞增殖的抑制率。Western blot检测EGFR及磷酸化EGFR(p-EGFR)、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平。结果:MTT结果显示,吉非替尼抑制VSMC增殖呈时间和浓度依赖性,而吉非替尼对EC增殖的抑制作用明显低于紫杉醇;Western blot结果显示VSMC中EGFR(1.07±0.13)表达与EC(0.58±0.05)相比明显增多(P<0.01),而吉非替尼可明显抑制VSMC中EGFR及Akt蛋白的磷酸化。结论:类似紫于杉醇,吉非替尼可抑制VSMC增殖,而对EC的细胞毒性作用明显低于紫杉醇,其机制可能是通过抑制EGFR及Akt蛋白磷酸化来实现的。     

维康醇与维泰醇的抗肿瘤作用研究进展★

维泰醇是从短叶红豆杉树皮的真菌突变株中提取并纯化的单体化合物，维康醇是其氧化物异构体。近期研究表明，二者均具有良好的特异性抗肿瘤活性，可干扰肿瘤细胞中多重信号通路的活性，调控细胞周期相关蛋白表达，引起细胞周期阻滞。维泰醇可特异性作用于黄嘌呤氧化酶，促进细胞内活性氧堆积，激活内源性凋亡通路，导致细胞死亡。蛋白质谱研究表明，维泰醇可特异性地与线粒体三羧酸循环中的4种酶蛋白结合，扰乱线粒体有氧呼吸功能和细胞能量代谢，减少ATP的产生，遏制体内肿瘤生长。维泰醇与维康醇均表现出抑制肿瘤细胞侵袭和迁移的能力，并可诱导肿瘤细胞分化。研究还指出，维泰醇具有选择性作用于肿瘤细胞的特性，对正常细胞无明显影响，目前在细胞水平和动物体内的实验均取得了良好的抗肿瘤效果，具有极大的研究价值和成药前景。     

新型抗癌单体化合物维泰醇的发酵工艺

目的对从红豆杉树皮中分离、选育到的1株高产紫杉醇菌种发酵生产新型单体化合物维泰醇(alternol)的发酵工艺进行研究。方法用摇瓶发酵对培养基成分进行单因素、正交设计实验,筛选出合理的基础培养基配方;用5 L罐发酵确定最佳发酵pH值、通气比等;用50 L罐发酵确定放大工艺。结果确定维泰醇的发酵工艺为碳和氮的质量比为40∶80、pH值在6.2~7.2之间、发酵液体积与单位时间内通入空气的体积比(通气比)为1.0∶1.2、溶解氧质量分数(DO)值不得低于起始溶解氧质量分数的10%、比生长速率为10%。50 L罐发酵产量可达420 mg.L-1。结论控制比生长速率10%是工艺放大过程中的关键控制参数。     

抗人stathmin单克隆抗体及其联合紫杉醇对人乳腺癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇分别单用或联用对乳腺癌细胞系MCF-7的生长抑制及促凋亡作用。方法：以不同浓度的抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇分别组成单药组和联合用药组,另设不加药的空白对照组,分别作用于MCF-7细胞24、48、72、96h,观察细胞数量和形态的变化。MTT法检测单克隆抗体、紫杉醇单用组、联用组以及对照组对MCF-7细胞的增殖抑制作用,用流式细胞仪通过AnnexinV/PI双染法检测各组细胞凋亡率的改变。结果：不同浓度的各实验组作用后细胞数量明显减少、形态不规则,部分细胞核固缩和胞质减少,而对照组细胞生长状态良好。抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能抑制MCF-7细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,联用组细胞抑制率较单药组明显增高,差异具有统计学意义（P〈0.05）,两药联用有交互效应（P〈0.05）。抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能诱导MCF-7细胞凋亡,联合组更为明显（P〈0.05）。结论：抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能抑制MCF-7细胞增殖,诱导其凋亡;两药联合作用于人乳腺癌MCF-7细胞具有协同作用。     

人肝癌HepG-2细胞对人淋巴管内皮细胞增殖及管状结构形成的影响

目的探讨人肝癌HepG-2细胞对人淋巴内皮细胞(HLEC)增殖、迁移和管状结构形成的影响。方法采用transwell方法建立HepG-2细胞与HLEC共培养系统;通过绘制细胞生长曲线,观察HepG-2细胞对HLEC增殖的影响;通过细胞迁移实验,观察HepG-2细胞对HLEC迁移的影响;通过基质胶实验,观察HepG-2细胞对HLEC管状结构形成的影响。结果 HepG-2细胞能够显著促进HLEC增殖(P<0.05),迁移(P<0.05)及管状结构形成(P<0.05),呈剂量依赖性。结论 HepG-2细胞促进HLEC增殖、迁移及管状结构形成可能是肿瘤淋巴道转移的机制之一。     

Cell growth inhibition,G<Subscript>2</Subscript>M cell cycle arrest,and apoptosis induced by the novel compound Alternol in human gastric carcinoma cell line MGC803

Summary Alternol is a novel compound purified from fermentation products of a microorganism in the bark of the yew tree. Because it has a similar origin as the anticancer agent paclitaxel, we hypothesized that Alternol may also have an anti-tumor effect. In this report, we chose human gastric carcinoma cell line MGC803 as the model to investigate the effects of Alternol. We evaluated cell viability using the CCK8 kit. The cell cycle distribution was analyzed by flow cytometry. AnnexinV combined with PI was performed to evaluate the apoptosis rate. The mitochondria membrane potential (MMP) was measured by a fluorescence-activated cell sorter using Rhodamin123 staining. We observed the morphological changes by immunofluorescence and Hochest33342 staining. RT-PCR and Western blot analysis were used to evaluate the changes of G₂M-related regulators. Our data show that Alternol inhibited the growth of MGC803 and induced G₂M arrest. Coincident with G₂M arrest, phosphorylation of CDC2 on Tyr-15 was significantly elevated, which could be explained by the increase of Wee1 and decrease of CDC25C. The decreased expression of PLK1 may cause the elevation of Wee1 and CyclinB1 protein levels. Moreover, the apoptosis seemed to be secondary to G₂M arrest because the elevated Caspase3, decreased MMP, and typical apoptotic morphology changes appeared after G₂M arrest. These findings suggested that Alternol could inhibit the growth of MGC803 by inducing G₂M arrest and apoptosis. We expected Alternol may be used as a lead compound one day and our experiments might provide some clues for further research.     

Antimetastatic effect of prodigiosin through inhibition of tumor invasion

Prodigiosin, a bacterial metabolite, was reported to have immunosuppressive and anticancer activities. In this study, we investigated novel functions of prodigiosin about anti-metastasis and anti-invasion. Prodigiosin dose-dependently inhibited 95-D cells' migration and invasion according to wound healing assay and the Transwell assay. The inhibitive effect could reach about 50% when cells were treated with 5 microM prodigiosin for 12 h. In animal experiment, intraperitoneal administration of 5 mg kg(-1) prodigiosin decreased the number of metastatic nodules by 53% and elevated the survival rate of mice about one-fold comparing with control group. Results of cell aggregation and adhesion assay showed that prodigiosin could promote cell aggregation and simultaneously inhibit cell from adhering to extracellular matrix (ECM). In addition, prodigiosin suppressed RhoA gene expression, hence, decreased protein level of RhoA in 95-D cells, according to RT-PCR assay and Western blot assay. Gel zymogram assay revealed that prodigiosin could suppress the activity of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2). These results demonstrate that prodigiosin effectively inhibit tumor metastasis in vitro and in vivo. The action mechanisms of prodigiosin are associated with the promotion of cell aggregation and the inhibition of various steps in cell invasive process, which include the inhibition of cell adhesion and mobility in a RhoA-dependent way and the suppression of MMP-2 ability.     

紫杉醇联合miR-200b对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响

【摘要】目的 体外观察紫杉醇联合应用miR-200b模拟物（miR-200b mimics）对抑制胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法 分别单独应用miR-200b转染细胞（200b组）及50 nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞（紫杉醇组）,并联合应用上述两者（联合组）,同时设转染无义序列组和对照组。通过流式细胞技术检测细胞的凋亡水平和周期分布情况,克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观测细胞的侵袭迁移能力,Western-blot检测E2F3蛋白的表达水平。结果 与单药组相比,联合组早期凋亡率显著升高;克隆形成率显著降低,穿过Transwell小室的细胞数目显著减少;划痕48 h后的细胞迁移能力明显降低;E2F3蛋白在200b组及联合组中表达水平降低（均P< 0.001）。联合组阻滞于G2/M期细胞的比例高于200b组、无义序列组及对照组,但和紫杉醇组比较差异无统计学意义。结论 miR-200b可能通过降低E2F3表达增强紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用。