冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和功能变化

目的:观察冠心病患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)数量和功能的改变.方法:选择冠心病患者和非冠心病患者各20例,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白(fibronectin)包被培养板,培养7d后贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC.采用MTT比色法、改良的Boyden 小室和粘附能力测定实验,观察EPC的增殖能力和迁移能力及粘附能力.结果:冠心病患者外周血EPC数量明显减少(31.8±7.7 vs 59.5±10.6 EPCs/×200视野,P<0.05),且冠心病患者外周血EPC的粘附能力和迁移能力及增殖能力也明显受损.结论:冠心病患者外周血内皮祖细胞数量减少、功能减退.     

Klotho水平与小鼠月龄相关并抑制其骨髓源性内皮祖细胞衰老

目的 观察不同月龄小鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs) 数量和部分生物学功能以及外周血抗衰老蛋白klotho(Kl)表达水平,探讨Kl对体外培养的老龄小鼠EPCs数量和功能的影响.方法 采用Western-blot法测定不同月龄小鼠外周血Kl水平;以密度梯度离心法获取老龄小鼠单个核细胞与不同浓度的Kl孵育,分别采用acLDL-DiI 和 FITC-lectin 荧光双阳性细胞计数、MTT 分析和改良的 Boyden 小室法来检测其数量、增殖、迁移能力的变化.结果不同月龄小鼠EPCs数量和功能以及外周血Kl水平均与月龄呈负相关;不同月龄小鼠Kl表达水平与外周血EPCs数量及其增殖和迁移等生物学功能具有相关性;体外培养中Kl 可呈浓度依赖性上调EPCs的数量及其迁移能力、增殖能力.结论月龄增加可导致小鼠内皮祖细胞数量和功能下降,并下调肾脏和外周血Kl水平;Kl可增加体外培养的小鼠内皮祖细胞的数量,改善其功能.     

sEHi对冠心病患者内皮祖细胞功能的影响

目的：观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor, sEHi)tAUCB对冠心病(CHD)患者外周血来源的内皮祖细胞 (endothelial progenitor cells, EPCs)迁移、血管生成能力和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）表达的影响。方法：采用密度梯度离心法从CHD患者外周血获取单个核细胞培养7 d后,采用免疫荧光和流式细胞仪进行EPCs的鉴定;随后用不同浓度 (0, 10-6, 10-5, 10-4 mol/L) tAUCB干预24 h,分别用Transwell小室和Matrigel-Matrix管腔形成的体外模型检测其迁移、血管生成能力的变化,提取蛋白用Western印迹检测EPCs VEGF的表达。培养年龄性别匹配的健康对照者的EPCs作为对照组。 结果：与健康对照组相比,CHD患者EPCs的迁移及血管生成能力均显著下降 (P＜0.05);与处理前（0 mol/L tAUCB）相比,tAUCB呈浓度依赖性地显著增加CHD患者EPCs迁移、血管生成能力并促进CHD患者EPCs 表达VEGF。 10-6 mol/L tAUCB即明显增加CHD患者EPCs的上述功能并促进其VEGF的表达(P＜0.05)。结论：sEHi具有正向调节CHD患者EPCs功能的作用,其有望成为一类治疗CHD的新型药物。     

COPD患者外周血中EPCs增殖、迁移、黏附及血管形成功能研究

目的：观察慢性阻塞性肺病（COPD）患者外周血中内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、黏附及小管形成等功能。方法：体外培养分离COPD患者及对照组外周血中EPCs,采用MTT测定细胞不同时间段的OD值,观察EPCs增殖情况。应用Transwell测定细胞对基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的迁移能力。通过对细胞HUVEC的黏附及late-EPCs小管形成实验判断COPD患者外周血中EPCs对血管内皮的修复能力,并用NOS/SCID下肢股动脉内皮损伤模型观察患者EPCs修复功能。结果：COPD患者的EPCs和对照组单个集落细胞数量分别是22.0±7.0、62.0±12.9（100倍,10个随机视野）,两者存在明显差异（P〈0.001）。细胞迁移实验中发现,COPD患者组early-EPCs对SDF-1迁移细胞数量明显少于对照组,两组迁移的细胞数量分别是0.425×104、0.775×104（P=0.039）,通过流式分析发现COPD患者组early-EPCs表达C-X-C家族趋化因子受体4（CXCR4）数量较对照组少,两者分别是（55.1±9.9）%、（91.5±6.7）%。Late-EPCs对HUVECs形成小管黏附实验中,两者有明显差异（P〈0.001）,分别是26.4±8.1、35.2±7.3/×10（10随机视野）。小管成形实验中,COPD患者的late-EPCs不能形成完整的小管;动物在体实验中发现,COPD患者组late-EPCs在受损血管处黏附较对照组少。结论：COPD患者外周血中EPCs增殖、迁移、黏附等功能降低,血管形成功能异常。     

nox5表达异常对缺血性心肌病患者循环EPCs功能的影响

目的探查缺血性心肌病患者循环内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能是否异常,了解活性氧(reac-tive oxygen species,ROS)和ROS生成的相关基因nox5表达对EPCs功能的影响。方法入选缺血性心肌病患者及健康对照组各7例,测定外周血EPCs数量、增殖、迁移、成血管能力的改变,检测nox5蛋白及mRNA的表达,进一步沉默nox5表达,检测对EPCs功能及ROS产量的影响。结果与健康对照组比较,缺血性心肌病患者循环EPCs数目、增殖、迁移能力等未见异常;但体外培养过程中内皮系表面标志KDR的表达减少,体外成血管能力下降,伴随nox5蛋白及mRNA表达增加、活性氧生成增加;沉默nox5表达可降低细胞内ROS产量,改善EPCs成血管能力。结论本研究提示,缺血性心肌病患者循环EPCs体外成血管能力异常,细胞内ROS生成增加,ROS生成的相关基因nox5蛋白及mRNA表达上调;沉默nox5表达可降低细胞内ROS产量并改善EPCs功能。     

冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞功能的改变

目的:观察冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的改变。方法:选择30例冠状动脉造影证实为慢血流的患者为CSF组,冠脉造影血流正常的患者30例为NCF组。以校正TIMI帧数>27,诊断为冠状动脉慢血流。采取外周血分离单个核细胞体外诱导培养1周,在显微镜下计数,并观察EPCs增殖能力、迁移能力、黏附能力。结果:CSF组外周血EPCs数量及增殖、迁移、黏附能力均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CSF患者外周血EPCs功能降低可能参与CSF现象发生的病理生理过程中。     

内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力与端粒酶活性的关系

目的 观察体外培养外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移和黏附能力与EPCs端粒酶活性之间的关系.方法 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞(MNCs),接种至明胶包被的培养板上,培养7 d后进行细胞免疫组化鉴定EPCs,采用MTT比色法、Transwell小室和黏附能力测定实验,观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力.TRAP-PCR银染法检测EPCs端粒酶活性.结果 从人外周血能成功分离EPCs细胞.从冠心病患者分离的EPCs增殖、迁移、黏附能力较非冠心病患者下降.冠心病患者EPCs端粒酶活性较非冠心病患者低.结论 冠心病患者EPCs功能显著减弱.可能与EPCs端粒酶活性降低有关.     

循环中内皮祖细胞与原发性高血压的关系

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)数量和功能与原发性高血压的关系。方法对34例初诊原发性高血压患者以及30例健康人采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养7天后,收集贴壁细胞,多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数。采用MTT比色法、改良的Boyden小室、粘附能力测定实验分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力、粘附能力。结果原发性高血压患者循环中EPCs数量比治疗前明显减少(P<0.01),降压达标后原发性高血压患者EPCs数量增加,但与对照组相比,达标后原发性高血压患者EPCs数量仍然少(P<0.05)。原发性高血压患者EPCs的增殖、迁移、贴壁能力受损(P均<0.01);降压达标后的原发性高血压患者EPCs的增殖、迁移、贴壁能力受损没有完全恢复(P均<0.01)。结论原发性高血压患者循环EPCs数量减少,功能受损;血压增高是循环EPCs数量和功能改变的原因之一,循环EPCs数量和功能的改变可能还参与原发性高血压的发生和发展。     

冠通方对体外培养内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响

[目的]观察冠通方含药血清对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响。[方法]将24只雄性Wistar大鼠随机分为冠通方组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞,加入各实验血清组培养液培养EPCs,经激光共聚焦显微镜、流式细胞仪鉴定为EPCs,分别在不同作用时间（12h,24h,48h,72h）后,倒置相差显微镜下观察并比较各组EPCs的数量、增殖能力、迁移能力和粘附能力。[结果]与对照组相比,冠通方组可促进外周血EPCs扩增,并显著改善外周血EPCs的粘附、迁移和增殖能力。[结论]冠通方可增加EPC的数量并改善其功能,这可能是冠通方防治冠心病患者经皮冠状动脉腔内成形术（PTCA）加支架植入术后再狭窄的作用机制之一。     

外源性gFGF-2对大鼠骨髓内皮祖细胞体外生物学活性的影响研究

目的 观察外源性糖化碱性成纤维细胞生长因子-2(glycated fibroblast growth factor-2,gFGF-2)对大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量及体外生物学活性的影响.方法 将10 μg/ml FGF-2同250 mmol/L浓度的D-果糖于37℃共同培养48 h制备gFGF-2,用蛋白指纹图谱分析仪检测其糖化情况.密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞,培养4 d后,分组分别用FGF-2(150μ/ml)、gFGF-2(150μg/ml)继续干预培养3 d.用免疫组织化学和免疫荧光染色作CD34、CD133、VEGFR-2、ac-LDL和UEA-1检测来鉴定EPC.胰酶消化培养7 d的贴壁细胞,将细胞分别同FGF-2和gFGF-2于37℃下培养72 h,用血管生成试剂盒检测其能力.收集培养7 d的细胞,贴壁细胞作EPCs附能力测定;用改良的Boyden小室作EPCs迁移能力测定;MTT法测定EPCs增殖能力;用放射性免疫法测定细胞的培养液GM-CSF,EPO和IL-8的含量.结果 经蛋白指纹图谱分析鉴定FGF-2成功糖化成gFGF-2.EPCs体外功能测定表明gFGF-2组骨髓EPCs比FGF-2组明显的黏附能力降低(P<0.05),迁移能力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.05),成血管能力降低(P<0.01);EPC分泌的EPO(P<0.05)、GM-CSF(P<0.01)和IL-8(P<0.01)比对照组都减少(P<0.01).结论 EPC在gFGF-2的作用下数量减少且体外生物学活性降低,并且血管新生能力也减弱,推断gFGF-2可能是糖尿病患者体内血管新生功能降低的原因之一.     

Reduced number and activity of circulating endothelial progenitor cells from patients with hyperhomocysteinemia

BACKGROUND: Hyperhomocysteinemia (HHcy) contributes to atherosclerosis and coronary artery diseases by inducing endothelial cell injury and dysfunction. Recent studies provided increasing evidence that endothelial progenitor cells (EPCs) participated in ongoing endothelial repair. The changes of EPCs in patients with HHcy have not yet been elucidated. Therefore, we investigated the number and functional activity of EPCs in patients with HHcy. METHODS: Human EPCs were isolated and cultured from patients with HHcy (n = 30) and matched volunteers (n = 30). Circulating EPCs were enumerated as AC133+ KDR+ cells via fluorescence-activated cell sorter analysis. Additionally, EPC were expanded from human blood in vitro and identified by DiI-acLDL uptake and lectin staining by direct fluorescent staining under a laser scanning confocal microscope. EPC migration activities were determined by modified Boyden chamber assay. EPC adhesion assay was performed by replating cells on fibronectin-coated dishes and then counting adherent cells. RESULTS: A significant decrease was observed in circulating EPC (AC133+ KDR+ cells) numbers in patients with HHcy compared with control subjects (63.9 +/- 11.7 cells/mL vs. 91.5 +/- 14.2 cells/mL blood, p <0.01). In addition, the numbers of EPCs also decreased in patients with HHcy after ex vivo cultivation (36.1 +/- 6.5 vs. 51.5 +/- 8.3 EPCs/x200 field, p <0.01). Both circulating EPCs and differentiated EPCs were inversely correlated with total homocysteine levels. In addition, EPCs from patients with HHcy were significantly impaired in their migratory capacity and ability to adhere to fibronectin compared with controls. CONCLUSIONS: The present study demonstrated that EPC numbers and functional capacity were impaired in patients with HHcy.     

冠心病患者循环内皮祖细胞与基质细胞衍生因子-1α的变化

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)与血浆基质细胞衍生因子-1α(SPF-1α)在冠心病中的作用及其临床应用价值。方法将44例患者分为稳定型心绞痛(SAP)组(n=12)、不稳定型心绞痛(UAP)组(n=14)、急性心肌梗死(AMI)组(n=11)及对照组(n=7)。采集患者外周血进行EPCs的分离培养,激光聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC,通过集落形成试验、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验计数EPCs的数量,测定EPCs的迁移和黏附能力。用酶联免疫吸附法检测各组血浆SDF-1α水平,比较其与循环内皮祖细胞的数量、迁移和黏附能力有无相关性。结果AMI组EPCs集落形成数是对照组的2.7倍,其迁移能力较其他3组升高(P<0.01),但其黏附能力与UAP组相比差异无统计学意义(P>0.05);UAP组患者EPCs数量及迁移能力较SAP组和对照组升高(P<0.01);SAP组患者EPCs数量及迁移、黏附能力均比对照组减低(P<0.05)。与对照组相比,UAP和AMI组患者血浆SDF-1α水平明显降低(P<0.01)。SDF-1α浓度与循环EPCs数量及迁移能力呈负相关,与循环EPCs黏附能力无相关性。结论AMI(发病7d内)和UAP可引起循环EPCs数量增多,迁移和黏附能力增强,这种变化可能与冠状动脉粥样斑块不稳定、消耗循环SDF-1α有关。     

Endothelial progenitor cell down-regulation in a mouse model of Kawasaki disease

Background  Cardiovascular complications of Kawasaki disease (KD) are a common cause of heart disease in pediatric populations. Previous studies have suggested a role for endothelial progenitor cells (EPCs) in coronary artery lesions associated with KD. However, long-term observations of EPCs during the natural progression of this disorder are lacking. Using an experimental model of KD, we aimed to determine whether the coronary artery lesions are associated with down-regulation of EPCs.

Methods  To induce KD, C57BL/6 mice were administered an intraperitoneal injection of Lactobacillus casei cell wall extract (LCWE; phosphate buffered saline used as control vehicle). Study groups included: group A (14 days following LCWE injection), group B (56 days following LCWE injection) and group C (controls). Numbers of circulating EPCs (positively staining for both CD34 and Flk-1 while staining negative for CD45) were evaluated using flow cytometry. Bone marrow mononuclear cells were cultured in vitro to expand EPCs for functional analysis. In vitro EPC proliferation, adhesion and migration were assessed.

Results  The model was shown to exhibit similar coronary artery lesions to KD patients with coronary aneurysms. Numbers of circulating EPCs decreased significantly in the KD models (groups A and B) compared to controls ((0.017±0.008)% vs. (0.028±0.007)%, P <0.05 and (0.016±0.007)% vs. (0.028±0.007)%, P <0.05). Proliferative, adhesive and migratory properties of EPCs were markedly impaired in groups A and B.

Conclusion  Coronary artery lesions in KD occur as a consequence of impaired vascular injury repair, resulting from excess consumption of EPCs together with a functional impairment of bone marrow EPCs and their precursors.

     

胎儿生长受限孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞数量与功能的变化

目的:观察胎儿生长受限(FGR)孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞(EPCs)数量与功能的变化.方法:选择FGR孕妇及新生儿15例和对照组健康孕妇及新生儿15例,密度梯度离心法收集外周血及脐血中单个核细胞(MNCs),接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,诱导分化培养9 d后收集贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜下...     

缺血性脑卒中不同TOAST分型的临床特征、影响因素及预后分析

目的 分析不同TOAST分型缺血性脑卒中（ischemic stroke,IS）患者的临床特征、影响因素及预后。方法 选取浙江省医疗健康集团衢州医院2019年7月至2021年6月收治的缺血性脑梗死患者500例为研究对象,按照分类标准分为心源性栓塞型（cardioembolism,CE）、大动脉粥样硬化型（large artery atherosclerosis,LAA）、小动脉闭塞型（small-artery occlusion lacunar,SAO）、其他原因引发的缺血性卒中（strike of other determined etiology,SOE）,原因不明的缺血性卒中型（stroke of other undetermined etiology,SUE）;分析年龄、性别、体质量指数（body mass index,BMI）、病灶位置、病灶范围、基础合并症、不良嗜好、血清炎症因子、脂质代谢相关指标、内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）、胱抑素-C、同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）在不同TOAST分型IS患者中的差异;随访不同TOAST分型患者在出院6个月至1年的美国国立卫生研究院卒中量表（National Institute of Health stroke scale,NIHSS）评分及Barthel指数,分析不同TOAST分型患者的预后。结果 性别、年龄、病灶位置、病灶范围、是否合并心脏病、是否合并不良嗜好、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）、人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2（lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2）、EPCs比例、Hcy水平在不同TOAST分型IS患者中存在差异（P<0.05）;EPCs、ox-LDL、Hcy、年龄、合并心脏病是影响IS患者TOAST分型的因素（P<0.05）;SUE型IS患者的预后较其他类型IS患者差（P<0.05）。结论 不同TOAST分型IS患者的临床特征、影响因素及预后均不同,应在治疗、预防上针对不同TOAST分型IS患者予以相应方案处理。     

冠心病患者循环内皮祖细胞数量比较研究

目的:观察并比较正常人与冠心病患者外周血中内皮祖细胞(EPCs)数量的差异。方法:依据病史、心电图、血清心肌坏死标志物及冠脉造影结果分成4组,其中冠心病患者3组,共48例,稳定型心绞痛组(SAP组)患者16例、不稳定型心绞痛组(UA组)患者19例、急性ST段抬高型心肌梗死组(STEAMI组)患者13例(发病24h内),同时,以性别年龄相匹配的9例冠状动脉造影正常者为对照组。利用流式细胞术双色分析法检测4组患者以及3组不同类型冠心病患者EPCs占外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMNC)的百分比,其中EPCs以CD133+/VEGFR-2+双标记阳性确定。结果:SAP组[(0.043±0.043)%]、UA组[(0.014±0.018)%]、STEAMI组[(0.040±0.036)%]外周血中EPCs占外周血单个核细胞的百分比均明显低于正常对照组[(0.111±0.078)%](P均<0.01)。其中,UA组不仅明显低于SAP组(P<0.05),而且较STEAMI组有下降趋势(P=0.11),SAP组与STEAMI组间EPCs占PBMNC百分比的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:冠心病患者外周血中EPCs数量较正常人减少,其数量在不同临床类型冠心病患者之间也存在差异,提示外周血中EPCs数量的变化与冠心病的病变程度有关。     

胰岛素对人脐血内皮祖细胞生物活性的影响

目的探讨胰岛素对人脐血内皮祖细胞增殖、迁移与黏附功能的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,加入EGM-2培养液,接种于包被人纤连蛋白的培养皿中贴壁培养,收集48 h后的悬浮细胞重新贴壁培养至第7天,利用免疫荧光和流式细胞术鉴定。细胞随机分为对照组和不同浓度(0.1、1和10nmol/L)胰岛素处理组干预24 h,分别采用MTT比色法、Transwell法和细胞黏附实验来观察胰岛素对内皮祖细胞增殖、迁移与黏附功能的影响。结果与对照组相比,0.1、1、10nmol/L的胰岛素干预内皮祖细胞24 h能明显增强其增殖、迁移和黏附能力(P<0.05或P<0.01);其中胰岛素浓度为1nmol/L时增殖功能达到峰值,胰岛素浓度为0.1nmol/L时迁移和黏附功能达到峰值。结论生理浓度与较低浓度胰岛素能增强内皮祖细胞的增殖、迁移与黏附能力。     

大剂量阿托伐他汀对行PCI急性心肌梗死病人血EPCs动员和VEGF、TLR4表达水平的影响

目的:探讨大剂量阿托伐他汀对行经皮冠状动脉介入术（PCI）治疗急性心肌梗死（AMI）病人血内皮祖细胞（EPCs）动员和血管内皮生长因子（VEGF）、Toll样受体4（TLR4）表达水平的影响。方法:选择行急诊PCI的AMI病人100例随机分为大剂量组和常规剂量组,每组50例。另选取非器质性心脏病的病人50例作为对照组。检测并比较各组病人的EPCs动员、VEGF含量和TLR4表达水平。结果:治疗后,大剂量组EPCs细胞数量和VEGF水平高于常规剂量组（P<0.05~P<0.01）,TLR4水平明显低于常规剂量组（P<0.01）。与治疗前相比,大剂量组EPCs细胞数量和VEGF水平明显升高（P<0.01）,TLR4水平明显降低（P<0.01）,常规剂量组TLR4水平明显降低（P<0.01）,而EPCs细胞数量和VEGF水平无显著变化（P>0.05）。治疗后,常规剂量组与大剂量组病人恶性室性心律失常发生率、丙氨酸氨基转移酶升高率差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:大剂量的阿托伐他汀可增加行PCI术病人外周血VEGF表达,动员骨髓EPCs参与修复损伤的血管内膜,降低病人外周血单核细胞TLR4表达,具有抑制炎症、稳定斑块的作用。