中药黄芪对糖尿病大鼠CYP450 2E1活性的影响

目的 用探针药物研究黄芪对大鼠CYP450活性的影响.方法 采用四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠,正常大鼠为对照组,给予黄芪水提物诱导,通过HPLC检测探针药物的代谢率来评价各组CYP450 2E1活性.结果 给药组动物血液中的氯唑沙宗的含量与模型组和空白组的含量无显著区别(P>0.05).结论 黄芪对大鼠CYP2E1活性无明显影响.     

丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

目的:研究丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b_5含量以及CYP1A2和CYP2E1活性的影响.方法:将大鼠分成溶剂对照组和丹参酚酸A给药组,每组10只,雌雄各半,丹参酚酸A给药组尾静脉注射给予丹参酚酸A 20 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续给药5 d;溶剂对照组给予相同剂量的溶剂,紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b_5含量;探针底物法评价CYP1A2和CYP2E1的活性.结果:丹参酚酸A尾静脉注射连续给药5 d后,大鼠细胞色素P450和细胞色素b_5含量与对照组比较均无显著性差异;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较也无显著性差异.结论:丹参酚酸A对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用,与经过CYP1A2和CYP2E1代谢的药物发生相互作用的可能性较小.     

丹皮酚对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及活性的影响

目的:考察丹皮酚对大鼠肝微粒体的蛋白含量、CYP450酶总量和主要CYP450酶亚型(CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C19)活性的影响。方法:大鼠灌胃给予丹皮酚(100 mg/(kg·d)-1,连续7 d,测定其肝微粒体蛋白含量、CYP450蛋白含量以及CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4及CYP2C19活性。结果与空白对照组相比,丹皮酚给药组大鼠肝微粒体蛋白含量及肝微粒体CYP450含量无明显差异(P>0.05)。丹皮酚给药后,给药组大鼠的平均CYP2D6活性是对照组的2倍;而二两组之间CYP1A2、CYP3A4和CYP2C19的活性相当。结论丹皮酚对大鼠CYP2D6活性有一定诱导作用,对CYP1A2、CYP3A4和CYP2C19的活性没有影响。     

藏药余甘子对大鼠CYP2C9活性的影响

目的:分析藏药余甘子对CYP2C9酶活性的影响。方法:对照组灌胃给予生理盐水,实验组灌胃给予余甘子。采用探针药物法评价CYP2C9的活性,探针药物以及代谢产物的浓度用HPLC测定。结果:对照组和实验组大鼠CYP2C9活性分别为0.083±0.042和0.100±0.049,两组数据差异无统计学意义。结论:余甘子对大鼠CYP2C9的活性无影响。     

蹄叶橐吾乙醇提取物对肝细胞色素P450的影响

目的 研究蹄叶橐吾乙醇提取物对大鼠和小鼠肝细胞色素P450(CYP450)的影响.方法 蹄叶橐吾乙醇提取物口服给药后,观察其对小鼠戊巴比妥钠催眠作用的影响、对大鼠肝微粒体CYP450含量、肝脏指数的影响,采用HPLC测定探针药的代谢率观察其对大鼠肝CYP450的7种亚型酶活性的影响.结果 蹄叶橐吾乙醇提取物对戊巴比妥钠诱导小鼠的睡眠时间无影响,大鼠肝CYP450含量及肝脏指数无显著变化,对大鼠肝CYP450的7种亚型探针药的代谢率亦无影响.结论 蹄叶橐吾乙醇提取物对肝药酶无诱导作用.     

贞芪扶正胶囊对大鼠肝细胞色素P450酶CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的影响

目的:研究贞芪扶正胶囊对大鼠肝细胞色素P450酶CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的影响。方法:用Cocktail探针药物法,将Wistar大鼠按体重随机分组,灌胃给予贞芪扶正胶囊溶液,以生理盐水为空白对照,诱导10天,股动脉插管,注射给予Cocktail探针药物咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗,通过HPLC检测各探针药物的代谢率来评价各组的CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1亚型酶的活性;药动学计算采用DAS2.0软件完成。结果:给予贞芪扶正胶囊组大鼠CYP2E1的酶活性明显低于对照组,探针药物氯唑沙宗的t1/2显著延长;CYP1A2、CYP3A4的的水平没有显著变化。结论:贞芪扶正胶囊对大鼠CYP2E1有抑制作用,对大鼠CYP1A2、CYP3A4的影响不显著。     

疏血通注射液对大鼠细胞色素P450酶6种亚型活性的影响

目的用Cocktail探针药物法,研究疏血通注射液对大鼠细胞色素P450酶(CYP450)6种亚型活性的影响。方法将Wistar雄性大鼠随机分组,实验组给予疏血通注射液,空白组给予生理盐水,诱导7 d,分别以咖啡因、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔、氯唑沙宗、氨苯砜作为CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A1/2的探针药物。HPLC法检测探针药物的血药浓度,DAS软件估算药动学参数。结果与空白组相比,咖啡因和氨苯砜的t1/2、AUC0-t、AUC0-∞均显著增大,CL/F显著降低(P<0.05);氯唑沙宗的AUC0-t、AUC0-∞显著降低,CL/F显著增大(P<0.05);而甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔的药代动力学参数无显著性差异。结论疏血通注射液对大鼠CYP1A2、CYP3A1/2亚型的活性有抑制作用,能诱导CYP2E1亚型的活性,而对CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6亚型的活性无显著影响。     

Cocktail探针药物法评价半夏泻心汤及不同配伍组对CYP450酶活性的影响

目的:采用Cocktail探针药物法研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝细胞色素P450酶活性的影响.方法:大鼠连续7d灌胃半夏泻心汤全方组,甘补组,苦降组和辛组的煎煮液(15 mL·kg-1)后尾静脉注射Cocktail探针药物咖啡因(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A1/2).建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中4种探针药物的浓度,DAS 2.0软件计算其药动学参数.结果:与空白组相比,全方组中甲苯磺丁脲的AUC0-24h值明显增大,CL显著减小,说明全方组对大鼠体内CYP2C6起抑制作用,而氯唑沙宗的AUC明显减少,CL增大,说明对CYP2E1起诱导作用;而对CYP1A2,3A1/2无显著性差异.同理,辛开组仅对CYP2C6起抑制作用,对其他的亚型酶无显著性差异;苦降组对CYP1A2,CYP2C6具有显著抑制作用,对CYP2E1有诱导作用,而对CYP3A1/2无显著性差异;甘补组对CYP1A2,CYP2E1有诱导作用,抑制CYP2C6,而对CYP3A1/2亦无显著性差异.结论:半夏泻心汤及不同配伍组对肝脏CYP450酶的活性影响不同,为阐明半夏泻心汤组方配伍的规律用以推测其在联合用药中可能发生的药物相互作用,指导临床合理用药.     

天王补心丸中生地黄、玄参、天冬和麦冬水提液对大鼠肝CYP450酶含量及其亚型CYP3A, CYP2E1和CYP1A2活性的影响

目的:研究天王补心丸中滋阴类药味生地黄、玄参、天冬和麦冬水提物对大鼠肝肝药酶(CYP450)含量及对亚型CYP3A,CYP2E1,CYP1A2活性的影响,探讨CYP450在天王补心丸代谢中的作用.方法:大鼠灌胃给予生地黄、玄参、天冬和麦冬水提物7d后取肝脏称重并制备肝微粒体,紫外分光光度法测定肝微粒体细胞色素b5(Cytb5),P450的含量及CYP3A的活性,高效液相法测定CYP2E1和CYP1A2的活性.结果:与空白对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;生地黄组CYP450含量极显著减少(P＜0.01),CYP3A活性极显著增加(P＜0.01),CYP1A2活性显著增加(P＜0.05);玄参组CYP450含量减少(P＜0.05),CYP3A和CYP1A2活性均极显著增加(P＜0.01);天冬组Cytb5含量增加(P＜0.05),CYP2E1活性增加(P＜0.05),CYP1A2活性极显著增加(P＜0.01);麦冬组cytb5,CYP450含量无统计学差异,CYP3A活性增加(P＜0.05),CYP2E1活性增加(P＜0.05),CYP1A2活性极显著增加(P＜0.01).结论:天王补心丸中生地黄、玄参降低大鼠肝脏CYP450酶含量并均诱导CYP3A和CYP1A2活性,天冬诱导CYP2E1和CYP1A2活性,麦冬诱导CYP3A,CYP2E1和CYP1A2活性.由于抑制CYP450活性,减少对其他药代谢,滋阴药组在天王补心丸全方配伍中可增强其他各功能组比如补血养血、宁心安神类药味的作用,为探讨天王补心丸的配伍机制提供了理论基础.     

Cocktail探针药物同时评价连翘对肝细胞色素P450的影响

 目的用Cocktail探针药物法，研究连翘对大鼠肝CYP450的影响。方法将SD♂大鼠随机分组，给予连翘的水提物，以生理盐水组为空白对照，通过HPLC检测Cocktail探针药物的代谢率来评价各组CYP450。结果给予连翘组的大鼠CYP1A2的水平显著低于对照组，CYP3A4的水平显著高于对照组，CYP2E1的水平没有显著变化。结论 连翘对大鼠CYP1A2有抑制作用，对大鼠CYP3A4有诱导作用，但对大鼠CYP2E1的影响不显著。     

归脾汤对雷公藤醇提物致肝损伤大鼠肝微粒体CYP3A4酶活性的影响

目的:建立一个快速、准确的测定大鼠肝微粒体中CYP3A4酶活性的HPLC,研究雷公藤醇提物对肝损伤大鼠肝微粒体CYP3A4酶活性的影响,进而探讨归脾汤对其保护机制。方法:50只大鼠随机分为正常组、模型组、归脾汤组、P450诱导组、P450抑制组。正常组、模型组灌服生理盐水,归脾汤组灌服归脾汤(9g·kg-1),P450诱导组、P450抑制组分别腹腔注射地塞米松(100mg·kg-1)和酮康唑(80mg·kg-1),连续ig 4d后,再以雷公藤醇提物(3.25mg·kg-1)ig 3d造模。选用HPLC以咪达唑仑为探针药物,检测各组大鼠肝微粒体中CYP3A4酶活性。结果:在所建立的HPLC条件下,咪达唑仑的出峰时间在8.960min,能够完全分离,且无其他生物基质峰干扰;线性范围是0.25~20μmol·L-1(r=0.9999),符合检测要求,方法可靠。结果显示,与正常组比较,模型组大鼠CYP3A4活性明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,归脾汤组、CYP450诱导组大鼠CYP3A4活性亦明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);归脾汤组与CYP450诱导组之间比较,大鼠CYP3A4活性差异不明显,无统计学意义。结论:本方法能够对CYP3A4活性进行准确评价,雷公藤对大鼠肝微粒体CYP3A4酶活性有一定的抑制作用,归脾汤可能通过诱导CYP3A4活性而降低雷公藤的毒性从而发挥对肝脏的保护作用。     

基于CYP450酶的四逆汤复方配伍减毒机制研究

目的探讨CYP450酶的四逆汤复方配伍减毒机制。方法采用"Cocktail"探针药物法测定CYP1A2和CYP3A4酶活性,使用高效液相色谱仪检测血浆中咖啡因和咪达唑仑两种特异性探针药物的浓度。应用CO示差还原法测定大鼠肝微粒体中CYP450酶含量,通过反转录聚合酶链式反应来检测CYP1A2和CYP3A4 mRNA的表达。结果附子对CYP1A2和CYP3A4酶活性及CYP450酶含量无影响;甘草、附子配伍甘草和四逆汤对CYP1A2和CYP3A4酶活性有诱导作用并且显著增加CYP450酶含量;与对照组比较,甘草组、附子配伍甘草组和四逆汤全方组对CYP3A4 mRNA的表达有不同程度诱导作用。甘草组和四逆汤全方组对CYP1A2 mRNA表达有显著诱导作用,附子配伍甘草组对CYP1A2 mRNA表达无显著影响。结论实验研究表明甘草、附子配伍甘草、四逆汤全方能够诱导CYP1A2和CYP3A4酶活性,显著增加CYP450酶含量;附子配伍甘草对两种酶活性的影响可能由甘草对酶基因表达影响引发,使酶活性增强,从而加快附子毒性成分在体内代谢,从肝药代谢酶角度阐明甘草在四逆汤中对附子起主要减毒作用。     

参麦注射液对大鼠细胞色素P450酶亚型活性的影响

目的用Cocktail探针药物法研究参麦注射液对大鼠细胞色素P450酶(CYP450)6种亚型活性的影响。方法将SD大鼠随机分组,实验组ip给予参麦注射液(10 m L/kg),对照组ip给予等量生理盐水,诱导7 d,分别以非那西丁、安非他酮、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2B1、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的探针药物。UPLC-MS/MS法检测大鼠血浆中探针药物的血药浓度,采用DAS3.0软件估算药动学参数。结果与对照组相比,非那西丁、安非他酮和奥美拉唑的AUC0~∞、CL和Cmax显著降低(P0.05),甲苯磺丁脲、美托洛尔和咪达唑仑的AUC0~∞、CL和Cmax无显著性差异。结论参麦注射液对大鼠CYP1A2、CYP2B1和CYP2C19亚型的活性有明显的抑制作用,而对CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4亚型的活性无显著性影响。     

石膏水煎液对肝微粒体细胞色素P450酶系中CYP1A2和CYP2E1的影响

目的:研究石膏水煎液对肝微粒体细胞色素P450酶CYP1A2和CYP2E1活性的影响,指导临床合理用药。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)对肝脏细胞色素P450酶CYP1A2和CYP2E1进行了初步研究。结果:与空白对照组比较,石膏水煎液对大鼠肝脏中的CYP1A2含量有降低的趋势,对CYP2E1的含量没有显著影响。结论:石膏对大鼠肝微粒体CYP1A2活性有抑制作用,临床上当与经过CYP1A2代谢的药物合用时应适当调整药量。     

扶正化瘀方对正常及肝纤维化大鼠体内CYP450酶的影响

使用Cocktail探针药物法,研究扶正化瘀方(FZHY)对正常和肝纤维化大鼠细胞色素P450(CYP450)5种同工酶的影响。正常和二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射诱导的肝纤维化模型大鼠,以FZHY浸膏粉连续灌胃2周后,单剂量尾静脉注射由CYP450 5种同工酶的特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C19)、氢溴酸右美沙芬(CYP2D6)和咪达唑仑(CYP3A4)配置的Cocktail探针溶液后,通过建立的LC-MS/MS法同时检测血浆中5种探针药物的浓度,采用PK solution 2TM对数据进行处理,并计算主要药动学参数。正常大鼠灌胃FZHY后,非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑和氢溴酸右美沙芬的AUC0-t均出现不同程度的增加,CL也均出现降低趋势,提示FZHY能明显抑制正常大鼠CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6的活性,但对CYP3A4的活性影响不明显;肝纤维化大鼠灌胃FZHY后,甲苯磺丁脲的AUC0-t显著增加,Vd显著降低,其他4种探针药物的药动学参数未见显著改变,提示在肝纤维化大鼠体内FZHY仅对CYP2C9有抑制作用,对CYP1A2,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4活性影响不明显。CYP450酶在肝纤维化条件下活性的改变可能是FZHY对正常和肝纤维化大鼠CYP450酶影响不同的原因。     

酸枣仁、远志和桔梗水提液对大鼠肝CYP450酶活性 及mRNA表达的调控作用

目的:研究中药酸枣仁、远志和桔梗水提液对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法:大鼠ig给予酸枣仁、远志和桔梗水提液7 d后取肝脏称重并制备肝微粒体,采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素b5(Cytb5),P450的含量及红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性,高效液相色谱法测定非那西汀O-脱乙基酶(PHD)的活性和对硝基苯酚羟化酶(pNPH),采用RT-PCR技术检测大鼠肝中5种P450同工酶CYP1A1,CYP1A2,CYP2E1,CYP3A1及CYP3A2mRNA的表达。结果:与对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;酸枣仁组显著降低Cytb5含量和ERD活性,增加pNPH活性,远志组显著升高pNPH,极显著降低ERD活性,桔梗组显著降低CYP450含量,并明显升高PHD和pNPH活性;在mRNA水平上,各组的CYP1A1基因均未能检出;酸枣仁组诱导CYP2E1,CYP3A1和CYP3A2基因表达,远志组抑制CYP3A1,诱导CYP3A2的mRNA表达,桔梗组诱导CYP1A2,CYP2E1,CYP3A2的mRNA表达;酸枣仁的CYP2E1、桔梗的CYP1A2和CYP2E1mRNA水平基本与酶活性水平相平行。结论:酸枣仁、远志水提液诱导CYP2E1的活性;桔梗水提液诱导CYP1A2,CYP2E1的活性,酶活性变化可能主要通过影响基因转录来实现。提示若酸枣仁和远志与经CYP2E1和CYP3A代谢的药物同用,桔梗若与经CYP1A2,CYP2E1,CYP3A代谢的药物同服,有可能会影响这些药物的临床疗效,临床用药时应慎重考虑。     

扶正化瘀方对原代大鼠肝细胞中CYP450的影响

目的:采用原代大鼠肝细胞(PRH)研究扶正化瘀方(FZHY)对大鼠细胞色素P450酶(CYP450)的影响。方法:采用两步灌流法分离大鼠原代肝细胞,形成肝板结构后加入FZHY共培养24 h,换成含有4种CYP450同工酶(CYP1A2,CYP2C9,CYP2D6,CYP3A4)对应的特异性探针药物(非那西丁、甲苯磺丁脲、氢溴酸右美沙芬、睾酮)的培养基,培养2 h后吸取上清液,利用UPLC-MS/MS对探针药物的代谢产物进行检测,考察FZHY对探针药物代谢产物生成量的影响,评价FZHY对PRH中CYP450代谢活力的影响。结果:PRH中CYP1A2,CYP2C9,CYP2D6与CYP3A4具有良好的代谢活力。4种探针药物在0~500μmol·L~(-1)内对PRH没有毒性,在0.5~500μg·L~(-1)时,FZHY对PRH没有毒性。FZHY在5μg·L~(-1)时对PRH具有轻微的保护作用,并能使甲苯磺丁脲的代谢活化值——米氏常数(Km)降低20.8%;氢溴酸右美沙芬的Km降低39.2%;非那西丁的Km降低17.4%;并使睾酮的Km显著降低。结论:FZHY能抑制原代大鼠肝细胞中CYP1A2,CYP2C9,CYP2D6和CYP3A4的代谢活性。     

黄芩提取物对细胞色素P450酶的影响

目的:研究黄芩提取物对大鼠细胞色素P450同工酶CYP1A2,CYP3 A4,CYP2E1,CYP2C19活性的影响.方法:建立同时测定大鼠血浆中4种探针药物的高效液相色谱方法,用Cocktail探针药物法,将雄性SD大鼠随机分为2组,给药组灌胃给予黄芩提取物混悬液,对照组灌胃给予相同剂量的生理盐水.给药10 d后尾静脉注射4种探针药物,眼眶取血,通过测定4种探针药物的代谢以评价CYP1 A2,CYP3A4,CYP2E1,CYP2C19的活性,采用Kinetica5.0计算药代动力学参数.结果:4种探针药物的T1/2较对照组均有增加,其中氨苯砜、氯唑沙宗和奥美拉唑的T1/2增加显著;氨苯砜、氯唑沙宗和奥美拉唑的MRT0→∞均有增加,其中氯唑沙宗和奥美拉唑的MRT0→∞增加显著.结论:黄芩提取物对CYP1A2,CYP3 A4,CYP2E1,CYP2C19均有抑制作用,其中对CYP3A4,CYP2E1,CYP2C19抑制作用显著.     

黄芪甲苷对大鼠肝微粒体酶活性影响

目的:研究黄芪甲苷对CYP450酶的影响,为制定合理用药方案提供科学依据。方法:以甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、香豆素、硝苯地平、非那西丁为探针药,HPLC测定探针药与相应代谢产物的浓度,在体外的孵育体系中研究黄芪甲苷对CPY2C9,CPY2E1,CPY2A6,CPY3A4和CPY1A2酶活性的影响。结果:黄芪甲苷对CYP1A2,CYP2A6,CYP2E1酶的活性没有明显的影响,而对CYP2C9和CYP3A4酶的IC50分别为35.40,88.22μmol.L-1。结论:黄芪甲苷对CYP2C9和CYP3A4酶有明显的抑制作用,在与经由CYP2C9,CYP3A4酶代谢的药物合用时,可能会产生药物相互作用。     

何首乌、制何首乌与茯苓配伍对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响

目的:研究何首乌、制何首乌以及分别配伍不同剂量茯苓对大鼠肝脏微粒体细胞色素P450酶(CYP450)的影响。方法:将大鼠分为7组,每日灌胃主药30g·kg-1,连续给药90d,测定大鼠CYP450的含量。结果:给药组与对照组比较,何首乌A组、何首乌B量组对大鼠肝微粒体CYP450有显著性升高作用(P<0.05);何首乌C组对其有升高作用,但不具统计学意义。制何首乌A、B、C各组对大鼠肝微粒体CYP450均无显著性影响。结论:何首乌、何首乌配伍大剂量茯苓能够增加大鼠肝微粒体CYP450含量,制何首乌各给药组对其影响不显著。