芍药甙对PC12细胞缺血性损伤的保护及机制研究

目的 探讨芍药甙（ＰＡＥ）对ＰＣ１２细胞缺血样损伤模型的保护作用及其机制。方法 采用组织培养法,以肾上腺嗜铬瘤克隆化细胞株ＰＣ１２细胞为材料,制备缺糖损伤、缺氧损伤、自由基损伤Ｃａｆ损伤、ＮＯ损伤及ＧＩｕ毒性损伤模型。结果 形态学检查发现ＰＡＥ对６种脑缺血样损伤模型中ＰＣ１２细胞具有明显保护作用,ＭＴＴ染色提示ＰＡＥ可显著提高损伤模型中ＰＣ１２细胞的存活数,降低胞浆释放的ＬＤＨ水平。结论 除缺氧损     

二氮嗪对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

近来研究表明 ,二氮嗪是一种选择性线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂 ,它不仅是血管扩张剂 ,还是耐缺血缺氧损伤的心脏保护药物。本研究的目的旨在从体外培养的PC12细胞水平初步探讨二氮嗪的神经保护作用。1　材料和方法1.1　细胞、药品和试剂大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤株PC12细胞 (南京医科大学胡刚教授惠赠 )。二氮嗪 (军事医学科学院毒物药物研究所合成 ,MTTFluka) ,DMEM培养基 (Gibco) ,新牛血清 (杭州四季青生物工程材料研究所 ) ,乳酸脱氢酶 (LDH)试剂盒 (北京中生生物工程高科技公司 )。1.2　方法1.2 .1　PC12细胞的培养及谷氨酸…     

大豆甙元对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨大豆甙元体外对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法 :用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,大豆甙元以不同浓度加入细胞培养体系 ,作用不同时间后 ,用动力学法测定细胞内碱性磷酸酶 (ALP)的活性。结果 :大豆甙元在 1× 10 3 mol/L范围内 48h和 72h ,1× 10 5mol/L 96h及 1× 10 7mol/L 72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论 :大豆甙元体外能提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。     

大豆异黄酮对Aβ1-42诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨大豆异黄酮提取物对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:从大豆中提取并纯化出总异黄酮,通过PC12细胞株体外培养的方法,给予不同剂量的大豆异黄酮预处理,并用10μmol/L Aβ1-42诱导的细胞损伤,检测经处理后细胞MTT及PC12细胞形态的变化。结果:大豆异黄酮可显著降低Aβ1-42诱导的PC12细胞损伤,显著提高细胞的MTT值(P<0.05),并改善细胞的形态,与雌二醇组比较没有显著差异(P>0.05)。结论:大豆异黄酮对Aβ1-42诱导的PC12细胞具有保护作用。     

大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其受体作用机制研究

目的观察大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖及其雌激素受体（ER）表达的影响。方法体外培养子宫内膜癌HEC-1B细胞,采用MTT法检测不同浓度大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响,同时检测大豆甙元对启动子（ERE）调控的ERα和ERβ的荧光素酶报告基因表达的影响。结果大豆甙元对HEC-1B细胞体外增殖有明显抑制作用,其抑制作用在一定范围内呈剂量及时间依赖性。大豆甙元在低浓度时已可显著诱导报告基因luc的表达,在80×10-6 mol/L时达到最高值;在高浓度时,其诱导作用逐渐下降;大豆甙元通过ERβ介导的报告基因表达水平的升高程度强于ERα。结论大豆甙元可抑制子宫内膜癌细胞的增殖,这种抑制作用可通过调节子宫内膜癌细胞ERα和ERβ的表达、调整ERα/ERβ比例而实现。     

番茄红素对鱼藤酮所致PC12细胞线粒体损伤的影响

目的: 研究番茄红素对鱼藤酮诱导PC12细胞线粒体损伤的保护作用。方法: 采用鱼藤酮(0.5 μmol·L^-1)诱导PC12细胞损伤模型,给予番茄红素(3,10,30 μmol·L^-1)预处理2 h后,加入鱼藤酮,使终浓度达到0.5 μmol·L^-1,培养24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态改变、透射电镜观察细胞线粒体超微结构,罗丹明123染色检测线粒体膜电位,以观察番茄红素的保护作用。结果: CCK-8结果显示与正常对照组比较,模型组细胞存活率下降为70.34%±2.81%(P<0.05),与模型组比较,番茄红素(3,10,30 μmol·L^-1)预处理后其细胞存活率分别提高到83.09%±3.15%,87.24%±2.15%,89.17%±2.26%(P<0.05);倒置相差显微镜观察显示鱼藤酮可导致PC12细胞凋亡,经番茄红素处理后,模型细胞凋亡情况明显改善;透射电镜观察显示鱼藤酮可导致PC12细胞线粒体超微结构发生改变,经番茄红素处理后,模型细胞凋亡情况明显改善;流式细胞仪检测结果显示与正常对照组比较,模型组细胞线粒体膜电位平均荧光强度下降为151.63±12.25(P<0.05),经番茄红素(3,10,30 μmol·L^-1)预处理后线粒体膜电位平均荧光强度分别提高到202.24±26.28,226.21±9.71,238.83±10.29 (P<0.05)。结论: 番茄红素对鱼藤酮诱导的PC12细胞线粒体损伤有保护作用。     

远志皂苷元对PC12细胞tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影响

[目的]观察远志皂苷元对体外培养的PC12细胞tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影响.[方法]应用低糖培养PC12细胞模拟O-GlcNAc糖基化水平的下降,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测细胞存活率;采用Western blot方法检测O-GlcNAc糖基化和tau蛋白磷酸化水平.[结果]远志皂苷元能明显改善PC12细胞存活率,与对照组相比,模型组O-GlcNAc糖基化表达降低,tau蛋白磷酸化水平升高.与模型组相比,远志皂苷元处理组未发生O-GlcNAc糖基化表达降低,tau蛋白未发生过度磷酸化.[结论]tau蛋白磷酸化在某些位点受到O-GlcNAc糖基化修饰的负性调节,远志皂苷元在一定程度上可以升高O-GlcNAc糖基化表达,降低tau蛋白磷酸化水平.     

刺五加有效部位对MPP~+损伤PC12细胞的保护作用

目的:对刺五加有效部位进行体外药效学评价。方法:采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡率,紫外可见分光光度计测LDH的漏出量以及SOD、MDA、NO、NOS的活性和含量。结果:刺五加有效部位可以发挥良好的神经元保护作用,能提高MPP+损伤PC12细胞的存活率(P0.01),降低细胞凋亡率(P0.01),降低LDH的漏出量以及NO、NOS、MDA的含量和降低SOD活性,有统计学意义(P0.05)。结论:刺五加有效部位对MPP+损伤PC12细胞具有一定的保护作用,其作用机制可能是通过降低PC12细胞NO、NOS、MDA的含量和LDH的漏出量,引起胞内SOD的活性增强,从而降低细胞凋亡率,提高细胞存活率而实现的。     

银杏内酯对体外PC12细胞拟缺血缺氧损伤及缺血继发性凋亡的作用

目的：研究银杏内酯对缺血缺氧损伤情况下体外培养PC12细胞的保护作用及其对该细胞凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法：在离体培养的PC12细胞，用NaCN无糖培养造成拟缺血损伤模型，用H2O2模拟氧自由基损伤，分别通过形态学观察、MTT微量比色等方法研究药物对上述模型的保护作用。另将PC12细胞在无血清条件下培养96h，通过琼脂糖凝胶电泳检测其凋亡情况，并用流式细胞术检测细胞的凋亡程度及凋亡相关基因bcl-2在其中的作用。结果：银杏内酯终浓度10^-5、10^-6、10^-7mol/L能抑制NaCN无糖和H2O2培养造成的细胞损伤，明显增强细胞活力。凝胶电泳可见到明显的梯型条带，流式细胞术检测凋亡情况发现模型组凋亡率为10．40％，银杏内酯10^-5mol/L组的凋亡率为3．96％。同时发现药物组和模型组细胞中的bcl-2基因表达没有显著差异。结论：银杏内酯具有神经保护作用，且该作用与药物的抗凋亡能力有关，但这种抗凋亡作用似乎并不是通过bcl-2基因的调控实现的。     

β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机理。方法用谷氨酸造成PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果10mmol/L谷氨酸作用PC12细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加;7.5、15、30μg/mLβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少乳酸脱氢酶渗漏;15、30μg/mLβ-细辛醚能明显降低谷氨酸引起的PC12细胞内钙离子浓度和细胞凋亡率。结论β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。     

地黄饮子对β淀粉样蛋白所致PC12细胞损伤的保护作用

目的：观察地黄饮子对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法：通过HE染色、尼氏染色、电镜观察地黄饮子对细胞形态的影响。结果：地黄饮子可显著改善Aβ25-35损伤引起的PC12细胞形态的改变,减轻细胞膜的损伤,减少损伤所致的细胞死亡。结论：地黄饮子对Aβ25-35所致PC12细胞损伤具有较好的保护作用。     

玉郎伞多糖对β淀粉样蛋白所致PC12细胞损伤的影响

目的 探讨玉郎伞多糖(YLSP)对β淀粉样蛋白(β amyloid pepitide,Aβ25-35)损伤大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的保护作用.方法 取对数生长期的PC12细胞分为6组:空白对照组、Aβ25-35模型组、阳性对照药组、不同浓度(0.01,0.1,1.0 μg·ml-1)YLSP处理组,各组按要求处理后收集细胞进行检测.MTT比色法分析细胞存活率,试剂盒检测细胞培养上清液LDH水平,流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位(MMP)水平.结果 MTT显示YLSP处理组细胞存活率明显高于Aβ25-35模型组(P＜0.01);细胞损伤模型组细胞培养液中LDH及细胞内ROS水平均较正常对照组高(P＜0.05或P＜0.01),MMP水平较正常对照组低(P＜0.01),YLSP各剂量组细胞培养液中LDH及细胞内ROS水平均较模型组低(P＜0.05或P＜0.01),MMP水平除低剂量组外,均较模型组高(P＜0.05或P＜0.01).结论 YLSP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤有保护作用.     

钩藤散含药血清对PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨钩藤散含药血清对PC12细胞损伤的保护作用。方法:分别采用谷氨酸及过氧化氢造成PC12细胞损伤模型,以MTT法及LDH活性观察钩藤散含药血清对PC12细胞损伤模型的影响。结果:发现钩藤散含药血清对PC12细胞损伤所致的细胞形态改变有明显的保护作用,可增强细胞活力,降低LDH活性。结论:钩藤散含药血清可对抗谷氨酸及过氧化氢造成的PC12细胞损伤,对细胞有明显的保护作用。     

盐酸川芎嗪对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

目的:探讨盐酸川芎嗪对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:以谷氨酸损伤的PC12细胞为模型,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活状况,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性来反映细胞损伤程度。结果:用谷氨酸(25mmol/L)和PC12细胞共同孵育24h后,细胞活性明显下降,不同浓度的盐酸川芎嗪(19.5、39.0、78.0μg/mL)预处理1h后可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原MTT的能力,抑制该细胞LDH的释放。结论:盐酸川芎嗪能明显减轻PC12细胞的谷氨酸损伤,对神经细胞的损伤有一定的保护作用。     

清心开窍方含药脑脊液对连二亚硫酸钠所致PC12细胞损伤的保护机制研究

目的:从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对连二亚硫酸钠(sodium dithionite,Na2S2O4)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据.方法:SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g· kg-1),每12h ig1次,共7次,制备清心开窍方含药脑脊液.采用PC12细胞和终浓度8 mmol·L-1的Na2S2O4共培养,造成神经细胞损伤模型.以尼莫地平(1×107 mol·L-1)为阳性对照组,MTr法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响,RT-PCR方法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达水平.结果:清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax,Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P ＜0.05,P＜0.01).结论:清心开窍方对Na2S2O4损伤的PC12细胞有明显的保护作用.     

金丝桃甙对大鼠缺血性脑损伤中氧自由基和一氧化氮的作用

目的：研究脑缺血中氧自由基（ＯＦＲ）和一氧化氮（ＮＯ）的动态变化及金丝桃甙（Ｈｙｐ）的作用。方法：脑缺血模型由结扎大鼠四血管造成。用低温电子顺磁共振（ＥＳＲ）技术和ｇｒｅｎ法分别测定脑皮质中的ＯＦＲ和ＮＯ。结果：脑缺血５ｍｉｎ时,ＮＯ就增多,１５ｍｉｎ时,ＯＦＲ才有增多;５０,１００ｍｇ·ｋｇ^－１Ｈｙｐ显著减少,ＯＦＲ和ＮＯ的增高,抑制超氧化物歧化酶和乳酸脱氧酶活性的下降,延长小鼠断头后张口喘气时间。结论：脑缺血中,ＮＯ增多早于ＯＦＲ,Ｈｙｐ对脑缺血损伤有保护作用。     

丹参配方颗粒对乙醇所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究丹参配方颗粒对乙醇损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的保护作用及其机制。方法用乙醇和不同质量浓度丹参配方颗粒溶液处理PC12细胞;MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测丹参配方颗粒对乙醇致PC12细胞损伤的保护作用;应用原位末端转移酶标记法(TUNEL)和Annexin V/PI标记染色检测PC12细胞凋亡情况:相关试剂盒测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)的量;DCFH-DA染色法检测胞内活性氧(ROS)水平。结果丹参配方颗粒能够抑制乙醇导致的PC12细胞的损伤和死亡,显著降低乙醇诱导的PC12细胞的凋亡率(P0.05),提高细胞的T-SOD、CAT和GSH-Px酶活性(P0.05),降低MDA和ROS水平(P0.05)。结论丹参配方颗粒能有效保护乙醇损伤的PC12细胞,其作用机制与提高细胞抗氧化能力有关。     

奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用研究

目的探究奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。方法采用谷氨酸损伤PC12细胞建立模型,用MTS法考察奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞存活率的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的变化。结果谷氨酸造模浓度为12.5 mmol/L,奇壬醇组细胞的存活率高于模型组(P 0.01)。模型组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),奇壬醇组细胞的凋亡率显著低于模型组(P 0.01)。与对照组相比较,模型组caspase-3和Bax蛋白的表达显著升高,Bcl-2蛋白的表达显著降低,而与模型组相比较,奇壬醇组caspase-3和Bax蛋白的表达量显著降低,Bcl-2蛋白的表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。结论谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,而奇壬醇通过抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,发挥其对PC12的保护作用。     

丹参酮对培养PC12细胞损伤模型的保护作用

目的 :探讨丹参酮对PC12细胞缺血样损伤模型的保护作用。方法 :采用组织培养法 ,以肾上腺嗜铬瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料 ,制备缺糖损伤、缺氧损伤、自由基损伤、咖啡因损伤、一氧化氮损伤及谷氨酸毒性损伤模型。结果 :形态学检查发现丹参酮对六种脑缺血样损伤模型中的PC12细胞具有明显保护作用 ,MTT染色和LDH活性测定提示丹参酮可显著提高损伤模型中PC12细胞的存活数 ,降低细胞损伤程度。其中以对缺氧损伤、咖啡因损伤的保护作用尤为显著。结论 :丹参酮对上述六种PC12细胞缺血损伤均有显著的保护作用 ,但其保护作用可能主要与抑制细胞损伤初期病变进程及咖啡因所致细胞钙超载有关。     

阿魏酸对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨阿魏酸(ferulic acid,FA)对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法:H_2O_2诱导PC12细胞构建氧化应激损伤模型,不同剂量阿魏酸(终浓度为1,10,100μmol·L~(-1))进行干预;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,生化法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量以及细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中胰岛素样生长因子-1(IGF-1) mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IGF-1蛋白的表达。结果:不同剂量的阿魏酸(终浓度为1,10,100μmol·L~(-1))干预24 h后能明显改善H_2O_2诱导的PC12细胞的氧化损伤,与模型组比较,给药组细胞存活率明显升高,细胞上清液中LDH的漏出率明显减少(P 0. 01); MDA的含量明显降低(P 0. 05),同时细胞中SOD的含量显著升高(P 0. 01); Real-time PCR结果显示,与空白组比较,模型组IGF-1 mRNA显著降低(P 0. 01),与模型组比较,药物干预24 h后IGF-1 mRNA表达显著升高(P 0. 01); Western blot结果显示,与空白组比较,模型组IGF-1蛋白的表达显著降低(P 0. 01),与模型组比较,药物作用24 h后,能上调IGF-1蛋白的表达(P 0. 01)。结论:FA能够抑制H_2O_2诱导的PC12细胞的氧化损伤,其保护作用机制可能与胰岛信号通路相关。