芪玉三龙汤对肺癌移植瘤小鼠PI3K/Akt/mTOR通路PI3K、Akt、mTOR表达的影响

目的 研究芪玉三龙汤对小鼠皮下移植瘤生长及对PI3K/Akt/mTOR信号通路调节的影响。方法 采用Lewis肺癌细胞培养移植法复制肺癌荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后随机分为模型组,化学治疗组,芪玉三龙汤高、中、低剂量组,联合组;观察小鼠的生存状态,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;Western blot法检测荷瘤小鼠肿瘤组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达。 结果 芪玉三龙汤高剂量组、联合组生存状态优于化学治疗组;芪玉三龙汤对肺肿瘤具有温和的抑制作用,其高剂量抑制肿瘤生长作用较优,但量效关系不明显,其与顺铂联用无明显增效作用;芪玉三龙汤可以下调PI3K、Akt和mTOR表达水平,和顺铂联用对下调关键分子Akt的表达具有明显的协同作用。 结论 芪玉三龙汤对肺癌移植瘤的抑制作用可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子有关,与化学治疗药联用可协同下调关键蛋白Akt的表达。     

Herceptin下调HER2表达后对PI3K/Akt通路蛋白表达的影响

目的:研究Herceptin下调乳腺癌细胞HER2表达对PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响,探讨该通路在Herceptin抗肿瘤效应中的作用。方法:Herceptin处理HER2过表达的乳腺癌细胞株SKBR-3,免疫细胞化学检测HER2、p21Cip1和p27Kip1的表达,Westernblot检测p-Akt和Bad的表达。结果:Herceptin处理组细胞HER2阳性表达率(37.4%)显著低于对照组(78.3%)(P<0.01)。Herceptin处理组与对照组比较,p-Akt蛋白含量降低53.5%(P<0.01),Bad蛋白含量升高0.83倍(P<0.01)。Herceptin处理组细胞p21Cip1和p27Kip1阳性表达率(分别为67%和56.1%)显著高于对照组(分别为19%和21.4%)(P<0.01)。结论:Herceptin下调HER2表达后,通过下调p-Akt表达而上调其下游Bad、p21Cip1和p27Kip1的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究小青龙汤方对小青龙汤证大鼠模型PI3K、Akt、mTOR mRNA表达的影响

目的:观察小青龙汤对小青龙汤证模型大鼠肺组织中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达的影响。方法:将24只雄性Wistar大鼠按照完全随机分组分成空白组、模型组、小青龙汤高剂量组、小青龙汤低剂量组共4组。建立外寒里饮(小青龙汤证)大鼠模型,予小青龙汤灌胃治疗15 d后,记录各组大鼠的体质量变化并加以分析,运用实时荧光定量(RT-qPCR)技术检测各组大鼠肺组织中PI3K、Akt、mTOR mRNA表达的差异。结果:与空白组比较,模型组与小青龙汤高、低剂量组大鼠体质量在造模后增加不明显,甚至出现负增长(P0.01);经过药物干预治疗后,与空白组比较,模型组大鼠体质量增长仍不明显;与模型组比较,小青龙汤高、低剂量组大鼠体质量明显增加(P0.01)。RT-qPCR结果显示,与空白组比较,模型组PI3K、Akt、mTOR mRNA表达升高(P0.05);与模型组比较,小青龙汤高剂量组PI3K、Akt、mTOR mRNA表达降低(P0.05,P0.01),小青龙汤低剂量组PI3K、Akt、mTOR mRNA表达有降低趋势,但差异无统计学意义。结论:小青龙汤证的发生发展与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达量的上调相关,小青龙汤高剂量治疗效果明显,其作用机制与其能够下调PI3K、Akt、mTOR mRNA的相对表达量有关。     

PI3K/Akt通路对缺氧缺血皮质神经元细胞GLUT3转位的影响

目的 研究PI3K/Akt通路对大鼠缺氧缺血皮质神经元细胞葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)转位的影响.方法 将原代培养的大鼠皮质神经元随机分为对照组、缺氧缺血组、缺氧缺血加LY294002 (PI3K特异性抑制剂)组,用Western blot检测3 h后3组细胞中PI3K/Akt磷酸化蛋白的表达,RT-PCR检测GLU...     

健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型P65、P50及磷酸化IκBα表达的影响

目的：探讨健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型核因子KB（nuclear factor-kappa B,NF-KB）的亚单位P65、P50及NF-KB抑制蛋白（P-IκBα）表达的影响。方法将原代培养的嗅鞘细胞分为5组：正常血清对照组、正常血清+低氧组、低氧+依达拉奉含药血清组、低氧+健脾补土法组方含药血清组、正常血清+低氧+NF-KB抑制剂/抗氧化剂（PDTC,50μmol/L）组,采用微需氧袋低氧/复氧的方法诱导嗅鞘细胞形成脑缺血再灌注损伤样模型,用Western blot法检测嗅鞘细胞胞浆P65、P50、P-IκBα和胞核P65、P50的含量。结果与正常血清对照组比较,正常血清+低氧组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与正常血清+低氧组比较,低氧+依达拉奉组、低氧+健脾补土组、正常血清+低氧+PDTC组、低氧+健脾补土+PDTC组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论健脾补土法组方能通过抑制嗅鞘细胞缺氧/复氧损伤后P65、P50、P-IκBα的过度表达,对NF-κB通路的活化具有抑制作用。     

风药、补虚药对脑缺血大鼠海马PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨侯氏黑散方中风药、补虚药、风药补虚药联用(以下简称联用药)抗脑缺血损伤的作用机制。方法利用线栓法制备永久性大脑中动脉栓塞(p MCAO)模型。SPF级雄性SD大鼠随机被分为假手术组、模型组、风药组、补虚药组及联用药组。脑缺血72 h后分离缺血侧海马组织,运用双抗体夹心法测定缺血侧海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)的表达,Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB又称Akt)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白的表达。结果侯氏黑散方中风药对脑缺血大鼠缺血侧海马BDNF、PI3K、Akt及CREB的蛋白表达无明显影响;补虚药可以明显上调脑缺血大鼠缺血侧海马BDNF和Akt蛋白的表达(P0.05);联用药可以明显降低脑缺血大鼠神经功能评分(P0.05),显著上调脑缺血大鼠缺血侧海马BDNF、PI3K、Akt及CREB蛋白的表达(P0.05)。结论风药可以佐助补虚药通过对PI3K/Akt信号通路中关键信号分子进行调控,减轻缺血性脑损伤。     

PI3K/Akt通路在硫化氢后处理保护心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨硫化氢后处理对原代培养的新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及可能机制。方法以硫氢化钠(NaHS)作为外源性硫化氢供体。原代培养新生大鼠的心肌细胞随机分为5组:①正常对照组;②缺氧复氧组(hypoxia-reoxygenation,HR组);③二甲基亚砜组(dimethyl sulfoxide,DMSO组);④硫化氢后处理组(hydrogen sulfide post-con-ditioning,H2S组);⑤LY294002+H2S后处理组(LY+H2S组)。分别于缺氧前和复氧2 h检测各组的心肌细胞存活率、培养液中CK和LDH的活性;复氧末,用流式细胞学技术检测各组心肌细胞凋亡情况;Western blot检测HIF-1α、p-Akt与Akt蛋白的表达情况。结果通过比较可知,复氧2 h时,H2S组心肌细胞存活率较HR组升高显著[(71.55±1.46)%vs(62.03±1.29)%,P<0.01],CK、LDH活性以及心肌细胞凋亡率明显降低[(244.99±21.38)U/L vs(329.53±26.14)U/L,(371.64±18.62)U/L vs(427.69±13.25)U/L,(...     

PI3K/Akt/mTOR信号转导通路在鼻息肉中的表达

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在鼻息肉中的表达及相关性,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导通路在鼻息肉发病过程中的作用.方法:鼻息肉组织28例和正常下鼻甲组织12例,用免疫组化Elivison二步法及Western blot检测鼻息肉组与对照组组织中PI3K、Akt与mTOR的表达,比较两组之间的表达差异.结果:鼻息肉组PI3K、Akt与mTOR免疫阳性细胞数及着色强度均明显高于对照组,图像分析显示鼻息肉组PI3K、Akt、mTOR的积分光密度(IOD,103/HP)分别为30.36±3.78、32.70±2.30、35.67±1.26,与对照组3.63 ±1.55、2.38±1.36、2.79±0.78相比有显著性差异(P值均＜0.01);Spearman等级相关分析显示,鼻息肉组PI3K、Akt、mTOR表达密切相关(P＜0.01);Western blot检测发现PI3K、Akt与mTOR在鼻息肉组织中特异性表达强度高于对照组(P＜0.01).结论:鼻息肉组织中PI3K、Akt和mTOR表达均上调,三者有协同表达关系,提示可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号转导通路使炎性细胞凋亡受到抑制,导致慢性炎症反应,最终形成鼻息肉.     

GHRP-6对心衰模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt/Caspase-9信号通路调节作用

目的:观察GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心脏功能的调节作用和其对PI3K/Akt/Caspase-9信号转导通路的影响。方法:建立GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心肌细胞的保护模型,比较PI3K p110α、Akt p-Thr308和Akt p-Ser473在正常对照组、假手术组和模型组大鼠心肌细胞左心室后壁和室间隔心肌细胞内的表达。流式细胞术(FCM)检测模型组与正常对照组和假手术组大鼠心肌细胞的凋亡率。结果:在大鼠心肌细胞左心室后壁和室间隔心肌细胞内,模型组大鼠心肌细胞的PI3K p110α、Akt p-Thr308和Akt p-Ser473阳性表达量较正常对照组和假手术组显著降低(P<0.05);与正常对照组、假手术组和模型组大鼠心肌细胞的分别比较,GHRP-6治疗组大鼠心肌细胞的阳性表达量显著升高(P<0.05)。模型组大鼠心肌细胞的Caspase-9和Caspase-3阳性表达量较正常对照组和假手术组显著增高(P<0.05);与正常对照组、假手术组和模型组分别比较,GHRP-6治疗组阳性表达量显著降低(P<0.05)。FCM结果显示,模型组大鼠心肌细胞与正常对照组和假手术组比较,凋亡率显著升高(P<0.05);GHRP-6治疗组与模型组比较,凋亡率明显降低(P<0.05)。相关程度分析显示,PI3K p110α与Akt p-Thr308、p-Ser473蛋白阳性表达量均呈中度正相关;Akt p-Thr308、p-Ser473与Caspase-9蛋白阳性表达量均呈中度负相关;Caspase-9与Caspase-3蛋白阳性表达量呈高度正相关。结论:GHRP-6通过调控PI3K/Akt/Caspase-9/Caspase-3信号转导通路,抑制心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡,是其实现心肌细胞保护作用机制之一。     

PI3’K/AKT通路抑制剂对人胃癌细胞Caspase-9表达的影响

目的:检测PI3’K/Akt通路抑制剂对抗肿瘤药物诱导人胃癌细胞凋亡过程的影响。方法:将胃癌细胞系BGC-823细胞分为6组:空白对照组、渥曼青霉素组、足叶乙甙组、渥曼青霉素+足叶乙甙组、阿霉素组和渥曼青霉素+阿霉素组。按照上述分组用药物干预BGC-823细胞24 h,采用NaI法提取各组细胞的DNA,Western blot检测caspase-9表达变化及用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况。结果:①DNA琼脂糖凝胶电泳示空白对照组未见DNA梯状谱,其他5组均出现明显的DNA梯状谱;②Western blot结果提示阿霉素与足叶乙甙干预后,BGC-823的Caspase-9活性与未处理组相比增强,加用渥曼青霉素处理后,BGC-823的Caspase-9活性与未处理组相比明显增强,与单用阿霉素或足叶乙甙处理组相比有所增强。结论:PI3K/AKT通路抑制剂能促进胃癌细胞凋亡,增强抗肿瘤化疗药物的疗效。     

齐墩果酸对白血病HL-60细胞PI3K、Akt、Cav-1表达的影响

目的：研究齐墩果酸（Oleanic add,OA）对人白血病HL-60细胞PDK、Akt、Cav-1表达的影响.方法：OA作用HL-60细胞后,采用透射电镜观察细胞形态,RT-PCR法检测HL-60细胞PDK、Akt、Cav-1的mRNA表达.结果：OA作用于HL-60细胞后,细胞形态改变明显,出现凋亡小体,且PI3K、Akt、Cav-1的mRNA表达下调（P＜0.01）.结论：OA可抑制肌-60细胞增殖,这可能与其下调HL-60细胞中PI3K、Akt、Cav-1的表达有关.     

基于PI3K/Akt/Caspase-9信号通路研究严氏强心饮对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:基于PI3K/Akt/Caspase-9信号通路研究严氏强心饮对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨严氏强心饮治疗心力衰竭可能的作用机制.方法:选择60只Wistar雄性大鼠,采用随机数字表法分为正常组、模型组、严氏强心饮低剂量组、严氏强心饮中剂量组、严氏强心饮高剂量组和培哚普利组,每组10只.除正常组外,其余5...     

PI3K/Akt抑制剂对肺癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对肺癌细胞A549、SPC-A1化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于肺癌细胞A549、SPC-A1,用MTT法检测单独使用顺铂、紫杉醇及联合PI3K抑制剂LY294002对体外培养的肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物的敏感性,用流式细胞术检测肺癌细胞A549、SPC-A1凋亡率和细胞周期变化.结果 联合LY294002作用后肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物顺铂、紫杉醇敏感性显著增强(P<0.01),且细胞凋亡率显著提高(P<0.01),G0/G1期细胞比例增加,S+G2/M期细胞比例减少(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物顺铂、紫杉醇体外对A549、SPC-A1细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,显著提高肺癌化疗效果.     

益气活血法对大鼠脑缺血再灌注损伤后PI3K/Akt通路的影响

目的:观察局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带PI3K/AKT通路的动态表达及益气活血方药对其影响。方法:以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注3、7、14d,用免疫组织化学染色SABC法分别检测缺血半暗带PI3K/AKT的表达。结果:脑缺血再灌注损伤发生后,模型组PI3K/AKT表达增加。活血组在脑缺血再灌注14d,能够明显增加PI3K/AKT的表达(P<0.001)。益气活血组在脑缺血再灌注3d,7d、14d,能够明显增加PI3K/AKT的表达(P<0.01或P<0.001)。组间比较显示,益气活血组在脑缺血再灌注14d显著优于益气组和活血组(P<0.01)。结论:益气活血法能上调细胞存活信号通路PI3K/AKT通路的表达,从而对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织产生保护作用。     

清热化瘀方联合HP-BMSCs移植对脑缺血损伤大鼠PI3K/Akt表达影响

目的:观察清热化瘀方联合缺氧预处理(HP)骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑缺血再灌注损伤大鼠PI3K/Akt m RNA和蛋白表达的影响。方法:SD大鼠216只,随机分为6组:假手术组(SO)、模型组(MCAO)、MSCs移植对照组(N-MSCs)、经HP后的MSCs移植组(HP-MSCs)、清热化瘀方联合MSCs移植组(MSCs+QRHY)、清热化瘀方联合HP-MSCs移植组(HP+QRHY)。每组按再灌注时间点又分为7 d、14 d、28 d 3个亚组。栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,根据分组情况给予清热化瘀颗粒灌胃及经颈内动脉注入BMSCs或HP-BMSCs,采用改良神经功能缺损评分法进行神经功能评分(NSS),并运用q RT-PCR、Western blot技术检测PI3K/Akt m RNA及其蛋白在缺血半暗带的表达变化。结果:(1)移植组与模型组各时间点比较,神经功能评分严重程度显著降低(P0.05),各移植组间以HP+QRHY组神经功能改善最为显著(P0.05)。(2)MCAO组及各移植组PI3K/Akt m RNA和蛋白表达均较SO组明显增加(P0.05);其表达均于7 d达到高峰(P0.05),14 d、28 d表达开始逐渐下降;其中在7 d、14 d亚组间相比较,HP-MSCs组、MSCs+QRHY组及HP+QRHY组二者的表达均明显优于N-MSCs组(P0.01或P0.05),而以HP+QRHY组增高最为显著(P0.05)。结论:清热化瘀方联合HPBMSCs移植可改善大鼠的神经功能,这可能和其促进大鼠脑缺血半暗区PI3K/Akt的表达相关。     

PI3K、Akt、ERK1/2在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:研究PI3K,Akt,ERKl/2在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:选取40例结直肠癌新鲜标本和癌旁正常组织。应用EnVisionTM二步染色免疫组化法和S-P免疫组化法,对PI3K,Akt,ERKl/2在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系进行研究。结果:PI3K,Akt在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为67.5%和75.0%,明显高于癌旁正常组织的20.0%和20.0%(P<0.01)。同一结直肠癌组织中P13K和Akt的表达呈正相关(r=0.687,P<0.01);ERKl/2在结直肠癌组织中的阳性表达率为57.5%,明显高于癌旁正常组织的15%(P<0.01);PI3K,Akt,ERKl/2蛋白表达与结直肠癌患者年龄、肿瘤部位、病理类型、临床病理分期、淋巴结转移和远处转移无关(P>0.05)。同一结直肠癌标本中PI3K和Akt的表达与ERKl/2的表达无相关性(P>0.05)。结论:P13K,Akt在结直肠癌组织中表达明显升高,结直肠癌组织中PI3K和Akt的表达呈正相关,但与临床病理因子无关,提示PI3K/Akt信号传导通路可能是结直肠癌发生发展的早期事件;ERKl/2在结直肠癌组织中表达明显升高,提示ERKl/2与结直肠癌的发生发展相关。