壮骨止痛方对细胞周期蛋白cyclin D1的作用研究

目的:探讨壮骨止痛方抗骨质疏松作用机制。方法:雌性SD大鼠40只随机分为模型组、壮骨止痛方组、阳性对照组、假手术组,给药5 d后制备含药血清。获取新生SD乳鼠成骨细胞,培养至第3代,分别加入4组血清。培养6 d后,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,用免疫组化法检测各组细胞中cyclin D1蛋白表达;18 d后进行茜素红染色,观察各组钙化结节。结果:壮骨止痛方组ALP活性以及cyclin D1蛋白表达强于阳性对照组,表明成骨细胞增殖旺盛。结论:壮骨止痛方可提高体外培养成骨细胞cyclin D1表达,对骨质疏松症有治疗效果。     

基于TGF-β-Smad通路探讨壮骨止痛方对绝经后骨质疏松症的治疗

目的：探究壮骨止痛方能否通过TGF-β-Smad通路治疗绝经后骨质疏松症,并探索其作用机制。方法60只雌性大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组和壮骨止痛方组并提取相应含药血清,提取培养原代成骨细胞并添加相应的含药血清继续培养,先后进行碱性磷酸酶、茜素红染色、免疫组化等一系列的指标检测。结果见大量被染成了蓝紫色的成骨细胞以及橘红色钙化结节;TGF-β、Smad蛋白在壮骨止痛方组中表达水平明显高于空白对照组和假手术组,模型组中的蛋白表达水平最低,具有统计学意义（P<0.05）。结论壮骨止痛方可以通过TGF-β-Smad信号转导通路治疗绝经后骨质疏松症并可大量提高该通路的表达水平。     

壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究

[目的]观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响,为明确壮骨止痛胶囊防治骨质疏松症的作用机制提供实验依据。[方法]取2代培养的大鼠成骨细胞,在壮骨止痛胶囊含药血清为40%的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成,碱性磷酸酶(ALP)测定成骨细胞增殖和分化,噻唑蓝(MTT)法测成骨细胞生长曲线。[结果]成骨细胞在6d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,壮骨止痛胶囊含药血清可促进成骨细胞的增殖、ALP的分泌。[结论]壮骨止痛胶囊含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化。壮骨止痛胶囊含药血清可能通过直接促进成骨细胞增殖、分化,从而防治骨质疏松症。     

固本活血壮骨颗粒对糖尿病大鼠成骨细胞Wnt/β-catenin信号传导通路的影响

目的观察固本活血壮骨颗粒对糖尿病大鼠模型成骨细胞Wnt/β-catenin信号传导通路的影响。方法 6月龄SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组、固本活血壮骨颗粒大、中、小剂量组。除正常对照组外,其余各组均采用左下腹腔内注射新鲜配制1%链脲佐菌素STZ(柠檬酸缓冲液,p H值4.4)65 mg/kg体重造模。各组予相应药物及生理盐水灌胃12周。结果固本活血壮骨颗粒可提高糖尿病模型成骨细胞Wnt1、LRP-5以及β-catenin蛋白的表达。结论固本活血壮骨颗粒可以通过促进成骨细胞Wnt1、LRP-5以及β-catenin蛋白的表达,调节Wnt/β-catenin信号传导通路的失调状态,促进骨形成,减少骨吸收,提高骨质量,从而达到防治糖尿病性骨质疏松症的效果。     

固本活血壮骨颗粒对去卵巢大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的 通过观察固本活血壮骨颗粒对去卵巢大鼠成骨细胞骨形态形成蛋白因子Ⅱ(BMP-2)表达的影响,探讨固本活血壮骨颗粒防治骨质疏松症的微观机制；方法 取3月龄的雌性SD大鼠60只,随机分为:假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组、尼尔雌醇组、固本活血壮骨颗粒小剂量组(简称GBHX小剂量组)、大剂量组(简称GBHX大剂量组).除假手术组仅切除双侧卵巢附近的相当于卵巢大小的小块脂肪,其余各组均切除双侧卵巢.术后一周开始给药,灌胃90d后,取右侧股骨近段,免疫组化法测定股骨成骨细胞BMP-2表达.结果 模型组BMP-2表达明显低于假手术组(P＜0.01),固本活血壮骨颗粒大剂量组BMP-2表达明显高于模型组(P＜0.01),且明显高其他治疗组.结论 固本活血壮骨颗粒可通过刺激成骨细胞BMP-2表达促进骨形成,且有剂量依赖关系.     

右归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞中GPR48、ATF4、BSP表达影响实验研究

目的:通过右归丸含药血清对大鼠成骨细胞GPR48、ATF4、BSP的实验研究,探究右归丸对治疗骨质疏松症的疗效机制。从而为"肾藏精"这一理论提供实验依据。方法:将SPF级大鼠随机分为正常组、右归丸组、诱导液组、骨疏康组、福善美组,对大鼠进行灌胃5 d。制备含药血清,并观察右归丸含药血清对成骨细胞的影响。结果:与正常组和阳性药物组及诱导液组相比,右归丸组的蛋白表达水平明显上升。结论:(1)正常大鼠骨组织中存在GPR48、ATF4、BSP蛋白表达;(2)右归丸组中的GPR48、ATF4、BSP与正常组相比含量均大幅提升,说明右归丸含药血清能够调控GPR48、ATF4、BSP的蛋白浓度,并可促进骨髓间充质干细胞向骨细胞分化,从而对骨质疏松症起到防治作用。     

鹿角壮骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨细微结构、骨代谢及OPG/RANK/RANKL信号通路的影响

目的:观察鹿角壮骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠的细微结构、骨代谢及OPG/RANK/RANKL信号通路的影响。方法:通过卵巢切除联合糖皮质激素建立骨质疏松大鼠模型,将60只雌性大鼠随机,分为假手术组、模型组、阳性组、鹿角壮骨胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只。给药3月后,检测各组大鼠血清钙、血清磷、酸性磷酸酶、骨钙素的含量水平,显微镜下测定股骨骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁间距,免疫组化法检测股骨OPG及RANKL蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清钙、血清磷、酸性磷酸酶、骨钙素降低(P<0.05),股骨骨小梁面积百分数、骨小梁厚度减少(P<0.05),骨小梁间距增大(P<0.05),股骨OPG蛋白平均光密度值显著降低(P<0.05),RANKL蛋白平均光密度值明显增高(P<0.05)。而阳性组、鹿角壮骨胶囊中、高剂量组对上述指标均有明显改善(P<0.05)。结论:鹿角壮骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠的改善作用可能与OPG/RANK/RANKL信号通路相关。     

右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞中TGF-β、BMP-7、BGP表达影响实验研究

目的:通过对大鼠骨髓间充质干细胞中TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达的分析,探究右归丸含药血清通过TGF-β信号通路诱导BMSCs向成骨细胞分化的机制,从而为"肾主骨"这一理论提供实验依据。方法:42只SPF级SD雌性大鼠,体质量(210±20)g,随机分为:正常组、诱导液组、右归丸组、福善美组、骨疏康组各8只,对大鼠灌胃5 d,制备含药血清,并分离和培养大鼠BMSCs,观察不同实验组含药血清对成骨细胞中TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达的影响。结果:与正常组相比,其余各实验组均不同程度上调了TGF-β、BMP-7、BGP的表达水平,并且右归丸组与其余各组相比,结果有统计学差异(P0.01)。结论:(1)正常大鼠BMSCs中存在TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达;(2)右归丸含药血清能够通过调控TGF-β、BMP-7、BGP的蛋白浓度促进BMSCs向成骨细胞分化,以起到对骨质疏松症的防治作用。     

冠心舒通胶囊对急性心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生的影响

目的 观察冠心舒通胶囊对心肌梗死后大鼠缺血心肌血管新生的影响.方法 健康Wistar大鼠正常喂养1周,建立大鼠心肌梗死模型后,随机分为冠心舒通胶囊高、低剂量组、阳性药物对照组(贝复济与肝素对照组)、模型组及假手术组.连续给药4周后处死大鼠,取梗死边缘区心肌组织,进行免疫组化检测.结果 免疫组化法中各组与假手术组、模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05);VEGF及PDGF-B蛋白表达情况,药物组与模型组、假手术组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),高剂量组与阳性药物对照组比较结果相当.结论 冠心舒通胶囊对心肌梗死后大鼠缺血心肌有促进血管新生的作用.     

透骨消痛胶囊含药血清对退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养大鼠退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng/mL IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24 h、48 h、72 h后用TaqMan real-time PCR和Western Blot法检测各组mRNA和蛋白的表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组caveolin-1和p38MAPK基因、蛋白相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,统计均有显著性差异(P0.05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞caveolin-1、p38MAPK的表达。     

鹿角壮骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨细微结构及骨代谢影响的实验研究

目的 观察鹿角壮骨胶囊对去卵巢大鼠骨细微结构及骨代谢的影响并探讨其机制.方法 120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆组,鹿角壮骨胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组,除假手术组外,其余均切除双侧卵巢,干预12周后检测各组血清雌二醇(E2)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)、骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型原胶原N-端前肽(PINP)和Ⅰ型胶原交联C-末端肽(S-CTX)水平,采用双能X线骨密度测量仪测定左侧股骨骨密度;显微镜下观察右股骨小梁的结构变化,并检测右股骨组织形态计量学参数平均骨小梁面积(％Tb.Ar)、骨小梁宽度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)以及骨小梁数目(Tb.N),采用免疫组织化学染色法检测大鼠股骨骨保护蛋白(OPG)及核因子-κ β受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达.结果 ①鹿角壮骨胶囊各组血清E2、TRACP-5b及BALP高于模型组(P＜0.01),血清PINP和S-CTX水平低于模型组(P＜0.01);②鹿角壮骨胶囊各组股骨骨密度高于模型组(P＜0.01);③鹿角壮骨胶囊各组Tb.Ar、Tb.Th和Tb.N显著高于模型组(P＜0.01),Tb.Sp显著低于模型组(P＜0.01);④鹿角壮骨胶囊各组股骨OPG蛋白表达高于模型组(P＜0.01),股骨RANKL蛋白表达低于模型组(P＜0.01).结论 鹿角壮骨胶囊不仅能有效地改善去卵巢大鼠激素水平和骨细微结构,而且可提高大鼠骨密度,降低骨转化.     

当归注射液对缺血/再灌注损伤大鼠心肌P57~(kip2)和CDK2蛋白表达的影响

目的:观察当归注射液对缺血/再灌注损伤(IRI)心肌细胞P57kip2和CDK2蛋白表达的影响。方法:30只SD大鼠构建心肌IRI模型后随机分成假手术组、缺血/再灌注损伤(IRI)组和当归组,免疫组化法观察各组心肌细胞内P57kip2和CDK2蛋白表达情况,测定其平均光密度和阳性面积,并与正常对照组比较。结果:IRI组心肌细胞内P57kip2蛋白表达的平均光密度和阳性面积率均低于正常对照组和假手术组(P<0.01),而CDK2蛋白表达较高(P<0.01);当归组P57kip2和CDK2蛋白表达与正常对照组和假手术组无差异(P>0 05)。结论:当归注射液对大鼠缺血/再灌注损伤心肌细胞有保护作用。     

壮骨止痛方对去势大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察壮骨止痛方对去势大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其治疗骨质疏松的机制。方法:60只3月龄SD雌性大鼠,按体重随机分为假手术组、空白组、模型组、壮骨止痛方组,15只/组。模型组、壮骨止痛方组采用双侧去卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型,假手术组切除卵巢周围相应质量脂肪。术后5 d开始药物干预,连续13 w。取股骨,观察病理形态及Wnt7b、TCF3、GSK3β蛋白的表达。结果:与模型组相比,壮骨止痛方组骨小梁密度及梁髓比均提高。与模型组相比,壮骨止痛方组骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达增高,GSK3β蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论:壮骨止痛方可通过上调去势大鼠骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达,下调GSK3β蛋白表达来调控Wnt/β-catenin信号通路。     

仙鹿壮骨方对去卵巢大鼠骨质疏松症骨密度和血清降钙素的影响

目的观察仙鹿壮骨方对去卵巢大鼠骨质疏松症骨密度和血清降钙素的影响,探讨仙鹿壮骨方治疗因雌激素缺乏导致的骨质疏松症的作用机制,为防治骨质疏松症提供实验依据。方法将72只大鼠随机分为假手术组、模型组、尼尔雌醇组、仙鹿壮骨方大剂量组、仙鹿壮骨方中剂量组、仙鹿壮骨方小剂量组6组,通过手术去除双侧卵巢复制大鼠骨质疏松症模型,各组分别灌胃生理盐水及相应药物12周,灌胃结束后检测各组大鼠骨密度及血清降钙素(CT)含量。结果与假手术组比较,模型组骨密度及血清降钙素含量显著降低,2组比较差异有高度统计意义(P0.01);与模型组比较,除了仙鹿壮骨方小剂量组的骨密度改善不显著外,其余给药组的两项指标及仙鹿壮骨方小剂量组的降钙素均显著升高,差异有统计意义(P0.05);各治疗组之间比较,仙鹿壮骨方各剂量组的两项指标均显著低于尼尔雌醇组(P0.05),仙鹿壮骨方各剂量组的骨密度比较差异无统计意义,但各剂量组的降钙素比较差异有统计意义(P0.05),呈显著的量效关系。结论仙鹿壮骨方可能通过升高CT含量,减缓伴随去卵巢所致的骨量丢失,起到防治骨质疏松的作用。     

壮骨止痛方提取物对去势雌鼠骨密度和骨生物力学影响

目的:观察壮骨止痛方对双侧卵巢摘除(去势法)后雌性大鼠骨密度及骨生物力学的影响。方法:60只雌性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、壮骨止痛方全方组,每组15只。术后1 w开始灌胃给药,连续13 w。13 w后按要求处死动物,观察雌性大鼠去势后骨质疏松模型骨密度及左后肢胫骨生物力学的变化。结果:壮骨止痛方能增加大鼠骨密度、胫骨最大应力和最大抗弯强度,与模型组比较差异有统计学意义。结论:壮骨止痛方具有抗骨质疏松的作用。     

p38MAPK通路在健骨颗粒促成骨细胞早期分化中的作用

目的观察p38MAPK信号转导通路在健骨颗粒促进体外培养成骨细胞早期分化过程中的作用。方法采用酶消化法分离、培养SD大鼠成骨细胞,分4组进行干预:对照组(加入生理盐水血清)、阻断剂组(加入p38MAPK的阻断剂SB202190)、中药组(加入健骨颗粒含药血清)和中药加阻断剂组(加入健骨颗粒含药血清和SB202190),运用化学比色法检测上清液中碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测成骨细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。结果在AKP活性、HYP含量及ColⅠmRNA表达3项指标上,中药组>中药加阻断剂组>对照组>阻断剂组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外培养大鼠成骨细胞的早期分化与p38MAPK信号转导通路有关;健骨颗粒含药血清能促进成骨细胞的早期分化,但这一作用仅部分通过p38MAPK信号通路实现。     

壮骨止痛方提取物对去势骨质疏松症雌鼠血清E_2、BGP水平的影响

目的:观察壮骨止痛方提取物对去势骨质疏松症雌鼠血清雌激素(E2)和骨钙素(BGP)的影响。方法:60只3月龄雌性SD大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型对照组(C组)、壮骨止痛方提取物组(D组)四组,15只/组,除正常组及假手术组外,其余组去势(去卵巢)后建立绝经后骨质疏松症模型大鼠,假手术组则去除卵巢周边相应体积的脂肪。大鼠皆灌胃13周后处死取材,测定血清中E2、BGP的含量并观察股骨头病理组织形态学变化。结果:D组大鼠E2水平明显升高,同时血清BGP的水平降低,与C组比较,有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。病理形态学镜下观察C组骨小梁稀疏、破坏,骨髓腔扩大,骨小梁密度明显下降,A组与B组骨小梁分布均匀,股骨骨小梁密度正常,D组骨小梁密度分布比较均匀,骨小梁密度基本恢复正常。结论:壮骨止痛方提取物不仅能促进雌激素分泌,而且可以通过调节BGP以降低骨转换率,减少骨量丢失,达到抗骨质疏松的目的。     

壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症骨密度及相关生化指标的影响

目的探讨壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症骨密度及生化指标的影响。方法选取10～12月龄雌性SD大白鼠60只,随机分为假手术组、去卵巢模型组、骨松宝对照组、壮骨止痛胶囊低、中、高剂量组共6组,每组10只。术后5 d拆线后开始给药,连续13周。取血、尿、骨标本从骨密度、骨代谢生化指标(S-Ca、P、ALP、U-Ca/Cr、U-HOP/Cr)、性激素(E2)等几个方面进行研究。结果壮骨止痛胶囊能明显增加去卵巢模型鼠股骨、胫骨、腰椎骨矿含量和骨密度,差异具有统计学意义(P<0.01),降低模型鼠血ALP、尿Ca/Cr、尿HOP/Cr水平,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论壮骨止痛胶囊能抑制骨吸收,促进骨形成,逆转骨代谢的高转换状态,有效治疗骨质疏松症。     

乳酸杆菌对过敏性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4和IL-5含量的影响

目的:探讨乳酸杆菌对过敏性鼻炎(AR)大鼠血清中IgE、IL-4和IL-5含量的影响。方法:SD大鼠,40只随机分为正常组、模型组、乳酸杆菌组及阳性药对照组4组,每组10只。乳酸杆菌组每天用乳酸杆菌活菌制剂1.5mg/g以无菌稀释液溶解后灌胃3周;正常组、模型组及阳性药对照组均予无菌稀释液灌胃3周。模型组、乳酸杆菌组及阳性药对照组建立大鼠卵白蛋白致敏模型。阳性药对照组灌胃氯雷他定5mg/kg,连续10d。采用ELISA法定量检测试验各组大鼠血清IgE、IL-4、IL-5的含量。结果:模型组IgE、IL-4、IL-5的含量显著高于正常组(P<0.05);乳酸杆菌组IgE、IL-4、IL-5的含量均显著低于模型组(P<0.05);乳酸杆菌组各项指标与阳性药对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乳酸杆菌可降低AR大鼠血清中IgE、IL-4和IL-5含量,减轻鼻黏膜变应性炎症。     

骨碎补总黄酮在肿瘤坏死因子α介导下对成骨细胞凋亡的影响

目的：通过观察骨碎补总黄酮在肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）介导下对成骨细胞增殖和凋亡的影响,探讨其防治类风湿关节炎骨质疏松症的作用机制。方法：20只雌性Wistar大鼠,随机分为空白对照组（蒸馏水灌胃）和骨碎补总黄酮组（强骨胶囊灌胃）制备血清。骨碎补总黄酮组大鼠每日强骨胶囊给药剂量为75mg,每日给药2次,2mL/次,连续给药3d,末次给药1h后,心脏采血收集血清备用。细胞实验分为4组：空白血清组、骨碎补总黄酮含药血清组、空白血清＋TNF-α组和骨碎补总黄酮含药血清＋TNF-α组。应用噻唑基四唑法测定成骨细胞的增殖,流式细胞仪测定成骨细胞的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应法测定Bcl-2和Bax mRNA表达量。结果：与对照血清相比,骨碎补总黄酮含药血清在TNF-α介导下能够促进成骨细胞增殖（P〈0.05）;减少成骨细胞的凋亡（P〈0.05）,增加Bcl-2/Bax比值。结论：骨碎补总黄酮含药血清在TNF-α介导的炎症环境下能够促进成骨细胞增殖,减少成骨细胞凋亡,可能是通过调节Bcl-2/Bax mRNA比例来实现的。