缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤过程中内质网应激的影响

目的探讨缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)中细胞凋亡及特异性内质网应激损伤相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)和半胱氨酸蛋白酶12(cysterine protease-12,caspase-12)表达水平的影响和意义。方法 Wistar大鼠24只随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组8只。采用改良Pferfer MA推管法制备大鼠缺血再灌注模型,假手术组于左冠状动脉前降支下穿线、套管,不结扎,旷置220min;缺血再灌注组结扎左冠状动脉40min后完全开放,再灌注180min;缺血后处理组结扎左冠状动脉40min后,再灌注缺血开始前连续实施3个循环的30s/30s的缺血再灌注后处理,随后完全开放左冠状动脉再灌注180min。采用Evans blue与TTC双染法测定心肌梗死面积百分比和缺血区面积百分比,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,采用Western blot法检测心肌组织caspase-12、GRP78蛋白表达水平。结果假手术组心肌缺血区面积百分比(0)和梗死区面积百分比(0)明显低于缺血后处理组[(46.46±2.13)%、(41.02±2.93)%]和缺血再灌注组[(53.31±3.87)%、(52.19±3.44)%](P0.01),心肌细胞凋亡指数[(6.70±2.25)%]、心肌组织caspase-12蛋白(0.11±0.01)和GRP78蛋白(0.13±0.03)表达水平明显低于缺血后处理组[(20.54±3.05)%、0.35±0.06、1.17±0.14]和缺血再灌注组[(26.92±1.91)%、0.41±0.06、1.04±0.16](P0.01);缺血后处理组心肌缺血区面积百分比、梗死区面积百分比、心肌凋亡指数、心肌组织caspase-12蛋白表达水平低于缺血再灌注组(P0.01),心肌组织GRP78蛋白表达水平高于缺血再灌注组(P0.05)。结论缺血后处理可减轻心肌细胞凋亡,而内质网应激激活参与了大鼠MIRI过程,推测缺血后处理在大鼠MIRI过程中可能通过调节内质网应激途径抑制细胞凋亡,改善MIRI。     

脑钠肽对高血脂大鼠缺血再灌注心肌的保护作用

目的探讨脑钠肽对高血脂大鼠缺血再灌注心肌的保护作用。方法高血脂SD大鼠30只,随机分为假手术组、缺血再灌注组和观察组各10只,缺血再灌注组和观察组大鼠制备心肌缺血再灌注模型,假手术组仅开胸不结扎冠状动脉;再灌注开始前5min观察组静脉注射0.01μg/(kg·min)脑钠肽,假手术组和缺血再灌注组静脉注射等量生理盐水。再灌注3h后观察3组大鼠心肌梗死面积和心肌细胞凋亡情况,检测3组大鼠血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。结果假手术组无明显心肌梗死区,缺血再灌注组心肌梗死面积[(38.45±2.20)%]和心肌细胞凋亡指数[(30.85±5.41)%]明显大于观察组[(24.16±3.51)%、(20.63±6.60)%]和假手术组[0、(2.20±0.61)%](P0.05),观察组大于假手术组(P0.05);缺血再灌注组和观察组大鼠血清CK[(810.06±37.64)、(743.21±41.73)u/L]、SOD[(53.05±11.59)、(70.13±13.20)ku/L]和MDA[(7.61±1.21)、(5.36±1.37)mol/L]水平均明显高于假手术组[(220.16±21.50)u/L、(20.51±6.71)ku/L、(0.91±0.13)mol/L](P0.05);观察组大鼠血清CK和MDA水平明显低于缺血再灌注组(P0.05),SOD水平明显高于缺血再灌注组(P0.05)。结论脑钠肽对高血脂大鼠缺血再灌注心肌有保护作用,可减少心肌细胞凋亡,缩小心肌梗死面积,降低大鼠血清CK、MDA水平,增高血清SOD水平。     

缺血后处理对高血脂大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的 观察缺血后处理对高血脂大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响.方法 选择高血脂SD大鼠48只,随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组16只.制备大鼠心肌缺血再灌注模型.缺血再灌注组收紧结扎线缺血40 min,放松结扎线再灌注240 min;缺血后处理组缺血40 min后,再灌注10 s,再缺血10 s,连续3个循环,然后再灌注240 min;假手术组不收紧结扎线.再灌注结束后自右颈动脉分别采血测定血清肌酸激酶活性,用伊文氏兰-红四氮唑(TTC)染色和TUNEL法分别检测再灌注心肌坏死和凋亡程度.结果 再灌注结束后,肌酸激酶活性缺血后处理组和缺血再灌注组分别为(734.86±25.48)U/L和(967.64±28.16)U/L,高于假手术组的(274.28±16.94)U/L,(P<0.05),缺血后处理组低于缺血再灌注组(P<0.05);缺血后处理组心肌缺血区与左心室面积比值与缺血再灌注组无显著性差异,但心肌坏死区与缺血区比值为(24.8±6.7)%,低于缺血再灌注组的(38.2±7.1)%(P<0.05);假手术组未见明显细胞凋亡,缺血后处理组心肌细胞凋亡率为(12.7±2.8)%,低于缺血再灌注组的(20.9±3.7)%(P<0.05).结论 缺血后处理可减轻高血脂大鼠心肌缺血再灌注损伤,机制可能与减少心肌细胞凋亡有关.     

缺血后处理神经保护作用的实验研究

目的：探讨缺血后处理对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为三组（n=10）,建立四血管阻断全脑缺血模型。假手术组：单纯麻醉和手术操作,无缺血过程;缺血再灌注组：缺血10 min后再灌注;缺血后处理组：缺血10 min后以10 s再灌注/10 s阻断,共6个循环实现缺血后处理。再灌注后于第1天和第3天进行行为学观察;在72 h后进行病理学检测。结果 Morris水迷宫提示：再灌注后第1天,缺血再灌注组的平均上台时间（84.76±10.22）s较假手术组（27.08±7.52）s明显延长,差异有统计学意义（t=14.84, P＜0.05）,缺血后处理组的平均上台时间（50.24±9.72）s明显少于缺血再灌注组,差异有统计学意义（t=7.74, P＜0.05）。再灌注后第3天,缺血再灌注组的上台时间（55.90±11.26）s仍明显长于缺血后处理组（29.22±5.82）s,差异有统计学意义（t=6.65, P＜0.05）。72 h后病理学染色提示：缺血再灌注组和缺血后处理组海马CA1区存活神经元分别为假手术组的25.90％和64.60％。结论缺血后处理可以明显减少大鼠全脑缺血再灌注后神经元死亡,减轻行为学缺损,对大鼠全脑缺血再灌注有神经保护作用。     

缺血后处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:观察缺血后处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法:实验于2006-02/05在首都医科大学附属朝阳医院心脏中心实验室完成。选择健康SD大鼠48只,随机数字表法分为3组:假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组16只。制备大鼠心肌缺血再灌注模型。缺血再灌注组,收紧结扎线缺血40min,放松结扎线再灌注240min;缺血后处理组,缺血40min后,再灌注10s,缺血10s,连续3个循环,然后再灌注239min;假手术组,开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线。采用TUNEL技术检测心肌细胞凋亡率,同时测定血清肌酸激酶活性和心肌梗死范围。结果:纳入动物48只,均进入结果分析。①血清中肌酸激酶活性的测定:再灌注结束后缺血后处理组和缺血再灌注组肌酸激酶活性明显高于假手术组[分别为(13.54±1.50),(20.72±1.58),(2.90±0.28)μkat/L,P<0.01],缺血后处理组明显低于缺血再灌注组(P<0.01)。②心肌梗死范围:再灌注结束后缺血后处理组和缺血再灌注组心肌缺血区与左室面积比值无明显差异,缺血后处理组心肌坏死区与缺血区比值显著低于缺血再灌注组(分别为26.1±6.7,40.2±7.2,P<0.01)。③心肌凋亡细胞计数:再灌注结束后假手术组未见明显细胞凋亡(<5%),缺血后处理组心肌细胞凋亡率明显低于缺血再灌注组[分别为(12.5±2.9)%,(21.3±3.8)%,P<0.01]。结论:缺血后处理可减轻缺血再灌注损伤、其机制可能与减少心肌细胞凋亡有关。     

红花注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后能量代谢的影响

目的探讨红花注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后能量代谢的改善作用。方法将64只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、红花注射液4 ml/kg组、红花注射液2 ml/kg组,每组16只大鼠,采用改良的Zea-Longa线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,并根据分组进行相应的干预处理,然后分别检测各组大鼠神经评分、脑组织含水量、乳酸、Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶。结果与模型组比较,红花注射液4 ml/kg组、红花注射液2 ml/kg组神经评分、脑组织含水量、乳酸水平明显降低,而Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶水平明显升高(P0.05)。与红花注射液4 ml/kg组比较,红花注射液2 ml/kg组神经学评分、脑组织含水量、乳酸水平明显升高,而Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶水平明显降低(P0.05)。结论红花注射液能够改善大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织的能量代谢,这可能是其能够保护脑缺血再灌注损伤后脑组织的机制之一。     

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子和成纤维生长因子-2表达的影响

目的观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维生长因子-2(FGF-2)表达的影响。方法 25只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、莫诺苷小剂量组(30 mg/kg)、莫诺苷中剂量组(90 mg/kg)和莫诺苷大剂量组(270 mg/kg)。采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)30 min再灌注模型。再灌注7 d后利用蛋白免疫印迹法检测梗死侧皮层VEGF和FGF-2蛋白表达。结果与假手术组相比,缺血再灌注7 d后,各组梗死侧大脑皮层VEGF、FGF-2的表达均有增加(P0.05);莫诺苷小、中、大剂量组VEGF表达进一步增加(P0.05);莫诺苷大剂量组FGF-2的表达进一步显著增加(P0.001)。结论莫诺苷可以促进局灶性脑缺血再灌注后VEGF和FGF-2的表达,可能有助于促进缺血性脑损伤后的血管新生。     

缺血再灌注对大鼠心肌损伤及氧化应激的影响

目的探讨心肌缺血大鼠恢复血流再灌注后不同时间心肌损伤程度及氧化应激水平变化。方法 36只SD大鼠随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注10min组、30min组、60min组、120min组各6只。缺血组,10min组、30min组、60min组、120min组制备大鼠心肌缺血模型,假手术组不结扎冠状动脉。10min组、30min组、60min组、120min组分别于再灌注10、30、60、120min采集动脉血,缺血组不恢复血流再灌注,于缺血30min后采集动脉血,假手术组于开胸后采集动脉血,检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme-MB,CK-MB)水平及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,并进行比较。结果缺血组、10min组、30min组、60min组、120min组血清CK-MB[(932.29±79.80)、(1 070.25±221.70)、(822.11±67.92)、(1 030.57±153.41)、(1 173.86±169.18)u/L]、MDA[(6.96±0.82)、(7.96±0.39)、(6.56±0.81)、(6.82±0.92)、(9.34±1.11)μmol/L]均高于假手术组[(390.94±190.75)u/L、(5.07±0.96)μmol/L],LDH活性[(547.53±95.04)、(534.24±55.64)、(520.37±93.04)、(557.50±93.23)、(629.86±46.91)u/L]均高于假手术组[(404.68±77.55)u/L],SOD水平[(155.98±7.92)、(162.39±3.20)、(176.27±9.12)、(178.01±3.60)、(153.35±9.57)u/mL]均低于假手术组[(203.24±20.62)u/mL](P0.05);30min组、缺血组、10min组、60min组、120min组血清CK-MB水平逐渐增加(P0.05);10min组、120min组血清MDA水平高于缺血组、30min组、60min组(P0.05),10min组与120min组、缺血组与30min组及60min组血清MDA水平比较差异无统计学意义(P0.05);缺血组、10min组、30min组、60min组、120min组血清LDH活性及SOD水平比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论缺血再灌注损伤与氧化应激有关,其损伤程度在再灌注早期出现短暂减弱后又明显增强。     

缺血后处理对大鼠缺血/再灌注心肌热休克蛋白的影响

目的:研究缺血后处理对大鼠缺血/再灌注心肌热休克蛋白(HSP70)的影响。方法:选择健康SD大鼠48只,随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组（对照组）和缺血后处理组,每组16只。制备大鼠心肌缺血/再灌注模型。缺血再灌注组,收紧结扎线缺血40 min, 放松结扎线再灌注240min;缺血后处理组,缺血40 min后, 再灌注10s,缺血10s,连续3个循环,然后再灌注240min;假手术组,开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线。免疫组织化学染色检测HSP70的表达,TUNEL 法检测心肌细胞凋亡指数,同时测定血清肌酸激酶活性。结果:①血清肌酸激酶活性测定：再灌注结束后缺血后处理组和缺血再灌注组肌酸激酶活性明显高于假手术组,分别为（712.13±42.77）,（935.17±57.99）,（282.74±29.54）U/L,P＜0.05,缺血后处理组明显低于对照组(P＜0.05)。②心肌凋亡细胞计数：再灌注结束后假手术组未见明显细胞凋亡（＜5%）,缺血后处理组心肌细胞凋亡率明显低于缺血再灌注组,分别为（14.3±2.7）%,（22.3±3.6）%,（P＜0.05）。③心肌热休克蛋白表达：缺血后处理组较对照组心肌热休克蛋白表达增强（P＜0.05）。结论:缺血后处理可减轻缺血再灌注损伤,其机制可能与增强热休克蛋白表达,减少心肌细胞凋亡有关。     

两种不同后处理措施对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨缺血后处理联合肢体缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为5组：假手术组（Ⅰ组）、缺血再灌注组（Ⅱ组）、近端缺血后处理组（Ⅲ组）、肢体远隔缺血后处理组（Ⅳ组）、联合处理组（Ⅴ组）.采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型.再灌注24h后测定各组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平.结果 各组大鼠脑梗死体积比值为0、（55.29±16.34）％、（36.07±14.76）％、（37.23±15.13）％和（21.15±10.92）％;与Ⅰ组相比,其余四组大鼠神经行为学评分、TNF-α水平及MDA含量均明显增高,SOD活性明显降低（均P＜0.01）;Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组SOD活性高于Ⅱ组,其余指标均低于Ⅱ组（均P＜0.05）;Ⅲ、Ⅳ组SOD活性低于Ⅴ组,其余指标均高于Ⅴ组（均P＜0.05）;Ⅲ组与Ⅳ组间各指标差异无统计学意义（均P＞0.05）.结论 缺血后处理联合肢体缺血后处理能减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,其效果优于单独一种方法.     

缺血后处理对大鼠缺血-再灌注肺损伤血红素加氧酶-1表达的影响

目的 观察缺血后处理( IPO)对大鼠肺缺血-再灌注损伤(IRI)期间血红素加氧酶-1( HO-1)表达的影响,探讨其保护机制.方法 48只成年SD大鼠,随机(随机数字法)分成6组(n=8),假手术组(S组);缺血-再灌注组(I/R组):夹闭左肺门缺血45 min,再灌注105min;缺血后处理组(IPO.组):缺血后再灌注30 s,停灌30 s,反复3次,再恢复灌注102 min;氯化高铁血红素(Hemin)+缺血-再灌注组(HM+ I/R组):术前连续2d腹腔注射Hemin 40 μmol/(kg·d),余同I/R组;锌原卟啉Ⅸ+缺血后处理组(ZnPPⅨ+IPO组):术前24 h腹腔注射ZnPP Ⅸ20 mg/(kg·d),余同IPO组;氯化高铁血红素+假手术组(HM +S组).测定各组肺组织HO-1蛋白表达水平、动脉血氧分压(PaO2)、肺组织湿/干质量比(W/D)和血清丙二醛(MDA)含量,观察肺组织病理变化.组间比较采用单因素方差分析,组内比较采用配对t检验.结果 I/R组肺组织HO-1蛋白表达(0.177 ±0.015)与S组和HM+S组相比差异具有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),但与IPO组(0.194 ±0.017)及HM+ I/R组(0.209±0.013)相比差异具有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).各实验组PaO2均显著低于S组(90 ±11) mm Hg,IPO组和HM + I/R组PaO2与I/R组相比较,差异具有统计学意义(P＜0.01);I/R组较S组肺组织W/D、血清MDA含量升高,肺组织病理损伤严重,而IPO组和HM+ I/R组上述改变差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 早期短时程缺血后处理能明显减轻在体大鼠肺IRI,其作用机制与其上调HO-1蛋白表达及抑制脂质过氧化的损伤作用有关.     

脑小血管病大鼠步态异常与基底节区星形胶质细胞活化及炎性因子表达的关系

目的探讨脑小血管病(cerebral small vessel disease,CSVD)大鼠基底节区星形胶质细胞活化、炎性因子表达与白质病变后出现步态异常的关系。方法 48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组20只和观察组28只,观察组结扎双侧颈总动脉制备CSVD模型,假手术组仅暴露双侧颈总动脉、不结扎。分别于术前、术后12周行锥形束测试,记录大鼠通过锥形束时间及滑足率,TTC染色观察大鼠基底节缺血区白质病变,Nissl染色观察大鼠基底节区神经元形态,免疫荧光法检测基底节离子钙接头蛋白分子-1(ionized calcium bindingadaptor molecule-1,Iba-1)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性表达星形胶质细胞数目,Western blot法检测大鼠基底节白细胞介素(interleukin,IL)-1、IL-6及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达。结果术后12周,假手术组基底节神经元形态正常、无缺血区域,观察组神经元明显皱缩、出现明显的缺血区域;观察组术前通过锥形束时间[(13.25±1.37)s]及滑足率[(11.78±1.16)%]与假手术组[(12.75±1.65)s、(12.26±1.08)%]比较差异均无统计学意义(P0.05);观察组术后12周通过锥形束时间[(13.75±1.99)s]与假手术组[(13.35±1.75)s]比较差异无统计学意义(P0.05),滑足率[(29.91±1.44)%]高于假手术组[(12.85±1.52)%](P0.05);术后12周,观察组大鼠基底节区Iba-1、GFAP阳性表达星形胶质细胞数目[(50.50±1.87)%、(52.66±2.50)%]较假手术组[(19.66±1.21)%、(15.50±1.51)%]多(P0.05),IL-1(0.76±0.02)、IL-6(1.00±0.05)、TNF-α(0.93±0.03)表达均高于假手术组(0.55±0.02、0.80±0.01、0.53±0.02)(P0.05)。结论 CVSD大鼠基底节星形胶质细胞异常活化引起促炎因子水平增高,通过炎性反应损伤脑白质,引起步态异常。     

米帕明对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织一氧化氮浓度和一氧化氮合酶活性的影响

目的:观察米帕明对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中含一氧化氮浓度和一氧化氮合酶活性的影响。方法:实验于2005-03/12在解放军总医院老年心血管病研究所生化药理实验室进行。①选用健康Wistar大鼠96只,随机分成假手术组、模型组、尼莫地平组和米帕明组4组,每组24只。②米帕明组腹腔注射米帕明10mg/kg,尼莫地平组腹腔注射尼莫地平2mg/kg,假手术组和模型组腹腔注射等容积生理盐水;60min后用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,假手术组尼龙线的头端不插入颈内动脉。③于缺血2h再灌注2,12和24h每组随机取6只大鼠断头,测定脑组织中一氧化氮浓度和一氧化氮合酶活性。每组剩余6只再灌注2h处死取脑,光镜下观察脑组织病理变化。结果:96只大鼠进入结果分析。①一氧化氮浓度:模型组、尼莫地平组和米帕明组再灌注2,12和24h均高于假手术组(P<0.05);尼莫地平组再灌注2,12和24h均低于模型组[(45.99±8.13),(40.63±3.13),(36.72±4.38)μmol/L;(65.54±6.01),(57.08±4.79),(48.13±5.12)μmol/L;P均<0.05];米帕明组再灌注2h和24h也低于同期模型组[(55.98±6.89),(39.42±4.28)μmol/L;P均<0.05]。②一氧化氮合酶活性:模型组、尼莫地平组和米帕明组再灌注2,12和24h均高于假手术组(P<0.05);尼莫地平组和米帕明组各个时间点均低于模型组(P<0.05)。③脑组织病理变化:尼莫地平组和米帕明组神经元损伤较模型组轻。结论:米帕明可降低局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中一氧化氮浓度和一氧化氮合酶活性,从而对大鼠脑缺血再灌注有保护作用,其效果与尼莫地平相似。     

TLR4/NF-κB参与缺血后处理大鼠脊髓保护作用机制研究

目的探讨Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路在缺血后处理介导大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护中作用,为缺血后处理用于脊髓保护提供新的理论支持。方法成年雄性SD大鼠80只随机分为5组(每组16只):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(Post C组)、TLR4拮抗剂TAK-242+I/R组(I/R+T组)、后处理+TAK-232组(Post C+T组)。Sham组分离血管但不阻断;I/R组分离腹主动脉夹闭20 min后开放;Post C组缺血20 min后,于再灌注即刻行再灌注30 s/缺血30 s处理,重复3次,然后行完全再灌注;I/R+T组缺血前尾静脉注射TAK-232(10 mg/kg),余同I/R组;Post C+T组缺血前尾静脉注射TAK-232,余同Post C组。各组动物在再灌注24 h、48 h行神经行为学评分;再灌注48 h取L4-6段脊髓,采用免疫荧光染色及Western blot技术检测脊髓组织中TLR4及NF-κB表达。结果与I/R组相比,其余各组再灌注24 h、48 h神经行为学评分均改善(P0.05);而给予TLR4拮抗剂TAK-242可逆转后处理的神经保护作用,即与Post C组相比,再灌注24 h、48 h Post C+T组神经行为学评分均增加(P0.05)。与I/R组相比,其余各组再灌注48 h脊髓组织中TLR4表达均显著减少(P0.05);与Post C组相比,Post C+T组TLR4表达显著减少(P0.05)。与I/R组相比,其余各组再灌注48 h脊髓组织中NF-κB表达均显著减少(P0.05);与Post C组相比,Post C+T组NF-κB表达则显著增加(P0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路参与缺血后处理介导大鼠脊髓的保护作用。     

芹菜素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用研究

目的探讨芹菜素在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和芹菜素组,每组8只。对照组给予生理盐水10 mg/(kg·d)灌胃15d后行假手术处理,模型组、芹菜素组分别给予10mg/(kg·d)生理盐水、低剂量芹菜素10mg/(kg·d)灌胃15d后,制作大鼠肾脏缺血再灌注模型。术后取各组肾脏组织行HE染色并行组织坏死评分、超氧化物歧化酶活力检测及肾组织细胞凋亡检测,计算肾小管上皮细胞凋亡指数。结果模型组肾组织超氧化物歧化酶活力[(173.55±15.11)u/mgprot]低于芹菜素组[(439.00±10.75)u/mgprot]和对照组[(514.14±18.37)u/mgprot],芹菜素组低于对照组(P0.05);模型组肾小管上皮细胞坏死评分[(3.53±0.10)分]和肾小管上皮细胞凋亡指数(52.11±2.81)高于芹菜素组[(1.63±0.09)分、16.15±1.06]和对照组[(0.12±0.02)分、0.19±0.07],芹菜素组高于对照组(P0.05)。结论芹菜素对大鼠肾急性缺血再灌注损伤有一定肾保护作用。     

促红细胞生成素预处理对肢体缺血再灌注损伤的影响

目的:观察促红细胞生成素预处理对骨骼肌缺血再灌注损伤的影响。方法:实验于2004-08/2005-01在解放军第二五二医院中心实验室完成。①采用大鼠右后肢缺血再灌注模型,将30只实验大鼠随机分为3组,每组10只。假手术组:仅显露股血管鞘,不做缺血再灌注,经腹腔注射同体积生理盐水;对照组:经腹腔注射同体积生理盐水,持续缺血4h,再灌注1h。促红细胞生成素预处理组(预处理组):经腹腔注射5000u/kg人重组促红细胞生成素,24h后持续缺血4h,再灌注1h。②测定各组血清磷酸激酶,乳酸脱氢酶丙二醛和腓肠肌99Tcm亚甲基二磷酸钠吸收量变化。③电镜观察腓肠肌超微结构变化。结果:30只大鼠全部进入结果分析。①对照组和预处理组血清磷酸激酶[(121.627±18.112),(84.417±14.594)μkat/L]、乳酸脱氢酶[(20.065±4.676),(13.354±5.229)μkat/L]明显高于假手术组[(50.247±16.066),(7.732±1.256)μkat/L](P<0.05);对照组和预处理组丙二醛[(10.36±2.65),(6.55.±2.19)nmol/L]及99Tcm亚甲基二磷酸钠吸收量[(16.69±3.14),(11.66±3.87)%/(g·min)]均明显高于假手术组[(3.54±1.89)nmol/L,(9.12±1.96)%/(g·min)(P<0.05)]。②预处理组各指标与对照组相比显著降低(P<0.05)。结论:促红细胞生成素对肢体骨骼肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

辛伐他汀对局部脑缺血大鼠线粒体的抗氧化效应

目的:观察辛伐他汀对局部脑缺血损伤大鼠的神经保护作用及其线粒体机制。方法:实验于2005-03/08在广州医学院生理实验室进行。取72只SD雄性大鼠,随机分为正常对照组、缺血模型组、辛伐他汀组3组,每组24只。辛伐他汀组大鼠灌胃辛伐他汀20mg/kg,1次/d,连续7d,最后一次灌胃1h后缺血模型组和辛伐他汀组大鼠线栓法复制左侧脑缺血2h再灌注模型,正常对照组仅分离动脉,不缺血。观察各组大鼠术后24h神经功能评分(3～18分,评分越高越好)、脑含水量、脑梗死体积以及脑组织线粒体超氧化物歧化酶、丙二醛、NO和Na -K ATPase的改变。结果:经补充后72只大鼠进入结果分析。①神经功能评分:辛伐他汀组明显高于缺血模型组(15.87±0.83,14.25±0.71,P<0.01)。②脑含水量:辛伐他汀组明显低于缺血模型组[(79.56±1.14)%,(81.13±1.36)%,P<0.05]。③脑梗死体积:辛伐他汀组明显低于缺血模型组[(173.7±15.92),(239.94±22.01)mm3,P<0.01]。④脑组织线粒体超氧化物歧化酶和Na -K ATPase活性:辛伐他汀组明显高于缺血模型组(P<0.05)。⑤脑组织线粒体丙二醛和NO含量:辛伐他汀组明显低于缺血模型组(P<0.01)。结论:辛伐他汀可能通过抑制大脑中动脉阻断后引起的脑内线粒体脂质过氧化反应,减少自由基的生成,稳定线粒体功能,增加ATP的生成,从而对缺血脑组织产生保护作用。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑损伤后线粒体Ca~(2+)、细胞色素C的影响

目的观察缺血预处理对大鼠局灶性脑损伤后线粒体Ca2+、细胞色素C的影响。方法用大鼠右侧大脑中动脉阻闭制成局灶性脑缺血模型。24只大鼠,每组8只,随机分为缺血预处理组、模型组和假手术组。缺血预处理组给予30 min预缺血,72 h再灌注,后续2 h缺血,4 h再灌注。用张均田的改良方法测定细胞色素C含量。用火焰原子吸收法检测线粒体Ca2+含量。结果缺血预处理组动物的细胞色素C、Ca2+,与假手术组相比差异显著(P0.05,P0.01),缺血预处理组与模型组相比差异显著(P0.05,P0.01)。结论缺血预处理减少线粒体释放细胞色素C,维持线粒体Ca2+稳态     

缺血后处理对急性心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗再灌注损伤的保护作用

目的 探讨缺血后处理对急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)再灌注损伤的保护作用.方法 2006年10月至2009年1月在北华大学附属医院心内科住院的AMI患者于12h内行直接PCI者64例,随机分为对照组(单纯再灌注组,34例)及缺血后处理组(30例).对照组给予单纯再灌注治疗;缺血后处理组采用再灌注30 s/再缺血30 s,交替3次持续灌注的方法.对比观察指标:再灌注心律失常的发生,冠状动脉血流速度评价(CTFC),入院72 h心肌酶动态变化及其峰值比较,室壁运动记分(WMSI)和心脏收缩功能测定,QRS积分法测定心肌梗死面积,心肌灌注分级测定.结果 快速性心律失常的发生率缺血后处理组显著低于对照组[58.82%比23.33%,χ~2=8.23,P<0.01].缓慢性心律失常的发生率在缺血后处理组亦显著低于对照组[26.47%比6.67%,χ~2=4.39,P<0.05].缺血后处理组与对照组比较肌酸磷酸激酶(CK)峰值[(1162.10±547.82)U/L与(1732.30±480.10)U/L,t=4.44]、肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)峰值[(164.70±69.67)U/L与(280.12±99.24)U/L,t=5.318]显著减少(P均<0.01);QRS积分法心肌梗死面积显著减少(P<0.05);CTFC、WMSI、射血分数(EF)及心肌灌注分级(MBG)显著优于对照组(P均<0.01).结论 缺血后处理能够减轻急性心肌梗死PCI再灌注损伤,有明显的心肌保护作用,其临床应用价值可能在不久的将来得到进一步的证实.     

STF083010对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的肾保护作用

目的探讨STF083010对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)的肾保护作用。方法健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、IRI组与STF083010组,每组10只。假手术组大鼠开腹后仅分离双侧肾动脉,不夹闭肾动脉;IRI组和STF083010组大鼠采用无创动脉夹同时夹闭左、右肾动脉45 min后放开,建立IRI模型;STF083010组大鼠建立IRI模型前2h腹腔注射STF083010 15mg/kg。缺血再灌注24h后,应用全自动生化仪检测3组大鼠血清尿素氮和肌酐水平,3组大鼠均行肾组织病理学PAS染色,采用免疫组织化学法检测肾组织XBP1、GRP78蛋白阳性表达率,采用实时荧光定量PCR检测肾组织XBP1、GRP78 mRNA表达水平。结果IRI组血清肌酐[(322.10±18.93)μmol/L]、尿素氮[(41.16±3.09)mmol/L]水平、肾小管损伤评分(202.50±9.15)高于STF083010组[(149.70±14.80)μmol/L、(25.22±3.81)mmol/L、129.50±5.49]和假手术组[(49.58±2.82)μmol/L、(7.56±0.70)mmol/L、25.88±1.46](P0.05),STF083010组高于假手术组(P0.05);IRI组和STF083010组大鼠肾组织GRP78蛋白阳性表达率[(27.16±3.98)%、(58.72±7.12)%]、GRP78 mRNA表达水平(0.086±0.007、0.335±0.023)、XBP1蛋白阳性表达率[(56.32±5.21)%、(29.83±3.78)%]、XBP1mRNA表达水平(0.172±0.053、0.088±0.054)高于假手术组[(4.86±2.30)%、0.015±0.001、(5.68±1.37)%、0.039±0.004](P0.05),STF083010组GRP78蛋白阳性表达率和GRP78mRNA表达水平高于IRI组,XBP1蛋白阳性表达率和XBP1mRNA表达水平低于IRI组(P0.05)。结论 STF083010可通过抑制XBP1表达,增加GRP78表达保护大鼠肾功能。