补阳还五汤对兔脑脊液漏模型VEGF表达的影响

目的:观察补阳还五汤对兔脑脊液漏模型VEGF表达的影响。方法:选择清洁级成年大耳白兔共30只,采用随机数字表法分为假手术组、模型对照组和补阳还五汤组各10只,对模型对照组和补阳还五汤组制备脑脊液漏模型,补阳还五汤组予补阳还五汤灌胃,剂量6.67g/Kg,其余两组予等剂量0.9%氯化钠注射液灌胃。在灌胃第7天、第14天时,各组分别随机选取5只实验兔,手术取出脊膜切口部位血肿机化物,采用免疫组织化学法检测VEGF表达,并进行比较。结果:与假手术组及模型对照组比较,灌胃第7天、第14天补阳还五汤组VEGF表达均明显增加(P0.05)。结论:补阳还五汤可增加兔脑脊液漏模型局部VEGF的表达,促进脊膜损伤部位愈合。     

补阳还五汤对肾间质纤维化大鼠模型胶原纤维和TGF-β1的作用

目的:观察补阳还五汤对单侧输尿管结扎肾间质纤维化大鼠模型胶原纤维和TGF-β1的作用。方法:将SD大鼠随机分为假手术对照组和单侧输尿管结扎造模组(UUO),造模大鼠再被随机分为模型组、补阳还五汤治疗组(12g/kg)和依那普利组(10mg/kg)。大鼠分别在第7、14、28天进行肾功能、Masson染色和免疫组化检测。结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾功能显著下降;依那普利和补阳还五汤干预后,肾功能显著提高。光镜显示模型组大鼠出现显著间质纤维化,依那普利和补阳还五汤干预显著减轻了肾小管损害。各个时间点,模型组肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达与假手术组相比,显著升高。通过依那普利和补阳还五汤干预在第7天时,显著降低肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达(P<0.05);用药第14、28天后,可进一步降低肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达(P<0.01)。结论:补阳还五汤治疗后,可改善单侧输尿管结扎大鼠肾功能和肾小管间质纤维化,降低胶原纤维和TGF-β1的表达,对拮抗肾间质纤维化有一定的作用。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠TLR4表达的影响

目的探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠脑组织TLR4表达的影响。方法 72只大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,每组按给药后7、14、21 d 3个时间点再各分3组,用免疫组化、Western blot、RT-PCR法检测各组不同时间点TLR4的蛋白和基因表达。结果模型组和补阳还五汤组各时间点TLR4蛋白和mRNA表达均高于假手术组(P<0.05),补阳还五汤组在第7、14天TLR4蛋白表达明显低于模型组,但TLR4mRNA水平在第7天、14天却明显高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤通过调节缺血后脑组织TLR4的表达可能是其治疗脑缺血的作用机制之一。     

补阳还五汤合六味地黄汤对局灶性脑缺血大鼠脑组织bFGF表达的影响

目的观察补阳还五汤合六味地黄汤对局灶性脑缺血大鼠脑组织碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响及反方是否有协同作用。方法采用改良Haruo Nagasawa法复制老龄大鼠脑缺血模型,随机分为补阳还五汤合六味地黄汤组（即健脑通络汤组）、六味地黄汤组、补阳还五汤组、模型组、假手术组,观察各组术后24 h、72 h、7 d后脑组织bFGF的表达。结果六味地黄汤和补阳还五汤合用能协同提高急性持续脑缺血大鼠bFGF的表达,其作用优于单用,其中单用补阳还五汤优于单用六味地黄汤。结论通过诱导内源性bFGF的表达,可能是健脑通络汤进行脑保护的机制,补阳还五汤与六味地黄汤合用优于单用补阳还五汤。     

补阳还五汤对急性脊髓损伤大鼠NOD样受体蛋白1/半胱氨酸蛋白水解酶-1细胞焦亡通路的影响

目的:探究补阳还五汤对急性脊髓损伤(SCI)大鼠NOD样受体蛋白1(NLRP1)/半胱氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)细胞焦亡通路的影响。方法:将32只SPF级大鼠随机分成假手术组、甲强龙组、补阳还五汤(BYHWT)组和模型组,造模成功后补阳还五汤组每天给予补阳还五汤灌胃1次,连续14d,甲强龙组给予甲强龙冲击治疗;假手术组及模型组注射等补阳还五汤剂量的生理盐水;干预后的第1,3,7及14天以BBB评分评价大鼠神经功能恢复情况,Western Blot法检测损伤脊髓中组织NLRP1,Caspase-1及IL-18蛋白的表达。结果:BBB评分:假手术组大鼠评分无变化,BYHWT组及甲强龙组治疗后3d,7d及14d评分大于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后7d及14d,各组大鼠评分变化不明显。干预后第14天大鼠损伤脊髓组织中NLRP1,Caspase-1及IL-18蛋白的表达结果:BYHWT组和甲强龙组蛋白表达均低于假手术组,高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补阳还五汤联合脊髓减压治疗急性SCI效果明显,作用机制可能是通过抑制NLRP1/Caspase-1通路以减少细胞焦亡。     

补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏肌成纤维细胞异常转化的机制研究

目的:通过观察补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏TGF-β_1/Smads通路信号分子的表达作用,阐释补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏肌成纤维细胞异常转化,延缓肾脏病理损伤的作用。方法:将20只雄性盐抵抗大鼠(dahl salt resistant rat,SS)随机分为正常对照组,中药对照组,20只雄性dahl盐敏感大鼠(dahl salt sensitive rat,DS)随机分为模型组和中药治疗组,每组10只。高盐饲料喂养12 d后,中药对照组和中药治疗组予以补阳还五汤灌胃治疗,每日1次,共治疗5周。治疗结束后取大鼠左肾组织检测TGF-β_1Smad2 Smad7及α-SMA的mRNA表达和P-Smad2蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β_1Smad2和α-SMA的mRNA表达升高(P0.05),Smad7mRNA表达降低(P0.05),P-Smad2蛋白表达升高(P0.05);补阳还五汤治疗后,与模型组比较中药治疗组TGF-β_1Smad2和α-SMA的mRNA表达降低(P0.05);Smad7mRNA表达升高(P0.05),P-Smad2蛋白表达降低(P0.05)。结论:补阳还五汤可能是通过调节肾脏TGF-β_1/Smads通路相关信号分子的表达抑制肌成纤维细胞异常转化,延缓肾脏病理损伤。     

补阳还五汤对心肌梗死后大鼠心肌微血管密度及血管内皮细胞生长因子-C表达的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠心肌梗死后左室非梗死区心肌微血管新生的影响。方法雄性Wistar大鼠,结扎左冠状动脉主干造成心肌梗死模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组及补阳还五汤低、中、高剂量组,加上假手术组,共5组,每组12只。补阳还五汤低、中、高剂量组分别按9.25、18.5、37 g/（kg.d）给予补阳还五汤水煎剂灌胃,假手术组、模型组给予0.2 mL/10 g生理盐水灌胃。连续给药12周后处死大鼠。免疫组化法检测心肌Ⅷ因子的表达,Westren blot及免疫组化法检测血管内皮细胞生长因子-C（VEGF-C）的表达。结果假手术组和不同剂量补阳还五汤组血管密度和VEGF-C的表达明显高于模型组（P〈0.001）;补阳还五汤中剂量组VEGF-C的表达与假手术组相当（P〉0.05）,补阳还五汤高剂量组VEGF-C表达高于假手术组（P〈0.01）。结论补阳还五汤可以促进心肌梗死后大鼠左室非梗死区血管新生,并且呈剂量依赖性,补阳还五汤促血管新生作用可能与升高VEGF-C表达有关。     

补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1及其基因表达的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中TGF-β1及其基因表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%,10%,20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%,10%,20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清中TGF-βl的表达,采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测细胞中的TGF-βl蛋白基因的表达。结果:与模型组比较,阳性组和20%含药血清组,10%含药血清组肺纤维化大鼠成纤维细胞中TGF-β1的表达均有显著减少(P0.01),5%含药血清组细胞中TGF-β1的表达有减少趋势,3组不同浓度的补阳还五汤含药血清作用效果表现出一定的量效关系;与模型组比较,阳性组和20%含药血清组肺纤维化大鼠成纤维细胞中TGF-β1蛋白基因的表达均有显著减少(P0.01);10%含药血清组TGF-β1蛋白基因的表达减少(P0.05),5%含药血清组TGF-β1蛋白基因的表达有减少趋势,三组不同浓度的补阳还五汤含药血清作用效果表现出一定的量效关系。结论:补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-βl及TGF-βl蛋白基因的表达,这可能是其防治肺纤维化作用的机制之一。     

补阳还五汤对急性脑缺血大鼠血管新生影响的实验研究

目的探讨补阳还五汤对急性脑缺血大鼠血管新生的影响。方法采用大脑中动脉线栓法建立急性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和尼莫地平组,给予不同处理,给药7d后处死大鼠,采用免疫组织化学法观察脑缺血区微血管密度（MVD）的变化及脑组织血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达情况,同时评价动物神经功能。结果与模型组比较,补阳还五汤组能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,MVD显著升高,并增强VEGF和bFGF的表达。结论补阳还五汤可促进急性脑缺血大鼠缺血区血管新生,增强脑组织VEGF和bFGF的表达,可能是其抗脑缺血的作用机制之一。     

补肺汤对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β_1表达影响的研究

目的:观察补肺汤对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织中转化生长因子(TGF-β1)表达的影响。方法:SD大鼠96只,随机分成正常组、模型组、补肺汤治疗组和强的松组,每组24只。除正常对照组给予生理盐水外,其余各组均予气管内注射博莱霉素诱导肺纤维化。各组在造模后第2天分别予生理盐水、生理盐水、补肺汤流浸膏、强的松混悬液灌胃,并于造模后第7、14、28天分批分组处死8只大鼠。取右肺行HE染色,观察肺组织形态学变化,免疫组化观察各组大鼠肺组织中TGF-β1蛋白的表达。结果:与模型组比较,补肺汤组和强的松组的病理形态学变化明显减轻,肺泡炎及纤维化积分明显降低;肺组织TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.01)。结论:抑制肺组织TGF-β1的表达可能是补肺汤抗肺纤维化作用的机制之一。     

补阳还五汤对猪冠状动脉支架植入术后支架早期内皮化及内皮祖细胞的影响

目的 研究补阳还五汤对猪冠状动脉支架植入术后（简称“猪冠脉支架后”）支架早期内皮化的作用以及对内皮祖细胞（EPCs）功能调节的机制。方法 雄性小香猪12只,每只猪均植入1枚3.0 mm×18.0 mm的火鹰支架,制作猪冠状动脉球囊损伤支架植入模型,分为治疗组（补阳还五汤+常规西药治疗）和对照组（常规西药治疗）2组。每组6只猪,共干预30 d。通过对该模型的实验研究,观察补阳还五汤对猪冠脉支架后内皮化的影响。采用光学相干断层扫描检测（OCT）评估支架内皮化的情况,流式细胞技术研究补阳还五汤对外周循环EPCs数量的影响,并以体外培养的方法,研究补阳还五汤对EPCs的血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响。结果 (1)动物实验结果显示,与对照组比较,治疗组能够促进支架内皮化,支架表面内皮覆盖率更高;术后第3天、第5天、第7天外周循环EPCs的数量显著增多,差异有统计学意义（P<0.001）。(2)体外EPCs培养结果显示,与对照组比较,治疗组术后第7天VEGF和bFGF的表达升高（P<0.05）。结论 补阳还五汤可增加猪冠脉支架后模型外周循环E...     

补阳还五汤联合间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠bFGF mRNA表达的影响

目的探讨补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脑缺血损伤的神经保护机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、MSCs移植组(MSCs组)、补阳还五汤联合MSCs移植组(联合组),每组12只。建立局灶性脑缺血再灌注模型,MSCs组、联合组从尾静脉注入MSCs,联合组并给予补阳还五汤,给药10天后检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达情况。结果 MSCs组与联合组均能上调大鼠脑组织bFGFmRNA表达水平,与模型组和假手术组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),联合组表达明显高于MSCs组(P<0.05)。结论补阳还五汤联合MSCs移植能通过上调脑组织bFGFmRNA表达水平,促进内源性神经营养因子bFGF基因表达而起对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

化瘀壮骨汤对胫骨骨折模型大鼠骨痂中TGF-β1、bFGF及BMP-7表达的影响

目的:探讨化瘀壮骨汤对胫骨骨折(闭合性)模型大鼠骨痂中转化生长因子β1蛋白(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的影响。方法:随机取清洁级SD大鼠48只,制造骨折(闭合性)模型,并随机分为两组各24只,模型组骨折后给予生理盐水灌胃,化瘀壮骨组骨折后给予化瘀壮骨汤灌胃。观察两组骨折后3天、1周、2周、4周时苏木精-伊红染色情况及骨痂中TGF-β1、bFGF及BMP-7表达情况。结果:骨折1周后,化瘀壮骨组及模型组骨折病理变化差异不明显,骨折后2周及4周时化瘀壮骨组骨折病理修复比模型组明显(P0.05);化瘀壮骨组骨折1周、2周、3周及4周时TGF-β1、bFGF及BMP-7表达与模型组比较,均有程度不同的升高(P0.05)。骨折2周时化瘀壮骨组bFGF表达明显高于模型组(P0.05);骨折3周时化瘀壮骨组TGF-β1、BMP-7表达明显高于模型组(P0.05)。结论:化瘀壮骨汤对骨折的愈合有促进作用,其作用机制可能与促进骨痂中TGF-β1、bFGF及BMP-7表达有关。     

补阳还五汤对家兔易损斑块内新生血管的影响研究

[目的]研究补阳还五汤对兔动脉粥样硬化斑块内新生血管的影响及机制。[方法]选取50只雄性新西兰白兔为研究对象,将其随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组,12周后处死。取斑块组织苏木精-伊红(HE)染色评估斑块破裂出血情况;取冰冻斑块组织,采用免疫荧光染色,评估血管密度情况;采用酶联免疫吸附(ELISA)及蛋白印记测定血中及斑块内碱性成纤维生长因子(b FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)表达情况。[结果]补阳还五汤组斑块破裂数明显少于模型组(P0.05)斑块内b FGF、PDGF表达与模型组比较有统计学差异(P0.05)。[结论]补阳还五汤具有稳定易损斑块的作用,其机制可能与增加斑块内b FGF、PDGF表达,促进血管成熟有关。     

基于TGF-β1/Smads通路研究补阳还五汤对心衰大鼠心肌重塑的干预作用

目的:基于TGF-β1/Smads通路研究补阳还五汤对心衰大鼠心肌重塑的干预作用。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术对照组、心衰组、补阳还五汤12.7、25.4 g/kg组、厄贝沙坦25 mg/kg组,采用腹主动脉缩窄法建立心衰模型,灌胃给予相应药物或生理盐水,每日1次,连续8 w。检测心功能超声参数、血清心衰标志物脑钠肽(BNP)及血管紧张素-Ⅱ(AT-Ⅱ)、心肌HE染色及Masson染色、心肌中胶原蛋白的含量及TGF-β1/Smads通路分子的表达。结果:与假手术对照组比较,心衰组大鼠的LVEDD、LVESD、血清BNP、AT-Ⅱ含量、心肌中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的含量、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达量明显增加,LVEF明显减少;与心衰组比较,补阳还五汤12.7 g/kg、25.4 g/kg组、厄贝沙坦25 mg/kg组大鼠的LVEDD、LVESD、血清BNP、AT-Ⅱ含量、心肌中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的含量、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达量明显减少,LVEF明显增加。结论:补阳还五汤能够改善心衰大鼠的心功能及心肌重塑,该作用可能与抑制TGF-β1/Smads通路有关。     

健脑通络汤对缺血大鼠脑组织神经营养因子含量影响的研究

目的 从神经营养因子环节探讨健脑通络汤(即补阳还五汤合六味地黄汤)抗脑缺血损伤的机制,并观察补阳还五汤与六味地黄汤是否有协同作用.方法 采用改良Haruo Nagasawa法复制老龄大鼠脑缺血模型,随机分为健脑通络汤组、六味地黄汤组、补阳还五汤组、模型组、假手术组,观察各组术后24h、72h、7d脑组织TGF-β1、GDNF的表达.结果 健脑通络汤能提高急性持续脑缺血大鼠的TGF-β1、GDNF阳性细胞总数,使其表达增强,其作用优于单用,其中单用补阳还五汤优于单用六味地黄汤.结论 通过诱导内源性神经营养因子的表达,可能是健脑通络汤脑保护的作用机制.     

补阳还五汤对局灶性脑缺血后星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后不同时间点谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)的影响。方法改良线栓法建立大脑中动脉栓塞/再灌注模型,术后进行补阳还五汤灌胃,每天2次,模型组给予等量的生理盐水。分别于第1天、第3天、第5天和第7天灌注取材,采用免疫荧光染色法检测各组大鼠星形胶质细胞GS的表达,免疫荧光双染确定GS的细胞定位。结果同假手术组相比,模型组海马CA1区GS的表达显著下降;同模型组相比,补阳还五汤组可显著提高海马CA1区GS表达,其中第3天和第5天GS达到最高水平。免疫荧光双染表明GS主要表达于星形胶质细胞。结论补阳还五汤可以提高大鼠脑缺血后海马CA1区星形胶质细胞GS的表达,从而增强星形胶质细胞转运谷氨酸的能力。     

补阳还五汤含药血清对TGF-β1诱导的人肺动脉内皮细胞Dll4/Notch4信号的调控作用

目的:观察补阳还五汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAEC)Dll4/Notch4信号的调控作用。方法:以53.36 g/(kg·d)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,TGF-β1诱导建立内皮间质转化(EndMT)模型,设立空白组(10%空白血清)、模型组(10%空白血清+TGF-β1)、DAPT组(10%空白血清+DAPT+TGF-β1)、10%含药血清组(10%含药血清+TGF-β1)、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和2.5%含药血清组(2.5%含药血清+7.5%空白血清+TGF-β1)6组。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1蛋白的表达,采用免疫共沉淀(Co-IP)法检测各组HPAEC细胞NICD4与CBF1的相互作用。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01),且NICD4与CBF1有结合作用;与模型组比较,DAPT组和补阳还五汤各剂量含药血清组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA及蛋白表达均降低,NICD4与CBF1的结合被抑制,随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可抑制TGF-β1诱导的HPAEC细胞的Dll4/Notch4信号,这可能是其干预内皮间质转化的机制之一。