高糖对体外培养肾小球及肾小球系膜细胞分泌TNF的影响

采用酶联免疫吸附实验观察两种不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠肾小球及ＧＭＣ分泌ＴＮＦ的影响，结果表明：分别２４，１６小时后，与对照组相比肾小球与ＧＭＣ分泌ＧＮＦ明显增加，Ｐ〈０．０１。不同浓度的葡萄糖环境对肾小球与ＧＭＳ分泌ＴＮＦ的影响无明显差异，Ｐ〉０．０５。     

冬虫夏草对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的:研究冬虫夏草对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定冬虫夏草对肾小球系膜细胞增殖的影响。结果:冬虫夏草抑制脂多糖刺激的大鼠系膜细胞增殖(P<0.05)。结论:冬虫夏草对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖有抑制作用。     

肾小球系膜细胞增殖抑制的研究进展

肾小球系膜细胞异常增殖对肾小球疾病进展有重要作用,探讨其发生机制对肾小球疾病的防治具有重要意义.本文综述了近年来肾小球系膜细胞增殖机制及抑制因子的研究进展.     

生长代谢类激素对肾小球系膜细胞增殖及系膜基质合成的影响

肾小球系膜细胞增生和硬化是多种病理类型肾炎的共同病理特征,大量临床和实验研究证明体内多种内分泌、旁分泌和自分泌的细胞因子或生长因子参与和调节肾小球系膜细胞增生和硬化。我们探讨内分泌代谢因素在肾小球硬化中的作用,应用细胞培养的方法研究了生长代谢类激素对系膜增殖及分泌纤维连结蛋白(FN)的影响作用,旨在探讨系膜增生的细胞生物学机制。 1 材料与方法     

细胞因子对体外培养大鼠肾小球及肾小球系膜细胞分泌TNF的影响

采用ＥＬＩＳＡ法，观察了正常大鼠肾小球及ＧＭＣ在体外培养期间分泌ＴＮＦ的变化规律及不同细胞因子对其分泌ＴＮＦ的影响。结果表明：体外培养的肾小球与ＧＭＣ具有分泌ＴＮＦ的功能，而且不同的时相ＴＮＦ分泌的量不等。ＩＬ－１对其分泌ＴＮＦ无影响。ＩＬ－６抑制肾小球分泌ＴＮＦ，但促进ＧＭＣ分泌ＴＮＦ。ＥＴ－１能明显促进ＴＮＦ的分泌，而且促进的幅度与其浓度成正比。     

醛固酮及其受体拮抗剂对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 研究醛固酮(ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(SPI)对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响.方法 应用MTT法检测系膜细胞增殖,用流式细胞术检测细胞周期各时相的百分比.结果 MTT结果显示,ALD抑制肾小球系膜细胞增殖(与对照组比较P＜0.01),并具有一定的剂量依赖和时间依赖性,SPI能拮抗其作用.流式细胞术结果显示,ALD作用于系膜细胞24 h,G1期细胞数增多,S期细胞数减少(与对照组比较,P＜0.01).结论 ALD通过调控细胞周期抑制肾小球系膜细胞增殖.     

肝素衍生物结构与抑制高糖引起人系膜细胞增殖的关系研究

目的考察肝素结构与抑制高糖引起人肾小球系膜细胞增殖活性之间的关系。方法采用化学修饰的方法制备2,3-O-脱硫酸肝素、6-O-脱硫酸肝素、N-脱硫酸肝素、高碘酸氧化/硼氢化钠还原肝素、羧基还原肝素和多硫酸化肝素,通过比浊法测得硫酸基团含量,核磁图谱分析肝素修饰物;MTT法比较这些肝素修饰物对高糖引起人肾小球系膜细胞增殖的抑制活性。结果多硫酸化肝素抑制活性显著增加,羧基还原肝素、高碘酸氧化/硼氢化钠还原肝素抑制活性相对肝素没有明显改变,而2,3-O-脱硫酸肝素、6-O-脱硫酸肝素和N-脱硫酸化肝素抑制活性显著降低。结论抑制活性大小的顺序和硫酸基团含量大小顺序一致,说明肝素中硫酸基团的含量是影响肝素抑制高糖引起人肾小球系膜细胞增殖的主要因素。     

L-精氨酸对人肾系膜细胞增殖的影响

目的　探讨L arg对人肾系膜细胞增殖的影响及其作用机制。方法　分别运用MTT法及细胞免疫组化、流式细胞仪等技术研究L arg对人肾系膜细胞增殖的影响。 结果　L arg抑制人系膜细胞增殖呈浓度、时间依赖性 ;L arg组系膜细胞PCNA表达增加 ,但细胞绝对数下降 ;流式细胞仪检测显示 ,L arg干预后大量的细胞阻滞在S期 ,L arg的浓度越高 ,阻滞作用越明显。结论　L arg对人系膜细胞增殖具有抑制作用 ,其机制可能与抑制细胞有丝分裂有关。     

益肾蠲湿合剂对肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的观察益肾蠲湿合剂对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及细胞外基质的抑制作用。方法将含低、中、高剂量益肾蠲湿合剂的药物血清作用于10％血清-DMEM培养液培养的GMC,分别用噻唑蓝和酶联免疫吸附（ELISA）方法检测细胞增殖和培养液中基质的浓度。结果益肾蠲湿合剂对GMC增殖有明显的抑制作用,并随着剂量的增加作用也逐渐增强（72h低、中、高剂量的抑制率分别为28．3％、40．5％、47．5％）。同时益肾蠲湿合剂对GMC分泌细胞外基质有也明显的抑制作用（高剂量组对FN、LN及ColⅣ的抑制率分别为26．1％、25．4％、22．3％,中剂量组分别为17．4％、20．5％、15．9％;低剂量组分别为10．4％、10．7％、9．3％）。结论益肾蠲湿合剂对GMC的增殖及基质的分泌有明显的抑制作用,这可能是其有效抑制各种慢性肾炎发展的重要原因。     

家兔肾小球系膜细胞培养

肾小球系膜细胞 (ＧＭＣ)是肾小球中功能最活跃的一类细胞 ,其具有多种功能 ,如分泌细胞基质 ,产生细胞因子 ,吞噬清除大分子物质及类似平滑肌细胞的收缩功能[1 ] 。因此ＧＭＣ的体外培养是研究肾小球疾病的发生、发展必不可少的手段之一[2 ] 。近年来我国多家实验室成功的培养了大鼠ＧＭＣ[3 ] 。本实验室在此基础上进行了技术改良 ,成功的培养了家兔ＧＭＣ ,现总结如下。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　试剂　Ⅰ号培养液ＲＰＭＩ 16 40(ＧＩＢＣＯ公司 ) ,丙酮酸钠 2ｍｍｏｌ Ｌ ,ＨＥＰＥＳ15ｍｍｏｌ Ｌ ,Ｌ 谷氨酰胺 30 0ｍｇ Ｌ ,青霉…     

灵芝多糖调节血糖血脂作用的实验研究

目的:研究灵芝多糖对四氧嘧啶致高血糖大鼠血糖、血脂水平及四氧嘧啶致高血糖小鼠、去甲肾上腺素致高血糖小鼠及正常小鼠血糖水平的影响.方法:制备四氧嘧啶致高血糖大鼠模型,给药4周后取血测定血糖及血脂水平;制备四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型及去甲肾上腺素致高血搪小鼠模型,给药2周后取血测定血搪水平.结果:灵芝多搪能明显降低四氧嘧啶所致搪尿病大鼠的血糖和血脂水平,其中高剂量组与模型对照组相比均有显著意义(P<0.05),并能明显降低四氧嘧啶所致糖尿病小鼠及去甲肾上腺素所致高血糖小鼠的血糖水平,其中高剂量组与模型对照组相比均有显著意义(P<0.05),而对正常小鼠血糖水平影响较小、低、中、高剂量组与正常对照组相比均无显著意义(P>0.05).结论:灵芝多糖对四氧嘧啶致高血糖大鼠有明显的降血搪、血脂作用,对四氧嘧啶致高血糖小鼠及去甲肾上腺素致高血糖小鼠具有明显降血搪作用,而对正常小鼠血糖水平影响较小.     

灵芝多糖含量测定显色方法的研究

目的优选出了灵芝多糖含量测定时显色条件的组合。方法通过正交试验优选出了灵芝多糖含量测定时显色条件的组合。结果:灵芝多糖含量测定时显色条件的组合为A_3B_3C_2,即5％苯酚1.6ml,硫酸7.5ml,反应时间26分钟。     

超微粉碎对灵芝中多糖、三萜的影响

目的：考察将灵芝粉碎成300目的超微粉,对灵芝中多糖、三萜的影响。方法：选择灵芝主要有效成分灵芝多糖、灵芝三萜的提取得率和液相图谱为考察指标,采用紫外分光光度法（UV）、高效液相色谱-二极管阵列检测器法（HPLC-PDA）、高效液相色谱-蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）,比较10目灵芝粉、80目灵芝细粉与300目超微粉中灵芝多糖、灵芝三萜的提取得率和液相图谱的变化。结果：灵芝经超微粉碎成300目的超微粉后,超微粉30 min的提取得率为10目粉90 min的2.3倍,为80目粉90 min的1.3倍;但从HPLC-ELSD图谱来看,超微粉碎后,高分子量灵芝多糖的溶出量并没有增加,在接近一万分子量部位的多糖反而减少。300目超微粉中灵芝三萜和甾醇与10目粉、80目粉相比,提取得率变化不大,液相图谱峰形也基本没有变化。结论：将灵芝粉碎成300目的超微粉,灵芝总多糖的提出率和溶出速度大幅提高,且对灵芝三萜基本没有影响,超微粉碎可显著提高灵芝的生物利用度。     

灵芝孢子粉中多糖的制备工艺研究

目的：针对灵芝孢子粉多糖的制备工艺进行研究。方法：以多糖转移率为指标,比较布袋包煎和搅拌提取两种工艺;采用单因素法,考察搅拌提取中料液比和提取次数对多糖提取的影响;根据滤液的性状,比较静置取上清液、离心、布袋滤过和板框滤过等多种滤过方法,优化滤过工艺。结果：灵芝孢子粉多糖的最佳制备工艺条件为：按料液比1：30加水至提取罐中,煮至100℃,投料,保温搅拌提取2min,静置24min,取上清液,离心,滤液先通过（5μm滤袋）,再板框滤过,滤液浓缩至相对密度为1．10（60℃）,醇沉,取沉淀减压干燥,千膏得率为3．26％,多糖含量为25．1％,多糖转移率97％。结论：该工艺可行有效,具有实际生产意义。     

黄芪多糖对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖作用研究

目的:研究黄芪多糖(APS)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的抑制作用。方法:以0(空白对照)、25、50、100 mg/ml APS培养细胞6、12、24 h后,MTT法测定细胞活力并计算抑制率。0(空白对照)、25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后,Hoechst33258荧光染色,荧光显微镜下观察细胞核形态;流式细胞仪检测细胞周期分布与凋亡情况;Western blot法检测细胞磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(ERK)1/2蛋白表达;酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞白细胞介素2(IL-2)、IL-6、IL-12含量。结果:与空白对照比较,100 mg/ml APS培养细胞6 h,50、100 mg/ml APS培养细胞12 h与25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后细胞抑制率升高。50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后,G0/G1期比例升高,G2/M、S期比例降低;IL-2、IL-6含量增加。25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后细胞凋亡率升高;细胞核出现碎块状致密浓染,并有凋亡小体出现;细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平降低,IL-12含量增加。以上差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:APS能抑制SH-SY5Y细胞增殖,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低ERK蛋白磷酸化水平和升高细胞因子水平有关。     

灵芝多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响研究

目的了解灵芝多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响。方法采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法),以灵芝多糖溶液连续灌胃小鼠后,经腹腔注射鸡红细胞悬液,取腹腔洗液制作涂片,固定染色后置于显微镜下观察,同时计数小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数目并计算吞噬率和吞噬指数,对结果进行统计学分析。结果①21g/kg、84g/kg组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数明显高于低剂量组和对照组,经统计学分析有显著性差异(P<0.05);②84g/kg组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数高于21g/kg剂量组,经统计学分析有显著性差异(P<0.05)。结论灵芝多糖能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,从而增强机体的免疫功能,但与剂量有关,低剂量灵芝多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能无明显影响,只有中、高剂量才能提高小鼠巨噬细胞免疫功能。     

藤茶总黄酮体外抗人肝癌细胞作用研究

目的:研究藤茶总黄酮体外抗人肝癌细胞的作用。方法:以MTT法、细胞生长曲线法、集落形成法观察藤茶提取物对人肝癌BEL7404细胞的体外抑制作用。结果:藤茶总黄酮能显著抑制体外培养的BEL7404细胞的生长。MTT法测得的半数抑制浓度(IC50)为28·59μg·mL-1;细胞生长曲线法提示藤茶总黄酮对BEL7404细胞的生长有显著的抑制作用;集落形成法提示当药物浓度在22·22μg·mL-1以上时IC50为100%,当药物浓度在14·81μg·mL-1时IC50为58·05%。结论:藤茶总黄酮对体外培养的BEL7404细胞有显著的抑制作用。     

离子注入选育灵芝多糖高产菌株及发酵条件优化

以美国大灵芝为出发菌株,利用N+离子注入技术选育出一株遗传性状稳定的灵芝多糖高产菌株。结果表明:在20 KeV2、×1016ions/cm2的注入条件下灵芝菌株G13的胞外多糖的产量为2.71 g/L,比对照菌株提高了15.32%。采用单因素法和正交实验法得到的培养基组分质量浓度优化组合为:葡萄糖45 g/L,玉米粉40 g/L,黄豆粉10 g/L,酵母膏0.5 g/L,VB125μg/L,KH2PO40.5 g/L,MgSO4.7H2O 0.1 g/L。进行分批发酵实验,发酵120 h灵芝胞外多糖的产量达到3.38 g/L。     

氨基胍对人翼状胬肉成纤维细胞增殖影响的体外试验研究

目的:观察氨基胍(AG)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响。方法:取人翼状胬肉标本进行体外贴壁细胞常规培养,传代至第3～5代细胞用于试验,以每孔1×104个细胞接种于培养板中,加入不同浓度(250、500、750、1000μmol.L-1)的AG作为AG组,另设不加AG的为对照组,检测作用24、48、72h后各孔的吸光度,并计算细胞增殖抑制率,每个时间点、每个浓度均设6个复孔。结果:人翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制率随AG浓度的增大和作用时间的延长明显升高(P<0.05)。结论:AG在受试浓度和受试时间范围内,对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞具有抑制作用且呈浓度、时间依赖性。