肝细胞对肝窦内皮细胞生长的支持作用

目的 探讨肝细胞在大鼠肝窦内皮细胞(hepatic sinus endothelial cell,HSEC)生长过程中的作用,并建立一种新的HSEC原代培养方法.方法 Ⅳ型胶原酶分离肝细胞,运用Pereoll建立的梯度密度离心以及选择性贴壁纯化HSEC,舍肝细胞条件培养液(HC-CM)的RPMI-1640培养液培养HSEC.结果 平均每只大鼠可获取2.55×107个HSEC,平均活力98%,培养24 h后纯度约91%.HC-CM有效刺激HSEC生长,促进细胞内DNA合成.HSEC体外生长保持良好的形态,维持5～6 d,扫描电镜下可见典型的"窗孔"样结构.结论 本实验方法能提供高活力的HSEC,肝细胞条件培养液内舍有多种营养因子支持HSEC生长.     

腺苷A2型受体在肝窦内皮细胞一氧化氮生成中的作用

目的研究腺苷A2型受体在肝窦内皮细胞(HSECs)一氧化氮生成中的作用。方法分别将腺苷、腺苷A1型受体激动剂R鄄PIA和腺苷A2型受体激动剂CGS21680与原代培养的HSEC共培养20min、40min、60min后,用RT鄄PCR测定HSECeNOSmRNA的表达,并测定HSEC内一氧化氮(NO)含量的变化。结果与对照组相比,腺苷和CGS21680都能促使HSEC内eNOSmRNA表达增加,提高HSEC内NO含量(P<0.05),而R鄄PIA却无此作用(P>0.05)。结论HSEC通过腺苷A2型受体的兴奋作用产生大量NO。     

外源性一氧化碳释放分子2对严重烧伤小鼠肝脏炎性反应的抑制作用

目的 观察外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）对严重烧伤小鼠肝脏炎性反应的抑制作用，并探讨其机制。方法 将C57BL／6小鼠随机分成假伤组（模拟烧伤）、假伤＋CORM-2组、烧伤组、烧伤＋CORM-2组及烧伤＋二甲亚砜（DMSO）组，每组9只。假伤＋CORM-2组除伤后使用CORM-2以外，其他处理同假伤组。烧伤＋CORM-2组及烧伤＋DMSO组除伤后分别使用CORM-2、DMSO外，其余处理同烧伤组。于伤后24h检测小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）及天冬氨酸转氨酶（AST）的水平，肝组织髓过氧化物酶（MPO）及核因子KB（NF-kB）活性，胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）蛋白的表达；检测各组小鼠肝窦内皮细胞（HSEC）经各自血清刺激后对中性粒细胞（PMN）的黏附作用。结果 与假伤组比较，烧伤组小鼠血清ALT、AST的水平[（398±34）、（122±22）U／L]及肝组织MPO活性、肝组织ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。与烧伤组比较，烧伤＋CORM-2组上述情况明显改善，且NF-kB活性下降。与假伤组比较，烧伤组小鼠HSEC对PMN的黏附作用增强；烧伤＋CORM-2组该作用明显弱于烧伤组（P〈0．05）。结论 外源性CORM-2能明显抑制肝组织NF-kB活性，减少ICAM-l、VCAM-l蛋白的表达水平，减轻严重烧伤后组织中白细胞滞留，改善肝功能，可有效减轻肝脏炎性反应。     

护理本科教育兼职护理教师培养现状和需求调查

目的 了解黑龙江省护理本科教育兼职护理教师的培养现状和培养需求,分析师资培养中存在的问题,以便提出改进措施.方法 自行设计调查问卷,对黑龙江省6所高校142名兼职护理教师的培养现状和培养需求进行调查.结果 47.4%和27.7%认为单位有计划地安排院内和院外培养,43.1%认为很少有机会外出学习和进修;院内外培养内容排在前3位的是护理专业知识、护理实践技能和教育学知识,培养内容需求前3位的是计算机知识、人文社会科学知识、教育学知识;培养形式以院内学术讲座为主(69.2%),院外以短期培训为主(64.0%),46.5%希望参加全脱产培训.结论 现阶段黑龙江省本科兼职护理师资的培养现状不能满足教师的培养需求.为适应兼职教师职业特点,建议建立护理教师培训基地,以职前系统性培养和在职渐进式培养为中心的多层次培养模式,对兼职护理教师进行培养.     

密闭式体外培养系统对胚胎发育及小鼠学习和记忆能力的影响

目的探讨密闭式培养系统对胚胎发育及子代小鼠学习和记忆能力的影响。方法建立胚胎密闭式培养体系,分组为密闭培养组和常规培养组(对照组),比较两种培养方式小鼠胚胎的发育和着床情况;Morris水迷宫实验和小鼠跳台实验研究两种培养方式获取的胚胎移植后新生小鼠学习和记忆能力。结果密闭培养组小鼠胚胎发育和着床能力与常规培养组相比无显著差异(P0.05);Morris水迷宫和小鼠跳台实验结果显示,密闭培养组小鼠胚胎移植后新生小鼠学习和记忆能力与常规培养组无显著差异(P0.05)。结论密闭培养体系培养的胚胎与常规培养得到的胚胎相比,在胚胎质量、着床能力以及子代小鼠学习和记忆能力方面均无统计学差异。     

软骨细胞与静电纺丝聚已内酯支架灌流培养构建组织工程软骨的实验研究

目的 采用静电纺丝聚已内酯(polycaprolactone,PCL)支架与软骨细胞复合培养,比较静态和灌流生物反应器培养条件下对细胞增殖及基质分泌的影响.方法 构建PCL支架,自制灌流生物反应器,分离兔软骨细胞,培养后接种于PCL支架,分为灌流培养组和静态培养组.在培养第3、7、14天对支架-细胞复合体行扫描电镜观察,DNA、糖胺聚糖和总胶原定量检测;在培养第14天分析软骨特异性基因表达并观察软骨基质分泌情况.结果 电镜观察PCL支架纤维直径(1.67±0.76) μm,孔径(17.65土7.11)μm,可见支架中软骨细胞黏附生长良好,灌流培养条件下细胞增殖快,且较好地保持了软骨细胞特征形态.在培养第7天,灌流培养组DNA定量高于静态培养组;在培养第3、7和14天,灌流培养组糖胺聚糖定量均高于静态培养组,灌流培养组糖胺聚糖/DNA比值均高于静态培养组.在培养第14天,灌流培养组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖基因表达增加;软骨分化指数高于静态培养组.在培养第14天,组织学染色可见灌流培养促进细胞的增殖和渗透生长,提高了软骨基质的分泌,并见软骨陷窝样结构.结论 在灌流生物反应器培养条件下,静电纺丝PCL支架与软骨细胞复合培养可促进软骨细胞的增殖和基质的分泌,提高了组织工程软骨的质量.     

睾丸生精细胞体外培养的研究进展

精子的产生是一个高度复杂有序的过程,涉及细胞的增殖和分化。生精细胞体外培养系统包括组织培养和细胞培养两大类,本文对生精细胞体外培养和睾丸组织块培养的研究进展及生精细胞的培养条件作一综述,归纳出各种培养方法的优缺点,旨在寻求生精细胞在体外的最佳分化途径,使精子体外培养成为研究和治疗男性不育的重要手段。     

人类生精细胞在培养过程中的分化与变形

目的 探讨体外培养条件下生精细胞向单倍体精子细胞分化以及精子细胞变形为精子的可能性.方法 对11例非梗阻性无精子症患者行睾丸活检,将其中9份具有生精细胞的活检标本在终浓度为50 U/L卵泡刺激素和1μmol/L睾酮的改良人输卵管液培养液中进行体外培养,对培养前及培养后24h标本中精子及其他细胞进行计数,计算各种细胞的比例.应用流式细胞仪对2例患者培养前和培养后24 h的细胞进行细胞倍体分析.结果 9例标本培养前精子比例为(17.7±8.9)％,培养24h后为(25.6±10.3)％,培养前后差异有统计学意义(P=0.004).2例细胞倍体分析结果显示,培养前可见4、2和1 n波峰,培养后4 n波峰消失,1 n波峰显著增宽和增高.结论 生精细胞体外培养可使生精细胞发生减数分裂,并使精子细胞向精子变形.     

两种培养状态下黑素细胞的生物学特征比较

目的:比较角质形成细胞无血清培养基(KC-SFM)和含血清的黑素细胞培养基培养的人类黑素细胞的生物学特征的差异,寻找适合黑素细胞移植治疗的黑素细胞培养方法。方法:以KC-SFM和含血清的黑素细胞培养基培养黑素细胞,在培养7d内倒置显微镜观察黑素细胞形态,MTT法观察生长曲线,并测定酪氨酸酶活性和黑素含量。结果:KC-SFM培养的黑素细胞具有较多树突且树突明显延长,增殖活性低于含血清的黑素细胞培养基培养的黑素细胞,而酪氨酸酶活性、黑素含量测定吸光值分别为0.385±0.036、0.276±0.022,和含血清的黑素细胞培养基培养黑素细胞比较均有显著差异。结论:KC-SFM可促进黑素细胞树突增多和树突延长,提高酪氨酸酶活性和黑素含量,适合用于移植治疗的黑素细胞培养。     

破骨细胞体外培养研究进展

破骨细胞是骨吸收的主要功能细胞,体外培养破骨细胞是骨吸收研究和抑制骨吸收药物开发研究的基础.该文综述破骨细胞体外培养常用的5种方法及近年研究进展,并对各种方法进行比较.成熟破骨细胞分离培养法仍是目前获得成熟破骨细胞的最佳途径;骨髓诱导破骨细胞培养法是目前最常用的破骨细胞培养法;脾干细胞诱导培养法和外周血单核细胞诱导培养法是近年新发展起来的培养方法,能排除骨髓基质细胞及其他造血干细胞干扰,更具有应用价值;骨巨细胞瘤破骨细胞样细胞分离培养法是其他破骨细胞培养方法的一个重要补充.     

两种不同方法培养大鼠肾上腺细胞的比较

目的 观察胶原凝胶三维培养对肾上腺细胞形态和功能的影响.方法 分离SD大鼠乳鼠肾上腺细胞,于自制鼠尾型Ⅰ胶原凝胶中培养14 d,与传统平面培养的肾上腺细胞相对比,比较两者在细胞形态、细胞增殖率、蛋白表达和分泌功能方面的差异.结果 两种培养方式下,肾上腺细胞均能表达其特异性细胞色素氧化酶CYP11B1和CYP11B2.原代培养8 d后,三维胶原凝胶培养大鼠肾上腺细胞的增殖率显著高于平面培养,至第14天,胶原凝胶中培养的肾上腺细胞增殖率为16.6%,而传统平面培养的仅为2.9%.胶原凝胶中培养的肾上腺细胞分泌功能维持时间更长,第14天其培养液中皮质酮和醛固酮浓度分别为(278.33±38.20)μg/L和(133.85±38.20)ng/L,而相应的平面培养肾上腺细胞分泌皮质酮和醛固酮浓度分别为(160.35 ±28.12)μ/L和(74.03±12.12)ng/L,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胶原凝胶中三维培养肾上腺细胞更有利于细胞功能的维持.     

人胃黏膜成纤维细胞原代培养条件的优化

目的 通过优化人胃黏膜成纤维细胞的原代培养条件,提高培养成功率,为进一步研究胃癌相关成纤维细胞奠定基础.方法 原代培养采用植块法,利用免疫组织化学、细胞形态学和电镜等方法进行细胞鉴定;分析不同培养表面、培养基和培养液pH值对原代细胞培养游出情况的影响,筛选适合的培养条件.结果 Logistic逐步回归分析提示RPMI 1640培养基的Waldχ2值=32.4533,P<0.01,标准化回归系数=0.7852,说明使用RPMI 1640培养基更利于原代成纤维细胞游出;pH=7.4的培养液的Waldχ2值=49.4756,P<0.01,标准化回归系数=0.4867,说明培养液pH值为7.4更利于原代成纤维细胞游出;不同水平的培养表面条件对成纤维细胞游出率的影响差异无统计学意义(P>0.05),而且各培养条件之间无交互作用.结论 通过优化培养表面、培养基种类和pH值等培养条件,可以提高人胃黏膜成纤维细胞原代培养的成功率.     

雄性生殖细胞体外分化研究现状

生殖细胞的体外研究已建立了多种组织和器官培养系统、精曲小管培养系统、Sertoli细胞和生殖细胞共同培养系统等。随着对血 睾屏障和睾丸细胞极性在体外培养中重要性的逐步重视 ,已初步建立了模拟睾丸分隔结构的双室培养系统和藻酸钙三维培养系统。现有培养系统已经成为深入了解和认识精子发生过程的一种强有力工具。目前在体外已经获得某些动物精子发生的整个减数分裂过程 ,但对雄性生殖细胞体外减数分裂的详细调控机制还知之甚少。本文主要介绍了在雄性生殖细胞体外分化尤其是减数分裂研究方面的发展现状     

护士分层级能力培养模型的构建

目的构建护士分层级能力培养模型,为合理培养各层级护士提供依据。方法在总结相关实践的基础上,进行文献分析和讨论,构建护士分层级能力培养模型。结果护士分层级能力培养模型包括新护士、通科护士、专科护士和护理顾问4个能力进阶层级和学校教育、临床实践、专科培训3种培养方式。结论该模型为我国护士的分层级培养提供了路径,具有实践参考价值。     

兔关节软骨细胞聚集培养的生物学性状观察

目的 观察聚集培养软骨细胞生物学性状的变化,为软骨细胞移植建立合适的体外培养方法。方法2001年11月至2004年6月酶消化法分离成年兔关节软骨细胞,分别低密度单层培养和高密度聚集培养,组化及免疫组化法观察细胞表型变化。结果低密度培养时,前3代细胞增殖迅速,但很快去分化,3代以后增殖缓慢,细胞表型大部丢失;聚集培养时,软骨细胞去分化速度减缓;传3代后细胞聚集培养,细胞表型部分恢复。结论聚集培养利于维持软骨细胞表型,原代细胞聚集培养或传代培养后聚集培养是较好的获取大量优良软骨细胞的培养方式。     

离心管培养软骨作为半月板移植替代物的可能性研究

目的比较培养关节软骨和半月板软骨细胞的生物学特性,探讨培养软骨作为半月板移植替代物的可能性. 方法分别自3周龄大耳白兔关节软骨和半月板分离软骨细胞,行单层传代培养和离心管培养.将离心管培养形成的软骨和6周龄兔半月板行组织学和透射电镜观察,比较关节软骨细胞和半月板纤维软骨细胞的生长曲线.流式细胞术检测第2、4代关节软骨细胞和半月板纤维软骨细胞周期. 结果第4代关节软骨细胞呈去分化,似成纤维细胞.离心管关节软骨细胞培养能形成软骨,半月板纤维软骨细胞不能形成软骨.培养软骨和半月板的组织学及超微结构差异显著,培养软骨中软骨细胞5%呈现凋亡.第2、4代关节软骨细胞中亚二倍体细胞比例明显多于第2、4代半月板纤维软骨细胞(P<0.05). 结论半月板来源的软骨细胞经离心管培养不能形成软骨组织,关节软骨细胞离心培养形成软骨不能作为半月板的移植物,关节软骨和半月板软骨组织存在明显的区别.     

Sertoli细胞与成人胰岛细胞共同培养的研究

目的观察塞尔托利（Sertoli）细胞对体外培养的成人胰岛细胞形态、存活率及功能的影响。方法胰腺、睾丸取自志愿捐赠的成年男性尸体多器官供者,共12例。分离纯化后的成人胰岛细胞分为单独培养组和共同培养组,单独培养组取成人胰岛细胞单独培养,共同培养组为成人胰岛细胞＋Sertoli细胞共同培养,均在RPMI1640培养液培养14d,采用倒置相差显微镜观察胰岛细胞形态,比较两组的胰岛细胞存活率、胰岛素分泌量和胰岛素刺激指数。结果培养14d后,共同培养组胰岛细胞存活率为（90±3）%,较单独培养组的（57±4）%明显提高（P〈0.01）,胰岛细胞的形态亦较单独培养组完整。共同培养组胰岛细胞始终对葡萄糖刺激保持较高的敏感度,而单独培养组胰岛细胞对葡萄糖刺激的敏感度随时间的延长明显降低（P〈0.05）。培养14d后,共同培养组的胰岛素分泌量为（249±12）mIU/L、胰岛素刺激指数为8.15±0.64,而单独培养组则分别为（47±7）mIU/L和1.68±0.34,两组比较差异有统计学意义（均为P〈0.01）。结论成人胰岛细胞与Sertoli细胞共同培养可以提高胰岛细胞的存活率,改善胰岛细胞的功能。     

SD大鼠阴茎平滑肌细胞的获取和体外培养

目的 研究SD大鼠阴茎平滑肌细胞体外培养方法和生物学特性.方法 采用贴壁组织块培养法和酶消化培养法,对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞进行活细胞观察.结果 (1)SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形,呈长轴平行排列,具有明显的方向性;体外贴壁快,生长迅速,体外培养的阴茎海绵体平滑肌细胞在合适的传代条件和比例下能够生存并保持其稳定的生物学特性.(2)酶消化培养法获得细胞的纯度高,接种后细胞生长快.贴壁组织块培养法操作简单易于掌握.结论 贴壁组织块培养法和酶消化培养法均可以获得平滑肌细胞,方法均方便可行.我们可根据实验的需要选择不同的方法.     

比较time-lapse培养和常规体外受精胚胎培养对临床结果的影响

目的比较分析延时摄像胚胎观测技术(time-lapse)培养和常规体外受精(IVF)胚胎培养对临床结局的影响。方法回顾性分析2013年10月至2015年1月期间110例time-lapse周期和2 274例常规IVF胚胎培养周期的临床结果。分别在周期受精数≤10和10的情况下,比较time-lapse培养周期和常规IVF胚胎培养周期的卵裂数、D3优质胚胎数、D3优质胚胎率、种植率、临床妊娠率。结果在周期受精数≤10的情况下,time-lapse培养周期组和常规IVF胚胎培养周期组的卵裂数、优质胚胎数、优质胚胎率比较均无显著性差异(P0.05),两组种植率(30.1%vs.35.4%)和临床妊娠率(47.7%vs.55.5%)亦无统计学差异(P0.05)。而在周期受精数10的情况下,time-lapse培养周期组和常规IVF胚胎培养周期组的种植率(56.8%vs.40.0%)和临床妊娠率(77.8%vs.57.5%)均存在显著性差异(P0.05)。结论受精数10的周期通过time-lapse培养,可以获得比常规IVF培养更高的种植率和临床妊娠率。     

护理本科生科研创新能力系统性培养实践

目的探讨护理本科生科研创新能力系统性培养的方法及实践效果。方法通过科研创新意识熏陶与培养、科研创新基础知识传授与创新思维培养、科研创新能力的培养与实践三个阶段对2009、2010级290名护理本科生的科研创新能力进行系统性培养。结果系统性培养后,290名护理本科生中99.31%认为有必要开展科研创新能力的培养,97.24%表示愿意参加科研创新;64.48%参与了科研创新能力训练与培养的基础性活动;且学生参加课外学术科技作品申报项目逐年增高,获得科研创新奖项和发表论文数量逐年增加。结论该系统性培养方法可提高护理本科生科研创新的意识和能力。