小半夏加茯苓颗粒含药血清体外对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响

目的: 采用血清药理学的方法,观察小半夏加茯苓颗粒对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用。 方法: 设空白对照组、环磷酰胺(CTX)组、原方汤剂组及颗粒剂不同剂量组,分别制备成含药血清与体外培养的肝癌SMMC-7721细胞共孵,倒置显微镜观察各组SMMC-7721细胞生长形态变化以及用MTT法检测其细胞增殖抑制率。 结果: 与空白对照组比较,CTX组、原方汤剂组以及颗粒不同剂量组均使SMMC-7721细胞生长形态发生明显改变,细胞生长不良,细胞数量减少;MTT实验结果显示CTX组、汤剂组、颗粒不同剂量组对SMMC-7721细胞作用24 h、48 h、72 h后,细胞增殖抑制率逐渐升高(P<0.05)。各时段内各中药组对细胞的抑制率均低于CTX组(P<0.05),原方汤剂组与颗粒大剂量组无显著差异(P>0.05)。 结论: 小半夏加茯苓颗粒含药血清对体外培养的肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用,且其作用呈现时间-效应关系和剂量-效应关系。     

小半夏加茯苓方含药血清抑制HepG2细胞增殖及促进凋亡

目的:采用血清药理学的方法,观察小半夏茯苓方对肝癌HepG2细胞增殖的影响,初步探索该方诱导肝癌细胞凋亡相关因子表达的影响。方法:制备含药血清,正常实验用动物Wistar大鼠,采用灌胃或腹腔注射给药途径,连续给药3 d,其中,正常对照组,灌服生理盐水;环磷酰胺(CTX)组,腹腔注射CTX;原方汤剂组,灌服小半夏加茯苓汤;原方汤剂加CTX组,灌服小半夏加茯苓汤的同时腹腔注射CTX;颗粒剂高中剂量组,灌服相当于小半夏加茯苓汤等量、二倍量的颗粒剂,末次给药后12 h,腹主静脉取血,制备含药血清,刺激体外培养的HepG2肝癌细胞,采用MTT法检测其对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测其对各时相细胞周期分布,免疫组织化学的方法观察其对凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3(caspase-3)、半胱天冬酶-9(caspase-9)的影响。结果:小半夏加茯苓方能抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在作用24 h时效果最明显。流式检测结果显示,药物作用细胞24 h,小半夏加茯苓方阻滞细胞于S期,环磷酰胺将细胞阻滞于G2期。小半夏加茯苓方作用24 h能诱导HepG2细胞的凋亡,caspase-3表达与药物的剂量呈正相关。结论:小半夏加茯苓方可能通过激活caspase-3蛋白表达,从而诱导肝癌细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,有效抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤的作用。     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

小半夏加茯苓汤醇提物对BGC-823细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:观察小半夏加茯苓汤醇提物对胃癌细胞BGC-823的凋亡作用以及诱导其凋亡发生的机制。方法:运用MTT法检测不同浓度的小半夏加茯苓汤醇提物对BGC-823的增殖抑制作用并计算抑制率;以罗丹明123为细胞染色剂,采用流式细胞术检测线粒体跨膜电位的改变;实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2和Cyt-c表达的变化。结果:MTT结果显示小半夏加茯苓汤醇提物对BGC-823具有抑制作用,随着给药浓度的增加和作用时间的延长,抑制率逐渐升高,细胞活力逐渐减弱,与空白对照组比较有显著统计学差异(P0.01)。流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,小半夏加茯苓汤醇提物能够显著降低线粒体跨膜电位(P0.01);qRT-PCR结果显示,Bax基因表达显著升高(P0.01),Cyt-c基因表达升高(P0.05),Bcl-2基因的表达降低(P0.05)。结论:小半夏加茯苓汤醇提物可以抑制BGC-823细胞活力,诱导细胞凋亡并减小Bcl-2/Bax基因表达比例,增强Cyt-c基因表达,其机制可能与线粒体为核心的凋亡通路相关。     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对VEGF表达的影响

目的:探讨健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用体外培养SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-FU组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,荧光定量PCR检测VEGF-mRNA在细胞中的表达。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,抑制VEGF-mRNA的表达;而以化疗药5-FU组作用最强,健脾柔肝汤中、高剂量含药血清组次之,且作用相当。结论:健脾柔肝方含药血清可有效诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,其作用机制可能是通过抑制VEGF-mRNA的表达而实现的。     

二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响

目的:观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响。方法:采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g/kg)5%、10%、20%含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用;通过流式细胞法观察药物对细胞凋亡的影响。结果:形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变;MTT结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用,且随含药血清浓度的增高以及作用时间的延长,抑制作用亦有所加强。其中20%含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h,10%含药血清作用于A549 48h,其OD值与对照组比较均有统计学差异;流式细胞技术检测结果表明20%含药血清作用于A549细胞株24h及48h,10%含药血清作用于A549 48h,与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高;20%、10%含药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h,对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用。结论:二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用,其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系。     

10种壮药含药血清抗人肝癌细胞的实验研究

目的:观察10种壮药含药血清对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用,筛选出具有较强抑癌作用的药物,以指导临床用药。方法:选用清洁级成年Wistar大鼠,分别制备金刚藤、龙葵、解毒蕨、半枝莲、排钱草、石见穿、绞股蓝、透骨消、叶下珠、藤梨根10种壮药含药血清,设低、中、高浓度作用于人肝癌SMMC-7721细胞,同时设生理盐水(NS)空白血清对照组及环磷酰胺(CTX)阳性血清对照组,用MTT法检测含药血清在24 h、48 h对细胞增殖的影响。结果:MTT法筛选结果显示,金刚藤、半枝莲、叶下珠、藤梨根的含药血清在24 h及48 h对人肝癌SMMC-7721细胞均有较好的抑制作用,且金刚藤高剂量组在48 h抑制作用最强。结论:金刚藤、半枝莲、叶下珠、藤梨根的含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞有较好的抑制作用。     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

陕重楼提取物对人肝癌SMMC_(-7721)细胞bc_(l-2)和Bax基因表达的影响

目的:探讨陕重楼乙酸乙酯提取物含药血清对肝癌SMMC-7721细胞bcl-2和Bax基因的影响。方法:采用血清药理学方法,以20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg药量提取物给SD大鼠灌胃,分离血清配制成10%含药血清培养基后,加入人肝癌细胞SMMC-7721中培养48h,制作细胞爬片,采用免疫细胞化学测定法检测bcl-2和Bax蛋白在肝癌细胞中的表达情况,观察陕重楼乙酸乙酯提取物对人肝癌SMMC-7721细胞中bcl-2和Bax基因表达的影响。结果:高、中、低浓度提取物10%含药血清制作的细胞爬片在人肝癌细胞系SMMC-7721中的bcl-2蛋白阳性细胞计数率分别为6.50%、8.47%和8.85%,Bax蛋白阳性细胞计数率分别为44.12%、43.88%和37.66%。结论:与肝癌细胞系SMMC-7721空白对照组的bcl-2、Bax蛋白阳性细胞计数率相比,给药组培育48h后肝癌细胞系中bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白的表达上调,bcl-2/Bax比值降低,陕重楼乙酸乙酯提取物应用在线粒体途径促进细胞凋亡过程中能发挥协同作用,并可能通过此途径诱导肿瘤细胞的凋亡。     

小半夏加茯苓汤对H22荷瘤小鼠瘤体中颗粒酶B和穿孔素表达的影响

目的观察小半夏加茯苓汤对H22荷瘤小鼠瘤体中的颗粒酶B及穿孔素表达的影响。方法建立体内H22荷瘤小鼠模型,随机分为荷瘤模型组、小半夏加茯苓汤高剂量组、小半夏加茯苓汤中剂量组、小半夏加茯苓汤低剂量组、顺铂组,每组24只。接种次日开始给药,荷瘤模型组给予生理盐水10g·kg-1,1次/d;小半夏加茯苓汤高、中、低剂量组,分别给予含4g、2g、1g生药·ml-1小半夏加茯苓汤水煎剂40,20,10g·kg-1,1次/d;顺铂组腹腔注射0.9%氯化钠溶液稀释顺铂5mg·kg-1,分别于第1,4,7,10天各给药1次,实验第11日称重断髓处死小鼠,取瘤体。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化(IHC)检测瘤组织中的颗粒酶B和穿孔素的表达量情况。结果与荷瘤模型组比较,小半夏加茯苓汤高剂量组体重明显升高(P0.05),小半夏加茯苓汤高、中剂量组瘤重明显降低(P0.05),顺铂组瘤重更低(P0.01);小半夏加茯苓汤高、中剂量组,顺铂组颗粒酶B、穿孔素基因表达量升高;各给药组颗粒酶B与穿孔素蛋白表达均显著升高(P0.01)。与顺铂组比较,各组小半夏加茯苓汤体重、瘤重显著升高(P0.01)。结论小半夏加茯苓汤升高H22荷瘤小鼠瘤体中的颗粒酶B及穿孔素表达量,这可能是诱导细胞凋亡的机制之一。     

癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响

目的观察癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法癌痛消饱和溶液按86.4、43.2、21.6 g/kg剂量给予SD大鼠灌胃1周,取血制备含药血清,加入SMMC-7721及Bel-7404肝癌细胞培养液。不同浓度癌痛消药物血清处理人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果体外研究显示,癌痛消方药物血清低、中、高剂量组对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404均具有不同程度的抑制作用,且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性,癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404有促凋亡作用。结论癌痛消方药物血清在体外对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞有抑制增殖作用和促凋亡作用。     

小半夏加茯苓汤含药血清对小鼠胚胎干细胞体外增殖及分化的影响

[目的]研究小半夏加茯苓汤含药血清对体外培养的小鼠胚胎干细胞(ES)增殖及分化的影响.[方法]噻唑蓝比色法(MTT)检测小半夏加茯苓汤含药血清作用下24、48、72、96 h后的ES细胞活性.半定量逆转录-聚合酶链反应法( RT-PCR)检测小半夏加茯苓汤含药血清作用下ES分化为心肌细胞的能力,判断受试物的胚胎发育毒性.[结果]在促细胞增殖方面:小半夏加茯苓汤含药血清作用下的ES细胞,在连续培养24、48、72、96 h时,其活性水平均呈显著上升趋势,与其他组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).在促细胞分化方面:小半夏加茯苓汤含药血清对ES分化心肌细胞的肌球蛋白重链基因β-MHC的表达能力,与其他组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).[结论]小半夏加茯苓汤含药血清能够促进ES细胞增殖,并能促进ES细胞向心肌细胞分化,提示在该实验剂量下,小半夏加茯苓汤无明显胚胎毒性.     

发酵虫草菌粉对人肝癌细胞增殖、凋亡及VEGF,MMP-2表达的影响

目的:探讨从天然冬虫夏草中分离出的虫草拟青霉Cs-4菌株,经人工发酵所得发酵虫草菌粉对SMMC-7721人肝癌细胞的生长抑制作用。方法:20只体重(200±20)g雄性SD大鼠随机分为4组(每组5只):空白组及Cs-4低、中、高剂量组,空白组ig予蒸馏水,Cs-4低、中、高剂量组(0.77,1.54,3.08 g·kg-1,ig);给药3 d后,制备含药血清。肝癌细胞悬液调整至4×104/m L,96孔板每孔加入100μL,培养24 h后加入大鼠含药血清及顺铂注射液;干预48 h MTT法测各组细胞增殖抑制率。将SMMC-7721细胞悬液调整至2.8×104/m L,接种于6孔板培养24 h,加入大鼠含药血清及顺铂,干预培养48 h后Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF),金属基质蛋白酶-2(MMP-2)表达量。结果:SMMC-7721细胞增殖被Cs-4含药血清明显抑制(与空白组比较P0.05),低、中、高剂量组抑制率分别为12.2%,23.2%,38.1%,呈剂量依赖性(Cs-4不同剂量组间比较P0.05)。Cs-4含药血清低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为13.9%,23.5%,24.9%,均高于空白组(P0.05)。Cs-4含药血清低、中、高剂量组细胞上清液中VEGF分别为443.5,436.9,411.0 ng·L-1,低于空白组(P0.05);Cs-4低、中、高剂量组细胞上清液中MMP-2浓度与空白组比无显著差异。结论:Cs-4含药血清能抑制SMMC-7721细胞增殖,提高体外培养的SMMC-7721细胞凋亡率,抑制SMMC-7721细胞VEGF表达,提示Cs-4有抗肝癌作用,对SMMC-7721细胞MMP-2表达无显著影响。     

艾蒿总黄酮诱导肝癌细胞凋亡及其机制

目的探讨艾蒿总黄酮对SMMC-7721肝癌细胞株增殖的抑制、促凋亡作用及其机制。方法采用不同质量溶度的艾蒿总黄酮和槲皮素(阳性对照)作用SMMC-7721细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,CCK-8实验检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3和P21的转录水平。结果不同质量浓度的艾蒿总黄酮均可以抑制SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡,下调Bcl-2,上调Caspase-3、P21的表达,并呈现浓度依赖性。结论艾蒿总黄酮可能通过下调Bcl-2、上调Caspase-3和P21的表达来诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡。     

消癌解毒方加入LPS及CD284对人肝癌细胞SMMC-7721的TLRs/NF-κB信号转导通路影响

目的:深入研究中医药抗恶性肿瘤单一信号通路及多靶点联合治疗的机制。方法:经细胞培养、倒置显微镜观察细胞凋亡形态法、MTT法及流式细胞仪检测消癌解毒方及在此基础上加入激动剂脂多糖(LPS)及TLR4阻断剂(CD284)对人肝癌细胞SMMC-7721的TLRs/NF-κB信号转导通路的影响。结果:消癌解毒方具有良好的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,空白、低、中、高各浓度含药血清组加入LPS后,人肝癌细胞抑制率与凋亡率均较相应浓度含药血清组下降,其中高浓度含药血清剂量组及加入CD284后对人肝癌细胞增殖的抑制作用最明显。结论:消癌解毒方的抗肿瘤机制可能是含药血清与CD284能协同作用于人肝癌细胞SMMC-7721的TLRs/NF-κB信号转导通路,抑制核转录因子NF-κB的异常持续活化,促进肿瘤细胞凋亡。     

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

柔肝解毒方法含药血清体外抗肝癌的实验研究

目的：通过体外抑制肿瘤细胞增殖试验,观察柔肝解毒方体外防治肝癌的药效作用。方法：制备柔肝解毒方含药血清,用MTT法观察含药血清对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721细胞增殖的影响。结果：柔肝解毒方含药血清能显著抑制人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721的增殖,对HepG2的最高抑制率为69.73%,对SMMC-7721的最高抑制率为62.64%,与空白对照组及PBS组相比差异显著（P〈0.01）;最高剂量组与含5-氟尿嘧啶血清抑制肝癌细胞的效果相比,无显著性差别（P〉0.05）。中药组的抑制率呈一定的量效关系,随着给药剂量的增加其抑制率升高。结论：柔肝解毒方具有良好的体外抗肝癌的药效作用。     

肝癥口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响

本文就肝癌口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响进行了研究。通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测表明，肝癌口服液可以促进人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡，且对正常人的免疫系统影响不大。