链霉亲和素的鉴定

作者在前阶段链霉菌的培养及其链霉亲和素（ＳＡ）分离纯化的基础上，对ＳＡ的生物学特性和理化性质作了测症。测得ＳＡ的分子量为７２８８１，等电点为６．０；经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳出现２条带，结合生物素的活性为１８μｇ／ｍｇ。从１升链霉菌培养液中可提取纯ＳＡ２３．２ｍｇ。     

链霉菌的培养与链霉亲和素的纯化

报道链霉菌的两种合成培养基和一种链霉亲和素的纯化方法，在该两种合成培养基中，亲和素链霉菌均能旺盛生长，获得了Ｓ．ａｖｉｄｉｎｉｉ的典型形态和菌落形征，ＳＡ的收获量也较高。在纯化过程中采用ＤＥＡＥ５２层析柱所得到ＳＡ的最高产量为１５．２μｇ／ｍｌ该纯化方法简单，易于操作和常规使用。     

分泌链霉亲和素菌株的筛选及所产链霉亲和素性质的研究

目的：筛选分泌链霉亲和素的菌株。方法：在河北省范围,于不同的时间,地域,植被状态取土,接种高氏一号培养基,选取可能的放线菌菌落,接种葡萄糖－天冬酰胺液体培养基,用ELISA方法检测菌液以判断是否产生链霉亲和素,筛选出1株产链霉亲和素较高者,命名为L－183,大量培养L－183后,用亲和层析提取链霉亲和素,并对其性质做鉴定。结果：L－183分泌的链霉亲和素产量高,达76mg/L;相对分子质量为62．2ku,等电点为6．0,结论：L－83有可能成为生产链霉亲和素的菌株。     

链霉亲和素产生菌培养条件的研究

目的；通过对分泌链霉亲和素（streptavidin)的菌株L－183最佳培养条件的研究，为提高链霉亲和素的产量及其规模生产打下了基础。方法：选用3种种子培养基和5种发酵培养基，通过检测种子菌体湿质量、间接ELISA检测发酵液中链霉亲和素的效价，筛选出菌体生长快的种子培养基及链霉亲和素产量高的发酵培养基。结果：B号种子培养基、2＃发酵培养基最适合L－183的生长和链霉亲和素合成；不同菌种接种量对链霉亲和素的产量也有明显影响，在140ml发酵液中，种子接种量为0．3ml，链霉亲和素产量可达111mg/L。结论：本实验筛选的培养基价格低廉，且L－183生长快、链霉亲和素产量高，可以作为规模生产链霉亲和素的首选培养基。     

链霉菌的培养与链霉亲和素的纯化

报道链霉菌的两种合成培养基和一种链霉亲和素（Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ，ＳＡ）的纯化方法。在该两种合成培养基中，亲和素链霉菌（Ｓ．ａｕｉｄｉｎｉｉ）均能旺盛生长，获得了Ｓ．ａｕｉｄｉｎｉｉ的典型形态和菌落特征，ＳＡ的收获量也较高。在纯化过程中采用ＤＥＡＥ５２层析柱所得到ＳＡ的最高产量为１５．２μｌ，该纯化方法简单，易于操作和常规使用。     

生物素—链霉亲和素系统在检测HBeAg中的比较

应用链霉亲和素和生物素系统发展成的酶连接免疫吸附测定（ELISA）改良法检测HBeAg，取得较满意效果。标记链霉亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）时，两的重量比以（0.5-0.8):1为佳，浓度以7μg/ml为最理想；SA-HRP的反应时间以30min为适宜。本改良法与生物素亲和素ELISA（BA）法、普通ELISA法检测HBeAg的灵敏度比较。其相对灵敏度高于后二；用Abbott试剂作为标准。检测HBeAg100人份，其阳性率高于BA法和普通ELISA法，提示链霉亲和素FLISA（BSA）法可提高方法的特异性及灵敏度。     

生物素—链霉亲和素系统检测乙型肝炎患者T淋巴细胞亚群

应用生物素－链霉亲和素方法检测了乙型病毒性肝炎（ＨＢＶ）患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群。旨在探讨乙型病毒性肝炎患者的Ｔ淋巴细胞的功能，其结果为各患者的ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋、ＣＤ３＾＋和ＣＤ４＾＋／ＣＤ４＾＋均明显高于正常人，其与正常人相比较，差别均有高度显著性（Ｐ〈０．０１）。表明乙型病毒性肝炎主要是杀伤性Ｔ淋巴细胞（Ｔｃ）参与了肝损害。     

生物素——链霉亲和素系统在检测MHV抗体中的应用

采用生物素－链霉亲和素系统（ＢＳＡ）试剂建立测定ＭＨＶ抗体的ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ法，并与ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ法比较。结果表明，前者本底极低，敏感性比后者提高４倍，阳性检出率提高１倍，且经阻断试验证明其特异性高。因此，该法在检测实验动物的特异性抗体方面，具有很大的应用潜力。     

生物素－链霉亲和素系统在检测HBeAg中的比较

应用链霉亲和素和生物素系统发展成的酶连接免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）改良法检测ＨＢｅＡｇ，取得较满意效果。标记链霉亲和素－辣根过氧化物酶（ＳＡ－ＨＲＰ）时，两者的重量比以（０．５～０．８）：１为佳，浓度以７μｇ／ｍｌ为最理想；ＳＡ－ＨＲＰ的反应时间以３０ｍｉｎ为适宜。本改良法与生物素亲和素ＥＬＩＳＡ（ＢＡ）法、普通ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｅＡｇ的灵敏度比较，其相对灵敏度高于后二者；用Ａｂｂｏｔｔ试剂作为标准，检测ＨＢｅＡｇ１００人份，其阳性率高于ＢＡ法和普通ＥＬＩＳＡ法。提示链霉亲和素ＥＩ，ＩＳＡ（ＢＳＡ）法可提高方法的特异性及灵敏度。     

抗癌胚抗原单抗与生物素及链霉亲和素偶联物的制备及性能鉴定

目的 研究抗癌胚抗原（CEA）单抗与生物素及链霉亲和素（streptavidin,SA)偶联物的制备方法。方法 将CEA单抗按抗体与生物素活化酯物质的量之比为1：15－1：50进行生物素化。抗CEA单抗与SA的偶联采用3－（2－吡啶二巯基丙酸）－N－琥珀酰亚胺酯（SPDP）化学偶联法制备。抗CEA单抗偶联物的生物活性及免疫活性分别采用间接ELISA方法和放射免疫分析法进行测定。结果 生物素化单抗每分子抗体中约偶联3分子生物素,具有良好的SAI结合活性,经SDS－PAGE电泳证实为单一蛋白条带,仍保留95％的免疫活性。SA每分子中含有1－2个疏基,而抗CEA单抗每分子中含有2－3个3－（2－吡啶二基丙酸）－N－琥珀酰亚胺酯间接ELISA方法证实偶联物具有良好的生物素结合活性,SDS－PAGE电泳显示单抗－SA偶联物相对分子质量为210000左右,仍保留着原单抗活性的70％左右。结论 所制备的两类抗CEA单抗偶联物基本保持完整的特异性结合肿瘤CEA的性质,可为进一步的预定位显像和治疗应用提供可靠的靶向载体。     

抗癌胚抗原单抗与生物素及链霉亲和素偶联物的制备及性能鉴定

目的　 研究抗癌胚抗原(CEA)单抗与生物素及链霉亲和素(streptavidin, SA)偶联物的制备方法。方法　 将CEA单抗按抗体与生物素活化酯物质的量之比为1:15～1:50进行生物素化。抗CEA单抗与SA的偶联采用3-（2-吡啶二巯基丙酸）-N-琥珀酰亚胺酯（SPDP）化学偶联法制备。抗CEA单抗偶联物的生物活性及免疫活性分别采用间接ELISA方法和放射免疫分析法进行测定。 结果　生物素化单抗每分子抗体中约偶联3分子生物素,具有良好的SA结合活性,经SDS-PAGE电泳证实为单一蛋白条带,仍保留95%的免疫活性。SA每分子中含有1～2个巯基,而抗CEA单抗每分子中含有2～3个3-（2-吡啶二巯基丙酸）-N-琥珀酰亚胺酯间接ELISA方法证实偶联物具有良好的生物素结合活性, SDS-PAGE电泳显示单抗-SA偶联物相对分子质量为210 000左右,仍保留着原单抗活性的70%左右。结论　所制备的两类抗CEA单抗偶联物基本保持完整的特异性结合肿瘤CEA的性质,可为进一步的预定位显像和治疗应用提供可靠的靶向载体。     

磁性纳米粒子与链霉亲和素的连接及初步应用

目的在磁性纳米粒子表面偶联上链霉亲和素,用于VEGF质粒的提纯.方法用缩合反应将链霉亲和素偶联在磁性纳米粒子上, NBT/BCIP显色法和放射性核素标记法测定链霉亲和素的连接;利用生物素和链霉亲和素的高亲和力将生物素连接的探针连接在磁性纳米粒子上,制备成三链螺旋磁性纳米粒子;修饰好的粒子从含有VEGF质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.结果显色反应证实链霉亲和素连接在磁性纳米粒子表面,核素标记法显示其结合率在室温时为2.5 μg/100 μg,65 ℃时为22.28 μg/100 μg;三链螺旋磁性纳米粒子可以提纯出质粒,且纯度较高.结论通过一定修饰的磁性纳米粒子可以从含有质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.     

磁性纳米粒子与链霉亲和素的连接及初步应用

目的在磁性纳米粒子表面偶联上链霉亲和素,用于VEGF质粒的提纯.方法用缩合反应将链霉亲和素偶联在磁性纳米粒子上, NBT/BCIP显色法和放射性核素标记法测定链霉亲和素的连接;利用生物素和链霉亲和素的高亲和力将生物素连接的探针连接在磁性纳米粒子上,制备成三链螺旋磁性纳米粒子;修饰好的粒子从含有VEGF质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.结果显色反应证实链霉亲和素连接在磁性纳米粒子表面,核素标记法显示其结合率在室温时为2.5 μg/100 μg,65 ℃时为22.28 μg/100 μg;三链螺旋磁性纳米粒子可以提纯出质粒,且纯度较高.结论通过一定修饰的磁性纳米粒子可以从含有质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.     

生物素-链霉亲和素技术一步法检测淋球菌抗原的研究

目的 :建立一种灵敏、快速诊断淋球菌感染的酶免疫测定法。方法 :检测淋球菌抗原的生物素 -链霉亲和素酶联免疫一步法。结果 :36例临床淋球菌标本中淋球菌抗原含量 1 0 8.47± 5 1 .39μg/ L ,阳性率 97.2 % ,显著高于非淋球菌标本的 4.71± 2 .1 3μg/ L ,阳性率 0 % (P均 <0 .0 1 ) ,本法检测灵敏度 0 .6 2 5 μg/ L,特异性 1 0 0 % ,敏感性 97.2 %。结论 :该法可作为灵敏、快速诊断淋球菌的新的辅助方法。     

生物素—链霉亲和素系统在检测MHV抗体中的应用

采用生物素—链霉亲和素系统(BSA)试剂建立测定MHV抗体的BSA-ELISA法,并与SPA-ELISA法比较。结果表明,前者本底极低,敏感性比后者提高4倍,阳性检出率提高1倍,且经阻断试验证明其特异性高。因此,该法在检测实验动物的特异性抗体方面,具有很大的应用潜力。     

链霉亲和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌诊断中的临床应用

目的分析链霉亲和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌检测当中的临床价值。方法选取2009年3月至2013年1月在孝感市中心医院就诊具有高度鼻咽癌危险的患者326例,分别进行链霉亲和素-生物素放大免疫酶法和常规免疫酶法检验,对链霉亲和素-生物素放大免疫酶法与常规免疫酶法在鼻咽癌患者117例与鼻咽癌高危人群但是无鼻咽癌患者209例的IgA/VCA和IgA/EA的检出率进行观察。结果在鼻咽癌患者中,链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA检出阳性率为99.16%,高于常规免疫酶法的92.31%,IgA/EA检出阳性率为78.63%,高于常规免疫酶法的56.41%(P<0.05)。鼻咽癌高危人群但是无鼻咽癌患者,链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA检出阳性率为24.88%,与常规免疫酶法检出阳性率(23.92%)差别无统计学意义(P>0.05),IgA/EA检出阳性率为3.83%,而常规免疫酶法为0。结论链霉亲和素-生物素放大免疫酶法能够较常规免疫酶法更为灵敏地诊断鼻咽癌。     

生物素－链霉亲和素系统在检测MHV抗体中的应用

采用生物素－链霉亲和素系统（ＢＳＡ）试剂建立测定ＭＨＶ抗体的ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ法，并与ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ法比较。结果表明，前者本底极低，敏感性比后者提高４倍，阳性检出率提高１倍，且经阻断试验证明其特异性高。因此，该法在检测实验动物的特异性抗体方面，具有很大的应用潜力。     

生物素-链霉亲和素技术一步法检测人心肌肌钙蛋白T

目的：用已获得的两株抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体N15C和N16D建立检测cTnT的生物素—链霉亲和素技术一步法。方法：应用酯化生物素对N15C进行标记,应用辣根过氧化物酶对N16D进行标记。将待检血清或抗原标准品、生物素标记的N15C和酶标记N16D加入经链霉亲和素包被的96孔酶标板微孔中,然后加入OPD,硫酸终止反应后,在λ=490nm处读取A值,根据标准曲线求出各样本值。结果：建立的方法检测cTnT,检测灵敏度为1．0μg／L,可定量检测范围为2．0～32．0μg／L。11例AMI患者和10例正常人用该法进行血清检测,与Enzymun—Test TnT试剂盒相比,阳性符合率为82％,特异性为100％。经重复检测表明本方法检测低浓度cTnT批内变异系数为4．70％,批间变异系数为9．36％;检测高浓度cTnT批内变异系数为3．20％,批间变异系数为8．25％。结论：该方法特异性高,重复性好,较常规双抗体夹心ELISA法有更高的灵敏度。     

链霉亲和素-人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的制备与活性鉴定

目的:制备链霉亲和素(SA)连接的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白(SA-hGM-CSF),并对其生物学活性进行鉴定。方法:在NCBI数据库中查找SA和hGM-CSF序列,将序列合成后连接入Pet28表达载体中,构建SA-hGM-CSF-Pet28重组表达载体,在BL21(DE3)表达感受态中利用IPTG诱导剂诱导表达,经His镍柱纯化,尿素梯度复性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法和蛋白质印迹法(WB)鉴定融合蛋白,通过TF-1细胞检测融合蛋白的生物学活性。结果:SA-hGM-CSF融合蛋白可在BL21(DE3)中高效诱导表达,经His镍柱纯化后该融合蛋白纯度较高。经尿素梯度复性后,细胞学实验验证该融合蛋白具有生物学活性。结论:成功表达具有生物活性的融合蛋白SA-hGM-CSF,该结果为SA-hGM-CSF表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研究提供了实验基础。     

新型磁共振靶向对比剂Gd—DTPA—链霉亲和素的制备及其反应条件的实验研究

目的 探讨制备Gd^3 标记的二乙三胺五乙酸-链霉亲和素(Gd-DTPA-SA)的最佳反应条件。方法 选择不同pH值的反应体系(pH值分别为5、6、7、8)及不同DTPA-SA的摩尔比率(1000、500、200、100)，测定不同反应条件下的每个SA分子所结合的Gd^3 数目及Gd-DTPA-SA的结合活性。结果 随着反应体系pH值的增高。每个SA分子所结合的Gd^3 数目增高；当DTPA-SA摩尔比率低于500时，DTPA-SA联结Gd的数目随着DTPA-SA摩尔比的增高而增高：而当摩尔比率为1000时，则出现下降。各实验组Gd-DTPA-SA复合物的生物素结合活性无明显差异。结论 SA分子所结合的Gd^3 矿数目依赖于反应体系的pH值及DTPA环酐-蛋白的摩尔比值，而Gd-DTPA-SA的生物素结合活性与反应条件无关。