黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备和鉴定

以自己合成的黄曲霉毒素Ｂ＿１一人血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ＿１单克隆抗体（ＡＦＴＢ＿１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为ＩＢ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱发产生含特异性抗体的腹水。用间接竞争抑制ＥＬＩＳＡ鉴定ＭｃＡｂ的反应特异性，使ＭｃＡｂ与固相黄曲霉毒素Ｂ＿１一牛血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＢＳＡ）结合产生５０％抑制所需的ＡＦＴＢ＿１、Ｂ＿２、Ｇ＿１、Ｇ＿２浓度依次为：１Ｂ５４．０、３６．９、２３．３、４０３．３ｎｇ／ｍｌ，２Ｆ１２．４、２．６、２．８、４。７ｎｇ／ｍｌ。     

黄曲霉毒素B1人工抗原及抗体的制备研究

Carboxymethyloxime of aflatoxin B1 (AFB1) was synthesized by refluxing AF B1 with carboxymethoxylamine hemihydrochloride for 4 hours in the presence of pyridine. AF B1-BSA (antigen) was made successfully by coupling AF B1-oxime with bovine serum albumin (BSA) in the presence of a water soluble carbodiimide. The rabbits were immunized with the artificial immunogen which had been purified by dialysis. The titers of antisera were determined by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) which was developed by ourselves. The highest titer was 1:100,000.     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

用O型人红细胞免疫的Balb/c小鼠脾细胞和NS--1骨髓瘤细胞融合、克隆后,获得两株杂交瘤细胞株。两株细胞分泌的单克隆抗体都是IgG_s亚类。文中对此类抗体的特性进行探讨。吸收试验表明,这两种单克隆抗体并不是和红细胞H抗原反应,但可能是同ABO各型红细胞上一种共同抗原反应。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检查中。     

泰泽病原体单克隆抗体的制备和鉴定

目的　制备多种抗泰泽病原体的单克隆抗体 ,用于该菌隐性感染的检测。方法　用含泰泽病原体的大鼠肝匀浆免疫BALB c小鼠 ,采用杂交瘤技术和间接免疫荧光方法筛选抗该菌的单克隆抗体 ;运用免疫电镜、Westernblotting和免疫双向扩散试验确定单克隆抗体的抗原定位和相对分子质量及IgG亚类型。结果　共筛选出 5种单克隆抗体 (M2、M3、M4、M5和M7)。免疫电镜表明 :抗体M2、M4、M5、和M7与泰泽病原体的细胞壁结合 ,而M3为抗菌毛的单克隆抗体 ;Westernblotting结果表明 :抗体M2、M3和M4与相对分子质量约为 6 4× 10 3的抗原有特异性结合 ,M5与M7与相对分子质量约为 4 1× 10 3的抗原特异性结合 ;M2、M5、M7为IgG1 ,M3为IgG2b,M4为IgG2a。对模拟自然感染大鼠考的松激发试验阳性为 2 10 ,而单克隆抗体为诊断抗体的IFA则为 8 10。除M7外 ,4种单抗不与清洁级以上大鼠回盲部细菌发生反应。结论　筛选的杂交瘤细胞能稳定分泌抗体 ,其IFA效价达 1∶10 2 4 ;表明这些抗体具有高效价、较高特异性和敏感性。     

PDGFR单克隆抗体的制备和鉴定

目的 通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得两株能稳定分泌抗PDGFR单克隆抗体的细胞3B12F5和3C6H7C11,亚类鉴定两种单抗均为IgG1.间接ELISA法测定两株细胞腹水抗体的效价分别为1:102400为和1:25600.Western blot法显示PDGFR单克隆抗体特异性地识别免疫原和胶质瘤细胞株U251中的抗原成分.细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别胶质瘤细胞株U251和膀胱癌细胞株BIU87中表达的PDGFR抗原.结论 成功制备PDGFR单克隆抗体,为研究PDGFR的表达情况和临床检测提供了一个有用的工具.     

抗人肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

The hepatocellular carcinoma (HCC) cell line, QGY-7703, derived from a Chinese patient, was used to immunize the BALB/c mice. Fifteen hybridomas producing McAb that reacted with QGY-7703 cells were isolated from 858 hybridomas created in three cell fusions. In further studies two McAb, namely, AQGY1 and A-QGY2, were selected which specifically stained HCC cells grown in vitro. The reactivity of these McAb was not removed by the absorption by homogenates of the normal liver, but was by homogenates of HCC cells. A-QGY1 and A-QGY2 also reacted definitely with HCC cells in liver tissues of HCC patients, but neither with other cells in the tissues nor with nontransformed liver tissues of the same patients. Furthermore these two McAb stained the adult or fetal liver tissues, nor all of the other normal or tumor tissues that had been tested. Blocking and absorbing experiments revealed that A-QGY1 and AQGY2 antigens had no immunohomogenicity with antigens such as HBsAg, HBcAg, HBeAg, AFP and CEA. The specificity of these two McAb may be used potentially for the sero diagnosis, histologic identification, radioimmunoimaging and destruction of human hepatocellular carcinoma.     

人子宫内膜癌单克隆抗体的制备及鉴定

1　实验资料人子宫内膜腺癌细胞ＡＮ3ＣＡ来自中国典型培养物保藏中心 .培养基及牛血清购自Ｇｉｂｃｏ公司 ;ＨＲＰ酶标抗体及ＡＢＣ试剂盒购自Ｚｙｍｅｄ公司 ;ＢＡＬＢ/ｃ小鼠购自中国医学科学院实验动物中心 .把人子宫内膜腺癌细胞ＡＮ3ＣＡ与Ｆｒｅｕｎｄ佐剂混合后免疫 8ｗｋ龄ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 .加强免疫 4次 .用聚乙二醇 (Ｍｒ 4 0 0 0 ,Ｍｅｒｅｋ) ,按常规方法将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ2 / 0 Ａｇ8.6 35细胞融合 .杂交瘤细胞培养于 10 0ｍＬ·Ｌ-1牛血清 ＨＡＴ ＲＰＭＩ选择性培养基 .采用酶联免疫吸附实验 (ＥＬＩＳＡ)…     

抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2 F(ab')2片段的特性

目的:研究经无花果蛋白酶酶切后所得的抗总黄曲霉毒素单抗2G2F(ab′)2片段的特性,为研制开发特异性、灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型单克隆、多克隆抗体提供科学依据。方法:在制备出抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2株及其2G2F(ab′)2片段的基础上,采用非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(非还原SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)对单抗2G2及其F(ab′)2片段的特性进行研究并加以比较。结果:单抗2G2F(ab′)2片段和单抗2G2的相对分子质量分别为105000和180000。单抗2G2F(ab′)2片段和单抗2G2的比效价分别为3.33和1.25。单抗2G2F(ab′)2片段的最低检出限和达到50%竞争抑制率时的检出限分别为0.17μg/L和0.67μg/L,单抗2G2的分别为0.47μg/L和1.92μg/L。单抗2G2F(ab′)2片段的亲和力常数为2.95×10-9mol/L,单抗2G2的亲和力常数为1.52×10-10mol/L。结论:单抗2G2F(ab′)2片段灵敏度优于完整抗体,可利用其生产特异性和灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型多克隆和单克隆抗体。     

抗hMOF单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗hMOF的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定.方法 以重组GST-hMOF融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到1株能稳...     

抗钙调素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备及鉴定抗钙调素单克隆抗体。方法 以碳化二亚胺法将钙调素—卵清蛋白偶联物作为免疫原，采用常规免疫方法免疫BALB／C小鼠，杂交瘤技术制备抗牛脑钙调素单克隆抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)检测，应用硫酸铵盐析法和离子交换层析法进行抗体纯化。分别采用免疫印迹、免疫酶斑点法鉴定抗钙调素单克隆抗体的性质。结果 脾细胞与骨髓瘤细胞的融合率为85％。阳性克隆率为0．35％，获得两株动物钙调素单克隆抗体，抗体效价为1：1000，对钙调素有较强的专一性。结论 此研究制备出了高特异性、高亲和力及高效价的抗牛脑钙调素单克隆抗体。     

面粉中黄曲霉毒素B1调查报告

黄曲霉毒素B1是强致癌物，我们采用薄层层析法进行分析测定，结果报告如下。